甘油的檢測方法匯總

1、甘油的檢測方法匯總在發(fā)酵行業(yè)中，甘油作為底物，是發(fā)酵液中生物合成的直接前體，會(huì)影響外源蛋白的啟動(dòng)表達(dá)效率，其含量的高低直接影響產(chǎn)物的發(fā)酵單位，是決定菌種取舍的重要指標(biāo)，是提高工程菌的發(fā)酵密度，提高產(chǎn)品生產(chǎn)率的關(guān)鍵。在生物柴油生產(chǎn)中，它是副產(chǎn)物，其含量直接影響生物柴油的使用性能，是衡量生物柴油產(chǎn)品品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。此外，甘油能與水結(jié)合以防止紅細(xì)胞的冷凍損傷，能延長紅細(xì)胞的保存期，被普遍用作細(xì)胞內(nèi)冷凍保護(hù)劑等。由于甘油用途很廣，因此其含量的測定具有非常重要的意義。目前國內(nèi)外甘油含量的測定方法較多，主要有高碘酸氧化法、Cu2 + 絡(luò)合比色法、酶比色法法、紫外 - 可見分光光度法、高效液相色譜法、氣

2、相色譜法、近紅外光譜法以及原子吸收法等。下面將對(duì)其進(jìn)行簡要概述：一、高碘酸法1. 原理： 高碘酸氧化法是目前常見用于甘油含量檢測的方法，利用高碘酸與甘油發(fā)生氧化還原反應(yīng)， 剩余高碘酸及反應(yīng)生成的碘酸與碘化鉀反應(yīng)生成碘， 再用硫代硫酸鈉進(jìn)行滴定，根據(jù)消耗的硫代硫酸鈉的量來計(jì)算甘油的含量。2. 操作步驟準(zhǔn)確發(fā)酵液 10ml 于 100mL小燒杯中，加少量水溶解，然后轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用水稀釋至標(biāo)線，搖勻，靜置。用移液管準(zhǔn)確移取10mL上述溶液于碘量瓶中，加入20mL高碘酸鈉溶液，混合均勻后，于黑暗中避光靜置40min，然后加入碘化鉀溶液和20%鹽酸溶液各15mL，調(diào)節(jié) pH 值在 0.8

3、1.0 之間，然后用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，近終點(diǎn)時(shí)， 加入 2mL淀粉指示劑溶液，繼續(xù)滴定至溶液藍(lán)色消失。同時(shí)做試樣空白。3. 計(jì)算： w（V2 V1） C M10010 / 50 4 1000式中： w樣品中甘油的含量，；V1空白試樣消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL；V2試樣消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL；C硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，molL；M甘油相對(duì)分子質(zhì)量；二、酶比色法1. 原理：它是利用酶的特異性催化反應(yīng)建立的測定甘油的一種酶學(xué)方法，是指甘油在甘油激酶作用下轉(zhuǎn)化為 3- 磷酸甘油，后者由磷酸甘油氧化酶催化生成磷酸二羥丙酮和過氧化氫，然后過氧化氫和 4- 氨基安普比林、4- 氯

4、酚在過氧化物酶催化下反應(yīng)生成紫蘭色、 能在 500 nm左右有特征吸收峰的醌亞胺，通過顏色深淺即吸光度的變化測定所生成的H2O2 ，甘油的含量與生成的 H2O2 成正比，這樣用比色法就可以測定甘油的含量。2. 操作步驟波長： 500nm?(480520nm)?反映溫度： 37?比色杯光徑： 1cm?取一定量 R1(參看 R2瓶簽 ) 加入 1 瓶 R2 中，溶解后即為工作液，工作液預(yù)先保溫至測試溫度?？瞻坠苄?zhǔn)管樣品管工作液1ml1ml1ml蒸餾水0.0100標(biāo)準(zhǔn)品0.01樣品000.01分別混合均勻，在反應(yīng)溫度保溫10 分鐘，以試劑空白管校零，記錄校準(zhǔn)及樣品OD值。3. 計(jì)算： ?甘油濃度

5、=A樣品 /A 校準(zhǔn) ×校準(zhǔn)濃度（ mmol/L 或 mg/dl ） ?三、高效液相色譜法1. 原理：高效液相色譜法 ( HPLC) 的原理是以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，利用色譜柱對(duì)待測混合物先進(jìn)行分離，然后再進(jìn)行檢測，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析，因而其測量的準(zhǔn)確性和精確度較高，目前已成為檢測生化分子較常用的一種方法。2. 操作步驟（ 1）首先用水將發(fā)酵液稀釋 2.5 倍 , 然后加 H3PO4 調(diào) pH至 5.5, 在轉(zhuǎn)速 8000r/min 、溫度 4下離心 10min, 經(jīng)微孔濾膜過濾用于 HP

6、LC分析；（ 2）將甘油標(biāo)準(zhǔn)系列溶液在最佳色譜條件下進(jìn)行 HPLC分析 , 以峰面積外標(biāo)法定量得到甘油標(biāo)準(zhǔn)曲線；（ 3）按照樣品預(yù)處理方法處理后進(jìn)樣 5 微升 , 記錄峰面積 , 代入線性方程中 , 計(jì)算其測定值。將計(jì)算值乘以稀釋倍數(shù)后 , 即得發(fā)酵液中甘油的含量。四、氣相色譜法1. 原理：氣相色譜分析法是用于分離分析復(fù)雜樣品中的化合物的一種方法，其原理是一定量的氣體或液體分析物被注入到柱一端的進(jìn)樣口中，在載氣帶動(dòng)下通過色譜柱，分析物的分子會(huì)受到柱壁或柱中填料的吸附。由于不同的樣品具有不同的物理和化學(xué)性質(zhì)，與特定的固定相有著不同的相互作用，使得每一種類型的分子都有自己的通過速率，因此，分析物中

7、的各種不同組分就會(huì)在不同的時(shí)間到達(dá)柱的末端，從而得到分離。當(dāng)化合物從柱的末端流出時(shí)，它們被檢測器檢測到，產(chǎn)生相應(yīng)的信號(hào)，并被轉(zhuǎn)化為電信號(hào)輸出，從而確定每一個(gè)組分到達(dá)色譜柱末端的時(shí)間順序以及每一個(gè)組分的含量。2. 操作步驟（ 1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制在 7 個(gè) 25mL容量瓶中分別準(zhǔn)確稱入0、0.05 、0.1 、0.2 、0.3 、0.4 、0.5g 甘油（精確至 0.1mg），再分別移入2mL內(nèi)標(biāo)貯備液，用混合溶劑定容并搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。 其中甘油質(zhì)量濃度分別為0、2、4、8、12、20g/L ，內(nèi)標(biāo)質(zhì)量濃度均為8g/L 。（ 2）樣品的制備 在 25mL容量瓶中加入 5ml 的發(fā)酵液樣品，

8、移入 2mL內(nèi)標(biāo)貯備液，用混合溶劑定容至刻度并搖勻。（ 3） GC條件色譜柱： HP-5 石英毛細(xì)管柱， 30m（柱長）× 0.32mm（內(nèi)徑）× 0.25 m（膜厚）。柱溫：初始溫度 120，保留 5min，以 20 /min 升至 290，保留 10min。進(jìn)樣口溫度： 280，進(jìn)樣量： 0.2 L，分流比： 1001。檢測器（ FID）溫度： 300，氫氣流速： 40mL/min，空氣流速： 300mL/min。載氣：氮?dú)?，流速?1mL/min，恒流模式（ 4）進(jìn)樣，計(jì)算五、酶電極法1、檢測原理利用生物酶只能催化一種或一類底物的性質(zhì)，將甘油氧化酶進(jìn)行固定化處理，樣本

9、中的甘油在甘油酶膜的作用下被催化生成過氧化氫，根據(jù)電化學(xué)的原理，過氧化氫的濃度與電壓值正相關(guān)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)液、緩沖液的電壓值響應(yīng)值來確定樣本中甘油濃度。甘油濃度與電壓值相關(guān)性分析2. 操作步驟按相關(guān)操作說明進(jìn)行。整個(gè)檢測過程不超過 45 秒應(yīng)用范圍：發(fā)酵過程甘油濃度檢測，食品中甘油檢測，西爾曼科技有限公司國內(nèi)唯一一家有能力生產(chǎn)可以不用預(yù)稀釋樣本就可以檢測高達(dá)1甘油濃度的分析的制造商。六、總結(jié)甘油的測定方法很多 , 最常用的是化學(xué)法。 化學(xué)法測定甘油含量費(fèi)用較低, 但操作繁瑣 ,試劑用量大 , 耗時(shí)長 , 且有時(shí)誤差極大。 酶法測定甘油專一性強(qiáng) , 只與溶液中的甘油特異性地反應(yīng) , 但所需試劑昂貴 , 不利于工業(yè)應(yīng)用和大量樣品的檢測。測定游離甘油最靈敏的方法是氣相色譜法、液相色譜法，精確度較高，但需對(duì)甘油進(jìn)行硅烷化，操作麻煩，成本也較高。由于高碘