流式細(xì)胞術(shù)對食管癌、賁門癌患者T細(xì)胞亞群的分析

1、流式細(xì)胞術(shù)對食管癌、賁門癌患者T 細(xì)胞亞群的分析【摘要】目的采用流式細(xì)胞術(shù)方法檢測食管癌、賁門癌患者細(xì)胞免疫功能。方法應(yīng)用三色免疫熒光流式細(xì)胞儀測定145 名食管癌和賁門癌患者及18 例正常對照者外周血 T 細(xì)胞亞群 CD3+、CD4+、CD8+、NK細(xì)胞、 CD4+/CD8+比值。結(jié)合臨床病理結(jié)果探討二者之間的關(guān)系。結(jié)果(1) 食管癌、賁門癌患者外周血中CD8+T淋巴細(xì)胞比例較正常對照組明顯升高（P）；CD3+、CD4+亞群較正常值降低，但是沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。NK細(xì)胞兩組比較也沒有顯著性差異；(2) 早期（ 0、期）食管癌、賁門癌病人和健康對照組之間T 細(xì)胞各亞群相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；中、晚期（

2、、期）食管癌、賁門癌病人和健康對照組相比：CD4+明顯降低（P）；CD8+則明顯升高（P）；CD4+/CD8+較正常有所下降，但是沒有顯著性差異；淋巴結(jié)陰性患者和淋巴結(jié)陽性患者比較T 細(xì)胞各亞群沒有明顯差異。 結(jié)論外周血T 細(xì)胞亞群的檢測有助于提高對食管癌患者的病情，臨床分期以及機(jī)體免疫狀態(tài)的判斷，晚期食管癌患者機(jī)體免疫狀態(tài)成紊亂型改變?！娟P(guān)鍵詞】食管癌賁門癌T 細(xì)胞亞群流式細(xì)胞術(shù)臨床分期0 引言惡性腫瘤患者往往伴有機(jī)體免疫機(jī)能低下和紊亂，免疫機(jī)能低下和紊亂對腫瘤發(fā)生發(fā)展起到一定的作用。流式細(xì)胞術(shù)分析 T 細(xì)胞亞群具有快速、多參數(shù)、可定量、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，國外已有較多報(bào)道。食管癌、賁門癌患者的

3、機(jī)體免疫狀態(tài)尤其是細(xì)胞免疫狀態(tài)國內(nèi)已有報(bào)道， 但所用研究方法多為傳統(tǒng)的免疫細(xì)胞學(xué)方法。本研究通過三色免疫熒光流式細(xì)胞術(shù)分析 145 名食管癌、賁門癌患者外周血 T 細(xì)胞亞群，并結(jié)合臨床病理分期， 分析食管癌、 賁門癌患者細(xì)胞免疫狀態(tài)的改變及其臨床意義。1 資料和方法資料和方法收集 20XX年 6 月 20XX年 8 月在我科住院治療的 145 名食管癌及賁門癌患者，所有病例抽血化驗(yàn)前均未行放、化治療，并均經(jīng)胃鏡活檢證實(shí)診斷。年齡2985 歲，男性 105 名，女性 40 名，平均年齡歲。食管癌 116 例，賁門癌 29 例。病理類型食管癌鱗癌 113 例，賁門癌腺癌 28 例，食管腺鱗癌 2

4、例，賁門腺鱗癌 1 例，食管小細(xì)胞癌 1 例。其中 127 名患者經(jīng)手術(shù)治療并有相應(yīng)的術(shù)后病理結(jié)果。 18 名患者未行手術(shù)治療（轉(zhuǎn)放療科 8 人，轉(zhuǎn)內(nèi)科 5 人，其他原因未治出院 5 人）。以 18 名健康成年人作為對照組。 145 名患者和健康對照組于入院進(jìn)行治療之前清晨空腹抽靜脈血 2ml,EDTA鉀鹽抗凝。獲得標(biāo)本后立即送檢。腫瘤分期腫瘤分期根據(jù) CT、胸片、腹腔 B 超及手術(shù)后病理結(jié)果采用 UICC的 TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，其中 0 期原位鱗癌 1 例；期 16 例；期 59 例；期 47 例；期 4 例；沒有分期資料 18 例。試劑和儀器試劑：美國 Couter 公司進(jìn)口試劑，包括 CD4

5、FITCCD8 PECD3Percp三色標(biāo)記的單克隆抗體。儀器：美國 Couter 公司 EpicsXl 型流式細(xì)胞儀。三色免疫熒光染色取 CD4FITCCD8 PECD3Percp 三色標(biāo)記的單克隆抗體 20l 加入試管管底，加入待檢驗(yàn)的經(jīng) EDTA鉀鹽抗凝的全血 50l ，混勻，避光室溫下染色15min。然后加入溶血素 500 l ，充分混合后立即上機(jī)檢測。流式細(xì)胞儀分析使用 Couter 公司配套的 System系統(tǒng)軟件數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。先進(jìn)行光路流路的較準(zhǔn)，較準(zhǔn)后進(jìn)行熒光補(bǔ)償，然后上樣本檢測。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析檢測結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。利用處理試驗(yàn)結(jié)果，兩組之間均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本的雙

6、側(cè)t 檢驗(yàn)， P :s:/論文在線機(jī)體抗腫瘤免疫效應(yīng)以細(xì)胞免疫為主 ,T 細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫在機(jī)體抗腫瘤效應(yīng)中起重要作用。根據(jù) T 細(xì)胞表面分化抗原的不同， T 細(xì)胞主要可以分為兩大類： CD4+和 CD8+T淋巴細(xì)胞。 CD4+主要是輔助性 T 淋巴細(xì)胞（ Th） ,CD8+包括細(xì)胞毒 T 淋巴細(xì)胞（ CTL）和抑制性 T 淋巴細(xì)胞（ TS）。CD4+T淋巴細(xì)胞在抗腫瘤細(xì)胞免疫中發(fā)揮核心的作用。通過抗CD4+抗體或者 CD4+基因敲除動(dòng)物試驗(yàn)研究顯示：缺乏 CD4+T淋巴細(xì)胞的試驗(yàn)動(dòng)物不能產(chǎn)生抗體特異性的CD8+T淋巴細(xì)胞1，2，而且 CD4+T細(xì)胞通過分泌的等細(xì)胞因子對于CD8+T淋巴細(xì)胞

7、功能的維持是不可缺少的 3。顯然，機(jī)體通過 CD4+T淋巴細(xì)胞來達(dá)到調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫功能的目的。惡性腫瘤患者CD4+T細(xì)胞亞群的改變情況報(bào)道不一，但多數(shù)研究CD4+T細(xì)胞亞群在惡性腫瘤患者中減少4，5。本研究雖然中晚期食管癌患者CD4+T細(xì)胞明顯降低，但在早期， CD4+T細(xì)胞的改變無明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。已知淋巴細(xì)胞的數(shù)量不是由淋巴干細(xì)胞生產(chǎn)的多少來決定的， 而是通過成熟淋巴細(xì)胞自我穩(wěn)定性的增殖進(jìn)行調(diào)控 6，7。早期，機(jī)體自穩(wěn)定機(jī)制尚可以發(fā)揮作用， 當(dāng) CD4+T 細(xì)胞減少時(shí)，即很快出現(xiàn) CD4+T細(xì)胞增殖從而保持相對的穩(wěn)定。 由于早期沒有明顯的免疫功能變化， 提示腫瘤細(xì)胞能夠逃脫免疫破壞而得以發(fā)生

8、、 發(fā)展。本研究顯示： CD8+T細(xì)胞在患者體內(nèi)明顯高于對照組。由于目前國內(nèi)多數(shù)單位開展的 T 細(xì)胞亞群檢測只是檢測各亞群的比例而不是絕對值，因此，可能存在兩種原因：一是由于 CD4+T淋巴細(xì)胞比例減少， 相應(yīng)地導(dǎo)致 CD8+T淋巴細(xì)胞比例增加； 二是CD8+T淋巴細(xì)胞絕對值增加。對于第一種可能性，進(jìn)一步開展 T 細(xì)胞亞群絕對數(shù)量的測定可以明確； 對于第二種可能， 有學(xué)者認(rèn)為 CD8+T淋巴細(xì)胞可以根據(jù)功能進(jìn)一步分為抑制性 T 淋巴細(xì)胞（ TS）和細(xì)胞毒 T 淋巴細(xì)胞（ TC），晚期腫瘤患者存在抑制性 T 淋巴細(xì)胞（ TS）的增加。由于目前區(qū)分 TS和 TC尚有一定困難，需進(jìn)一步研究證實(shí)。機(jī)體

9、腫瘤免疫是抗腫瘤細(xì)胞免疫和腫瘤免疫抑制、免疫逃避之間的平衡。CD4+T細(xì)胞所占比例的下降必然導(dǎo)致 CD8+T細(xì)胞比例的增加，從而形成 CD4+CD8+比值的下降。 Dick 等8認(rèn)為： CD4+CD8+的比值可以反映機(jī)體的抗腫瘤免疫狀態(tài)，大致反映上述兩者之間的平衡關(guān)系。晚期腫瘤患者外周血中CD4+CD8+比值下降，甚至比值倒置，說明患者免疫處于抑制狀態(tài)。本研究顯示：食管癌、賁門癌患者 CD4+ CD8+雖然有下降但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在Dick 研究對象多為遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的晚期患者，本文研究對象均為外科待術(shù)的病人，145 名患者中只有 4例期病人，這種研究對象構(gòu)成的差異導(dǎo)致了不同的結(jié)果。NK細(xì)胞對腫瘤具有

10、非特異性的殺傷作用，被認(rèn)為是機(jī)體抗腫瘤免疫的第一道防線。不需要致敏即可發(fā)揮對腫瘤細(xì)胞的攻擊作用。近年來研究表明：NK細(xì)胞不僅在非特異性抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用，并且具有激活和增強(qiáng)樹突狀細(xì)胞的功能，因此，NK細(xì)胞起到連接非特異性免疫和特異性免疫的作用 9。但是，由于 NK細(xì)胞在細(xì)胞毒淋巴細(xì)胞中所占比例很小10，并且在外周血淋巴細(xì)胞中只占 1511，所以目前認(rèn)為其在抗腫瘤的細(xì)胞免疫中的作用沒有T 淋巴細(xì)胞突出。本研究顯示：食管癌、賁門癌患者的 NK細(xì)胞和健康對照組沒有明顯差異。【參考文獻(xiàn)】1of CD4+ T cells in the antitumor immune responseJ. J E

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