微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)一輪學(xué)習(xí)教案

1、會計(jì)學(xué)1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)(piyng)一輪一輪第一頁，共20頁。1 1、形態(tài)、形態(tài)(xngti)(xngti)：球形、桿形、螺旋形。：球形、桿形、螺旋形。螺旋菌螺旋菌球菌球菌桿菌桿菌一、細(xì)菌一、細(xì)菌(xjn)第1頁/共19頁第二頁，共20頁。2 2、繁殖、繁殖(fnzh) (fnzh) 二分裂二分裂2020分鐘分鐘3030分鐘，分裂分鐘，分裂(fnli)(fnli)一次一次第2頁/共19頁第三頁，共20頁。 無鞭毛的球菌：無鞭毛的球菌：菌落較小較厚、邊菌落較小較厚、邊緣整齊緣整齊(zhngq).(zhngq). 有鞭毛的細(xì)菌：有鞭毛的細(xì)菌：菌落大而扁平、邊菌落大而扁平、邊緣

2、波狀或鋸齒狀緣波狀或鋸齒狀. .問：菌落問：菌落(jnlu)在生態(tài)在生態(tài)學(xué)學(xué)上屬于什么單位？上屬于什么單位？二、菌二、菌 落落菌落可以作為菌落可以作為(zuwi)(zuwi)菌種菌種鑒定的重要依據(jù)。鑒定的重要依據(jù)。第3頁/共19頁第四頁，共20頁。幾種(j zhn)菌落第4頁/共19頁第五頁，共20頁。一、微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)一、微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)(piyng)（一一）培養(yǎng)基培養(yǎng)基 人們按照微生物對營養(yǎng)人們按照微生物對營養(yǎng)(yngyng)物質(zhì)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)(yngyng)基質(zhì)基質(zhì) 一般一般(ybn)(ybn)的培養(yǎng)基均需要碳源、氮源的

3、培養(yǎng)基均需要碳源、氮源、生長因子、無機(jī)鹽和水等。、生長因子、無機(jī)鹽和水等。1、培養(yǎng)基的基本成分、培養(yǎng)基的基本成分不同培養(yǎng)基要滿足不同微生物對不同培養(yǎng)基要滿足不同微生物對pH、特殊營、特殊營養(yǎng)物質(zhì)及氧氣的需求。養(yǎng)物質(zhì)及氧氣的需求。 第5頁/共19頁第六頁，共20頁。2、培養(yǎng)基的種類、培養(yǎng)基的種類(zhngli)（1 1）按物理狀態(tài)來分：）按物理狀態(tài)來分： 分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基( (還有半固體還有半固體) )。其中固體培養(yǎng)基用于菌種分離、鑒定菌落。其中固體培養(yǎng)基用于菌種分離、鑒定菌落等。等。（2 2）按功能）按功能(gngnng)(gngnng)來分：來分： 分為選

4、擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。（3 3）按成分來分：）按成分來分： 分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。第6頁/共19頁第七頁，共20頁。（二）無菌技術(shù)（二）無菌技術(shù)(jsh)消毒消毒(xio (xio d) d) 滅菌滅菌(mi (mi jn) jn) 使用較為溫和的方法來殺死使用較為溫和的方法來殺死部分部分對人體有對人體有害的微生物。害的微生物。 對實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行對實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行 ； 將培養(yǎng)皿、接種用具進(jìn)行將培養(yǎng)皿、接種用具進(jìn)行 ； 接種的過程要在接種的過程要在 附近進(jìn)行。附近進(jìn)行。使用較為強(qiáng)烈的理化因素殺

5、死物體內(nèi)外的使用較為強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外的所有所有微生物（包括芽孢和孢子）。微生物（包括芽孢和孢子）。清潔消毒清潔消毒滅菌滅菌酒精燈酒精燈第7頁/共19頁第八頁，共20頁。1 1、煮沸消毒法、煮沸消毒法:100:100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化學(xué)藥劑消毒法、化學(xué)藥劑消毒法: :用用75%75%酒精、新潔酒精、新潔爾滅等進(jìn)行爾滅等進(jìn)行(jnxng)(jnxng)皮膚消毒皮膚消毒; ;氯氣消氯氣消毒水源毒水源4 4、紫外線消毒、紫外線消毒(1)消

6、毒消毒(xio d)的方法：的方法：第8頁/共19頁第九頁，共20頁。1.1.灼燒滅菌：接種用具和接種過程灼燒滅菌：接種用具和接種過程(guchng)(guchng)中的中的試管口或瓶口放在酒精燈火焰的充分燃燒層中進(jìn)行灼試管口或瓶口放在酒精燈火焰的充分燃燒層中進(jìn)行灼燒滅菌。燒滅菌。（2）常用的滅菌）常用的滅菌(mi jn)方法方法2.2.干熱滅菌：將玻璃器皿、金屬用具等能耐高溫并需干熱滅菌：將玻璃器皿、金屬用具等能耐高溫并需要保持干燥的物品要保持干燥的物品(wpn)(wpn)放到干熱滅菌箱內(nèi)，在放到干熱滅菌箱內(nèi)，在160160170OC170OC中加熱中加熱1 12h2h即可。即可。3.3.高

7、壓蒸汽滅菌：高壓蒸汽滅菌：將需滅菌的物品放到盛有水的高壓將需滅菌的物品放到盛有水的高壓滅菌鍋內(nèi)（見教材滅菌鍋內(nèi)（見教材1616頁圖頁圖2-42-4）煮沸，待冷空氣排盡后）煮沸，待冷空氣排盡后，密閉繼續(xù)加熱至鍋內(nèi)壓力到，密閉繼續(xù)加熱至鍋內(nèi)壓力到100kPa100kPa，溫度到，溫度到121121O OC C后，后，維持維持151530min30min即可。即可。第9頁/共19頁第十頁，共20頁。第10頁/共19頁第十一頁，共20頁。 二、實(shí)二、實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 操操 作作（一）制備（一）制備(zhbi)牛肉膏蛋白胨固體牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基1.1.計(jì)算計(jì)算(j (j sun)sun) 2. 2.稱

8、量稱量(chn(chn linlin) ) 3. 3.溶化溶化 4. 4.滅菌滅菌 5. 5.倒平板：倒平板：待培養(yǎng)基冷卻到待培養(yǎng)基冷卻到5050O OC C左右左右（P P1717）平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？ 平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。第11頁/共19頁第十二頁，共20頁。

9、（二）純化（二）純化(chn hu)大腸大腸桿菌桿菌1.1.平板平板(pngbn)(pngbn)劃線法劃線法 在數(shù)次劃線后可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉在數(shù)次劃線后可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見眼可見(kjin)的子細(xì)胞群體稱菌落。的子細(xì)胞群體稱菌落。 1、為什么在操作的第一步以及劃線之前都要灼燒接種環(huán)、為什么在操作的第一步以及劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)？殺滅殘留在接種環(huán)的微生物。殺滅殘留在接種環(huán)的微生物。第12頁/共19頁第十三頁，共20頁。 2. 2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)在灼燒接種環(huán)之后，

10、為什么要等其冷卻后再進(jìn)行行(jnxng)(jnxng)劃線？劃線？ 3. 3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？是從上一次劃線的末端開始劃線？以免接種以免接種(jizhng)環(huán)溫度太高，殺死菌種。環(huán)溫度太高，殺死菌種。 劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖(fnzh)而來的菌落。第13頁/共19頁第十四頁，共20頁。 2. 2.稀釋稀釋(xsh)(xsh)涂布平板法涂布平板法 稀釋涂布平板稀釋涂布平板(pngbn)法

11、操作過程分兩個(gè)步驟，法操作過程分兩個(gè)步驟，即系列稀釋操作和涂布平板即系列稀釋操作和涂布平板(pngbn)操作。操作。系列稀釋系列稀釋(xsh)操作操作101102103104105106 (1) (1)將分別盛有將分別盛有9mL9mL水的試管滅菌并編號。水的試管滅菌并編號。 (2) (2)用移液管吸取用移液管吸取1mL1mL培養(yǎng)的菌液，注入第二支試管中，輕壓橡培養(yǎng)的菌液，注入第二支試管中，輕壓橡皮頭，吹吸三次使之充分混勻。皮頭，吹吸三次使之充分混勻。 (3) (3)從從10101 1倍稀釋的試管中吸取倍稀釋的試管中吸取1mL1mL稀釋液，注入第三支試管中稀釋液，注入第三支試管中，重復(fù)步驟，重復(fù)

12、步驟2 2，直至到第六支試管。，直至到第六支試管。第14頁/共19頁第十五頁，共20頁。涂布平板涂布平板(pngbn)操作（操作（P19）(1)(1)將涂布器浸在盛有將涂布器浸在盛有7070的酒精的酒精(jijng)(jijng)的燒杯中。的燒杯中。(2)(2)取少量取少量(sholing)(sholing)菌液（不超），滴加到培養(yǎng)基表面菌液（不超），滴加到培養(yǎng)基表面。(3)(3)將沾有酒精的涂布器在火焰上將沾有酒精的涂布器在火焰上引燃引燃，火熄后，火熄后冷卻冷卻8 810s10s。(4)(4)用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布平板操作后，涂布平板

13、操作后，3737度恒溫培養(yǎng)，如果在培養(yǎng)基上觀度恒溫培養(yǎng)，如果在培養(yǎng)基上觀察到不同形態(tài)的菌落，請分析其可能的原因。察到不同形態(tài)的菌落，請分析其可能的原因。 無菌操作未達(dá)到要求：可能是培養(yǎng)基滅菌不徹底；可能是接無菌操作未達(dá)到要求：可能是培養(yǎng)基滅菌不徹底；可能是接種時(shí)發(fā)生了污染；也可能是在培養(yǎng)的過程中受到了污染。種時(shí)發(fā)生了污染；也可能是在培養(yǎng)的過程中受到了污染。第15頁/共19頁第十六頁，共20頁。兩種純化兩種純化(chn hu)(chn hu)細(xì)菌的方法的比較細(xì)菌的方法的比較項(xiàng)目項(xiàng)目優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)缺點(diǎn)平板平板劃劃線法線法可以觀察菌落特征，可以觀察菌落特征，對混合菌進(jìn)行分離對混合菌進(jìn)行分離不能計(jì)數(shù)不能

14、計(jì)數(shù)稀釋稀釋涂涂布平布平板法板法可以計(jì)數(shù)可以計(jì)數(shù)，可以觀，可以觀察菌落特征察菌落特征吸收量較小，較麻吸收量較小，較麻煩，平板不干燥效煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延果不好，容易蔓延第16頁/共19頁第十七頁，共20頁。1、下面是對大腸桿菌進(jìn)行數(shù)量測定的實(shí)驗(yàn)，請回答有關(guān)問題。、下面是對大腸桿菌進(jìn)行數(shù)量測定的實(shí)驗(yàn)，請回答有關(guān)問題。實(shí)驗(yàn)步驟：實(shí)驗(yàn)步驟：(1)制備稀釋倍數(shù)為制備稀釋倍數(shù)為102、103、104、105、106的系列稀釋液。的系列稀釋液。(2)為了得到更加準(zhǔn)確的結(jié)果，你選用為了得到更加準(zhǔn)確的結(jié)果，你選用_法接種樣品。法接種樣品。(3)適宜溫度下培養(yǎng)。適宜溫度下培養(yǎng)。結(jié)果分析：結(jié)果分析：(

15、1)測定大腸桿菌數(shù)時(shí)，在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為測定大腸桿菌數(shù)時(shí)，在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下的培養(yǎng)基中，得到以下(yxi)幾幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確可信的是種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確可信的是_，其理由是，其理由是_ 。A一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230B兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是220和和260，取平均值，取平均值240C三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、50和和520，取平均值，取平均值260D四個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是四個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、300、240和和250，取平均值，取平均值250(2)一同學(xué)在稀釋倍數(shù)

16、為一同學(xué)在稀釋倍數(shù)為105的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均值為的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均值為234，那，那么每毫升樣品中的菌落數(shù)是么每毫升樣品中的菌落數(shù)是_(涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1 mL)。稀釋稀釋(xsh)涂布平板涂布平板D 在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少定要涂布至少(zhsho)三個(gè)平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服三個(gè)平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性；在分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，要考慮所設(shè)置的重復(fù)組的結(jié)果是力與準(zhǔn)確性；在分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，要考慮所設(shè)置的重復(fù)組的結(jié)果是否合理否合理2.34108第17頁/共19頁第十八頁，共20頁。

17、(3)用這種方法測定用這種方法測定(cdng)的大腸桿菌密度，實(shí)際活菌數(shù)量要比測得的大腸桿菌密度，實(shí)際活菌數(shù)量要比測得的數(shù)量的數(shù)量_，因?yàn)椋驗(yàn)開多多當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí)，平板當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí)，平板(pngbn)上觀察到的只是一個(gè)菌落上觀察到的只是一個(gè)菌落2制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的下列操作中，不正確的是制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的下列操作中，不正確的是A操作流程是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌和倒平板操作流程是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌和倒平板B將稱好的牛肉膏連同將稱好的牛肉膏連同(lintng)稱量紙一同倒入燒杯中再稱量紙一同倒入燒杯中再加水、去紙加水、去紙C滅菌后向牛肉膏蛋白胨溶液中加滅菌后向牛肉膏蛋白胨溶液中加2%瓊脂，并使其溶解瓊脂，并使其溶解D將培養(yǎng)基冷卻到約將培養(yǎng)基冷卻到約50 時(shí)，在酒