補陽還五湯中總黃酮提取工藝探究

1、補陽還五湯中總黃酮提取工藝探究【摘要】目的：通過正交設計用不同的因素及不同的水平 的提取方法來得到提取補陽還五湯中總黃酮的最佳工藝。方 法：用正交試驗的方法從乙醇的濃度，提取時間，溶劑倍量, 提取次數四個不同因素，每個因素設置3個不同的水平。以 總黃酮含量為考察指標，從中尋找一個最合適的提取條件。 用紫外分光光度法測定總黃酮含量和純度，從而確定總黃酮 提取的最佳工藝。結果：確定補陽還五湯中總黃酮的最佳工 藝條件為用70%的乙醇150ml煎煮3次，每次90mino結論: 此次試驗以乙醇作為提取溶劑，廉價、安全，且符合工業(yè)化 生產的要求。【關鍵詞】補陽還五湯；總黃酮；含量測定補陽還五湯是清代名醫(yī)王

2、清任創(chuàng)制的經典復方，該方由 黃英120g、當歸尾6g、赤芍5g、地龍、川葦、桃仁、紅花 各3g組成，具有補氣、活血、通絡的功效，主治中風及其 后遺癥，其中所含的黃英是重要的補氣中藥。本試驗研究的 是補陽還五湯的提取液。它含有多糖、黃酮類和皂昔類等多 種有效成分1。本試驗是恒溫水浴提取補陽還五湯中總黃 酮的工藝研究，為補陽還五湯的進一步研究和開發(fā)提供資料 和依據，為補陽還五湯及其它經典復方的創(chuàng)新研究提供一定 的參考價值。運用現(xiàn)代化學方法研究傳統(tǒng)中藥，建立起中藥 質量控制標準，研制出“安全、有效、可控、穩(wěn)定”的新藥。1實驗材料1.1器材電子天平ag135型，恒溫水浴鍋，旋轉蒸發(fā)儀，循環(huán)水 式真空泵

3、shz-d (iii)型，電熱恒溫鼓風干燥箱dgg-9140a 型,雙光束紫外可見分光光度計tu-1900型，抽濾瓶等。1.2藥品與試劑黃竄、當歸、赤芍、地龍、川葦、桃仁紅花由杭州方 回春堂藥店提供。蘆丁對照品，由浙江省食品藥品檢驗所提 供。無水乙醇：99. 7%分析純，安徽安特生物化學有限公司 生產。10%nan02 溶液，10%al (n03)3 溶液，lmol/1 的 naoh 溶液，濃氨水，1%三氯化鋁。2實驗方法2. 1補陽還五湯總黃酮的提取2精密稱取補陽還五湯藥材，加70%乙醇150ml,提取2次, 乙醇水浴回流提取90 min,過濾，搖勻，濃縮，揮干至漿狀， 剩余物用60%乙醇溶

4、解置于50ml容量瓶中，加60%乙醇稀釋 至刻度，搖勻，作供試品備用。2. 2黃酮含量測定2. 2. 1定性測定實驗步驟32. 2. 1. 1紫外光下呈色反應：取該樣品溶液點在濾紙上, 在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈灰褐色并有熒光斑點。2. 2. 1. 2濃氨水反應：取該樣品溶液點在濾紙上,將濾紙 在氨水上方熏15min ,立即在紫外光下觀察(254nm)，呈極明 顯的黃褐色熒光斑點。2.2. 1.3三氯化鋁反應：取樣品溶液點在濾紙上，滴加 1 %三氯化鋁乙醇溶液，吹干。在可見光下呈灰黃色，在紫外 光下呈黃色熒光斑點。2. 2. 2定量測定42. 2. 2. 1對照品溶液的制備精密稱取在10

5、5°c干燥恒重的蘆丁對照品20mg于100ml 容量瓶中，60%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密量取 10ml置50ml容量瓶中，60%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻即得 每 lml 含無水蘆丁 0. 040mg (40ug/ml)2. 2. 2. 2最大吸收波長的確定5取供試品溶液lml放入100ml容量瓶中，加入10%nan02 溶液lml,5min后加入10%a1(n03)3溶液lml,搖勻,6min后 加入lmol/1的naoh溶液5ml,用60%乙醇稀釋至刻度，用紫 外可見分光光度計將供試品溶液在400600nm處進行掃描, 結果發(fā)現(xiàn)對照品溶液及供試品溶液在510nm附近有最

6、大吸 收峰，實驗中選擇測定波長為510nmo2. 2. 2. 3標準曲線的繪制精密量取對照品溶液2,3,4,5,6,7ml,分別置25ml容量 瓶中加入10%nan02溶液lml,5min后加入10%al(n03)3溶液 lml,搖勻，6min后加入lmol/1的naoh溶液5ml,用60%乙醇 稀釋至刻度，搖勻，制成含蘆丁 3. 211.2ug/ml的系列標準 溶液。(以25ml容量瓶中加入10%nan02溶液lml,5min后加 入 10%al(n03)3 溶液 lml,搖勻，6min 后加入 lmol/1 的 naoh 溶液5ml,用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻作為空白)，在510 nm

7、波長處測定其吸光度。結果表明，蘆丁在3. 211. 2 u g/ml范圍內符合beer 定律，吸光度與濃度呈良好的線性關系，其回歸方程 為:y=0. 0239x-0. 01,相關系數 r二0.9991。2. 2. 2. 4精密度試驗從對照品溶液中，量取2ml放入25ml容量瓶中，加入 10%nan02 溶液 lml,5min 后加入 10%al(n03)3 溶液 1ml,搖 勻,6min后加入lmol/1的naoh溶液5ml,用60%乙醇稀釋至 刻度，搖勻。溶液1ml,搖勻,6min后加入lmol/1的naoh溶 液5ml,用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻作為空白)測在510nm 波長處測定其吸光

8、度，重復六次。結果見表精密試驗結果：結果表明，rsd%乙醇濃度為70%,60min /次，溶劑量為150ml來提取, 提取次數分別為1次，2次，3次，4次。再測定各水平總 黃酮的吸光度為0. 123, 0. 145, 0. 150, 0. 143,得提取3次 最好。2. 3. 2驗證性實驗取補陽還伍湯藥材按最佳工藝條件進行提取，進行驗證 實驗結果見表。3討論試驗結果亦表明總黃酮的提取工藝與乙醇濃度及溶劑 倍量有顯著關系，所以最終確定補陽還五湯中總黃酮的提取 工藝條件為a2b1c3d2,確定補陽還五湯中總黃酮的最佳工藝 條件為用70%的乙醇150ml煎煮3次，每次90mino且試驗 證明其精密度

9、和穩(wěn)定性良好。用鋁鹽分光光度法測定黃酮的 含量，結果準確可靠，操作簡單易行，此法的關鍵是顯色時間 要把握好，一般以llmin為宜。所得總黃酮是深棕色物質， 為方便以后的含量測定，用60%的乙醇定容。初步測得補陽 還五湯中總黃酮的含量為41. 402mg/ml。提取時間的長短和 恒溫水浴溫度的控制，實質上是體現(xiàn)在溫度對浸提效果的影 響，一方面浸提速度宜接與浸提溫度成正相關，另一方面溫 度升高，溶劑的粘度減少，也增大了浸提溫度效率。但是， 鑒于有效成分的熱穩(wěn)定性，以及溫度升高時雜質溶出量也相 應增大，在提取時浸提溫度不能過高，同時也考慮到乙醇的 沸點是78. 5°c,溫度過高，乙醇揮發(fā)嚴

10、重，生產成本增大。因此將恒溫水浴鍋溫度控制在80°c-85°c之間。本試驗以廉 價、安全的乙醇作為提取溶劑，所得樣品有效成分含量高, 表明該方法簡便、實用、經濟。為補陽還五湯的進一步研究 和開發(fā)提供資料和依據，為補陽還五湯及其它經典復方的創(chuàng) 新研究提供一定的參考價值。參考文獻1 .王晩霞，李榮亨，補陽還五湯作用機制研究進展j. 中西醫(yī)結合心腦血管病雜志,2008,6 (5)： 574576。2 .紀松崗，李翔，正交設計法確定黃英中黃酮類成分 的超聲提取條件第二軍醫(yī)大學學報，2005,26(10):1168-1170o3 .范媛媛，李新華，綠豆黃酮提取工藝研究j.沈陽 農業(yè)大學學報，2005, 36(5)： 619- 622。4 .蔡碧瓊，余萍，水稻谷殼中總黃酮提取工藝及其性 質表征江西農業(yè)大學學報,2007, 36(5)： 142-147o5 .蔡凌云，肖娟，白葉中黃酮成分的鑒定和含量測 定綿陽師范學院學