分析化學(xué)精品課程課件 第 07 章 吸光光度法

1、 第七章 吸光光度法7.1 吸光光度法基本原理吸光光度法基本原理7.2 光度計(jì)及其基本部件光度計(jì)及其基本部件7.3 顯色反應(yīng)與條件的選擇顯色反應(yīng)與條件的選擇7.4 吸光度測(cè)量條件的選擇吸光度測(cè)量條件的選擇7.5 吸光光度法的應(yīng)用吸光光度法的應(yīng)用7.6 紫外吸收光譜法簡(jiǎn)介紫外吸收光譜法簡(jiǎn)介spectrophotometry本章要求本章要求: :(1)熟悉吸光光度法的基本原理、特點(diǎn)及應(yīng)用；(2)掌握朗伯-比爾定律及偏離朗伯-比爾定律的原因；(3)掌握影響顯色反應(yīng)的因素和顯色條件的選擇、吸光度測(cè)量條件的選擇；(4)掌握單組分分析、多組分分析、雙波長(zhǎng)分光光度法、示差法的原理及特點(diǎn)；(5)熟悉影響吸收光

2、譜的因素；(6)了解有機(jī)化合物電子躍遷的類型,紫外吸收光譜法的應(yīng)用;(7)了解光度計(jì)及其基本部件。九寨溝的水為啥出名？不同的顏色？九寨溝的水為啥出名？不同的顏色？吸光光度法概述吸光光度法概述 基于物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收而建立的分析方法為吸光光度法。包括：比色法、可見分光光度法、紫外分光光度法。特點(diǎn)：特點(diǎn)：(1) 靈敏度較高，濃度下限達(dá)10-510-6 molL-1。(2) 相對(duì)誤差約為2%5%。(3) 測(cè)定迅速，儀器操作簡(jiǎn)單，價(jià)格便宜，應(yīng)用廣泛，幾乎所有的無機(jī)物質(zhì)和許多有機(jī)物質(zhì)的微量成分都能用此法進(jìn)行測(cè)定。概念： 光是一種電磁波，根據(jù)波長(zhǎng)或頻率排列。光是一種電磁波，根據(jù)波長(zhǎng)或頻率排列。波長(zhǎng)范圍

3、10-1nm 10-1 10nm 10400nm 400750nm 0.751000m 0.1100cm 11000cm光譜區(qū)域 射線 X射線 紫外光 可見光 紅外光 微波 無線電 單色光：?jiǎn)紊猓簭?fù)合光：復(fù)合光：互補(bǔ)色光：互補(bǔ)色光：具有同一波長(zhǎng)的光稱為單色光。由不同波長(zhǎng)組成的光稱為復(fù)合光。按一定比例混合可得到白光的兩種單色光互稱為互補(bǔ)色光。7.1 吸光光度法基本原理光的互補(bǔ)示意圖： 光的互補(bǔ)光的互補(bǔ)：藍(lán)：藍(lán) 黃黃表1 物質(zhì)顏色與吸收光顏色的互補(bǔ)關(guān)系吸收光物質(zhì)顏色顏色波長(zhǎng)/nm黃綠紫400450黃藍(lán)450480橙綠 藍(lán)480490紅藍(lán) 綠490500紫 紅綠500560紫黃綠560580藍(lán)黃5

4、80600綠 藍(lán)橙600650藍(lán) 綠紅650780q 有色物質(zhì)溶液顯色：有色物質(zhì)選擇性地吸收了選擇性地吸收了不同波長(zhǎng)的光。q 物質(zhì)的顏色是由其主要吸收色光的互補(bǔ)色光決互補(bǔ)色光決定定的。通過比較有色溶液顏色的深淺，可測(cè)定有色物質(zhì)的含量。q 吸光光度法吸光光度法：基于物質(zhì)對(duì)光的：基于物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收選擇性吸收而建而建立起來的一種分析方法。立起來的一種分析方法。7.1.1 物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收M + 熱M + 熒光或磷光M + h M *基態(tài)基態(tài) 激發(fā)態(tài)激發(fā)態(tài)E1 （E） E2 E = E2 - E1 = h 量子化量子化 選擇性吸收選擇性吸收; 分子結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性使其對(duì)不分子

5、結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性使其對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸收程度不同；同波長(zhǎng)光的吸收程度不同；電子能級(jí)間躍遷電子能級(jí)電子能級(jí)間躍遷的同間躍遷的同時(shí)總伴隨有振動(dòng)和轉(zhuǎn)時(shí)總伴隨有振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)間的躍遷。動(dòng)能級(jí)間的躍遷。電子光譜中總包含有電子光譜中總包含有振動(dòng)能級(jí)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)振動(dòng)能級(jí)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)間躍遷產(chǎn)生的若干譜間躍遷產(chǎn)生的若干譜線而呈現(xiàn)寬譜帶。線而呈現(xiàn)寬譜帶。吸收曲線與最大吸收波長(zhǎng)不同波長(zhǎng)的單色光照射不同波長(zhǎng)的單色光照射 吸收曲線吸收曲線, 最大吸收波長(zhǎng)最大吸收波長(zhǎng) max由吸收曲線：（1）吸光度最大處對(duì)應(yīng)于最大吸收波長(zhǎng)max；（2）不同濃度的同一種物質(zhì)，其吸收曲線形狀相似，max不變。（3）吸收曲線可作為物質(zhì)定性分析的依據(jù)之一

6、。（4）在max處吸光度隨濃度變化的幅度最大，所以測(cè)定最靈敏。吸收曲線是定量分析中選擇入射光波長(zhǎng)的重要依據(jù)。7.1.2 光的吸收基本定律 朗伯-比耳（Larnbert-Beer）定律1.1.朗伯朗伯比耳定律比耳定律 當(dāng)一束平行單色光通過單一均勻的、非散射的吸光物質(zhì)溶液時(shí)，溶質(zhì)吸收了光能，光的強(qiáng)度就要減弱。吸光度與液層厚度吸光度與液層厚度 Ab吸光度與物質(zhì)濃度吸光度與物質(zhì)濃度 A c A c bcbIIA0lg式中式中 A：吸光度，描述溶液對(duì)光的吸收程度；吸光度，描述溶液對(duì)光的吸收程度； b：液層厚度液層厚度(光程長(zhǎng)度光程長(zhǎng)度)，通常以，通常以cm為單位；為單位； c：溶液的摩爾濃度，單位溶液的

7、摩爾濃度，單位 molL-； ：摩爾吸收系數(shù)摩爾吸收系數(shù)，單位，單位 Lmol-cm-；或或: A = lg(I0/It) = a b c c：溶液的濃度，單位溶液的濃度，單位gL- a：吸收系數(shù)吸收系數(shù)，單位，單位Lg-cm- a與與的關(guān)系為：的關(guān)系為： a = /M （M為摩爾質(zhì)量）為摩爾質(zhì)量） 朗伯比耳定律數(shù)學(xué)表達(dá)式（1）在數(shù)值上等于濃度為1 mol L-1、液層厚度為1cm時(shí)該溶液在某一波長(zhǎng)下的吸光度。（2）是吸收物質(zhì)在一定波長(zhǎng)和溶劑條件下的特征常數(shù);（3）在溫度和波長(zhǎng)等條件一定時(shí)，僅與吸收物質(zhì)本身的性質(zhì)有關(guān)，與待測(cè)物濃度無關(guān)；（4）同一吸收物質(zhì)在不同波長(zhǎng)下的值是不同的;（5）可作為定

8、性鑒定的參數(shù)；摩爾吸收系數(shù)摩爾吸收系數(shù) （6） 是物質(zhì)的吸光能力的量度:max越大，該物質(zhì)的吸光能力越強(qiáng)，光度法測(cè)定該物質(zhì)的靈敏度越高。 105 ：超高靈敏； = (610）104 ：高靈敏； = 104 103 ：中等靈敏； 103 ：不靈敏。摩爾吸收系數(shù)摩爾吸收系數(shù) cbIITA0lglg 透光度（透光率）透光度（透光率）T : 描述入描述入射光透過溶液的程度。射光透過溶液的程度。 T = I / I0吸光度吸光度A與透光度比與透光度比T 的關(guān)系的關(guān)系:(1) 吸光光度法的理論基礎(chǔ)和定量測(cè)定的依據(jù)。(2) 吸光度具有加和性。nnnbcbcbcAAA221121A總7.1.3 偏離比耳定律的

9、原因1. 1. 現(xiàn)象現(xiàn)象 用用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定未知溶液的濃度時(shí)，發(fā)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線常發(fā)生彎曲（尤其當(dāng)溶液濃度較高時(shí)），這種現(xiàn)象稱為對(duì)朗伯比耳定律的偏離。2. 2. 引起偏離的因素引起偏離的因素（兩大類）（兩大類） （1 1）物理性因素，物理性因素， 即儀器的非理想引起的； （2 2）化學(xué)性因素?；瘜W(xué)性因素。物理性因素： 分光光度計(jì)只能獲得近乎單色的狹窄光帶-非單色光！復(fù)合光可導(dǎo)致對(duì)朗伯比耳定律的正或負(fù)偏離。另外，非平行入射光、介質(zhì)的不均勻性引起光的散射會(huì)引起對(duì)朗伯比耳定律的偏離，最主要的是非單色光作為入射光引起的偏離。 非單色光作為入射光引起的偏離：假設(shè)由波長(zhǎng)為1和2的兩單色光組成的入射光通過濃度為c

10、的溶液，則： A1lg（01 /t1 ） 1 bc A2lg(02 /t2 ） 2 bc故：故：式中：01、02分別為1、2 的入射光強(qiáng)度； t1 、t2分別為1、2 的透射光強(qiáng)度； 1、 2分別為1、2的摩爾吸收系數(shù)；cbcbIIII21211110;100t0t A總總 = lg（0總總/t總總 ) = lg(I01 +02)/(t1 +t2 ） = lg(I01 +o2)/(01 10 - 1bc +02 10 - 2bc ）因?qū)嶋H上只能測(cè)總吸光度因?qū)嶋H上只能測(cè)總吸光度A總總，故，故討論：討論： (1) 1= 2 則：則： A總 lg（o /t） bc(2) 1 2 A與C不成直線， 1

11、 、 2相差越大，偏離直線越嚴(yán)重。討論：討論： (3) 1 2： 可近似認(rèn)為是單色光。在低濃度范圍內(nèi)，不發(fā)生偏離。隨著c值增大， A-c曲線上部(高濃度區(qū))彎曲愈嚴(yán)重。故朗伯-比耳定律只適用于稀溶液。 (4) 為克服非單色光引起的偏離，應(yīng)選擇比較好的單色器,將入射波長(zhǎng)選定在max且吸收曲線較平坦處。 選用譜帶a的復(fù)合光進(jìn)行測(cè)量，得到右圖的工作曲線，A與c基本呈直線關(guān)系。 選用譜帶b的復(fù)合光進(jìn)行測(cè)量， 工作曲線明顯偏離線性。(2) 化學(xué)性因素朗伯比耳定律的假定：所有的吸光質(zhì)點(diǎn)之間不發(fā)生相互作用；僅在稀溶液(c 10-2 mol L-1時(shí)，每個(gè)粒子都可影響其鄰近粒子的電荷分布，其相互作用可使它們的

12、吸光能力發(fā)生改變。 故：朗伯故：朗伯比耳定律只適用于稀溶液。比耳定律只適用于稀溶液。 溶液中存在著離解、聚合、互變異構(gòu)、配合物的形成等化學(xué)平衡時(shí)，使吸光質(zhì)點(diǎn)的濃度發(fā)生變化。 例： 2CrO42- + 2H+ = Cr2O72- + H2O7.2 光度計(jì)及其基本部件1.1.分光光度計(jì)分光光度計(jì)分光光度計(jì)分光光度計(jì)7.2.1 基本組成光源單色器樣品室檢測(cè)器顯示722型分光光度計(jì)型分光光度計(jì)7.2.2 主要部件1. 1. 光源光源 在整個(gè)紫外光區(qū)或可見光譜區(qū)可以發(fā)射連續(xù)光譜，具有足夠的輻射強(qiáng)度、較好的穩(wěn)定性、較長(zhǎng)的使用壽命。 可見光區(qū)可見光區(qū)：鎢燈作為光源，其輻射波長(zhǎng)范圍在3202500 nm。 紫

13、外區(qū)紫外區(qū)：氫、氘燈。發(fā)射185400 nm的連續(xù)光譜。2. 2. 單色器單色器 將光源發(fā)射的復(fù)合光分解成單色光并可從中選出一任意波長(zhǎng)單色光的光學(xué)系統(tǒng)。 單色器一般由入射狹縫、準(zhǔn)光器（透鏡或凹面反射鏡使入射光成平行光）、色散元件、聚焦元件和出射狹縫等幾部分組成。其核心部分是色散元件，起分光的作用。 色散元件：棱鏡或光柵，使不同波長(zhǎng)的光以不同角度傳播。 構(gòu)成：狹縫、準(zhǔn)直鏡、棱鏡或光柵、會(huì)聚透鏡。構(gòu)成：狹縫、準(zhǔn)直鏡、棱鏡或光柵、會(huì)聚透鏡。 入射入射狹縫狹縫準(zhǔn)直準(zhǔn)直鏡鏡物鏡物鏡棱鏡棱鏡焦面焦面出射出射狹縫狹縫f入射狹縫入射狹縫準(zhǔn)直鏡準(zhǔn)直鏡光柵光柵物鏡物鏡出射狹縫出射狹縫f其中最主要的分光元件為棱鏡和

14、光柵其中最主要的分光元件為棱鏡和光柵3. 3. 樣品室樣品室吸收池: 比色皿，玻璃（可見） 石英（可見、紫外） 為減少光的損失，吸收池的光學(xué)面必須完全垂直于光束方向。 將光信號(hào)轉(zhuǎn)化成電信號(hào)-光電管，光電倍增管，光伏電池。 5. 5. 讀出系統(tǒng)讀出系統(tǒng) 百分透光率T%，吸光度A 4. 4. 檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng)1個(gè)個(gè)光電子可產(chǎn)生光電子可產(chǎn)生106107個(gè)電子個(gè)電子光電倍增管光電倍增管7.2.3 分光光度計(jì)的類型分光光度計(jì)的類型多通道儀器多通道儀器（Multichannel Instruments） 光電二極管陣列光電二極管陣列(通常具有通常具有316個(gè)硅二極管個(gè)硅二極管) photodiode ar

15、rays (PDAs) 同時(shí)測(cè)量同時(shí)測(cè)量200820nm范圍內(nèi)的整個(gè)光譜范圍內(nèi)的整個(gè)光譜, 比單比單個(gè)檢測(cè)器快個(gè)檢測(cè)器快316倍倍,信噪比增加信噪比增加 316 1/2 倍倍. 其他類型分光光度計(jì)其他類型分光光度計(jì)將光度計(jì)放入樣品中將光度計(jì)放入樣品中, , 原位測(cè)量原位測(cè)量纖維光度計(jì)纖維光度計(jì)7.3 顯色反應(yīng)與條件的選擇 將待測(cè)組分轉(zhuǎn)變成有色化合物的反應(yīng)叫顯色反應(yīng)。與待將待測(cè)組分轉(zhuǎn)變成有色化合物的反應(yīng)叫顯色反應(yīng)。與待測(cè)組分形成有色化合物的試劑稱為顯色劑。測(cè)組分形成有色化合物的試劑稱為顯色劑。7.3.1 7.3.1 顯色反應(yīng)的選擇顯色反應(yīng)的選擇1.1.選擇顯色反應(yīng)時(shí)，應(yīng)考慮的因素選擇顯色反應(yīng)時(shí)，

16、應(yīng)考慮的因素 (1)(1)靈敏度高(2)選擇性好(3)生成物組成恒定、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定（4）顯色劑在測(cè)定波長(zhǎng)處無明顯吸收（5）顯色條件易于控制。2.2.配位顯色反應(yīng)配位顯色反應(yīng) 當(dāng)金屬離子與有機(jī)顯色劑形成配合物時(shí)，通常會(huì)發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移躍遷，產(chǎn)生很強(qiáng)的紫外可見吸收光譜。3.氧化還原顯色反應(yīng) 某些元素的氧化態(tài)，如Mn（）、Cr（）在紫外或可見光區(qū)能強(qiáng)烈吸收，可利用氧化還原反應(yīng)對(duì)待測(cè)離子進(jìn)行顯色后測(cè)定。 例如：鋼中微量錳的測(cè)定， 2 Mn2 5 S2O82-8 H2O =2 MnO4- + 10 SO42- 16H+ 將Mn2 氧化成紫紅色的MnO4-后，在525 nm處進(jìn)行測(cè)定。7.3.2 顯色劑無機(jī)顯

17、色劑：無機(jī)顯色劑：硫氰酸鹽、鉬酸銨等。有機(jī)顯色劑：有機(jī)顯色劑：種類繁多偶氮類顯色劑：偶氮類顯色劑：性質(zhì)穩(wěn)定、顯色反應(yīng)靈敏度高、選擇性好、對(duì)比度大，應(yīng)用最廣泛。偶氮胂III、PAR等。三苯甲烷類：三苯甲烷類：鉻天青S、二甲酚橙等7.3.3 顯色反應(yīng)條件的選擇1.1.顯色劑顯色劑用量用量 吸光度A與顯色劑濃度cR的關(guān)系會(huì)出現(xiàn)如圖所示的幾種情況。選擇曲線變化平坦處。2.2.酸度酸度3.3.顯色時(shí)間顯色時(shí)間 4.4.顯色溫度顯色溫度5.溶劑溶劑影響配合物的離解度、顏色以及顯色反應(yīng)的速度6.干擾離子的影響(1)與顯色劑反應(yīng)生成有色化合物(2)干擾離子本身有顏色(3)與顯色劑反應(yīng)生成無色化合物(4)與被測(cè)

18、離子結(jié)合形成離解度小的另一化合物7. 干擾的消除（1）加入配位掩蔽劑或氧化還原掩蔽劑：）加入配位掩蔽劑或氧化還原掩蔽劑： 使干擾離子生成無色配合物或無色離子。（2）選擇適當(dāng)?shù)娘@色條件以避免干擾：）選擇適當(dāng)?shù)娘@色條件以避免干擾： 用磺基水楊酸測(cè)定Fe3+離子時(shí),Cu2+與試劑形成黃色絡(luò)合物, 干擾測(cè)定, 但如控制pH在2.5左右，Cu2+則不與試劑反應(yīng)。（3）分離干擾離子；）分離干擾離子；（4）在不同波長(zhǎng)處測(cè)量被測(cè)離子和干擾離子形成的有色化合）在不同波長(zhǎng)處測(cè)量被測(cè)離子和干擾離子形成的有色化合物的吸光度。物的吸光度。7.3.4 三元配合物在光度分析中的應(yīng)用特性簡(jiǎn)介 由一種金屬離子同時(shí)與兩種不同的配

19、位體形成的三元配合物具有下列分析特性：1. 穩(wěn)定，可提高分析測(cè)定的準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性；穩(wěn)定，可提高分析測(cè)定的準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性； 例: Ti-EDTA-H2O2三元配合物的穩(wěn)定性，比Ti-EDTA和Ti-H2O2二元配合物的穩(wěn)定性，分別增強(qiáng)約1000倍和100倍。2. 比二元配合物具有更高的靈敏度和更大的對(duì)比度；比二元配合物具有更高的靈敏度和更大的對(duì)比度； 靈敏度通常可提高12倍，有時(shí)甚至提高5倍以上。3. 比二元體系具有更高的選擇性；比二元體系具有更高的選擇性； 減少了金屬離子形成類似配合物的可能性。4.三元配合物形成條件易于控制；三元配合物形成條件易于控制；5.三元配合物具有較好的萃取性能。三元配

20、合物具有較好的萃取性能。7.4 吸光度測(cè)量條件的選擇7.4.1 選擇適當(dāng)?shù)娜肷洳ㄩL(zhǎng)選擇適當(dāng)?shù)娜肷洳ㄩL(zhǎng) 一般應(yīng)該選擇max為入射光波長(zhǎng)。 如果max處有共存組分干擾時(shí)，則應(yīng)考慮選擇靈敏度稍低但能避免干擾的入射光波長(zhǎng)。 如圖選500nm波長(zhǎng)測(cè)定，靈敏度雖有所下降，卻消除了干擾，提高了測(cè)定的準(zhǔn)確度和選擇性。7.4.2 參比溶液的選擇 為什么需要使用參比溶液？為什么需要使用參比溶液？ 測(cè)得的吸光度真正反映待測(cè)溶液吸光強(qiáng)度。測(cè)得的吸光度真正反映待測(cè)溶液吸光強(qiáng)度。試液參比IIIIAlglg0 選擇參比溶液所遵循的一般原則：選擇參比溶液所遵循的一般原則： 當(dāng)試液、顯色劑、條件試劑均無吸收時(shí)當(dāng)試液、顯色劑、條

21、件試劑均無吸收時(shí)，用純?nèi)苡眉內(nèi)軇ㄋ畡ㄋ? )作參比溶液；作參比溶液； 若顯色劑或若顯色劑或條件條件試劑在測(cè)定波長(zhǎng)處略有吸收試劑在測(cè)定波長(zhǎng)處略有吸收, ,而試液本身無而試液本身無吸收，吸收，用用“空白空白溶液溶液”(”(僅僅不加試樣溶液，不加試樣溶液，其它與顯色試液相同其它與顯色試液相同的溶液的溶液) )作參比溶液；作參比溶液； 當(dāng)試液中其他成分有吸收，但不與顯色劑反應(yīng)，同時(shí)顯色劑當(dāng)試液中其他成分有吸收，但不與顯色劑反應(yīng)，同時(shí)顯色劑無吸收時(shí)，無吸收時(shí)，則可用試則可用試液溶液作液溶液作參比溶液；參比溶液；當(dāng)試液中其他成分有吸收，但不與顯色劑反應(yīng)，同時(shí)當(dāng)試液中其他成分有吸收，但不與顯色劑反應(yīng)，同

22、時(shí)顯色劑顯色劑有有一點(diǎn)一點(diǎn)吸收吸收, ,則可在試液中加入適當(dāng)掩蔽劑將待測(cè)組分掩蔽后再則可在試液中加入適當(dāng)掩蔽劑將待測(cè)組分掩蔽后再加顯色劑，作為參比溶液。加顯色劑，作為參比溶液。（5 5） 當(dāng)試液中其他成分與顯色劑反應(yīng)形成有色化合物時(shí)，當(dāng)試液中其他成分與顯色劑反應(yīng)形成有色化合物時(shí)，可可在試液中加入適當(dāng)掩蔽劑將待測(cè)組分掩蔽后再加顯色劑，作為在試液中加入適當(dāng)掩蔽劑將待測(cè)組分掩蔽后再加顯色劑，作為參比溶液。參比溶液。7.4.3 吸光度讀數(shù)范圍的選擇不同的透光度讀數(shù)，產(chǎn)生的誤差大小不同： lgT= bc微分：dlgT0.434dlnT = - 0.434T -1 dT = b dc 兩式相除得：c/c不

23、僅與儀器的透光度誤差T 有關(guān)，而且與其透光度讀數(shù)T 的值也有關(guān)。是否存在最佳讀數(shù)范圍？何值時(shí)誤差最??？是否存在最佳讀數(shù)范圍？何值時(shí)誤差最?。縏TT.ccdlg4340dTTT.cclg4340最佳讀數(shù)范圍與最佳值:設(shè)：設(shè)：T =0.5%， c/c T 關(guān)系曲線關(guān)系曲線T 在在 10%70% 之間時(shí)之間時(shí), 濃度相濃度相對(duì)誤差較小。對(duì)誤差較小。濃度相對(duì)誤差最小時(shí)的透光度濃度相對(duì)誤差最小時(shí)的透光度Tmin為：為： Tmin 36.8%, Amin 0.434 通過改變吸收池厚度或待測(cè)液濃度，使吸光度讀數(shù)處在適宜范圍。 分光光度法不適于高含量或極低含量物質(zhì)的測(cè)定。7.5 吸光光度法的應(yīng)用7.5.1

24、普通分光光度法普通分光光度法1.1.單組分的測(cè)定單組分的測(cè)定 A- c 標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量測(cè)定。2.2.多組分的同時(shí)測(cè)定多組分的同時(shí)測(cè)定 各組分的吸收曲線不重疊各組分的吸收曲線不重疊 各組分的吸收曲線互有重疊各組分的吸收曲線互有重疊根據(jù)吸光度的加合性求解聯(lián)立方程組得出各組分的含量。根據(jù)吸光度的加合性求解聯(lián)立方程組得出各組分的含量。 A1 = a1 bca b1bcb A2 = a2 bca b2bcb 7.5.27.5.2一元弱酸離解常數(shù)的測(cè)定一元弱酸離解常數(shù)的測(cè)定HL HLHLHLL=HL+LKccAKK +L+aaa(HL)H (HL)=+H +H KaH+L/HL高酸度下

25、，幾乎全部以高酸度下，幾乎全部以HL存在，可測(cè)得存在，可測(cè)得AHLHLc(HL)；低酸度下，幾乎全部以低酸度下，幾乎全部以L存在，可測(cè)得存在，可測(cè)得AL Lc(HL).代入整理：代入整理：AAKAA +HLaL-=H -HLLL HLAAKAAa-p= pH+lg-或配制一系列配制一系列c相同相同,pH不同的溶液不同的溶液,測(cè)測(cè)A.7.5.3 雙波長(zhǎng)分光光度法兩束光交替照射：兩束光交替照射：bcAAA)(2121試液本身作參比液。試液本身作參比液。主要應(yīng)用：主要應(yīng)用：(1)多組分混合物的測(cè)定(2)混濁樣品的測(cè)定(3)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)過程研究例例1 鄰二氮菲光度法測(cè)鐵鄰二氮菲光度法測(cè)鐵 : (Fe)=

26、1.0mg/L, b=2cm , A=0.38,計(jì)算計(jì)算 解：解： c(Fe)=1.0 mg/L=1.010-3/55.85 =1.810-5mol/L4-1-1-50.38=1.1 10 L molcm2 1.8 10 例題2：相對(duì)摩爾質(zhì)量為180的某吸光物質(zhì)的= 6.0*103，稀釋10倍后在1.0cm吸收池中測(cè)得吸光度為0.30，計(jì)算每升原溶液中含有這種吸光物質(zhì)多少毫克？解：由題意稀釋后的濃度為c=A/(b)=0.30/(6.0*103*1.0)=5.0*10-5mol/L原溶液的濃度c原=10c=10*5.0*10-5=5.0*10-4 mol/L則每升原溶液中含有這種吸光物質(zhì)m= c原*M=5.0*10-4*180=0.09 mg/L7.6 紫外吸收光譜法簡(jiǎn)介 7.6.1 有機(jī)化合物電子躍遷的類型有機(jī)化合物電子躍遷的類型 有機(jī)化合物三種價(jià)電子：有機(jī)化合物三種價(jià)電子：、n 電子電子。 分子軌道理論分子軌道理論： 外層電子均處于分子軌道的基態(tài)(成鍵或非鍵軌道)。外層電子吸收紫外或可見輻射后，從基態(tài)向激發(fā)態(tài)(反鍵軌道)躍遷。四種躍遷: n n 1.1.躍遷躍遷 所需能量最大。飽和烷烴的分子吸收光譜出現(xiàn)在遠(yuǎn)紫外所需能量最大。飽和烷烴的分子吸收光譜出現(xiàn)在遠(yuǎn)紫外區(qū)區(qū)(max 104Lmol -1 cm -1以上，強(qiáng)以上，強(qiáng)吸收。不飽和烴、共軛烯