微生物檢驗(yàn)方法驗(yàn)證方案(4)

1、.藥品微生物限度檢查方法驗(yàn)證方案微生物控制菌檢查方法 片驗(yàn)證方案微生物限度檢查方法驗(yàn)證方案13微生物檢驗(yàn)方法驗(yàn)證方案22藥品微生物限度檢查方法驗(yàn)證方案*;方 案 審 批1方案起草起草部門(mén)簽名日 期質(zhì)量控制部 年 月 日2方案會(huì)簽部 門(mén)簽 名日 期QC部長(zhǎng) 年 月 日微生物檢驗(yàn)員 年 月 日 QA部長(zhǎng) 年 月 日3方案批準(zhǔn)批 準(zhǔn) 人簽 名日 期質(zhì)量負(fù)責(zé)人 年 月 日4方案實(shí)施實(shí)施部門(mén)職 責(zé)質(zhì)量控制部對(duì)驗(yàn)證工作與檢驗(yàn)相關(guān)的數(shù)據(jù)的采集與檢驗(yàn)驗(yàn)證方案、報(bào)告的編寫(xiě)質(zhì)量保證部負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案和報(bào)告的審核對(duì)人員進(jìn)行培訓(xùn)文件進(jìn)行整理歸檔質(zhì)量負(fù)責(zé)人對(duì)驗(yàn)證工作全面主持批準(zhǔn)驗(yàn)證方案和報(bào)告微生物檢驗(yàn)員方案具體實(shí)施，并出具

2、檢驗(yàn)記錄和報(bào)告 目 錄1. 概述2. 儀器設(shè)備3. 供試液的制備4. 細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)5. 控制菌檢查6. 驗(yàn)證品種項(xiàng)目表微生物限度檢查法概述微生物限度檢查法系檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法。檢查項(xiàng)目包括細(xì)菌數(shù)、真菌數(shù)、酵母菌數(shù)及控制菌檢查。微生物限度檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。檢查全過(guò)程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止再污染。單向流空氣區(qū)域、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。除另有規(guī)定外，本檢查法中細(xì)菌的培養(yǎng)溫度為3035，真菌、酵母菌的培養(yǎng)溫度為2

3、528，控制菌培養(yǎng)溫度為（36±1）。檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告以1g、1ml、10g、10ml為單位報(bào)告。檢驗(yàn)量即一次試驗(yàn)所用的供試品。除另有規(guī)定外，一般供試品的檢驗(yàn)量為10g或10ml。檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)從2個(gè)以上最小包裝單位中抽取供試品，一般應(yīng)隨機(jī)抽取不少于檢驗(yàn)用量（兩個(gè)以上最小包裝單位）的三倍量供試品。2 儀器設(shè)備2.1 YXQ-LS-30SII型立式壓力蒸汽滅菌器2.2 雙人凈化工作臺(tái) 2.3 150A型培養(yǎng)箱2.4 HH.B11-500型培養(yǎng)箱2.5 202-2型干燥箱2.6 微波爐2.7 架盤(pán)天平2.8 YJA-電動(dòng)勻漿儀3 供試液的制備根據(jù)供試品的理化特征與生物學(xué)特征，可采取適宜的方法制

4、備供試液。供試液制備若需要用水浴加熱時(shí)，溫度不應(yīng)超過(guò)45。供試液從制備至加入檢驗(yàn)用培養(yǎng)基，不得超過(guò)1小時(shí)。液體供試品：取供試品10ml，加pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，混勻，作為1：10的供試液。固體供試品：取供試品10g，加pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，混勻，作為1：10供試液。4 細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù) 4.1 計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證：當(dāng)建立藥品的微生物限度檢查法時(shí)，應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證，以確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)的測(cè)定。若產(chǎn)品的組分或檢驗(yàn)條件發(fā)生改變可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，計(jì)數(shù)方法應(yīng)重新驗(yàn)證。無(wú)特殊情況下，驗(yàn)證周期為一年

5、。 驗(yàn)證時(shí)，按供試液的制備和細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)所規(guī)定的方法及下列要求進(jìn)行。對(duì)各試驗(yàn)菌的回收率應(yīng)逐一進(jìn)行驗(yàn)證。4.2 菌種及菌液制備4.2.1 驗(yàn)證用菌株：試驗(yàn)用菌株傳代次數(shù)不得超過(guò)5代，并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進(jìn)行保存，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特征。驗(yàn)證菌株培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時(shí)間大腸埃希菌CMCC(B)44102營(yíng)養(yǎng)肉湯303518-24h金黃色葡萄球CMCC(B)26003營(yíng)養(yǎng)肉湯303518-24h枯草芽孢桿菌CMCC(B)63501營(yíng)養(yǎng)肉湯303518-24h白色念珠菌CMCC(F)98001改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基232824-48h黑曲霉菌CMCC(F)98003改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基232

6、85-7天4.2.2 菌液制備 接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、與枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于3035培養(yǎng)1824小時(shí)。取經(jīng)3035培養(yǎng)1824小時(shí)的大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、與枯草芽孢桿菌營(yíng)養(yǎng)肉湯新鮮培養(yǎng)物1ml加入到9ml0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10-610-7約為50100cfuml的菌懸液備用。 接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中，于2328培養(yǎng)2448小時(shí)。取經(jīng)2328培養(yǎng)2448小時(shí)的白色念珠菌改良馬丁液體培養(yǎng)物1ml加入到9ml0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10-5約為50100cfuml的菌懸液備用。接種黑曲霉菌的新鮮培養(yǎng)物至

7、改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上，于2328培養(yǎng)57天，加入35ml含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，吸出孢子懸液（用管口帶有薄的無(wú)菌棉花或紗布能過(guò)濾菌絲的無(wú)菌毛細(xì)吸管）至無(wú)菌試管內(nèi)，用含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含孢子數(shù)50100cfuml的菌懸液備用。4.2.3 每ml菌液含菌量的計(jì)數(shù)測(cè)定 測(cè)定方法：取稀釋后的菌液1ml（剩余的菌液冷藏保存）,置直徑90mm的無(wú)菌平皿中，注入1520ml已經(jīng)過(guò)適用性檢查確證的溫度不超過(guò)45的相應(yīng)的溶化的培養(yǎng)基，混勻，凝固，倒置培養(yǎng)。每個(gè)稀釋級(jí)至少制備2個(gè)平板。細(xì)菌類(lèi)別培養(yǎng)

8、溫度為3035，培養(yǎng)3天；霉菌、酵母菌類(lèi)別培養(yǎng)溫度為2328，培養(yǎng)5天。4.3 驗(yàn)證方法：驗(yàn)證試驗(yàn)至少應(yīng)進(jìn)行三次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，并分別計(jì)算各試驗(yàn)菌每次試驗(yàn)的回收率。4.3.1 試驗(yàn)組：平皿法計(jì)數(shù)時(shí)，取試驗(yàn)可能用的最低稀釋級(jí)供試液1ml和50100cfu試驗(yàn)菌，分別注入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，按平皿法測(cè)定其菌數(shù)。薄膜過(guò)濾法計(jì)數(shù)時(shí)，取規(guī)定量試驗(yàn)可能用的最低稀釋級(jí)供試液，過(guò)濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入50100cfu試驗(yàn)菌，過(guò)濾，按薄膜過(guò)濾法測(cè)定其菌數(shù)。4.3.2 菌液組：測(cè)定所加的試驗(yàn)菌數(shù)。4.3.3 供試品對(duì)照組：取規(guī)定量供試液，按菌落計(jì)數(shù)方法測(cè)定供試品本底

9、菌數(shù)。4.3.4 稀釋級(jí)對(duì)照組：若供試液制備需要分散、乳化、中和、離心或薄膜過(guò)濾等特殊處理時(shí)，應(yīng)增加稀釋劑對(duì)照組，以考察供試液制備過(guò)程中微生物受影響的程度。試驗(yàn)時(shí)，可用相應(yīng)的稀釋液替代供試品，加入試驗(yàn)菌，使最終菌濃度為每毫升供試液含50100cfu，按試驗(yàn)組的供試液制備方法和菌落計(jì)數(shù)方法測(cè)定其菌數(shù)。4.4 結(jié)果判斷：在3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)中，稀釋劑對(duì)照組的菌回收率（稀釋劑對(duì)照組的平均菌落數(shù)占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率）應(yīng)均不低于70%。若試驗(yàn)組的均回收率（試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)減去供試品對(duì)照組的平均菌落數(shù)的值占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率）均不低于70%，照該供試液制備方法和計(jì)數(shù)法測(cè)定供試品的細(xì)菌、霉

10、菌及酵母菌數(shù)；若任一次試驗(yàn)中驗(yàn)證組的回收率低于70%，應(yīng)采用培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀集菌法、薄膜過(guò)濾法、中和法等方法或聯(lián)合適用這些方法消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。 若沒(méi)有適宜的方法消除供試品的抑菌活性，那么驗(yàn)證試驗(yàn)中微生物回收的失敗可看成時(shí)因供試品的抗菌活性引起的，同時(shí)表明該供試品不能被試驗(yàn)菌污染。但是，供試品也可能僅對(duì)試驗(yàn)用的菌株具有抑制作用，對(duì)其他菌株沒(méi)有抑制作用。因此，根據(jù)供試品須符合的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)和菌數(shù)報(bào)告規(guī)則，在不影響檢查結(jié)果判斷的前提下，應(yīng)采用能使微生物生長(zhǎng)的更高稀釋級(jí)的供試液進(jìn)行方法驗(yàn)證試驗(yàn)。若驗(yàn)證試驗(yàn)符合要求，應(yīng)以該稀釋級(jí)供試液作為最低稀釋級(jí)的供試液進(jìn)行供試品檢驗(yàn)

11、。計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證時(shí)，采用上述方法若還存在一株或多株試驗(yàn)菌的回收率達(dá)不到要求，那么選擇回收率最接近要求的方法和試驗(yàn)條件進(jìn)行供試品的檢驗(yàn)。驗(yàn)證試驗(yàn)液可與供試品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)同時(shí)進(jìn)行。 控制菌檢查方法的驗(yàn)證：當(dāng)建立藥品的微生物限度檢查法時(shí)，應(yīng)進(jìn)行控制菌檢查方法的驗(yàn)證，以確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品的控制菌檢查。若產(chǎn)品的組分或原檢驗(yàn)條件發(fā)生改變可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，檢查方法應(yīng)重新驗(yàn)證。無(wú)特殊情況下，驗(yàn)證周期為一年。驗(yàn)證時(shí)，依各品種項(xiàng)下微生物限度標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定檢查的控制菌選擇相應(yīng)驗(yàn)證的菌株，驗(yàn)證大腸菌群檢查法時(shí)，采用大腸埃希菌作為驗(yàn)證菌株。驗(yàn)證試驗(yàn)按供試液的制備和控制菌檢查法的規(guī)定及下列要求進(jìn)行。菌種

12、及菌液制備 驗(yàn)證用菌株試驗(yàn)菌株培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時(shí)間（小時(shí)）大腸埃希菌 CMCC(B)44102營(yíng)養(yǎng)肉湯30351824金黃色葡萄球菌 CMCC(B)26003營(yíng)養(yǎng)肉湯30351824乙型副傷寒沙門(mén)菌 CMCC(B)50094營(yíng)養(yǎng)肉湯303518245.2.2 菌液制備 接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型副傷寒沙門(mén)菌的新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18-24小時(shí)，用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)為10100cfu的菌懸液。每ml菌液含菌量的計(jì)數(shù)測(cè)定。 每ml菌液含菌量的計(jì)數(shù)測(cè)定測(cè)定方法：取稀釋后的菌液1ml（剩余的菌液冷藏保存）,置直徑90mm的無(wú)菌平皿中，注入1520ml已經(jīng)

13、過(guò)適用性檢查確證的溫度不超過(guò)45的溶化的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，倒置培養(yǎng)。每稀釋級(jí)每種培養(yǎng)基至少制備2個(gè)平板。培養(yǎng)溫度為3035，培養(yǎng)3天。5.3 驗(yàn)證方法5.3.1 試驗(yàn)組：取規(guī)定量供試液及10100cfu試驗(yàn)菌加入增菌培養(yǎng)基中，依相應(yīng)控制菌檢查法進(jìn)行檢查。當(dāng)采用薄膜過(guò)濾法時(shí)，取規(guī)定量供試液，過(guò)濾，沖洗，試驗(yàn)菌應(yīng)加在最后一次沖洗液中，過(guò)濾后，注入增菌培養(yǎng)基或取出濾膜接入贈(zèng)君培養(yǎng)基中。5.3.2 陰性菌對(duì)照組：設(shè)立陰性菌對(duì)照組是為了驗(yàn)證該控制菌檢查方法的專(zhuān)屬性。方法同試驗(yàn)組，驗(yàn)證大腸埃希菌、大腸菌群、沙門(mén)菌檢查法時(shí)的陰性對(duì)照菌采用金黃色葡萄球菌，陰性對(duì)照菌不得檢出。5.4 結(jié)果判斷：陰性菌

14、對(duì)照組不得檢出陰性對(duì)照菌。若試驗(yàn)組檢出試驗(yàn)菌，按此供試液制備法和控制菌檢查法進(jìn)行供試品的該控制菌檢查；若試驗(yàn)組未檢出試驗(yàn)菌，應(yīng)采用培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀集菌法、薄膜過(guò)濾法、中和法等方法或聯(lián)合適用這些方法消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。驗(yàn)證試驗(yàn)也可與供試品的控制菌檢查同時(shí)進(jìn)行。 驗(yàn)證品種項(xiàng)目表以上品種含蜂蜜、王漿的液體制劑，用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基測(cè)定真菌數(shù)，用酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基測(cè)定酵母菌數(shù)，合并計(jì)數(shù)。附：細(xì)菌、霉菌、酵母菌檢查方法驗(yàn)證原始記錄控制菌檢查方法驗(yàn)證原始記錄第 7 頁(yè) 共 9頁(yè) 通化金匯藥業(yè)股份有限公司 海量資料 超值下載細(xì)菌、霉菌、酵母菌檢查方法驗(yàn)證原始記錄 文件編

15、號(hào)：SOP.PC-JT-23-01-02品 名規(guī) 格批 號(hào)數(shù) 量來(lái) 源檢驗(yàn)日期年 月 日檢 驗(yàn) 依 據(jù)中國(guó)藥典2010年版一部報(bào)告日期年 月 日紫外消毒時(shí)間時(shí) 分 時(shí) 分 記錄編號(hào)試驗(yàn)用培養(yǎng)基：培養(yǎng)基名稱(chēng)批號(hào)培養(yǎng)基名稱(chēng)批號(hào)營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（YPD）一 試驗(yàn)組：營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 （大腸埃希菌）營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 （金黃色葡萄球菌）營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 （枯草芽孢桿菌） 碟號(hào)檢品12平均 碟號(hào)檢品12平均 碟號(hào)檢品12平均1：10供試液+試驗(yàn)菌液50100 cfu1：10供試液+試驗(yàn)菌液50100 cfu1：10供試液+試驗(yàn)菌液501

16、00 cfu玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基（白色念珠菌）玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基（黑曲霉）YPD培養(yǎng)基（白色念珠菌） 碟號(hào)檢品12平均 碟號(hào)檢品12平均 碟號(hào)檢品12平均1：10供試液+試驗(yàn)菌液50100 cfu1：10供試液+試驗(yàn)菌液50100 cfu1：10供試液+試驗(yàn)菌液50100 cfu二 菌液組：取上述試驗(yàn)菌液，測(cè)定其加入的試驗(yàn)菌數(shù)大腸埃希菌金黃色葡萄球菌碟號(hào)稀釋級(jí)12平均碟號(hào)稀釋級(jí)12平均枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉碟號(hào)稀釋級(jí)12平均碟號(hào)稀釋級(jí)12平均碟號(hào)稀釋級(jí)12平均 三 供試品對(duì)照組：取規(guī)定量供試液，按菌落記數(shù)方法測(cè)定供試品本底菌數(shù)細(xì)菌總數(shù)檢查標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：不得過(guò) cfug或ml 霉菌、酵母菌總數(shù)檢

17、查標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定不得過(guò) cfug或ml取樣量：每一濃度吸1ml取樣量：每一濃度吸1ml營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基碟號(hào)稀釋級(jí)12平均碟號(hào)稀釋級(jí)12平均碟號(hào)稀釋級(jí)12平均2平均結(jié)果CFUg或ml碟號(hào)稀釋液12平均結(jié)果CFUg或ml10-110-110-1原菌液陰性對(duì)照陰性對(duì)照陰性對(duì)照四 稀釋劑對(duì)照組：取稀釋劑1ml加入50100 cfu試驗(yàn)菌，注皿經(jīng)培養(yǎng)測(cè)定其菌數(shù)碟號(hào)稀釋液菌種12平均PH7.0無(wú)菌氯化鈉蛋白胨緩沖液大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念球菌黑曲霉五 計(jì)算試驗(yàn)組平均菌落數(shù)供試品對(duì)照組平均菌落數(shù)試驗(yàn)菌組的回收率（%）= _ ×100%菌液的平

18、均菌落數(shù) 菌種代數(shù)菌液組（cfu / ml）試驗(yàn)組（cfu / ml）供試品對(duì)照（cfu / ml或g）人工染菌回收率（%）大腸埃希菌細(xì)菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌霉菌、酵母菌白色念珠菌（YPD培養(yǎng)基）黑曲霉 稀釋劑對(duì)照組平均菌落數(shù)（2） 稀釋劑對(duì)照組的菌回收率（%）= _×100% 菌液的平均菌落數(shù) 菌種稀釋劑對(duì)照組平均菌落數(shù)菌液的平均菌落數(shù)回收率（%）大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉六 結(jié)果判定：稀釋劑對(duì)照組的菌回收率：試驗(yàn)菌組的菌回收率：若稀釋劑對(duì)照組和試驗(yàn)菌組的菌回收率均不低于70%，確認(rèn)所采用的方法適合于該藥品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)的測(cè)定。_

19、檢驗(yàn)人： 復(fù)核人： 質(zhì)檢中心主任簽名： 日 期： 年 月 日 控制菌檢查方法驗(yàn)證原始記錄 文件編號(hào)：SOP.PC-JT-23-01-03品 名規(guī) 格批 號(hào)數(shù) 量來(lái) 源檢驗(yàn)日期年 月 日檢 驗(yàn) 依 據(jù)中國(guó)藥典2010年版一部報(bào)告日期年 月 日 紫外消毒時(shí)間時(shí) 分 時(shí) 分記錄編號(hào)試驗(yàn)用培養(yǎng)基：培養(yǎng)基名稱(chēng)批號(hào)培養(yǎng)基名稱(chēng)批號(hào)膽鹽乳糖培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基MUG培養(yǎng)基麥康凱瓊脂培養(yǎng)基膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基一 供試品控制菌檢查檢查項(xiàng)目：需做的檢查在內(nèi)劃“”大腸埃希菌項(xiàng)目BLMUGIEMB革蘭染色LacIMViC結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定檢品g不得檢出g陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照大腸菌群0. 1g0.01g0.001g陰性對(duì)照EMB乳糖

20、發(fā)酵管結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定個(gè)g小于100個(gè)g沙門(mén)菌 項(xiàng)目對(duì)照肉湯TTBEMB DHLTSIH2SI ULDKVN，動(dòng)力AF“O”血清結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定凝集對(duì)照檢品g不得檢出g陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照二 試驗(yàn)組及陰性菌對(duì)照組控制菌檢查檢查項(xiàng)目：需做的檢查在內(nèi)劃“”大腸埃希菌 檢查方法的驗(yàn)證操作方法：取膽鹽乳糖培養(yǎng)基100ml，加入 10ml的供試液及10100cfu試驗(yàn)菌，取膽鹽乳糖培養(yǎng)基中的培養(yǎng)物0.2ml，接種到含5mlMUG培養(yǎng)基的試管內(nèi)，培養(yǎng)，于5小時(shí)、24小時(shí)在366nm紫外光下觀(guān)察，同時(shí)用未接種的MUG培養(yǎng)基作本底對(duì)照。陰性菌對(duì)照組同法操作。檢品培養(yǎng)基名稱(chēng)供試品 + 試驗(yàn)菌（大腸埃希菌）陰性菌對(duì)照組（金黃

21、色葡萄球菌）本底對(duì)照膽鹽乳糖培養(yǎng)基MUG培養(yǎng)基靛基質(zhì)結(jié) 果大腸菌群檢查方法的驗(yàn)證操作方法：取不少于10ml膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基管3支，加入1：10供試液1ml（含供試品0.1g或0.1ml）及10100cfu試驗(yàn)菌。取上述產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管中的培養(yǎng)物，分別劃線(xiàn)接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)1824小時(shí) ，同時(shí)用膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基管作本底對(duì)照，陰性菌對(duì)照組同法操作。檢品培養(yǎng)基名稱(chēng)供試品 + 試驗(yàn)菌（大腸埃希菌）陰性菌對(duì)照組（金黃色葡萄球菌）膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基麥康凱瓊脂培養(yǎng)基本底對(duì)照結(jié) 果沙門(mén)菌檢查方法的驗(yàn)證操作方法：取營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基2份，每份200ml，1份加入10g或者10ml供試品使均勻，另

22、1份加入稀釋劑10ml作陰性對(duì)照，1824h35觀(guān)察。輕微搖動(dòng)供試品增菌培養(yǎng)瓶，吸取1ml接種于1管含10ml四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基的試管中，培養(yǎng)1824h。輕微搖動(dòng)供試品增菌培養(yǎng)瓶，劃線(xiàn)于麥康凱瓊脂(MacC)培養(yǎng)基平板，培養(yǎng)2448小時(shí) ，同時(shí)用膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基管作本底對(duì)照，陰性菌對(duì)照組同法操作。檢品培養(yǎng)基名稱(chēng)供試品 + 試驗(yàn)菌（大腸埃希菌）陰性菌對(duì)照組（金黃色葡萄球菌）四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基麥康凱瓊脂培養(yǎng)基本底對(duì)照結(jié) 果三 驗(yàn)證結(jié)果大腸埃希菌方法驗(yàn)證結(jié)果項(xiàng)目加菌量BLMUGIEMB革蘭染色LacIMViC結(jié) 果供試品試驗(yàn)組陰性對(duì)照菌組陰性對(duì)照大腸菌群方法驗(yàn)證結(jié)果項(xiàng)目加菌量膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基

23、管EMB革蘭染色乳糖發(fā)酵管結(jié) 果123供試品試驗(yàn)組陰性對(duì)照菌組陰性對(duì)照沙門(mén)菌方法驗(yàn)證結(jié)果 項(xiàng)目加菌量肉湯TTBEMB DHLTSIH2SI ULDKVN，動(dòng)力AF“O”血清結(jié)果凝集對(duì)照供試品試驗(yàn)組陰性菌對(duì)照組陰性對(duì)照四 結(jié)果判定：陰性菌對(duì)照組不得檢出陰性對(duì)照菌，試驗(yàn)組應(yīng)檢出相應(yīng)的試驗(yàn)菌。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果判定該品種控制菌可采用 法檢驗(yàn)。 _檢驗(yàn)人： 復(fù)核人： 質(zhì)檢中心主任簽名： 日 期： 年 月 日 微生物控制菌檢查方法 片驗(yàn)證方案 編碼：表一、驗(yàn)證方案的起草與批準(zhǔn)1.驗(yàn)證方案起草 起草人： 起草時(shí)期： 年 月 日2.驗(yàn)證小組成員： 3.驗(yàn)證方案審核部門(mén)審核人日 期生產(chǎn)部生產(chǎn)車(chē)間QCQA4.驗(yàn)證方案

24、批準(zhǔn) 批準(zhǔn)人： 批準(zhǔn)日期：二、驗(yàn)證方案1.驗(yàn)證目的和原理1.1驗(yàn)證目的本實(shí)驗(yàn)是關(guān)于 片的微生物控制菌檢查試驗(yàn)的驗(yàn)證。驗(yàn)證結(jié)果應(yīng)顯示對(duì) 片的微生物控制菌試驗(yàn)方法，對(duì)檢品中可能存在的微生物沒(méi)有抑制作用，符合驗(yàn)證要求。1.2原理按照已建立的藥品微生物控制菌檢查方法，通過(guò)已知菌數(shù)試液的對(duì)照菌的培訓(xùn)對(duì)照，驗(yàn)證其操作方法適合該藥品的微生物控制菌的檢測(cè)的正確性。2.驗(yàn)證方法步驟2.1驗(yàn)證前的準(zhǔn)備：將所有的平皿和稀釋劑都應(yīng)該嚴(yán)格按照相關(guān)的滅菌程序消毒，以確保其對(duì)試驗(yàn)的結(jié)果沒(méi)有影響。試驗(yàn)菌應(yīng)選擇相應(yīng)的陰性對(duì)照菌。2.2驗(yàn)證試驗(yàn)的操作計(jì)劃：用3個(gè)不同批號(hào)產(chǎn)品按照微生物控制菌檢測(cè)方法進(jìn)行平行試驗(yàn)，通過(guò)觀(guān)測(cè)是否長(zhǎng)菌來(lái)

25、判斷。2.3試驗(yàn)結(jié)果可接受標(biāo)準(zhǔn)：用標(biāo)準(zhǔn)菌株評(píng)價(jià)方法“ 片”的微生物控制菌檢查試驗(yàn)對(duì)檢品中微生物的抑菌性。試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)顯示；陰性菌對(duì)照組不得檢出陰性對(duì)照菌，試驗(yàn)組應(yīng)檢出試驗(yàn)菌。3.試驗(yàn)實(shí)施3.1試驗(yàn)前的準(zhǔn)備3.1.1主要儀器設(shè)備：恒溫培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、電子天平、高壓蒸汽滅菌器、凈化工作臺(tái)。3.1.2操作環(huán)境：操作間應(yīng)該安裝空氣除菌過(guò)濾層裝置。環(huán)境潔凈度不應(yīng)低于10000級(jí)，局部潔凈度為100級(jí)（或放置同等級(jí)凈化工作臺(tái)）。操作間或凈化工作臺(tái)的潔凈空氣應(yīng)該保持對(duì)環(huán)境形成正壓，不低于5pa。3.1.3試驗(yàn)樣品： 片 批號(hào)： 批號(hào)： 批號(hào)： 3.1.4培養(yǎng)基：培養(yǎng)基名稱(chēng)培養(yǎng)基批號(hào)配制日期有效期至營(yíng)養(yǎng)肉湯

26、培養(yǎng)基BL增菌培養(yǎng)基MUG培養(yǎng)基 3.1.5稀釋液：PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液以上經(jīng)115高壓蒸汽滅菌30min。3.1.6驗(yàn)證用微生物名稱(chēng)及其編號(hào) 實(shí)驗(yàn)菌株的來(lái)源： 菌株名稱(chēng)內(nèi)控編號(hào)大腸埃希菌CMCC(B) 44102Ec-金黃色葡萄球菌 CMCC(B) 26003Sa-編號(hào)由菌名首字母?jìng)鞔鷶?shù)制備日期組成。3.1.7器具：無(wú)菌薄膜過(guò)濾器：（孔徑0.45um直徑50mm）、無(wú)菌培養(yǎng)皿（直徑90mm）、無(wú)菌移液管（5ml）4.驗(yàn)證方法4.1試驗(yàn)菌種的制備和稀釋接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的新鮮培養(yǎng)物至相應(yīng)的營(yíng)養(yǎng)肉湯或BL增菌液10ml中,3035培養(yǎng)1824小時(shí)。用無(wú)菌0.9%氯化鈉

27、溶液將上述培養(yǎng)物進(jìn)行倍比遞增稀釋?zhuān)瞥擅?ml含菌落數(shù)為50100cfu的菌懸液。4.2實(shí)驗(yàn)方法A試驗(yàn)組取1：10供試液10ml及含大腸埃希菌數(shù)為50100cfu的菌懸液1ml加入到100mlBL增菌液中，3035培養(yǎng)1824小時(shí)。 B陰性對(duì)照組采用金黃色葡萄球菌作為陰性對(duì)照用菌。方法同試驗(yàn)組。5.試驗(yàn)結(jié)果5.1驗(yàn)證用微生物的稀釋度和接種量菌種名稱(chēng)稀釋度接種濃度（cfu/ml）接種量（ml）大腸埃希菌金黃色葡萄球菌5.2試驗(yàn)組和陰性對(duì)照組結(jié)果大腸埃希菌批號(hào)BL增菌液MUG靛基質(zhì)試 驗(yàn) 組陰性對(duì)照組注：為1824小時(shí)有菌生長(zhǎng)。6.結(jié)論： 陰性對(duì)照菌試驗(yàn)：檢出陰性對(duì)照菌，大腸埃希菌18小時(shí)生長(zhǎng) 。

28、該檢驗(yàn)方法用于該樣品的控制菌檢驗(yàn)。檢驗(yàn)人： 復(fù)核人：7.驗(yàn)證結(jié)果評(píng)價(jià)分析質(zhì)控部負(fù)責(zé)各項(xiàng)驗(yàn)證、試驗(yàn)結(jié)果記錄，驗(yàn)證小組根據(jù)驗(yàn)證、試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，起草驗(yàn)證報(bào)告，報(bào)驗(yàn)證委員會(huì)。驗(yàn)證委員會(huì)負(fù)責(zé)對(duì)驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行綜合評(píng)審，做出驗(yàn)證結(jié)論，發(fā)放驗(yàn)證證書(shū)。對(duì)驗(yàn)證結(jié)果的評(píng)審應(yīng)包括：驗(yàn)證試驗(yàn)是否有遺漏；驗(yàn)證實(shí)施過(guò)程中對(duì)驗(yàn)證方案有無(wú)修改，修改原因、依據(jù)以及是否經(jīng)過(guò)批準(zhǔn)；驗(yàn)證記錄是否完整；驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求，偏差及對(duì)偏差的說(shuō)明是否合理，是否需進(jìn)一步補(bǔ)充試驗(yàn)。8.最終審批驗(yàn)證報(bào)告由驗(yàn)證組長(zhǎng)審核后，報(bào)驗(yàn)證總負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)，并簽發(fā)驗(yàn)證證書(shū)。驗(yàn)證報(bào)告 年 月 日至 年 月 日，驗(yàn)證小組根據(jù)批準(zhǔn)的微生物控制菌檢查方法驗(yàn)證文件

29、對(duì)微生物限度檢查法進(jìn)行了相關(guān)的一系列驗(yàn)證工作，達(dá)到了預(yù)期效果，滋將有關(guān)事項(xiàng)說(shuō)明如下：驗(yàn)證方案在實(shí)施過(guò)程中未做修改。驗(yàn)證方案各項(xiàng)性能指標(biāo)在驗(yàn)證中未作變動(dòng)，誤差在允許范圍內(nèi)。驗(yàn)證過(guò)程中結(jié)果符合規(guī)定要求，記錄完整屬實(shí)。驗(yàn)證結(jié)果符合設(shè)計(jì)要求和GMP原則要求，可以投入使用。 片組分或檢驗(yàn)條件改變時(shí)須重新驗(yàn)證。以上情況，請(qǐng)驗(yàn)證委員會(huì)審批！驗(yàn)證小組：年 月 日試驗(yàn)報(bào)告審批表驗(yàn)證名稱(chēng)微生物控制菌檢查方法驗(yàn)證編號(hào)驗(yàn)證內(nèi)容審閱會(huì)簽質(zhì)量部審核人： 年 月 日驗(yàn)證委員會(huì)意見(jiàn)：批準(zhǔn)人： 年 月 日驗(yàn)證證書(shū) 驗(yàn)證證書(shū)編號(hào)： 驗(yàn) 證 名 稱(chēng)： 有 效 期： 上述方法已按驗(yàn)證方案進(jìn)行驗(yàn)證，各項(xiàng)驗(yàn)證結(jié)果符合標(biāo)準(zhǔn)要求，批準(zhǔn)按此方

30、法進(jìn)行本品的控制菌檢查。特發(fā)此證。 驗(yàn)證總負(fù)責(zé)人： 年 月 日 備注：微生物限度檢查方法驗(yàn)證方案 編碼：表一、驗(yàn)證方案的起草與批準(zhǔn)1.驗(yàn)證方案起草 起草人： 起草時(shí)期： 年 月 日2.驗(yàn)證小組成員： 3.驗(yàn)證方案審核部門(mén)審核人日 期生產(chǎn)部生產(chǎn)車(chē)間QCQA4.驗(yàn)證方案批準(zhǔn) 批準(zhǔn)人： 批準(zhǔn)日期：二、驗(yàn)證方案1.驗(yàn)證目的和原理1.1驗(yàn)證目的為確認(rèn)所采用的方法適合于該藥品的細(xì)菌、霉菌、酵母菌數(shù)的測(cè)定，特制定本方案。驗(yàn)證過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本方案規(guī)定的內(nèi)容進(jìn)行，若因特殊原因確需要變更時(shí)，應(yīng)報(bào)驗(yàn)證委員會(huì)批準(zhǔn)。1.2原理通過(guò)比較試驗(yàn)4組中試驗(yàn)菌的恢復(fù)生長(zhǎng)結(jié)果來(lái)評(píng)價(jià)整個(gè)檢驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性、有效性和重現(xiàn)性。2.驗(yàn)證方法

31、步驟2.1驗(yàn)證前的準(zhǔn)備：進(jìn)行微生物限度檢查方法驗(yàn)證前，所有的平皿和稀釋劑都應(yīng)該嚴(yán)格按照相關(guān)的滅菌程序消毒，以確保其對(duì)試驗(yàn)的結(jié)果沒(méi)有影響。試驗(yàn)菌應(yīng)包括G、G+、酵母菌和霉菌類(lèi)微生物以基本覆蓋樣品中可能存在的微生物。2.2驗(yàn)證試驗(yàn)的操作計(jì)劃：用3個(gè)不同批號(hào)產(chǎn)品微生物限度檢測(cè)方法進(jìn)行平行試驗(yàn)，通過(guò)計(jì)算回收率來(lái)判斷限度檢查方法是否對(duì)產(chǎn)品有影響。2.3試驗(yàn)結(jié)果可接受標(biāo)準(zhǔn)：用標(biāo)準(zhǔn)菌株評(píng)價(jià)方法“ ”的微生物限度檢查對(duì)檢品中微生物的抑制性，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)顯示3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)中，稀釋劑對(duì)照組的菌回收率應(yīng)不小于70%，試驗(yàn)組回收率也不低于70%。3.試驗(yàn)實(shí)施3.1試驗(yàn)前的準(zhǔn)備3.1.1主要儀器設(shè)備：恒溫培養(yǎng)箱、生化

32、培養(yǎng)箱、電子天平、高壓蒸汽滅菌器、凈化工作臺(tái)。3.1.2操作環(huán)境：操作間應(yīng)該安裝空氣除菌過(guò)濾層裝置。環(huán)境潔凈度不應(yīng)低于10000級(jí)，局部潔凈度為100級(jí)（或放置同等級(jí)凈化工作臺(tái)）。操作間或凈化工作臺(tái)的潔凈空氣應(yīng)該保持對(duì)環(huán)境形成正壓，不低于4.9pa。3.1.3試驗(yàn)樣品： 批號(hào)： 批號(hào)： 批號(hào)： 3.1.4培養(yǎng)基：培養(yǎng)基名稱(chēng)培養(yǎng)基批號(hào)配制日期有效期至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基膽鹽乳糖增菌培養(yǎng)基 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基3.1.5稀釋液：PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液以上經(jīng)115高壓蒸汽滅菌30min。3.1.6驗(yàn)證用微生物名稱(chēng)及其編號(hào) 實(shí)驗(yàn)菌株的來(lái)源： 菌株名稱(chēng)內(nèi)控編號(hào)大腸埃希菌CMCC(B

33、) 44102Ec-金黃色葡萄球菌 CMCC(B) 26003Sa-枯草芽孢桿菌CMCC(B) 63501Bs-白色念珠球菌CMCC(F) 98001Ca-黑曲霉CMCC(F) 98003An-編號(hào)由菌名首字母?jìng)鞔鷶?shù)制備日期組成。3.1.7器具：無(wú)菌薄膜過(guò)濾器：（孔徑0.45um直徑50mm）、無(wú)菌移液管（5ml）4.驗(yàn)證方法4.1菌液的制備將大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌接種至10ml的無(wú)菌營(yíng)養(yǎng)肉湯中在3035下培養(yǎng)1824小時(shí)，將白色念珠菌接種至改良馬丁液體培養(yǎng)基中，在2328下培養(yǎng)2448小時(shí)。將黑曲霉接種至改良馬丁液體培養(yǎng)基中，在2328下培養(yǎng)57天。將上述培養(yǎng)物用0.9%

34、的無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌落數(shù)為50100cfu的菌懸液。4.2實(shí)驗(yàn)方法供試液的制備：取樣品10g（ml）加入無(wú)菌PH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml，振搖使分散均勻，或用勻漿儀混勻，制成1：10均勻的供試液。A樣品試驗(yàn)組取1：10供試品（相當(dāng)于1g或1ml供試品）1ml，及各50100cfu的試驗(yàn)菌，分別注入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基。大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌傾注肉湯瓊脂培養(yǎng)基；白色念珠菌、黑曲霉傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基。B菌液組取上述制備菌液各1ml注入平皿中，金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草桿菌加入肉湯瓊脂培養(yǎng)基，白色念珠菌、黑曲霉加入玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基。C供試品對(duì)

35、照組取上述1：10供試液1ml注入平皿中，分別傾注肉湯瓊脂培養(yǎng)基和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基。D稀釋劑對(duì)照組取PH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液各1ml及各50100cfu的試驗(yàn)菌，分別注入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基。大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌傾注肉湯瓊脂培養(yǎng)基；白色念珠菌、黑曲霉傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基。4.3培養(yǎng) 將大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌在3035下培養(yǎng)48小時(shí)，將白色念珠菌、黑曲霉在2328下培養(yǎng)72小時(shí)，點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。5.試驗(yàn)結(jié)果5.1產(chǎn)品試驗(yàn)組微生物生長(zhǎng)檢查情況： 批號(hào)： 菌種名稱(chēng)產(chǎn)品試驗(yàn)組計(jì)數(shù)結(jié)果（cfu/皿）平均值大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲

36、霉5.2供試品對(duì)照組微生物生長(zhǎng)檢查情況： 批號(hào)： 菌種名稱(chēng)供試品對(duì)照組計(jì)數(shù)結(jié)果（cfu/皿）平均值大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉5.3稀釋劑對(duì)照組微生物生長(zhǎng)檢查情況： 批號(hào)： 菌種名稱(chēng)稀釋劑對(duì)照組計(jì)數(shù)結(jié)果（cfu/皿）平均值大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉5.4菌液組微生物生長(zhǎng)檢查情況： 批號(hào)： 菌種名稱(chēng)菌液組計(jì)數(shù)結(jié)果（cfu/皿）平均值大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉6.回收率計(jì)算6.1稀釋劑對(duì)照組菌回收率菌種名稱(chēng)批號(hào)菌落計(jì)數(shù)（cfu/皿）回收率稀釋劑對(duì)照組菌液組大腸埃希菌平均值金黃色葡萄球菌平均值枯草芽孢桿菌平均值白色念珠菌平均

37、值黑曲霉平均值表中：回收率=稀釋劑對(duì)照組的平均菌落數(shù)÷菌液組的平均菌落數(shù)×100%。6.2試驗(yàn)組菌回收率菌種名稱(chēng)批號(hào)菌落計(jì)數(shù)（cfu/皿）回收率試驗(yàn)組供試品對(duì)照組菌液組大腸埃希菌平均值金黃色葡萄球菌平均值枯草芽孢桿菌平均值白色念珠菌平均值黑曲霉平均值表中：回收率=（試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)供試品對(duì)照組的平均菌落數(shù)）÷菌液組的平均菌落數(shù)×100%。7.結(jié)論：7.1經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉的回收率分別為 %、 %、 %、 %、 %。7.2稀釋劑回收率為 %、 %、 %、 %、 %。 以上驗(yàn)證結(jié)果證明，本品 采用上述方法

38、進(jìn)行微生物限度檢查。檢驗(yàn)人： 復(fù)核人：8.驗(yàn)證結(jié)果評(píng)價(jià)分析質(zhì)控部負(fù)責(zé)各項(xiàng)驗(yàn)證、試驗(yàn)結(jié)果記錄，驗(yàn)證小組根據(jù)驗(yàn)證、試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，起草驗(yàn)證報(bào)告，報(bào)驗(yàn)證委員會(huì)。驗(yàn)證委員會(huì)負(fù)責(zé)對(duì)驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行綜合評(píng)審，做出驗(yàn)證結(jié)論，發(fā)放驗(yàn)證證書(shū)。對(duì)驗(yàn)證結(jié)果的評(píng)審應(yīng)包括：驗(yàn)證試驗(yàn)是否有遺漏；驗(yàn)證實(shí)施過(guò)程中對(duì)驗(yàn)證方案有無(wú)修改，修改原因、依據(jù)以及是否經(jīng)過(guò)批準(zhǔn)；驗(yàn)證記錄是否完整；驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求，偏差及對(duì)偏差的說(shuō)明是否合理，是否需進(jìn)一步補(bǔ)充試驗(yàn)。9.最終審批驗(yàn)證報(bào)告由驗(yàn)證組長(zhǎng)審核后，報(bào)驗(yàn)證總負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)，并簽發(fā)驗(yàn)證證書(shū)。驗(yàn)證報(bào)告 年 月 日至 年 月 日，驗(yàn)證小組根據(jù)批準(zhǔn)的微生物限度檢查方法驗(yàn)證文件對(duì)微生物限度檢查

39、法進(jìn)行了相關(guān)的一系列驗(yàn)證工作，達(dá)到了預(yù)期效果，滋將有關(guān)事項(xiàng)說(shuō)明如下：驗(yàn)證方案在實(shí)施過(guò)程中未做修改。驗(yàn)證方案各項(xiàng)性能指標(biāo)在驗(yàn)證中未作變動(dòng)，誤差在允許范圍內(nèi)。驗(yàn)證過(guò)程中結(jié)果符合規(guī)定要求，記錄完整屬實(shí)。驗(yàn)證結(jié)果符合設(shè)計(jì)要求和GMP原則要求，可以投入使用。 片組分或檢驗(yàn)條件改變時(shí)須重新驗(yàn)證。以上情況，請(qǐng)驗(yàn)證委員會(huì)審批！驗(yàn)證小組：年 月 日試驗(yàn)報(bào)告審批表驗(yàn)證名稱(chēng)微生物限度檢查方法驗(yàn)證編號(hào)SOP-V-028驗(yàn)證內(nèi)容審閱會(huì)簽質(zhì)量部審核人： 年 月 日驗(yàn)證委員會(huì)意見(jiàn)：批準(zhǔn)人： 年 月 日驗(yàn)證證書(shū) 驗(yàn)證證書(shū)編號(hào)： 驗(yàn) 證 名 稱(chēng)： 有 效 期： 上述方法已按驗(yàn)證方案進(jìn)行驗(yàn)證，各項(xiàng)驗(yàn)證結(jié)果符合標(biāo)準(zhǔn)要求，批準(zhǔn)按此方

40、法進(jìn)行本品的控制菌檢查。特發(fā)此證。 驗(yàn)證總負(fù)責(zé)人： 年 月 日 備注：微生物檢驗(yàn)方法驗(yàn)證方案一 概 述：通過(guò)驗(yàn)證以確認(rèn)所采用的微生物限度檢測(cè)方法適合于湖南金旺稀貴藥業(yè)有限公司所生產(chǎn)原料藥的細(xì)菌、霉菌及酵母菌的測(cè)定；確認(rèn)所采用的方法適合于所生產(chǎn)原料藥的控制菌的檢查。根據(jù)樣品特性制定檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)條件按制定的方法進(jìn)行試驗(yàn)，根據(jù)驗(yàn)證結(jié)果判斷是否符合驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。二 目 的：通過(guò)驗(yàn)證確認(rèn)所采用的方法適合于所生產(chǎn)原料藥的微生物限度的測(cè)定。三 適用范圍：本方案適用于本公司生產(chǎn)的四種原料藥的微生物限度檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證。四 責(zé) 任 人：驗(yàn)證小組成員及相關(guān)人員。五 驗(yàn)證方案內(nèi)容：1.大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽

41、孢桿菌、黑曲菌、白色念珠菌為驗(yàn)證用菌株。大腸埃希菌為革蘭氏陰性菌，金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽(yáng)性菌，枯草芽孢桿菌為產(chǎn)芽孢桿菌，這三種菌株為細(xì)菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證用菌株；黑曲菌為霉菌，白色念珠菌為酵母菌，作為霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證用菌株。驗(yàn)證用菌株的傳代次數(shù)不得才超過(guò)5代。細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證1.1當(dāng)建立藥品的微生物限度檢查時(shí)，應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證，以確認(rèn)所采用的方法適用于該藥品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌的測(cè)定。驗(yàn)證試驗(yàn)可與供試品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌級(jí)數(shù)同時(shí)進(jìn)行。1.2 驗(yàn)證菌菌液制備1.2.1 大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌菌液制備：接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿

42、菌的新鮮培養(yǎng)物至10ml營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，3537培養(yǎng)1824小時(shí)。取此培養(yǎng)液1ml加0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-610-7，制成每1ml含菌數(shù)50100cfu的孢子懸浮液。1.2.2 白色念珠菌菌液制備：接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至10ml改良馬丁培養(yǎng)基中，2328培養(yǎng)2428小時(shí)；取此培養(yǎng)液1ml加0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增稀釋法稀釋至10-610-7，制成每1ml含菌數(shù)50100cfu的孢子懸浮液。1.2.3 黑曲菌菌液制備：接種黑曲菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中，2328培養(yǎng)57天，加入35ml0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，吸至無(wú)菌試管中，取1ml加無(wú)菌