α-羥丁酸脫氫酶(α-HBD)檢測(cè)試劑盒(速率比色法)

1、北京雷根生物技術(shù)有限公司a-羥丁酸脫氫酶（a-HBD）檢測(cè)試劑盒（速率比色法）簡(jiǎn)介：a-羥丁酸脫氫酶（a-HBD）不是一個(gè)獨(dú)立的特異酶，而是含有H亞基的乳酸脫氫酶同工酶LDi和LD2的總稱(chēng)，測(cè)定a-羥丁酸脫氫酶，其實(shí)際反映的是乳酸脫氫酶同工酶LDi和LD 2的活性，對(duì)診斷心肌疾病和肝臟疾病有一定意義。a-羥丁酸脫氫酶（a-HBD）檢測(cè)試劑盒（速率法）其檢測(cè)原理是a-羥丁酸脫氫酶催化 a-酮 丁酸還原成a-羥丁酸，同時(shí)使 NADH氧化成NAD +。其反應(yīng)公式：a-酮丁酸 +NADH t a-羥丁酸 +NAD +。通過(guò)分光光度法（分光光度計(jì)和自動(dòng)分析儀）檢測(cè)吸光度，監(jiān)測(cè)吸光度下降速率， 進(jìn)而計(jì) 算

2、a-羥丁酸脫氫酶的活性。該試劑盒可用于檢測(cè)血清、血漿、組織等樣品的a-羥丁酸脫氫酶。50T試劑盒采用分光光度計(jì)可檢測(cè)約 25個(gè)樣本，如果采用自動(dòng)分析儀檢可檢測(cè)約 142 個(gè)樣本。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。組成:編號(hào)TE028350TStorage試劑(A): HBD assay buffer100ml4 C試劑(B): NADH solution8ml-20 C避光試劑（C）:酮丁酸溶液0.5ml-20 C避光使用說(shuō)明書(shū)1份自備材料：1、蒸餾水2、離心管或小試管3、水浴鍋4、比色杯5、分光光度計(jì)或自動(dòng)分析儀操作步驟（僅供參考）:1、準(zhǔn)備樣品： 血漿、血清樣品：血漿、血

3、清按照常規(guī)方法制備，可以直接用于本試劑盒的測(cè)定，-20 C凍存，用于a-HBD的檢測(cè)。 細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織進(jìn)行勻漿，低速離心取上清，-20 C凍存，用于a-HBD的檢測(cè)。 高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的a-HBD，可以使用蒸餾水稀釋。 （選做）樣品準(zhǔn)備完畢后可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度，以便于后續(xù)計(jì)算單位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的a-HBD含量。2、 配制 NADH 工作液：取適量的 NADH solution ，按 NADH solution: HBD assay buffer 混合，即為NADH工作液。4 C避光保存3月有效。3、 配制酮丁酸工作液：取適量的酮

4、丁酸溶液，按酮丁酸溶液：HBD assay buffer 的比例混合，即為酮丁酸工作液。4 C避光保存1周有效。4、分光光度計(jì)檢測(cè)：按照下表設(shè)置空白管、測(cè)定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的酶活性過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。加入物（ml）空白管測(cè)定管蒸餾水0.04一待測(cè)樣品（如血清等）一0.04NADH工作液1.61.6混勻，孵育。酮丁酸工作液0.080.08混勻，孵育，1.0cm光徑，蒸餾水調(diào)零，讀取吸光度 （A空白1和A測(cè) 定1）,后再讀取吸光度（A空白2和A測(cè)定2）。5、自動(dòng)分析儀檢測(cè)：根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的儀器，設(shè)定測(cè)定參數(shù)，亦可參考下列性能指標(biāo):主波

5、長(zhǎng)340nm反應(yīng)方法速率法反應(yīng)溫度37 C輔助波長(zhǎng)405nm反應(yīng)方向向下U/L消光系數(shù)6220加入物（訕）空白管測(cè)定管蒸餾水7一待測(cè)樣品（如血清等）一7NADH工作液280280混勻，37 C孵育。酮丁酸工作液1414啟動(dòng)反應(yīng)，延遲時(shí)間60s，檢測(cè)時(shí)間180s，女口 AA/min>0.08，應(yīng)用HBD assay buffer稀釋樣品后重新檢測(cè)。計(jì)算：分光光度計(jì)計(jì)算公式：6a-HBD(U/L)= AA/min X(10 /6220) X1.72/0.04= AA/min X6913式中：AA/min= AA/min=( A 測(cè)定 1 A 測(cè)定 2)-( A 空白1 A空白 2)/2自動(dòng)分析儀計(jì)算公式：6a-HBD(U/L)= AA/min X(10 /6220) X301/7= AA/min X6913注意事項(xiàng)：1、 紅細(xì)胞中HBD含量高，樣本采集后應(yīng)在 2h內(nèi)分離血清，溶血血清不能用。血清置于4 C酶活性可穩(wěn)定1-2周。2、 枸櫞酸鹽、氟化物、草酸鹽會(huì)抑制酶活性，EDTA(1mg/ml)、肝素(0.2mg/ml)不會(huì)抑制酶活性。3、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。有效期：12個(gè)月有效。相關(guān)：編號(hào)名稱(chēng)CA0005氨卞青霉素溶液(Ampicilli n,50