17β雌二醇對人橈動脈舒張作用的體外實(shí)驗(yàn)(精)

1、17B雌二醇對人橈動脈舒張作用的體外實(shí)驗(yàn)作者：蘇海川，趙玉紅 ，韋耿澤，陳軍，李陜區(qū)【摘要】 目的： 研究 17B雌二醇(17B?estradiol, E2 )對人橈動 脈(RA)的舒張作用及其機(jī)制.方法：采用離體血管灌流的方法，觀察 E2 對人 RA 的舒張作用以及 NO 合成酶抑制劑左旋硝基精氨酸甲酯(N3?nitro?L?arginine methyl ester, L?NAME), 8?Br?cGM 嗣鳥苷酸環(huán)化酶抑制劑美藍(lán)(MB)對這一過程的影響.結(jié)果：觀察到 E2(0.1100 卩 mol/L)可劑 量依賴性地舒張血管且具有內(nèi)皮依賴性；8?Br?cGMP(0.11X103 卩 mo

2、l/L)也可引起劑量依賴性的血管舒張效應(yīng) 10 卩 mol/L MB 使 E2 舒張人 RA 的作用完全 消失.10卩 mol/L L?NAME 能部分抑制 E2 舒張 TA 的作用.結(jié)論：E2 對 RA 的 急性舒張作用具有內(nèi)皮依賴性此作用是 E2 通過非基因組方式使血管內(nèi)皮細(xì)胞 分泌 NO 進(jìn)而可能引起血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)的 cGMP 水平升高實(shí)現(xiàn)的.【關(guān)鍵詞】 雌二醇；橈動脈；一氧化氮； 環(huán) GMP 0 引言 絕經(jīng)前婦女心血管疾病發(fā)病率明顯低于同齡男性和絕經(jīng)后婦女， 說明雌激素具有很強(qiáng)的心血管保護(hù)作用 1. 動物研究表明，雌激素能夠通過 非基因組途徑快速舒張血管，雌激素的快速舒血管作用可能是

3、雌激素促進(jìn)了血 管內(nèi)皮細(xì)胞釋放 NO 進(jìn)而抑制平滑肌細(xì)胞的收縮2.有報(bào)道，雌激素可以 直接抑制血管平滑肌細(xì)胞的收縮作用，產(chǎn)生舒血管作用3.然而，雌激素作用于血管的確切機(jī)制還未完全清楚，雌激素對人動脈的作用及其機(jī)制也少見報(bào) 道. 我們采用離體灌流人橈動脈環(huán)，觀察雌激素對保留內(nèi)皮和去內(nèi)皮血管的急 性舒張作用，并進(jìn)一步研究這種舒張血管的作用機(jī)制 .1 材料和方法1.1 材料人橈動脈由西京醫(yī)院心血管外科取材自 1 0 例行冠狀動脈旁路移植術(shù)的 男性患者，年齡 4565 (55 8)歲.17B雌二醇、左旋硝基精氨酸甲酯(N3?nitro?L?arginine methyl ester, L?NAME)

4、、美藍(lán)( MB)、 8?Br?cGMP、 去甲腎上腺素(NE (美國 Sigma公司).RM?6280多道智能生理記錄及分析 處理系統(tǒng)(第四軍醫(yī)大學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程系) .1.2 方法 1.2.1 主要藥物配制 17B雌二醇用 DMSO 己制成 10 mmol/L 的原液，實(shí)驗(yàn)前用 Kreb?s 液稀 釋成工作液.L?NAME,MB 用去離子水配成 10 mol/L 原液，實(shí)驗(yàn)時(shí)加入 Kreb?s 液，工作濃度為 10 卩 mol/L. 8?Br?cGMP 直接用 Kreb?s 液配成工作液(0.11000 卩 mol/L ) . Kreb?s 液成分(mmol/L): NaCl 118, KCl

5、 4.75, CaCl2 2.54,KH2PO4 1.19, MgSO4 1.19, NaHCO3 25, 葡萄糖 10，充以含 950 mL/L O2 和 50mL/LCO2 的混合氣，用 HCI 調(diào) pH 至 7.27.4.1.2.2 離體血管環(huán)灌流將游離的 RA 放入到預(yù)冷、充以含 950 mL/L O2 和 50 mL/L CO2 Kreb?s 液中，仔細(xì)去除血管上的脂肪及結(jié)締組織，將動脈剪成23 mm 的小段，然后將血管環(huán)套在不銹鋼小鉤上，放入37C,充以含 950 mL/L O2 和 50mL/L CO2 的 Kreb?s 液中，并連接在張力傳感器上.給血管環(huán)加 0.5 g 的前負(fù)

6、 荷，在Kreb?s 液中平衡至少 120 min 以上，在此過程中，孵育血管環(huán)的液體 每 15 min 換 1次，并使前負(fù)荷維持在 0.5 g.加入 10 卩 mol/L 的 NE 檢測標(biāo)本 活性(收縮幅度小于 500mg 者棄去)，然后沖洗使血管張力恢復(fù)到基線 . 穩(wěn)定 30 min 后重復(fù)給予 NE,待血管收縮達(dá)到穩(wěn)定值時(shí)逐步增加 E2 的濃度(0.1 100 卩 mol/L ).去內(nèi)皮采用細(xì)鋼絲插入血管腔中滾動完成.用 10 卩 mol/L 的 乙酰膽堿(Ach)對血管環(huán)是否有舒張反應(yīng)作為判斷血管內(nèi)皮是否完整的標(biāo)準(zhǔn).統(tǒng)計(jì)學(xué)處理： 血管環(huán)的例數(shù) n 等于提供血管的患者數(shù).以 NE 對血管

7、環(huán)收縮的最大效應(yīng)為 100%. 制作累積濃度 ?舒張反應(yīng)曲線，求出最大舒張反應(yīng)值（RmaX和血管最大舒張的半數(shù)有效濃度 （EC50 .統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用組間t檢 驗(yàn)， P0.05為差異顯著 .2 結(jié)果 2.1E2 對人橈動脈的作用人橈動脈血管環(huán)用 1 卩 mol/L 的 NE 產(chǎn)生張力，待穩(wěn)定后加入 E2（0.1100 卩 mol/L）. 數(shù)據(jù)用1 卩 mol/L NE 預(yù)收縮的血管舒張到未加藥前的百分?jǐn)?shù)表示.NE 使保留 內(nèi)皮或去內(nèi)皮的HIMA 收縮后，E2 可引起劑量依賴性的舒張效應(yīng)，且具有內(nèi)皮 依賴性（圖 1）.圖1E2 對人橈動脈舒張的量效關(guān)系（略）2.28?Br?cGMP 對人橈動脈的作

8、用人橈動脈血管環(huán)用1 卩 mol/L NE 產(chǎn)生張力，待穩(wěn)定后，加入 8?Br?cGMP （0.11000 卩 mol/L）. 數(shù)據(jù)用 1 卩 mol/L NE 預(yù)收 縮的血管舒張到未加藥前的百分?jǐn)?shù)表示.NE 使 RA 收縮后，8?Br?cGMF 可引起劑 量依賴性的舒張效應(yīng)（圖 2），8?Br?cGMP 勺濃度為 1000 卩 mol/L 時(shí)，Rmax=（9（ 8）%, EC50=4.7 0.3（log10mol/L）.圖 28?Br?cGMP 寸人橈動脈舒張的量效關(guān)系（略）2.3L?NAME 對 E2 舒張人橈動脈的影響人乳內(nèi)動脈血管環(huán)用 1 卩 mol/L NE 產(chǎn)生張力，待穩(wěn)定后加入

9、E2 （1X10-41 卩 mol/L）. 一些血管環(huán)在加入 E2 之前 20 min 用 L?NAME（10 卩 mol/L）預(yù)處理，數(shù)據(jù)用 1 卩 mol/LNE 預(yù)收縮的血管舒張到未加藥前的百分?jǐn)?shù)表示.L?NAME 可以使 E2 舒 張 RA 的作用完全消失（圖 3）. 圖 3L?NAME 口 MB 對 E2 舒張人乳內(nèi)動脈效應(yīng) 的影響（略）2.4MB 對 E2 舒張人橈動脈的影響人乳內(nèi)動脈血管環(huán)用1卩 mol/L NE 產(chǎn)生張力，待穩(wěn)定后加入 E2 （1X10-41 卩 mol/L）. 一些血管環(huán) 在加入 E2 之前 20 min 用 MB （10 卩 mol/L）預(yù)處理，數(shù)據(jù)用 1

10、卩 mol/L NE 預(yù)收 縮的血管舒張到未加藥前的百分?jǐn)?shù)表示.10 卩 mol/L 的 MB 可以使 VNP 舒張 HIMA 的作用完全消失.3 討論E2 的急性舒血管作用為非基因組機(jī)制，雌激素受體a和B都可能參與其中，以往報(bào)道，其效應(yīng)呈內(nèi)皮依賴性和 內(nèi)皮非依賴性，NO 在雌激素的舒血管作用中起關(guān)鍵的作用4-5 . NO 分泌后 可以激活血管平滑肌細(xì)胞中的 GC 使細(xì)胞內(nèi) cGMR 濃度升高， 進(jìn)一步激活 PKG 產(chǎn)生舒血管作用 6 .這些研究是以動物為研究對象得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，而 E2 對人橈動脈的作用還少見報(bào)道 .本實(shí)驗(yàn)采用冠狀動脈旁路移植術(shù)使用的橈動脈 來觀察 E2 對其的作用.我們的結(jié)

11、果顯示：E2 對人 RA 的舒張為內(nèi)皮依賴性的，而 NOS 抑制劑 L?NAM 可以完全抑制 E2 的舒張作用，說明雌激素的急性舒血管作用依 賴于血管內(nèi)皮分泌的 NO. GC 抑制劑 MB 抑制 E2 對 RA 的舒張作用程度與 L?NAME 大致相等，用 cGMP 類似物 8?Br?cGMP 同樣能夠產(chǎn)生強(qiáng)烈的舒血管作用，且與 E2 的舒血管作用相似，進(jìn)一步闡明了 E2 的舒血管作用有賴 NO?cGM 通路的參 與. NO?cGM 通路激活 GC 升高細(xì)胞內(nèi)重要的第二信使 cGMP 通過 cGMP的介導(dǎo)，激活 PKG PKG 通過以下機(jī)制產(chǎn)生舒血管作用：抑制 L?型鈣通道，減少鈣內(nèi)流，增加鈣

12、泵對鈣的攝取，從而降低細(xì)胞 內(nèi)游離的鈣離子濃度； 直接作用于收縮蛋白而使血管舒張；在某些血管組織中，PKG 還可特異性抑制磷酸二酯酶活性，阻止 cAMF 降解而加強(qiáng) cAMP 介 導(dǎo)的舒張作用； 活化 K 通道， 加速細(xì)胞復(fù)極化， 抑制鈣內(nèi)流 7 .我們的 結(jié)果表明 L?NAM和 MB 可以完全阻斷 E2 的舒血管作用，提示 E2 激活 NO?cGMP 通路產(chǎn)生舒血管效應(yīng) 8 . E2 的快速舒血管作用為內(nèi)皮依賴性，說明血管內(nèi) 皮細(xì)胞在 E2 的刺激下分泌NO 增加，引起血管舒張.這與 Geary 等9在小鼠 大腦動脈的研究是一致的 . Binko 的研究發(fā)現(xiàn) 10： 去內(nèi)皮后的大鼠胸主動 脈

13、急性暴露 10-6 mol/L 的 E2 10 min 后并沒有明顯減弱新福林引起的收縮作 用，而與 E2 孵育 24 h 后，可以明顯減弱新福林收縮血管的程度，并活化平滑 肌細(xì)胞 NOS 刺激 NO 勺表達(dá)和分泌.總之，E2 對 TA 具有依賴內(nèi)皮的舒張作用它作用于血管內(nèi) 皮細(xì)胞促進(jìn) NO 的釋放，激活 NO?cGM 通路，舒張血管.這是以非基因組的方式 快速舒張 TA.【參考文獻(xiàn)】 1 Stampfer MJ, Colditz GA, Willett WC, et al. Postmenopausal estrogentherapy and cardiovascular disease.

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