病理生理教研室實用教案

1、細胞凋亡是指細胞在一定的生理或病理條件下，受內(nèi)在(nizi)遺傳機制的控制自動結(jié)束生命的過程第1頁/共8頁第一頁，共9頁。 細胞凋亡的過程不同于壞死性死亡，其染色質(zhì)斷裂，細胞核碎裂程核裂片，細胞質(zhì)濃縮，細胞體積減小，細胞膜內(nèi)折，整個細胞通過起泡和發(fā)芽方式形成大小不等凋亡小體。 凋亡的細胞的核DNA的斷裂發(fā)生在核小體之間，因此產(chǎn)生的斷裂DNA在電泳時會呈180-200bp整數(shù)倍大小的階梯狀條帶，這是識別凋亡細胞的可靠生化(shn hu)特征。能誘導(dǎo)細胞凋亡的枉法有很多，這里主要采取化療藥物誘導(dǎo)細胞凋亡第2頁/共8頁第二頁，共9頁。第3頁/共8頁第三頁，共9頁。HepG2 肝癌(n i)細胞株，D

2、NA提取試劑盒，移液器，EP管，PBS，低溫離心機第4頁/共8頁第四頁，共9頁。1.在細胞懸液中加入20 l Proteinase K溶液，混勻。2.加入200 l緩沖液GB，充分顛倒混勻，70放置10 min，溶液應(yīng)變清亮，簡短離心以去除水珠。3.加人200 l 無水乙醇，充分振蕩混勻15 sec，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。4.將上一步(y b)所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (13,400g)離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放回收集管中。5.向吸附柱CB3中加入500 l緩沖液GD （使用前請先檢

3、查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm (13,400g)離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。第5頁/共8頁第五頁，共9頁。6. 向吸附柱CB3中加入(jir)600 l 漂洗液PW（使用前請先檢查是否已加入(jir)無水乙醇），12,000 rpm (13,400g)離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。7. 重復(fù)操作步驟6。8. 將吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm(13,400g)離心2 min，倒掉廢液。將吸附柱CB3置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。9. 吸附柱CB3轉(zhuǎn)入一個干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加50-200 l洗脫緩沖液TE，室溫放置2-5 min，12,000 rpm (13,400g)離心 2 min，將溶液收集到離心管中。第6頁/共8頁第六頁，共9頁。 DNA提取過程中哪些步驟會導(dǎo)致樣品不純，為什么？ 化療藥物誘導(dǎo)(yudo)細胞凋亡的機制是什么？第7頁/共8頁第七頁，共9頁。感謝您的觀看(gunkn)！第8頁/共8頁第八頁，共9頁。NoImage內(nèi)容(nirng)總結(jié)細胞凋亡。能誘導(dǎo)細胞凋亡的枉法有很多，這里主要采取化療藥物誘導(dǎo)細胞凋亡。第2頁/共8頁。HepG2 肝癌細胞株，DNA提取試劑盒，移液器，EP管，PBS，低溫離心機。將吸