DB37T596-2006醫(yī)療污染物排放標(biāo)準(zhǔn)

1、ICS 13.030.99DB37山 東 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB37/5962006醫(yī)療污染物排放標(biāo)準(zhǔn)Discharge standard of medical pollutants2006-01 -04 發(fā)布2006-01T 0 實(shí)施山東省環(huán)境保護(hù)局山東省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局友句DB37/596 2006本標(biāo)準(zhǔn)的全部技術(shù)內(nèi)容為強(qiáng)制性。為了貫徹中華人民共和國環(huán)境保護(hù)法、中華人民共和國水污染防治法中華人民共和國海洋 環(huán)境保護(hù)法、中華人民共和國人氣污染防治法、中華人民共和國固體廢物污染環(huán)境防治法、中華 人民共和國傳染病防治法以及醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例，促進(jìn)醫(yī)療廢物處胃系統(tǒng)的建設(shè)和符理，加強(qiáng)醫(yī) 療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)廢物的

2、排放控制，保障人民身體健廉，維護(hù)好的生態(tài)環(huán)境。特制定本地方標(biāo)準(zhǔn)。木標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B、附錄C、附錄D為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省環(huán)境保護(hù)局提出°本標(biāo)準(zhǔn)委托濟(jì)南市環(huán)境匸程設(shè)計(jì)院、濟(jì)南市環(huán)保局自屬分局起草。本標(biāo)準(zhǔn)主耍起草人：悵成志、高旭光、遲智香、張建國、周蓬、徐志浩木標(biāo)準(zhǔn)于2006年1月4 口首次發(fā)布。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省環(huán)境保護(hù)局負(fù)貴解釋。DB37/ 596 2006醫(yī)療污染物排放標(biāo)準(zhǔn)1范圍木標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了山東省醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療污水排放和醫(yī)療廢物處置（控制）的污染物限值。木標(biāo)準(zhǔn)適用門|東省醫(yī)療卩生機(jī)構(gòu)醫(yī)療污水排放和保療廢物處置（控制）的管理，也適用獸醫(yī)院 的污水和醫(yī)療廢物的排放管理。2規(guī)范性

3、引用文件卜列文件屮的條歎通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注FI期的引用文件，具隨后所有的 修改單（不包括勒謀的內(nèi)容）或修訂版均不適用J：本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究 是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注口期的引用文件，其最新版本適用J：本標(biāo)準(zhǔn)。GB 3097海水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)GB 3838地表水環(huán)境質(zhì)最標(biāo)準(zhǔn)GB 5085. 3危險廢物鑒別標(biāo)準(zhǔn) 浸出毒性鑒別GB 15981消帝與滅菌效呆的評價方法與標(biāo)準(zhǔn)GB 15982醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB 18466醫(yī)療機(jī)構(gòu)水污染物排放標(biāo)準(zhǔn)GB 18181危險廢物焚燒污染控制標(biāo)準(zhǔn)GB 18598危險廢物填埋污染控制標(biāo)準(zhǔn)GB 18918城氛污

4、水處理廠污染物排放標(biāo)準(zhǔn)GB 19218醫(yī)療廢物焚燒爐技術(shù)要求（試行）HJ/T 91地表水和污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范醫(yī)療廢物集屮處置技術(shù)規(guī)范（試行）（環(huán)發(fā)20031206號）3術(shù)語及定義卜列術(shù)語及定義適用J本標(biāo)準(zhǔn)。3. 1醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)從審與洪療、預(yù)防、保健以及其他相關(guān)活動的，由各級衛(wèi)牛行政主管部門負(fù)貴管理或監(jiān)管的單位。3. 2醫(yī)療污水醫(yī)療機(jī)構(gòu)門診、病房、手術(shù)室、各類檢驗(yàn)室、病理解剖室、放射室、洗衣房、人平間等處排出的診 療、生活及糞便汚水。當(dāng)醫(yī)療機(jī)構(gòu)其他河水與上述汚水混介排出時一律視為醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水。3.3醫(yī)療廢物醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)在醫(yī)療、預(yù)防、保健以及苴他相關(guān)活動中產(chǎn)生的貝冇直接或苕間接感染性、奇性以及 貝他

5、危害性的廢物。體分類名錄依照國家危險廢物名錄和國務(wù)阮衛(wèi)生行政主管部門和壞境保護(hù)行 政主管部門共同制定的醫(yī)療廢物分類目錄執(zhí)行。3. 4醫(yī)疔廢物集中處置中心具有環(huán)境保護(hù)行政主管部門頒發(fā)的醫(yī)療廢物處置資格的區(qū)域性醫(yī)療廢物集中處矍單位。4技術(shù)內(nèi)容4 1水污染物排放標(biāo)準(zhǔn)4 1. 1處理要求4. 1. 1.1醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)將傳染病房的汚水與K他污水分別收集。傳染病醫(yī)院（包括設(shè)傳染病房的綜介 性醫(yī)院）應(yīng)設(shè)專用化糞池，進(jìn)行預(yù)消壽處理。4.1.1.2醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的各種特殊排水，如含魚金屬廢水、含油廢水、洗印廢水等血單獨(dú)收集，分別 采取不同的預(yù)處理措施后排入醫(yī)療污水處理系統(tǒng)。4 1.1.3同位素治療和診斷產(chǎn)生的放

6、射性廢水，必須單獨(dú)收集處理。4 1. 1.4醫(yī)療污水不得排入GB 3838中的I、I【類水域和III類水域的集中式生活飲用水地表水源地二 級保護(hù)區(qū)、游泳區(qū)以及GB 3097中的一、二類海域。4 1.2排放要求4. 1.2.1根據(jù)水污染物的來源及性質(zhì)，將水汚染物控制項(xiàng)II分為必測項(xiàng)目和選測項(xiàng)II兩類。必測項(xiàng)目 為壞境保護(hù)行政主管部門為了保護(hù)水環(huán)境，在日常監(jiān)測過用中必須監(jiān)測的水污染物控制項(xiàng)目，主要包括 影響水環(huán)境和污水處理系統(tǒng)一般處理I：藝町以去除的妹本控制項(xiàng)冃及部分一類污染物，共15項(xiàng)。選測 項(xiàng)11為地方壞境保護(hù)行政主管部門根據(jù)當(dāng)?shù)蒯t(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的汚染狀況及水環(huán)境保護(hù)狀況対汚水排放可 以選擇監(jiān)測的

7、控制項(xiàng)目，共計(jì)4項(xiàng)。4. 1.2. 2必測項(xiàng)冃必須執(zhí)行。選測項(xiàng)忖由縣級及其以上人民政府壞境保護(hù)行政主管部門根據(jù)當(dāng)?shù)乇／?衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的具體情況和水環(huán)境質(zhì)量耍求選擇控制。4.1.3標(biāo)準(zhǔn)分級根據(jù)醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)排入地表水域環(huán)境功能和保護(hù)FI標(biāo)，將必測項(xiàng)冃的常規(guī)污染物標(biāo)準(zhǔn)值分為一級標(biāo) 準(zhǔn)、二級標(biāo)準(zhǔn)、三級標(biāo)準(zhǔn)、艸級標(biāo)準(zhǔn)。一類車金屬污染物和選測項(xiàng)冃不分級。4. 1.3.1排入GB3838III類水域屮除集屮式生活飲用水地衣水源地二級保護(hù)區(qū)及游泳區(qū)Z外的區(qū)域，執(zhí) 行一 級標(biāo)準(zhǔn)。4 1.3.2排入GB3838IV、V類水域或排入GB3097中三類海域以及排入未設(shè)置城鎮(zhèn)污水處理廠的城績 污水排放系統(tǒng)的醫(yī)療污水，執(zhí)行二

8、級標(biāo)準(zhǔn)。4. 1.3. 3排入設(shè)豐城鎮(zhèn)污水處理廠的城鎮(zhèn)污水排放系統(tǒng)的醫(yī)療污水，執(zhí)行三級標(biāo)準(zhǔn)。4.1.3.4床位小20床以及不設(shè)床位的醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)產(chǎn)生的醫(yī)療污水，應(yīng)當(dāng)役消忑處理設(shè)施，執(zhí)彳亍四 級標(biāo)準(zhǔn)。4. 1.3.5傳染病爆發(fā)期間，應(yīng)當(dāng)根據(jù)環(huán)境保護(hù)行政主管部門和醫(yī)療衛(wèi)生行政主管部門的耍求執(zhí)行應(yīng)急 處置措施要求。4.1.4標(biāo)準(zhǔn)值4. 1.4.1醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)水污染物排放，必測項(xiàng)忖執(zhí)行表1和表2的規(guī)定。4. 1.4.2選測項(xiàng)目按表3的規(guī)定執(zhí)行。表1 一類污染物最高允許排放濃度（日均值）爪位為臨克毎升序號污染物最高允許排放濃度1總汞0. 052總仰0.5表2基本控制項(xiàng)目最高允許排放濃度（日均值）曜位為亳

9、克毎升序號基本控制項(xiàng)目-級標(biāo)準(zhǔn)二級標(biāo)準(zhǔn)三級標(biāo)準(zhǔn)四級標(biāo)準(zhǔn)1糞人腸菌群數(shù)（MPN/L）5010050050002腸道致病菌不得檢出不得檢出3腸逍嘉帝不得檢出不得檢出4結(jié)核桿繭不得檢出不斜檢出5化學(xué)需氧雖（CODc）40601206生化需氧雖（B0DJ1020307懸浮物（SS） *10(5)20608動植物油1.05159揮發(fā)酚0. 10.50.510氨卅5(8)15(20)25(30)11耀酸鹽（以P計(jì)）0.50.51.012余氯&0.50.5813PH698括號內(nèi)為用丁沖洗地ifii及洗車用水水質(zhì)指標(biāo).»括號外數(shù)值為水溫121?時的控制指標(biāo)，括號內(nèi)數(shù)值為水溫W12C時的控制指

10、標(biāo)。1消痔接觸池接觸時間lh,接觸池出口總余氯3mg/l10mg/lo表3選測項(xiàng)目最高允許排放濃度（日均值）單位為亳克毎升序號污染物呆高允許拮放濃度1氟化物102氯化物2503甲醛類1.04總冇機(jī)碳仃0C）304. 1.4.3污水處理過程中產(chǎn)生的廢氣按照GB18466執(zhí)行4.1.5取樣與監(jiān)測4. 1.5.1水質(zhì)取樣在污水處理站處理丁藝末端排放I I。比中一類污染物的取樣按照町/T 91執(zhí)行。4 1.5.2檢測取樣頻率為至少每2h 次，取24h混介樣，以口均值計(jì)。4. 1.5. 3監(jiān)測分析方法按表4或國家環(huán)境保護(hù)總局認(rèn)定的替代方法、等效方法執(zhí)行。3DB37/ 596 2006表4水污染物監(jiān)測分析

11、方法序號控制項(xiàng)H測定方法測定下限（mg/1）方法來源1總汞冷椒子吸收分光光度法0. 0001GB7468雙硫腺分光光度法0. 002GB74692總種二乙準(zhǔn)二硫代氨基甲酸銀分 光光度法0. 007GB74853糞大腸萌群數(shù)多管發(fā)酵法附錄A4沙門氏菌附錄B5志賀氏諸附錄C6結(jié)核桿菌附錄D7化學(xué)需氧雖（CODcJ重餡酸鹽法30GBU9148BODs稀釋與接種法2GB7488微生物傳感器快速測定法1HJ/T869懸浮物（SS）重雖法GBU90110動植物油紅外分光光度法0. 1GB/T1648811揮發(fā)酚4-氨基安伴比林分光光度法0. 002GB749012總氮（以N計(jì)）緘性過硫酸鉀消解紫外分光光度

12、法0. 05GBU89413確酸鹽（以P計(jì)）鋼酸俊分光光度法0.01GBU89314pH玻璃電極法GB692015r離子選擇電極法0. 05GB7484苗索確酸鉆日視比色法GB7482緘試劑分光光度法GB748316氯化物硝酸偎滴定法GB1189617:|尿乙醸丙刪分光光度法0. 05GB1319718TOC非紅外吸收法0.5GB1318319余氯N,N-二乙基1,4苯:胺滴定法GB11897N,N-二乙基7,4 苯二胺分光光度法GB1189842醫(yī)療廢物控制標(biāo)準(zhǔn)4. 2. 1醫(yī)療卩生機(jī)構(gòu)不得將醫(yī)療廢物隨意棄置。4.2.2醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)將醫(yī)療廢物與生活垃圾分開收集；醫(yī)療廢物應(yīng)進(jìn)行無害化集中處宣

13、，生活垃圾 按城市生活垃圾處理原則進(jìn)行處理。4 2.3醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)對醫(yī)療廢物進(jìn)行分類，并采用醫(yī)療廢物集屮處置技術(shù)規(guī)范（試行）中要求 的容器、轉(zhuǎn)運(yùn)器械進(jìn)行包裝、轉(zhuǎn)運(yùn)，包裝、轉(zhuǎn)運(yùn)期間應(yīng)注意防護(hù)措施。4. 2. 4醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)設(shè)置醫(yī)療廢物的暫存場所a H-Yj 100張床位以上的醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)建立專門的 醫(yī)療廢物暫冇庫房，料存阡忌必須滿足醫(yī)療廢物集小處置技術(shù)規(guī)范（試行）屮關(guān)暫存庫房的設(shè)計(jì) 要求：H有l(wèi)oo張床位以卜的醫(yī)療卩.牛機(jī)構(gòu)及門診、部、所W設(shè)工專門的保療廢物暫存場所，并滿足醫(yī) 療廢物集中處置技術(shù)規(guī)范（試行）中暫存場所的要求。DB37/ 596 20064. 2. 5醫(yī)療廢物可以根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r

14、采用農(nóng)5的處置方法進(jìn)行處置。表5醫(yī)療廢物處置方法序號醫(yī)療廢物種類醫(yī)療廢物處置方法備注1病理性廢物（包括人體組織、死胎、器官、 肢體和動物尸體、血液、體液）火化或焚燒按國家右關(guān)法律法規(guī)處雄2感染性廢物（包括傳染病人F術(shù)或尸解后 的廢棄物，如污染的材料和儀器：來門傳 染病房的廢棄物，如泄物、手術(shù)或感染 傷口的敷料、嚴(yán)巫污染的衣物：傳染病人 血透析中產(chǎn)生的廢棄物：實(shí)驗(yàn)牢感染的動 物：傳染病人或動物接觸過的任何其他設(shè) 備和材料:實(shí)驗(yàn)室所用的菌落及病原株培 養(yǎng)基和保菌液：使用過的一次性注射器、 輸液器、輸血器等廢棄物）焚燒或消奇3鋒利物（銳器）（包括針頭、F術(shù)刀、解 剖刀、針管、手術(shù)鋸、玻璃制品尊易對人

15、 體造成損傷的廢物）焚燒4藥物性廢物（包括過期、被洶汰、壓碎或 污染的藥品、疫苗、血淸）焚燒5遺傳病毒性廢棄物（包括C明確的抑制細(xì) 胞的藥物，化學(xué)或放射治療病人的嘔吐 物、尿或糞便。如苯、環(huán)抱霉索、環(huán)碼酰 胺等）焚燒對環(huán)碣酰胺、異環(huán)磅酰胺、硫 酸長春新緘等可采用化學(xué)降解 法或封存或使Zl'l動失效A化學(xué)性廢棄物（包括在診斷、試驗(yàn)、淸潔、 管理、消毒過程中產(chǎn)生的，具有毒性、腐 蝕性、易燃性、反應(yīng)性或遺傳應(yīng)性的物質(zhì)。 如甲醉、攝影用劑、冇機(jī)化含物等）埜燒啞化學(xué)處理對F般的化學(xué)廢棄物，如糖、 氨基酸和特定的鹽類可按城市 生活垃圾進(jìn)彳亍處世或扌*入卜水 認(rèn)7低放射性廢物（包括診斷或治療用的棉

16、簽、注射器、輸液器等）焚燒8污水處理過程中產(chǎn)生的污泥焚燒4. 2.6醫(yī)療廢物進(jìn)行無害化處置的技術(shù)要求4. 2. 6. 1采用高溫?zé)崽幚砑夹g(shù)要求按GB19218執(zhí)行。4. 2. 6. 2高溫蒸汽滅菌按GB15982執(zhí)彳4 2. 6.3其他處理技術(shù)采用微波處理法、化學(xué)消毒法、電熱去活技術(shù)（EDT）等其它經(jīng)壞境保護(hù)行政主管部門及衛(wèi)生行政 用;部門認(rèn)川的醫(yī)療廢物處理技術(shù)時，污染物的川放應(yīng)當(dāng)達(dá)到壞境保護(hù)彳政匸管部門及PTf.il；匸管部 門的要求。4 2.7無害化處置后的醫(yī)療廢物應(yīng)達(dá)到的排放標(biāo)準(zhǔn)4. 2. 7. 1釆用焚燒法處置保療廢物，貳焚燒爐排放氣體的排放限值不應(yīng)高j- GB18484規(guī)定的限值。檢

17、 測方法按GB18484執(zhí)行。4. 2. 7. 2采用焚燒法處宣醫(yī)療廢物，其焚燒殘留物中的含菌量應(yīng)為零。4. 2. 7. 3醫(yī)療廢物焚燒過程中除塵設(shè)備收集到的飛灰必須密閉收集貯存，并按照GB18598固化填埋處 理；焚燒產(chǎn)牛的爐渣町以送牛活垃圾填埠場填埋處理：其他煙氣凈化裝置產(chǎn)牛的固體廢物按GB 5085. 3 進(jìn)行鑒別，并確定是否屬危險廢物，如屬危險廢物，按危險廢物處豐，否則町以送生活垃圾填埋場 填埋處理，無法進(jìn)行鑒別實(shí)驗(yàn)的，按危險廢物處置。4. 2. 7. 4采用高溫蒸汽滅菌法處置醫(yī)療廢物產(chǎn)生的固體廢物將英粉碎后按城市生活垃圾進(jìn)行處置。4. 2. 7. 5采用高溫蒸汽滅偏法處克供療廢物，牛

18、物指示劑應(yīng)選擇耐熱的嗜熱性脂肪桿茵芽他（Bacillus stearothermoph訂us spores） 檢測方法按 GB 15981 執(zhí)彳丁。4. 2. 7. 6每批醫(yī)療廢物進(jìn)行高溫祓VC滅菌處置需用化學(xué)檢測方法對滅菌效果進(jìn)行檢測,可采用化學(xué)指 示管（卡）檢測方法或化學(xué)指示膠帶檢測法，檢測盂將化學(xué)指示管（卡）放入滅菌室內(nèi)滅繭效果報(bào)難保 證的空削位胃，或?qū)⒒瘜W(xué)指示膠帶粘貼每一待火詢物品包外，經(jīng)一個火謫周期后，觀察所放置的拆小 管（卡）或膠帯的性狀或顏色，如果均變至規(guī)泄的條件，判為火菌合格：若未達(dá)到規(guī)定的條件，則滅菌過 程不介格。5標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施與監(jiān)督本標(biāo)準(zhǔn)由雖級以上人民政府壞境保護(hù)行政主管部門

19、負(fù)貴監(jiān)怦實(shí)施。5DB37/ 596 2006附錄A（規(guī)范性附錄）醫(yī)療污水中糞大腸菌群的檢驗(yàn)方法A. 1儀器和設(shè)備A 1.1高壓蒸汽滅菌器A 1.2干燥滅菌箱A. 1.3培養(yǎng)箱：37-CA. 1.4恒溫水浴箱A. 1.5電爐A. 1.6天平A. 1.7滅菌平皿A. 1.8滅菌刻度吸管A 1.9酒精燈A. 2培養(yǎng)基和試劑A. 2.1乳糖膽鹽培養(yǎng)液A. 2.1.1成分蛋白腺20g豬膽鹽（或牛、羊膽鹽）5g乳糖5g0.4%漠甲酚紫水溶液2. 5mL蒸餡水lOOOmLA. 2. 1.2 制法將蛋白豚、豬膽鹽及乳糖溶解j*-1000mL蒸鐳水中，調(diào)整pH到7. 4,加入指示劑，充分混勻，分裝 于內(nèi)有倒管的

20、試管中。115°C卜滅菌20min°貯存于冷暗處備用。A 2.2三倍濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液A. 2. 2. 1 成分蛋白腺60g豬膽鹽（或牛、半膽鹽）15g乳糖15g0.4%浣甲酚紫水溶液7. 5mL蒸懾水lOOOmLA 2.2.2制法制法同附錄A. 2. 1.2oA 2.3伊紅美蘭培養(yǎng)基（EMB培養(yǎng)基）A 2.3. 1 成分蛋白腺lOg乳糖lOg磷酸氫二鉀2g塩脂20g2%供紅水溶液20mL0.5%美藍(lán)水溶液13mL蒸餡水lOOOmLA. 2. 3. 2 制法將瓊脂加到900mL蒸飾水中，加熱溶解，然后加入磷酸氫二仰和蛋白腺，混勻使溶解，再加入蒸飼 水補(bǔ)足至lOOOmL,調(diào)整

21、pH至7.27.4。趁熱用脫脂棉和砂布過濾,再加入乳糖，混勻,定量分裝丁燒 瓶內(nèi)，115£滅菌20min。作為儲備培養(yǎng)基貯存于冷暗處備用。臨用時，加熱融化儲備培養(yǎng)基，待冷至609左右，根據(jù)燒瓶內(nèi)培養(yǎng)基的容磺，加入一定屆的已火菌 的2%伊紅水溶液和0.5%美藍(lán)水溶液，充分搖勻（防止產(chǎn)生氣泡）。傾注平皿備用。A. 2.4乳糖蛋白籐培養(yǎng)液A 2. 4. 1 成分蛋白腺10g牛肉膏3g乳糖5g氯化鈉5g1.6%瀆甲酚紫乙醇溶液lmL蒸1®水lOOOmLA. 2. 4. 2 制法將蛋白腺、牛肉膏、乳糖及氯化鈉加熱溶解FlOOOmL蒸慨水中,調(diào)整pH到7.27.4,加入1.6% 澳甲酚

22、紫乙醇溶液lmL,充分混勻，分裝J：內(nèi)有倒管的試管中。115*0下滅菌20min。貯存J；冷暗處備用。 A 2.5革蘭氏染色液A 2. 5. 1結(jié)晶紫染色液結(jié)晶紫lg95%乙醇溶液20mL1 %草酸錢水溶液lOOOmL將結(jié)晶紫溶乙醇中，然后與草酸彼水溶液混合.A 2. 5. 2革蘭氏碘液碘lg碘化鉀2g蒸飾水300mL將碘與碘化鉀混合，加入蒸懈水少許，充分搖勻，待完全溶解，再加入蒸館水至300mLoA. 2. 5. 3脫色液95%乙醇A 2.5.4沙黃復(fù)染液沙黃lg95%乙醇2g蒸懾水90mL將沙黃溶95%乙醇中，然后用蒸鐳水稀釋。A. 2. 6染色法染色的基本步驟為：a）涂片：在載玻片上滴加

23、一滴生理鹽水，用滅繭的接種環(huán)取菌落少許，與生理鹽水混勻，涂布成 薄膜；b）干燥：在室溫中便自然干燥；c）固定：將涂片迅速通過火焰23次，以取玻片反而接觸皮狀，熱而不燙為度：d）染色：滴加結(jié)晶紫染色液，染色lmin,水洗：e）媒染：滴加革蘭氏碘液，作用lmin,水洗；f）脫色：滴加95%乙醇脫色，約30s,水洗；g）復(fù)染：滴加復(fù)染液,復(fù)染lmin,水洗。革蘭氏陽性菌染色后呈紫色，革蘭氏陰性繭染色后呈 紅色。亦可用1： 10稀釋的石炭酸復(fù)紅染色液作復(fù)染劑，復(fù)染時間為10s。A. 3檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)程序見圖A.lo圖A. 1污水中糞大腸菌群檢驗(yàn)程序A.4操作步驟A. 4. 1樣品準(zhǔn)備汚水樣品應(yīng)至少収20

24、0mL,使用前應(yīng)允分混勻。若樣品為經(jīng)過氯消忑的汚水，應(yīng)在采樣后立即用5 %硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。根據(jù)預(yù)計(jì)的污水樣品中糞人腸菌群數(shù)確定污水樣品接種杲。炎人腸菌群數(shù)帚相對較少的接種杲一般 為 10mL、lmL、0. ImL。糞人腸曲群數(shù)較多時接種屆為ImL、0. ImL、0. OlmL 或0. ImL、0. OlmL、0. OOlmL 等。接種量少丁lmL時，水樣應(yīng)制成稀釋樣品后供發(fā)酵試驗(yàn)使用.接種雖:為O.lmL、0. OlmL時，取稀釋 比分別為1:10、1:100。瓦它接種斎的稀釋比依此類推。1:10稀釋樣品的制作方法為：吸取ImL水樣，注入到盛有9mL滅菌水的試管中，混勻，制成1 ：

25、 10稀 釋樣品。因此,取lmLl:10稀釋樣品,等F取0. lmL污水樣品。其它稀釋比的稀釋樣品同法制作。A 4 2發(fā)酵試驗(yàn)將樣品接種裝有乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管（內(nèi)有小倒管）中，44C培養(yǎng)24h。樣品接種體枳以及管 內(nèi)乳糖膽鹽培并液的濃度號體積根據(jù)以卜條件確定：取三個接種量、每個接種量的樣品分別接種J；5個 試管內(nèi)，共需15個試管。試管內(nèi)乳糖膽鹽培養(yǎng)液的濃度與體積應(yīng)根據(jù)接種斎確定。桿接種靈為10mL, 吸取10mL樣胡接種:裝有5mL三倍濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內(nèi)：若接種杲為ImL時，吸取ImL樣胡接 種裝的10mL普通濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內(nèi);若接種最少于lmL時，吸取ImL稀釋樣品接種于

26、裝 有10mL普通濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內(nèi)。A. 4. 3平板分離人腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時培養(yǎng)液變色、產(chǎn)氣時小倒管內(nèi)出現(xiàn)氣泡。經(jīng)24h培養(yǎng)后，將產(chǎn)酸的試管內(nèi) 培養(yǎng)液分別劃線接種J EMB培養(yǎng)基上。置J-37-C培養(yǎng)箱屮，培養(yǎng)18h24h。A. 4. 4鑒定挑選可疑糞人腸菌群菌落，進(jìn)行革蘭氏染色和鏡檢?？梢删鋬樱篴）深紫黑色，只有金屬光澤的菌落：b）紫黑色，不帯或略帯金屆光澤的菌落；c）淡紫紅色，中心色較深的菌落。上述涂片鏡檢的菌落如為節(jié)蘭氏陰性無芽抱桿菌，則姚取上述典熨菌落13個接種J：盛有5mL乳糖 蛋白腺培養(yǎng)液倒管和倒管的試管內(nèi)，置J'44-C培養(yǎng)箱屮培養(yǎng)2巾h。產(chǎn)酸產(chǎn)氣試管為糞

27、人腸繭群陽性管。A. 5計(jì)數(shù)根據(jù)證實(shí)冇糞人腸菌群存在的陽性管數(shù)，査表A. 1H得lOOmL污水中糞人腸iWMPN值。由F表A.1是按一定的三個10倍濃度差接種屋設(shè)計(jì)的（接種量為10mL、ImL和0. ImL），當(dāng)采用其他 三個10倍濃度差接種鼠時，需耍修正表內(nèi)MPN值，只體方法如F：表內(nèi)所列汚水最丿、接種就增加10倍時表內(nèi)MPN值相應(yīng)降低10倍：污水最人接種彊減少10倍時表 內(nèi)值相丿'V增加10借。如污水接種吊攻為ImL、0. ImL和0. OlmL時，表A內(nèi)MPN值相應(yīng)增加10借。托 它的三個10倍濃度差接種最的MPN值相應(yīng)類推。111 J-A. llAjMPN值的單位為每100mL

28、污水樣品屮MP值，而汚水以1L為報(bào)告單位，因此盂將查表 A. 1得到的MPN值乘上10,換算成1L污水樣品中的MP tfio表A-1污水中糞大腸菌群謚可能數(shù)（MPN）檢索表（污水樣品接種量為5份lOnil水樣，5份lnil水樣和O.lml水樣）陽性管數(shù)陽性管數(shù)毎陽性管數(shù)毎接種接種接種100ml接種接種接種100ml接種接種接種100ml10011110ml0.11111水樣中100111lOnilO.hnl水樣中100m10mlO.lml水樣中1水樣水樣水樣MPN1水樣水樣水樣MPN1水樣水樣水樣MPN0000200540013001220174011700242029402210035203

29、124032500472041440430005920516405360102210741017011421194112101252121241226表A.1 （續(xù)）陽性骨數(shù)毎陽性管數(shù)毎陽性骨數(shù)毎接種接種接種100ml接種接種接種100ml接種接種接種100ml100ni10mlO.lnil水樣中100mlOnil0.11111水樣中100m10ml0.1ml水樣中1水樣水樣水樣MPN1水樣水樣水樣MPN1水樣水樣水樣MPN01372131441331014921417414360151121519415420204220942022021622112421260227222144223202

30、392231742338024112241942444025132252242550030623012430270317231144313303292321743239033112332043345034132342243452035152352543559040824015440340419241174414004211242204424704313243234435404415244254446204517245284456905092501745041051112512045148052132522345256053152532645364054172542945472055192553

31、24558110023008?0023101430111501311026302135024310383031650358104103042050476105123052350595110431011510331116311145114611283121751263113103132051384表A.1 （續(xù)）陽性管數(shù)陽性管數(shù)每陽性骨數(shù)毎接種接種接種100ml接種接種接種100ml接種接種接種1001111100m10mlO.lnil水樣中100mlOnil0 11111水樣中100m10ml0.1ml水樣中1水樣水樣水樣MPN1水樣水樣水樣MPN1水樣水樣水樣MPN1141231423514

32、110115143152751513012063201452049121832117521701221032220522941231232324523120124153242752415012517325315251801308330175307913110331215311101321233224532140133153332853318013417334325342101351933536535250140113402154013014113341245411701421534228542220143173433254328014419344365443501452234540545430

33、1501335025550240151153512955135015217352325525401531935337553920154223544155416001552435545555>160013DB37/ 596 2006 附錄B（規(guī)范性附錄）醫(yī)療污水中沙門氏茵的檢驗(yàn)B 1儀器和設(shè)備B 1.1高壓蒸汽滅菌器B 1.2干燥滅菌箱B 1.3諳養(yǎng)箱B 1.4恒溫水浴箱B. 1.5 電爐B. 1.6天平B 1.7 滅菌平皿B 1.8滅菌刻度吸管B 1.9酒精燈B 2培養(yǎng)基和試劑B 2. 1亞硒酸鹽增菌液（SF增菌液）B 2. 1. 1成分耽蛋腺（或多價豚）10g磷酸包二鈉（Na2HP03

34、）16g磷懷：軾鈉（NaH2P03）2. 5g乳糖4g亞硒酸氫鈉4g蒸餡水lOOOmLB 2. 1.2制法除亞硒酸氫鈉外，將以上各成分放入蒸伽水中，加熱溶化。再加入亞硒酸氫鈉，待完全溶解后，調(diào) 整pH到7.07.1,分裝于三角燒杯內(nèi)。121C下滅菌15min備用。B 2. 2二倍濃度亞硒酸鹽増菌液（二倍濃度SF増菌液）B 2. 2. 1成分除蒸13水改為500mL夕卜，JL它成分同附錄B. 2. 1. 1。B 2. 2.2制法制法同附錄B2. 1.2-B 2. 3 SS培養(yǎng)基B. 2. 3. 1基礎(chǔ)培養(yǎng)基B. 2.3. 1.1 成分牛肉膏5g示腺og三號膽鹽3. 5g瓊脂17g蒸懾水lOOOm

35、LB 2. 3. 1.2 制法將牛肉膏、示豚和膽鹽溶解JMOOmL蒸飾水中。將瓊脂加到600mL蒸伽水中，煮沸使其溶解。再將 二者混合,12rCT滅菌15min,保存?zhèn)溆谩?5B 2.3. 2完成培養(yǎng)基B. 2. 3. 2.1 成分基礎(chǔ)培養(yǎng)基lOOOmL乳糖10g檸檬酸鈉8. 5g硫代硫酸訥8. 5g10%杼椽酸鐵溶液lOmL1%中性紅溶液2. 5mL0. 1%煌綠溶液0. 33mLB 2. 3. 2.2 制法加熱溶化基礎(chǔ)培養(yǎng)叢，按比例加入除中性紅和煌綠溶液以外的乞成分，充分混介均勻，調(diào)整pH到 7.0,加入中性紅和煌綠溶液，傾注平板。制好的培養(yǎng)基宜當(dāng)丨1使用，或保存冰箱內(nèi)J-18h內(nèi)使用。煌

36、綠溶液配好后應(yīng)在10犬以內(nèi)使用。B. 2.4亞硫酸祕瓊脂培養(yǎng)基（BS培養(yǎng)基）B. 2. 4. 1基礎(chǔ)培養(yǎng)基B. 2. 4. 1.1 成分蛋白腺10g牛肉膏5g氯化鈉5g瓊脂20g蒸飭水lOOOmLB. 2. 4. 1.2 制法加熱溶解齊成分，按每份100mL的乗分裝250mL三角瓶中，121°C卜滅菌20min備用。B 2.4.2亞硫酸祕貯備液B. 2. 4. 2.1 成分檸檬酸蝕餃2g亞硫酸鈉20g磷恢氯二鈉lOg匍萄糖lOg蒸飾水200mLB 2. 4.2.2 制法將檸檬酸鈕鍍?nèi)芙釰-50mL沸水中，同時將H.硫酸鈉溶解J-lOOmL沸水屮，混合兩液并煮沸3min趁熱加入磷酸氯二

37、鈉攪拌至溶解。冷卻后，加入剩余的50mL爸禽糖水溶液貯心冰箱屮。B. 2. 4. 3檸檬酸鐵煌綠貯備液B. 2. 4. 3.1 成分檸檬酸鐵2g煌綠（1%水溶液）25mL蒸飾水200mLB 2. 4.3.2 制法將上述成分溶解于水中.盛于已滅菌的玻璃瓶內(nèi).貯存于冰箱。B. 2. 4. 4完成培養(yǎng)基B. 2. 4.4.1 成分棊礎(chǔ)培養(yǎng)基lOOmL亞硫酸俺貯備液20mL17DB37/ 596 2006 檸檬酸鐵煌綠貯備液4. 5mLB 2. 4. 4.2 制法加熱融化基礎(chǔ)培養(yǎng)基并冷卻至50°C,同時分別加熱亞硫酸儲貯備液和檸檬酸鐵煌綠貯備液至50C。在無菌操作下將后者加入到前者去，充分混

38、合，無菌傾入已滅菌的培養(yǎng)皿中。B. 2.5三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基（TSI培養(yǎng)基）B 2. 5. 1 成分蛋白腺20g牛肉膏5g乳糖10g蔗糖10g制萄糖lg氯化鈉5g硫酸亞飲彼0. 2g硫代硫酸鈉0. 2g瓊脂12g酚紅0. 025g蒸懾水lOOOmLB 2. 5. 2制法將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解J：蒸館水中,調(diào)pH到7. 4。加入瓊脂.加熱煮沸,再加入0.2% 酚紅水溶液12. 5mL.搖勻。分裝試竹，裝吊立多些，以便得到較高的底So 12PC卜滅菌15min。放宣高 層斜面?zhèn)溆?。B 2.6沙門氏菌診斷血清B. 3檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)程序見圖B.1。圖B. 1污水中沙門氏菌檢驗(yàn)程序19B 4操作步驟

39、B. 4.1樣品處理和增菌取200mL汚水，用滅菌濾膜進(jìn)行抽濾。用100mL二倍濃度SF地菌液把濾膜上截留的雜質(zhì)洗脫到滅 菌三角燒瓶內(nèi)，充公搖勻，置J-37°C恒溫培養(yǎng)箱，增菌培養(yǎng)122仆。若樣品為經(jīng)過氯消毒的污水，應(yīng)在釆樣后立即用5%硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。B. 4.2平板分離取上述増菌培養(yǎng)液，分別接種于SS培養(yǎng)基平板和BS培養(yǎng)基平板,置F379培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24h 48h。觀察各平板上生長的繭落形態(tài)。挑取在SS培養(yǎng)堆T：板上呈無色透明或中間有黑心，肖徑I2inn的菌落;挑取在BS培養(yǎng)基平板I： 呈黑色的菌落或灰綠色的可疑腸道病原菌菌落。每個平板最少挑取5個菌落，接種J-TSI

40、培養(yǎng)基屮，宣 丁37C培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)18h24h。B 4. 3鑒定B 4. 3. 1血清學(xué)試驗(yàn)在TSI培養(yǎng)基屮，如不發(fā)酵乳糖，發(fā)酵爸萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，一般產(chǎn)生硫化氫，仃動力 若,先與沙門氏A-F群0多價血清作玻璃片凝集，凡與多價0血清凝集苕，再與0因子血清凝集，以確定 所屬群別,然后用H因子血清，確定血清型。雙向菌株應(yīng)證實(shí)兩相的H抗原，有Vi抗原的菌型（傷寒和 丙型副傷寒沙門氏菌）應(yīng)用Vi因子血消檢驗(yàn)。B. 4. 3. 2生化試驗(yàn)應(yīng)進(jìn)行葡萄糖、廿露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖、靛基質(zhì)、硫化氫、動力、尿素試驗(yàn)。沙門氏菌屬中 除傷寒沙門氏菌和雞沙門氏菌不產(chǎn)氣外,通過發(fā)酵葡萄糖、產(chǎn)氣、均發(fā)酵甘露

41、諄和麥芽糖（但豬沙門氏 菌、雛沙門氏菌不發(fā)酵麥芽糖），不分解乳糖、懺糖，尿素劇和靛基質(zhì)為陰性，通常產(chǎn)生硫化氫。除雞、 雛沙門氏菌和傷寒沙門氏菌的0型菌株無動力外，通常均有動力。如遇多價0血清不凝集而一般生化反應(yīng)符介上述情況時，可加做側(cè)金盞花醇、水楊素和貳化鉀試驗(yàn), 沙門氏茵均為陰性。B.5檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)泉，報(bào)告一定體積的樣品中存在或不存在沙門氏菌。#DB37/596 2006附錄c（規(guī)范性附錄）醫(yī)疔污水中志賀氏菌的檢驗(yàn)方法C.1儀器和設(shè)備C.1.1高壓蒸汽滅菌器C. 1.2干燥滅菌箱C. 1.3培養(yǎng)箱C. 1.4恒溫水浴箱C. 1.5 電爐C. 1.6天平C. 1.7滅菌平皿C. 1.

42、8滅菌刻度吸管C. 1.9酒精燈C.2培養(yǎng)基和培養(yǎng)液C.2. 1革蘭氏陰性增菌液（GN增菌液）C.2. 1. 1 成分耽蛋門腺（或多價豚）20g葡菊糖lg甘霞醇2g枸椽酸鈉5g玄氧膽酸鈉0. 5g磷酸電二鉀16g磷酸二氫鉀2. 5g氯化鈉5r蒸飾水lOOOmLC. 2. 1.2 制法將以上各成分加入蒸館水中溶化，調(diào)整pH至7.0,煮沸過濾，115C卜火萌20min°貯存J：冷暗處備 用。C. 2.2二倍濃度革蘭氏陰性增菌液（二倍濃度GN増菌液）C.2. 2. 1 成分除蒸懈水改為500mL夕卜，其它成分同附錄C2. 1. 1。C. 2. 2. 2 制法制法同附錄C2. 1.2oC.

43、2. 3 SS培養(yǎng)基同附錄B. 2.3oC. 2. 4伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（EMB培養(yǎng)基）同附錄A. 2.3。C.2.5三糖鐵瓊脂（TSI培養(yǎng)基）同附錄B. 2. 5«C. 2. 6志賀氏菌診斷血清DB37/ 596 2006C. 3檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)程序見圖C. 1。圖C. 1污水中志賀氏菌檢驗(yàn)程序C.4操作步驟C. 4. 1樣品處理和增菌培養(yǎng)取200mL污水，用火悄濾膜進(jìn)彳J：抽濾。若樣品為經(jīng)過氯消毒的汚水，W在釆樣后立即用5%硫代硫 酸鈉溶液充分中和余氯。用100mL二倍濃度GN增菌液把濾膜上截留的雜質(zhì)洗脫到LA滅菌的三角燒瓶內(nèi)， 搖勻，置于37°C恒溫培養(yǎng)箱，增菌培養(yǎng)68h

44、。C. 4. 2分離取上述増菌培養(yǎng)液，分別接種SS培養(yǎng)基平板和EMB培養(yǎng)基平板，直J：37C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。挑取在SS培養(yǎng)基平板和EMB培養(yǎng)基平板上呈無色透明,直徑11.5mL的可疑腸道病原菌菌落。何 個平板最少挑取5個菌落,接種J -TSI培養(yǎng)基，置J-37*C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)182仆。挑取在TSI中,葡萄 糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，無動力，不產(chǎn)生硫化軾，上層斜面乳糖不分解的菌株，可做血淸學(xué)和?；囼?yàn)。C. 4. 3鑒定C. 4. 3. 1血清學(xué)試驗(yàn)志賀氏菌屬分為四個群，先與多價血清作玻璃片凝集試驗(yàn)，如為陽性，再分別與A、B、C、D群血 清凝集，并進(jìn)一步與分型血清做玻璃片凝集，最后確定其血消型。C. 4

45、. 3. 2生化試驗(yàn)應(yīng)進(jìn)行荷萄糖、廿露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖、靛甚質(zhì)、硫化氫、動力、尿素試驗(yàn)。，忐賀氏菌屬能 分解葡菊糖，但不產(chǎn)氣（福氏志賀氏菌6糧有時產(chǎn)生少駅氣體），一般不能分解乳糖和蔗糖，宋內(nèi)氏，忐賀 氏筒對乳糖和蔗糖遲緩發(fā)酵產(chǎn)酸。，忐賀氏筒屬均不產(chǎn)生硫化氫，不分解尿素，無動力。対II錨醉、麥芽 糖的發(fā)酵及靛基質(zhì)的產(chǎn)生，則因菌株不同而異。如遇多價血淸玻璃片凝集試驗(yàn)為陰性，而生化反應(yīng)符合上述情況時，可加做肌醇、水楊酸、V-P、 椽酸鹽、氛化鉀等試驗(yàn)。志賀氏繭屈均為陰性反應(yīng)。C. 5檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果，報(bào)告一定體積的樣品屮存在或不存在憑賀氏菌。19DB37/ 596 2006附錄D（規(guī)范性附錄）醫(yī)療污水中結(jié)核桿菌的檢驗(yàn)方法D. 1儀器和設(shè)備D. 1.1電爐D. 1.2恒溫水浴箱D. 1.3高斥蒸汽火菌器D. 1.4濾菌器D. 1