脂質(zhì)體PPT精選文檔

1、脂質(zhì)體制備技術(shù)概述脂質(zhì)體制備技術(shù)概述1、組成與結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)及其特點(diǎn)、組成與結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)及其特點(diǎn)2、口服腸溶胰島素脂質(zhì)體、口服腸溶胰島素脂質(zhì)體3、紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體、紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體4、脂質(zhì)體的現(xiàn)狀與未來、脂質(zhì)體的現(xiàn)狀與未來一、概述脂質(zhì)體脂質(zhì)體 （liposomes,或稱類脂小球）是一種類或稱類脂小球）是一種類似生物膜結(jié)構(gòu)的雙分子層微小囊泡。似生物膜結(jié)構(gòu)的雙分子層微小囊泡。 分類：分類： 1、單室脂質(zhì)體：有一層類脂質(zhì)雙、單室脂質(zhì)體：有一層類脂質(zhì)雙分子層構(gòu)成分子層構(gòu)成 2、多室脂質(zhì)體：由基層脂質(zhì)雙分、多室脂質(zhì)體：由基層脂質(zhì)雙分子層將被包含的水溶性藥物的水膜隔開子層將被包含的水溶性藥物的水膜隔開形

2、成不均勻的聚合體形成不均勻的聚合體結(jié)構(gòu)與組成結(jié)構(gòu)：雙分子層（與膠束區(qū)別）結(jié)構(gòu)：雙分子層（與膠束區(qū)別）組成：磷脂及附加劑組成：磷脂及附加劑 磷脂分子形成脂質(zhì)體時(shí)，磷脂分子形成脂質(zhì)體時(shí)，兩條疏水鏈指向內(nèi)部，親水基兩條疏水鏈指向內(nèi)部，親水基在膜的內(nèi)外表面上。構(gòu)成的囊在膜的內(nèi)外表面上。構(gòu)成的囊泡將水相介質(zhì)與外界隔離泡將水相介質(zhì)與外界隔離。特點(diǎn)特點(diǎn)載藥脂質(zhì)體特點(diǎn)： 1、靶向性 2、緩釋性 3、降低藥物毒性 4、提高藥物穩(wěn)定性制備脂質(zhì)體的材料磷脂類：卵磷脂、腦磷脂、大豆磷脂膽固醇：調(diào)節(jié)脂質(zhì)體的膜流動(dòng)性脂質(zhì)體的修飾長(zhǎng)循壞脂質(zhì)體免疫脂質(zhì)體糖基脂質(zhì)體溫度敏感脂質(zhì)體PH敏感脂質(zhì)體二、紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體二、紫杉醇長(zhǎng)

3、循環(huán)脂質(zhì)體（一）修飾以聚乙二醇（以聚乙二醇（PEG）作為修飾材料。）作為修飾材料。PEG的表面被柔順而親水的的表面被柔順而親水的PEG鏈鏈部分覆蓋，極性部分覆蓋，極性PEG基增強(qiáng)了脂質(zhì)基增強(qiáng)了脂質(zhì)體的親水性，減少血漿蛋白與脂質(zhì)體的親水性，減少血漿蛋白與脂質(zhì)體的相互作用，降低被巨噬細(xì)胞吞體的相互作用，降低被巨噬細(xì)胞吞噬的可能，延長(zhǎng)在循環(huán)系統(tǒng)的滯留噬的可能，延長(zhǎng)在循環(huán)系統(tǒng)的滯留時(shí)間，因而有利于肝脾以外的組織時(shí)間，因而有利于肝脾以外的組織或器官的靶向作用。或器官的靶向作用。 紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體到達(dá)作用部位后，發(fā)揮一系列的抗紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體到達(dá)作用部位后，發(fā)揮一系列的抗腫瘤作用。其作用機(jī)制主要有以下

4、三種：腫瘤作用。其作用機(jī)制主要有以下三種：1 細(xì)胞毒性作用：細(xì)胞毒性作用：紫杉醇屬于有絲分裂抑制劑紫杉醇屬于有絲分裂抑制劑 ,它可以誘導(dǎo)和促進(jìn)微管蛋白聚它可以誘導(dǎo)和促進(jìn)微管蛋白聚合合 ,抑制微管解聚。正常微管在抑制微管解聚。正常微管在 4 低溫或低溫或 Ca 存在下存在下可發(fā)生解聚。由于微管過于穩(wěn)定可發(fā)生解聚。由于微管過于穩(wěn)定 ,從而抑制紡錘體的形成從而抑制紡錘體的形成 ,使染色體不能向兩極移動(dòng)使染色體不能向兩極移動(dòng) ,使腫瘤細(xì)胞阻滯于使腫瘤細(xì)胞阻滯于 G2/ M 期期 ,最終阻止有絲分裂的完成最終阻止有絲分裂的完成 ,因而對(duì)多種腫瘤具有較強(qiáng)因而對(duì)多種腫瘤具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒作用的細(xì)胞毒作用 。（

5、二）作用機(jī)制（二）作用機(jī)制2 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用 凋亡凋亡 凋亡是正常細(xì)胞在有關(guān)基因控制凋亡是正常細(xì)胞在有關(guān)基因控制下的程序性死亡方式下的程序性死亡方式 ,腫瘤細(xì)胞正是失去了這種腫瘤細(xì)胞正是失去了這種正常控制而呈現(xiàn)無限制的增殖現(xiàn)象。紫杉醇能下正常控制而呈現(xiàn)無限制的增殖現(xiàn)象。紫杉醇能下調(diào)胞漿調(diào)胞漿 IkB - a水平水平 ,激活激活 NF - kB 并促進(jìn)其并促進(jìn)其轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核參與調(diào)控下游基因轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核參與調(diào)控下游基因 。研究發(fā)現(xiàn)。研究發(fā)現(xiàn) ,紫紫杉醇可激活或調(diào)節(jié)多種與凋亡相關(guān)基因或蛋白杉醇可激活或調(diào)節(jié)多種與凋亡相關(guān)基因或蛋白 ,如如Bcl 家族、家族、P53、P21、Fas/

6、Fas配體及半胱配體及半胱天冬酶天冬酶(Caspase)家族等家族等 ,可誘導(dǎo)細(xì)胞出現(xiàn)典型的可誘導(dǎo)細(xì)胞出現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變。目前尚不清楚紫杉醇誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改變。目前尚不清楚紫杉醇誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的信號(hào)傳導(dǎo)途徑以及有絲分裂阻滯和凋亡之凋亡的信號(hào)傳導(dǎo)途徑以及有絲分裂阻滯和凋亡之間的關(guān)系。但研究凋亡的重點(diǎn)已轉(zhuǎn)移到凋亡過程間的關(guān)系。但研究凋亡的重點(diǎn)已轉(zhuǎn)移到凋亡過程中一系列細(xì)胞內(nèi)具有關(guān)鍵作用的蛋白質(zhì)如何被特中一系列細(xì)胞內(nèi)具有關(guān)鍵作用的蛋白質(zhì)如何被特異性酶降解。凋亡發(fā)生機(jī)制中關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一是異性酶降解。凋亡發(fā)生機(jī)制中關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一是Caspase激活激活 ,已有研究表明在紫杉醇誘導(dǎo)腫瘤已有研究表明在紫杉

7、醇誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的過程中細(xì)胞凋亡的過程中 Caspase - 3 和和 Caspase - 8 起著重要作用。起著重要作用。 紫杉醇在體外可以抑制人血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖紫杉醇在體外可以抑制人血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖 ,在體內(nèi)可以抑在體內(nèi)可以抑制雞胚尿囊膜血管的新生制雞胚尿囊膜血管的新生 ,其抑制作用在其抑制作用在 3.514 nmol/L 的濃度的濃度下獲得并呈劑量依賴性下獲得并呈劑量依賴性 ,當(dāng)紫杉醇的濃度低于當(dāng)紫杉醇的濃度低于 1 nmol/L 時(shí)時(shí) ,對(duì)血管對(duì)血管和內(nèi)皮細(xì)胞無明顯影響。同時(shí)和內(nèi)皮細(xì)胞無明顯影響。同時(shí) ,在試驗(yàn)所選定的濃度下在試驗(yàn)所選定的濃度下 ,紫杉醇在體紫杉醇在體外未能抑制腫

8、瘤細(xì)胞的增殖外未能抑制腫瘤細(xì)胞的增殖;而在而在CAM體內(nèi)試驗(yàn)中體內(nèi)試驗(yàn)中 ,以以CAM胚胎胚胎10g計(jì)算計(jì)算 ,即使在最高濃度即使在最高濃度14 nmol/L 下下 ,只等效于只等效于0.24g/ kg,相當(dāng)相當(dāng)于于 70 kg成人成人 16.8g紫杉醇的劑量紫杉醇的劑量 ,遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于常規(guī)化療劑量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于常規(guī)化療劑量 ,提示提示紫杉醇對(duì)新生腫瘤血管的抑制機(jī)制與其細(xì)胞毒作用無關(guān)紫杉醇對(duì)新生腫瘤血管的抑制機(jī)制與其細(xì)胞毒作用無關(guān) ,是在非細(xì)胞是在非細(xì)胞毒濃度下表現(xiàn)出的特點(diǎn)。毒濃度下表現(xiàn)出的特點(diǎn)。 (1)由于含有親水基團(tuán)（由于含有親水基團(tuán)（PEG）而能阻止血液中許）而能阻止血液中許多不同組分特別是調(diào)理素

9、與其結(jié)合，從而降低與多不同組分特別是調(diào)理素與其結(jié)合，從而降低與單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的親和力，可在循環(huán)系統(tǒng)中穩(wěn)單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的親和力，可在循環(huán)系統(tǒng)中穩(wěn)定存在并使半衰期延長(zhǎng)，增加腫瘤組織對(duì)它的攝定存在并使半衰期延長(zhǎng)，增加腫瘤組織對(duì)它的攝取。取。 (2)由于癌增長(zhǎng)部位及感染、炎癥部位病變引起毛由于癌增長(zhǎng)部位及感染、炎癥部位病變引起毛細(xì)血管的通透性增加，含有紫杉醇的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)細(xì)血管的通透性增加，含有紫杉醇的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體能增加藥物在這些部位的聚集量體能增加藥物在這些部位的聚集量. (3)由于紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的緩釋直接作用于病由于紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的緩釋直接作用于病變部位，增強(qiáng)了治療效果。此種增加藥物的治

10、療變部位，增強(qiáng)了治療效果。此種增加藥物的治療指數(shù)的機(jī)制稱為指數(shù)的機(jī)制稱為“被動(dòng)靶向被動(dòng)靶向”。力撲素力撲素是國際首次上市的脂質(zhì)體劑型的紫杉醇是國際首次上市的脂質(zhì)體劑型的紫杉醇. 與其它紫杉醇產(chǎn)品相比，力撲素具有以下優(yōu)勢(shì)：與其它紫杉醇產(chǎn)品相比，力撲素具有以下優(yōu)勢(shì)： 1、避免了紫杉醇制劑因溶媒引發(fā)的超過敏反應(yīng)；、避免了紫杉醇制劑因溶媒引發(fā)的超過敏反應(yīng)； 2、顯著降低外周循環(huán)毒性反應(yīng)；、顯著降低外周循環(huán)毒性反應(yīng)； 3、明顯提高機(jī)體對(duì)紫杉醇的耐受性；、明顯提高機(jī)體對(duì)紫杉醇的耐受性； 4、顯示儲(chǔ)庫效應(yīng)和被動(dòng)靶向效應(yīng)、顯示儲(chǔ)庫效應(yīng)和被動(dòng)靶向效應(yīng)； 力撲素能明顯提高患者對(duì)紫杉醇的耐受力撲素能明顯提高患者對(duì)紫

11、杉醇的耐受性，小鼠靜脈給藥的性，小鼠靜脈給藥的LD50比紫杉醇注射比紫杉醇注射液大一倍液大一倍.（紫杉醇注射液為（紫杉醇注射液為33mg/kg，紫杉醇脂質(zhì)體為紫杉醇脂質(zhì)體為69.8mg/kg .)表明其耐表明其耐受性明顯提高，為臨床用藥加大劑量、受性明顯提高，為臨床用藥加大劑量、提高療效提供了空間。提高療效提供了空間。 動(dòng)物藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)表明：動(dòng)物藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)表明：（三）、制備紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的（三）、制備紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的材料材料紫杉醇（主藥）磷脂（脂質(zhì)體的基礎(chǔ)物質(zhì)）膽固醇（脂質(zhì)體“流動(dòng)性緩沖劑”）PEG（四）、制備方法薄膜分散法 將磷脂、膽固醇等脂質(zhì)及紫杉醇溶于氯仿中，然后將氯仿溶液在燒瓶中

12、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，使其在內(nèi)壁上形成一薄膜；將磷酸鹽緩沖液加入燒瓶中不斷攪拌，即得脂質(zhì)體。目前，美國Endorex公司研制的口服胰島素脂質(zhì)體（Orasome），已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段（二 ）脂質(zhì)體通過胞吞作用進(jìn)入小腸粘膜細(xì)胞小腸粘膜細(xì)胞小腸粘膜細(xì)胞小腸特點(diǎn)特點(diǎn)： 胰島素是大分子藥物，小腸無法直接吸收。而脂質(zhì)胰島素是大分子藥物，小腸無法直接吸收。而脂質(zhì)體是一種類似于生物膜的磷脂雙分子層的載體，它可體是一種類似于生物膜的磷脂雙分子層的載體，它可以和小腸粘膜細(xì)胞膜通過胞飲和胞吞作用而融合，使以和小腸粘膜細(xì)胞膜通過胞飲和胞吞作用而融合，使得包裹在脂質(zhì)體內(nèi)部的大分子藥物胰島素被小腸粘膜得包裹在脂質(zhì)體內(nèi)部的大分子藥物胰

13、島素被小腸粘膜細(xì)胞吸收，再通過胞吐作用釋放到血液中，發(fā)揮降血細(xì)胞吸收，再通過胞吐作用釋放到血液中，發(fā)揮降血糖的作用。糖的作用。脂質(zhì)體包裹胰島素后，能防止酶脂質(zhì)體包裹胰島素后，能防止酶 的降解作用的降解作用! 此外，脂質(zhì)體通過與此外，脂質(zhì)體通過與 腸道細(xì)胞膜融合或者表面吸附，腸道細(xì)胞膜融合或者表面吸附， 增加了胰島素進(jìn)入細(xì)胞的途徑，增加了胰島素進(jìn)入細(xì)胞的途徑， 有助于胰島素的穩(wěn)定與吸收有助于胰島素的穩(wěn)定與吸收 （三）口服腸溶胰島素脂質(zhì)體（三）口服腸溶胰島素脂質(zhì)體 材料和制備方法材料和制備方法材料材料殼聚糖殼聚糖(chitosan)(chitosan) 是甲殼素經(jīng)脫乙酰作是甲殼素經(jīng)脫乙酰作用后得到

14、的一種天然的帶正電荷的多糖用后得到的一種天然的帶正電荷的多糖, ,在自然界為僅次于纖維的最豐富的多聚在自然界為僅次于纖維的最豐富的多聚物物, ,具有親水性、生物適應(yīng)性、生物降解具有親水性、生物適應(yīng)性、生物降解性和低毒等特點(diǎn)性和低毒等特點(diǎn), ,可以作為脂質(zhì)體的穩(wěn)定可以作為脂質(zhì)體的穩(wěn)定組分組分, ,同時(shí)還可作為吸收促進(jìn)劑。同時(shí)還可作為吸收促進(jìn)劑。但是但是, ,殼聚糖作為一種弱堿殼聚糖作為一種弱堿, ,需一定量的需一定量的酸才能使葡糖胺結(jié)構(gòu)單元展開并轉(zhuǎn)變?yōu)樗岵拍苁蛊咸前方Y(jié)構(gòu)單元展開并轉(zhuǎn)變?yōu)閹д姾傻娜芤籂顟B(tài)。在帶正電荷的溶液狀態(tài)。在pH pH 中性時(shí)中性時(shí), ,殼殼聚糖分子將失去電荷并從溶液中沉淀出

15、聚糖分子將失去電荷并從溶液中沉淀出來來, ,因而殼聚糖作為吸收促進(jìn)劑的潛在用因而殼聚糖作為吸收促進(jìn)劑的潛在用途在大腸、結(jié)腸和直腸等堿性環(huán)境中受途在大腸、結(jié)腸和直腸等堿性環(huán)境中受到限制。到限制。N N三甲基殼聚糖鹽酸鹽三甲基殼聚糖鹽酸鹽( ( N Ntrimethyl chitosanchloride , trimethyl chitosanchloride , TMC)TMC) 具有殼聚糖相同的生物學(xué)性具有殼聚糖相同的生物學(xué)性質(zhì)質(zhì), ,即使在中性即使在中性pH pH 值也能溶解和有值也能溶解和有效地降低跨上皮細(xì)胞電阻效地降低跨上皮細(xì)胞電阻, ,打開腸打開腸上皮細(xì)胞間的緊密結(jié)上皮細(xì)胞間的緊密結(jié),

16、 ,通過細(xì)胞旁通過細(xì)胞旁路增加親水性大分子的轉(zhuǎn)運(yùn)。路增加親水性大分子的轉(zhuǎn)運(yùn)。海藻酸鹽海藻酸鹽是一種無毒、可生物降解的帶是一種無毒、可生物降解的帶負(fù)電荷共聚物負(fù)電荷共聚物, ,具有生物粘附性具有生物粘附性, ,能延長(zhǎng)能延長(zhǎng)腸道轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)間腸道轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)間, ,增加藥物吸收增加藥物吸收, ,同時(shí)也能同時(shí)也能有效地保護(hù)胃腸道粘膜。在低有效地保護(hù)胃腸道粘膜。在低pH pH 環(huán)境環(huán)境, ,海藻酸鹽能縮聚海藻酸鹽能縮聚, ,其包裹成分不釋放其包裹成分不釋放, ,但但包封率低。包封率低。藥物經(jīng)脂質(zhì)體包裹后藥物經(jīng)脂質(zhì)體包裹后, ,再用海藻酸鹽包封再用海藻酸鹽包封, ,可使脂質(zhì)體粘合在腸道或增加制劑的轉(zhuǎn)可使脂質(zhì)體粘合在

17、腸道或增加制劑的轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)間運(yùn)時(shí)間, ,從而有助于藥物吸收從而有助于藥物吸收, ,提高生物提高生物利用度。利用度。脂質(zhì)體的內(nèi)水相能保護(hù)胰島素脂質(zhì)體的內(nèi)水相能保護(hù)胰島素的結(jié)構(gòu)和構(gòu)象的結(jié)構(gòu)和構(gòu)象, ,而外部親脂層有助于改善而外部親脂層有助于改善跨生物屏障吸收。跨生物屏障吸收。脂質(zhì)體藥物模型脂質(zhì)體藥物模型制備制備殼聚糖純化殼聚糖純化 取食品級(jí)殼聚糖取食品級(jí)殼聚糖5 g 5 g 溶解溶解于于1 %1 %醋酸醋酸400 mL 400 mL 中中, ,過濾過濾, ,用用NHNH4 4OH OH 將濾液調(diào)至中性將濾液調(diào)至中性, ,過濾過濾, ,用水反復(fù)洗滌用水反復(fù)洗滌, ,然后冷然后冷凍干燥。凍干燥。 NH2殼

18、聚糖殼聚糖脂質(zhì)體的制備脂質(zhì)體的制備 用逆相蒸發(fā)法制備胰島素脂質(zhì)體混懸液。將適量磷用逆相蒸發(fā)法制備胰島素脂質(zhì)體混懸液。將適量磷脂和膽固醇溶于乙醚脂和膽固醇溶于乙醚10 mL10 mL中。稱取胰島素中。稱取胰島素4 mg 4 mg 溶于溶于0.05 0.05 molL molL - 1- 1 HCl 0.5mL , HCl 0.5mL ,再加入再加入pH 7.4 PBS 2.5 mL ,pH 7.4 PBS 2.5 mL ,然后然后與乙醚液混合與乙醚液混合, ,振搖振搖, ,浴式超聲儀超聲浴式超聲儀超聲5 min ,5 min ,所得乳劑在所得乳劑在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸去有機(jī)溶劑旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸去有機(jī)溶劑, ,探針式超聲探針式超聲0.5 min ,0.5 min ,加加殼聚糖或海藻酸鈉溶液在殼聚糖或海藻酸鈉溶液在10 10 水浴旋轉(zhuǎn)孵化水浴旋轉(zhuǎn)孵化60 min60 min即得即得包覆的胰島素脂質(zhì)體混懸液。包覆的胰島素脂質(zhì)體混懸液。電鏡觀察脂質(zhì)體包裹藥物電鏡觀察脂質(zhì)體包裹藥物A: Uncoated li