24份普通白菜遺傳多樣性的形態(tài)特征和RAPD分析

1、24份普通白菜遺傳多樣性的形態(tài)特征和RAPD分析p 打開文本圖片集【摘要】：p ：利用形態(tài)特征與RAPD分析p 技術，分析p 了國內不同地區(qū)的24份普通白菜（Brassica cestris L.ssp.chinensis （L.） Makino var.munis Tsee et Lee.）種質的遺傳多樣性.結果表明，13個形態(tài)學性狀的變異系數(shù)為12.469.9，其中葉柄變異最大，子葉變異最小.24份普通白菜材料在形態(tài)學聚類的距離5處聚為4類.利用篩選出的15條RAPD引物從24份普通白菜材料中共擴增出113條帶，其中多態(tài)性條帶83條，多態(tài)率73.4，平均每條引物條帶7.53條、多態(tài)性條帶5

2、.53條.RAPD數(shù)據(jù)聚類在相似系數(shù)0.77處，分為8類，與形態(tài)聚類間有重疊和細分.以形態(tài)聚類4個類別計算的Neis基因多樣性指標H和Shannon信息指數(shù)I，均為第大類>第大類>第大類>第大類，第類的H和I分別為0.2395和0.3523.而不同地區(qū)則以江淮地區(qū)的Neis基因多樣性H和Shannon信息指數(shù)I最高，分別為0.2076和0.3098.這些結果與普通白菜種質資多樣性特征以及地區(qū)分布相吻合.【關鍵詞】：p ：普通白菜； 形態(tài)特征； RAPD分析p ； 聚類分析p 中圖分類號： S 634.3 文獻標志碼： A 文章編號： 10005137（20_）06058508

3、普通白菜（Brassica cestris L.ssp.chinensis （L.） Makino var.munis Tsee et Lee.）為十字花科蕓薹屬蕓薹種小白菜（不結球白菜）亞種的一個主要變種1-2，屬異花授粉作物.授粉方式多樣，變種內、種內和種間雜交廣泛，因此，經長期選擇，就產生了復雜變異，形成了豐富的品種資，表現(xiàn)為形態(tài)、習性、生態(tài)適應性上的差異類型3-4；此外，不同生態(tài)環(huán)境下栽培，也可形成不同的群體5.為此，不結球白菜分類一直存在著廣泛的爭議，也使得品種繁多的普通白菜種質資的收集和整理存在一定難度，尤其是同種異名和同名異種的種質更加難以確定其類別和地位.因此，進行普通白菜種質

4、資的鑒定對種質的收集和保存意義重大.種質鑒定方法有形態(tài)學方法和分子標記技術兩種類型6-9，形態(tài)學方法易受栽培技術和季節(jié)變化等影響，準確性不高；分子標記技術直接以DNA形式表現(xiàn)，有穩(wěn)定、快速、準確的特點9-10，已被廣泛用于紫珠11、溫郁金12、菠蘿13、油茶14、芹菜15、不結球白菜16等不同植物的種質鑒定、遺傳多樣性分析p 和圖譜構建.目前在不結球白菜上進行分子標記取得了一定進展16-18，侯喜林19-21等對我國南方廣泛種植的普通白菜、塌菜等不少品種進行了親緣關系分析p .宋廷宇22等對瀕于滅絕的薹菜進行了RAPD和SSR分析p ，以保護正在流失的種質資.盡管前人已做了不少工作，但目前市場

5、上品種混雜現(xiàn)象嚴重，尤其是同名異種或異種同名現(xiàn)象非常普遍，因此進行品種鑒定以理清品種間的親緣關系顯得十分必要.本研究結合形態(tài)學性狀和RAPD分子標記，對產自我國不同地區(qū)的不同類型的24份普通白菜種質，進行變種內親緣關系的分析p ，以期為普通白菜種質資收集、保存、利用提供依據(jù)，也為已建成的普通白菜種質資庫23的修訂以及正在創(chuàng)建的不結球白菜種質數(shù)據(jù)庫提供正確信息.1 材料與方法1.1 植物材料參試的普通白菜材料共計24份（表1），分別標記為124，全部為市場購買.品種選擇考慮了產地、形態(tài)特征、播期等因素，盡量在適宜播期內，品種的分布范圍盡可能代表普通白菜在國內的分布區(qū)域，形態(tài)上要將各種特征包含在內

6、，如株型、葉色等.種子產地包括華東、華北、西北、華中、華南等地區(qū)的13個省份；株高有矮箕、中梗和高梗之分；葉色有墨綠、綠、淺綠類型；葉面有光滑、皺縮和帶毛類型.試驗分20_年和20_年2個年度進行，其中20_年為預備實驗.播種時間分別為20_年10月8日、20_年10月11日，露地穴播，穴距20 cm×15 cm，二葉一心期定植.小區(qū)面積9 m2，重復2次.正常田間管理.1.2 試驗方法1.2.1 形態(tài)特征調查在正常收獲期（20_年為1月10日，20_年為1月14日），調查24個品種的葉長、葉柄長、葉寬、葉柄寬、葉厚、葉柄厚、冠幅、株高、蓮座葉數(shù)等數(shù)量性狀和株型、葉形、葉緣、葉面、葉

7、色、葉柄色等質量性狀.每個小區(qū)取5株代表性的植株調查，重復2次.調查標準參照3進行.數(shù)量性狀數(shù)據(jù)按2年平均，質量性狀取2年相同的表現(xiàn).1.2.2 RAPD分子標記操作1.2.2.1 DNA提取采用CTAB法提取.所用嫩葉取自20_年的田間植株，完成品種田間形態(tài)調查后，每份材料選取12 g嫩葉，放入冰盒中，迅速帶回實驗室，置冰箱中保存，備用.取適量（比指甲蓋稍大）葉片放入EP管，加適量石英砂，再加300 L PVP+CTAB的混合液，研磨到看不見組織后，又加300 L上述混合液研磨.在通風櫥中加入6 L 巰基乙醇后，65 水浴1 h（每隔1520 min搖1次）.水浴后，加600 L 苯酚-氯仿（11）混合液，4 120_ r/min離心20 min，分層.取上清液于EP管，輕搖，相同條件下離心.上清液移入約1 mL無水乙醇的EP管中，混勻，-20 冰箱處理3060 min，取出，4 離心.倒去上清液，加600 L 75乙醇，4 120_ r/min離心10 min.去掉上清液，殘液留