化驗員、質(zhì)監(jiān)員培訓(xùn)講義 儀器分析法

1、化驗員、質(zhì)監(jiān)員培訓(xùn)講義之儀器分析法化驗員、質(zhì)監(jiān)員培訓(xùn)講義第三部分 儀器分析法第一章 紫外分光光度法一、原理 可見光、紫外線照射某些物質(zhì)，主要是由于物質(zhì)分子中價電子能級躍遷對輻射的吸收，而產(chǎn)生化合物的可見紫外吸收光譜?；谖镔|(zhì)對光的選擇性吸收的特性而建立分光光度法或稱吸收光譜法的分析方法。它是以朗伯比耳定律為基礎(chǔ)。 1 朗伯比耳定律 A = lg- = ECL T式中 A為吸收度； T為透光率； E為吸收系數(shù)，采用的表示方法是（E），其物理意義為當(dāng)溶液濃度為1%（g/ml），液層厚度為1cm時的吸收度數(shù)值； C為100ml溶液中所含被測物質(zhì)的重量（按干燥品或無水物計算），g； L為液層厚度，cm

2、。二、使用范圍 凡具有芳香環(huán)或共軛雙鍵結(jié)構(gòu)的有機(jī)化合物，根據(jù)在特定吸收波長處所測得的吸收度，可用于藥品的鑒別、純度檢查及含量測定。三、儀器 可見-紫外分光光度計。其應(yīng)用波長范圍為200400nm的紫外光區(qū)、400850nm的可見光區(qū)。主要由輻射源（光源）、色散系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、吸收池、數(shù)據(jù)處理機(jī)、自動記錄器及顯示器等部件組成。本儀器是根據(jù)相對測量的原理工作的，即先選定某一溶劑（或空氣、試樣）作為標(biāo)準(zhǔn)（空白或稱參比）溶液，并認(rèn)為它的透光率為100（或吸收度為0），而被測的試樣透光率（或吸收度）是相對于標(biāo)準(zhǔn)溶液而言，實際上就是由出射狹縫射出的單色光，分別通過被測試樣和標(biāo)準(zhǔn)溶液，這兩個光能量之比值，就

3、是在一定波長下對于被測試樣的透光率（或吸收度）。本儀器可精密測定具有芳香環(huán)或共軛雙鍵結(jié)構(gòu)的有機(jī)化合物、有色物質(zhì)或在適當(dāng)條件下能與某些試劑作用生成有色物的物質(zhì)。 使用前應(yīng)校正測定波長并按儀器說明書進(jìn)行操作。四、儀器的校正 1.波長的準(zhǔn)確度試驗 以儀器顯示的波長數(shù)值與單色光的實際波長值之間誤差表示，應(yīng)在±1.0nm范圍內(nèi)。 可用儀器中氘燈的486.02nm與656.10nm譜線進(jìn)行校正。 2.吸收度的準(zhǔn)確度試驗 3.雜散光的試驗 4.波長重現(xiàn)性試驗 5.分辨率試驗五、測定方法 1.對照品比較法 （1）按各品種項下的方法，分別配制供試品溶液和對照品溶液，對照品溶液中所含被測成分的量應(yīng)為供試

4、品溶液中被測成分標(biāo)示量的100±10%，所用溶劑也應(yīng)完全一致，在規(guī)定的波長測定供試品溶液和對照品溶液的吸收度后，按下式計算含量，即得。 （2）計算式 A樣×G對/稀釋倍數(shù)×100×1 含量（%）= - ×100% A對×G樣/稀釋倍數(shù)×100×1 2.吸收系數(shù)法 （1）按各品種項下的方法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長處測定其吸收度，再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計算含量。用本法測定時，應(yīng)注意儀器的校正和檢定。 （2）計算式 A樣 含量（%）= - ×100% G樣/稀釋倍數(shù)×(E)對×

5、100×1 3.計算分光光度法 采用計算分光光度法應(yīng)慎重。本法有多種，使用時均應(yīng)按各品種項下規(guī)定的方法進(jìn)行。當(dāng)吸收度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測定時，波長的微小變化可能對測定結(jié)果造成顯著影響，故對照品和供試品測試條件應(yīng)盡可能一致。若測定時不用對照品，如維生素A測定法，則應(yīng)在測定時對儀器作仔細(xì)的校正和檢定。六、注意事項 1.空白溶液與供試品溶液必須澄清，不得有渾濁。如有渾濁，應(yīng)預(yù)先過濾，并棄去初濾液。 2.測定時，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同瓶溶劑為空白對照，采用1cm的石英吸收池。 3.在規(guī)定的吸收峰波長±2nm以內(nèi)測試幾個點(diǎn)的吸收度，以核對供試品的吸收峰波

6、長位置是否正確，除另有規(guī)定外，吸收峰波長應(yīng)在該品種項下規(guī)定的波長±2nm以內(nèi)；否則應(yīng)考慮該試樣的真?zhèn)?、純度以及儀器波長的準(zhǔn)確度，并以吸收度最大的波長作為測定波長。 4.一般供試品溶液的吸收度讀數(shù)，以在0.30.7之間的誤差較小。 5.吸收池應(yīng)選擇配對，否則要引入測定誤差。在規(guī)定波長下兩個吸收池的透光率相差小于0.5的吸收池作配對，在必要的情況時，須在最終測量扣除吸收池間的誤差修正值。 6.由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測定供試品的吸收度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，再計算含量。 7.儀器的接地必須良好，一切裸露的零件對地電位不得超過24伏（測電筆的氖管不得發(fā)亮）。 8.在使用過程中，如

7、需開啟試樣室蓋時或暫時停止測試時，必須及時推入光門鈕桿（使光電管前光門關(guān)閉），保護(hù)光電管，以防止光電管受強(qiáng)光或長時間照射而損壞。 9.在測定時或改測其它檢品時，應(yīng)用待測溶液沖洗吸收池34次，用干凈綢布或擦鏡紙擦凈吸收池的透光面至不留斑痕（切忌把透光面磨損）。 10.取吸收池時，應(yīng)拿毛玻璃兩面，切忌用手拿捏透光面，以免粘上油污。使用完后及時用測定溶劑沖凈，再用純化水沖凈，用干凈綢布或擦鏡紙擦干，晾干后，放入吸收池盒中，防塵保存。 11.若吸收池內(nèi)外壁沾污，兩池差較大的處理。 （1）可用綢布纏在扁竹條外或用脫脂棉纏在細(xì)玻璃棒上蘸上乙醇，輕輕摩擦，再用純化水沖凈。 （2）如上述方法處理不好，必要時可

8、用重鉻酸鉀-硫酸洗液泡洗12分鐘，用自來水沖凈，再用純化水沖凈。 （3）不得用毛刷刷洗或硬物拭擦，以防止表面光潔度受損影響正常使用。 12.請務(wù)必注意經(jīng)常保持硅膠的干燥，目的是保護(hù)光學(xué)元件和光電放大器系統(tǒng)不致受潮損壞而影響儀器的正常工作，如發(fā)現(xiàn)有的硅膠由藍(lán)色變?yōu)榉奂t色，應(yīng)立即更換。該儀器干燥劑筒有兩個：一個是裝在放大器暗盒上，另一個裝在單色光器暗盒上。 13.在更換硅膠干燥劑時，應(yīng)關(guān)閉切斷電源。 14.在停止工作期間，主機(jī)試樣室內(nèi)應(yīng)放入袋裝或筒裝硅膠干燥劑。用防塵罩罩住整個儀器，并在防塵罩內(nèi)放數(shù)袋防潮硅膠。 15.儀器在操作中，狹縫的寬度應(yīng)從小逐漸開大。若狹縫過大，由于進(jìn)入光電管的光能量強(qiáng)度過

9、大，將會使放大器輸出信號達(dá)到飽和，以至數(shù)字顯示出溢出（即數(shù)字閃爍或示1不變）。這不是儀器有故障。 16.將波長旋轉(zhuǎn)放在625nm，鋏縫關(guān)閉在0.02nm附近，選擇按鍵恢復(fù)在停止工作部位（即三個鍵均彈出）。 17.搬動儀器時應(yīng)搬在主體端，不要搬在試樣室和光電管盒端以及光源燈室部位，以防止儀器狹縫或光路部件受力而發(fā)生變形。并在搬動或運(yùn)輸時，應(yīng)將可動部分固定，如各旋鈕可用膠布貼住，狹縫位置開大些，然后固定，不要關(guān)小狹縫，以免運(yùn)輸時振動使狹縫刀口受損壞。 18.儀器的光柵、反射鏡絕對不能擦拭，否則將損壞儀器光學(xué)表面，增加雜散光。 19.儀器經(jīng)過搬動請及時檢查并糾正波長精度，為保證測定的準(zhǔn)確性請經(jīng)常校準(zhǔn)

10、波長精度。如有異常，應(yīng)立即報告質(zhì)量保證部，但不得擅自調(diào)整，并及時做好記錄。七、結(jié)果計算 A E（供試品） = CL E（供試品） 含量（%）= - ×100% E（標(biāo)準(zhǔn)值或?qū)φ掌罚┌?、允許差 儀器分析方法的誤差限度，除另有規(guī)定外，其相對偏差應(yīng)在±(2.03.0)%。第二章 比色法一、原理及適用范圍 在可見光區(qū)，除某些物質(zhì)有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒有吸收，但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后，根據(jù)顏色深淺與濃度成正比關(guān)系，則可用比色法測定含量。二、儀器 可見分光光度計（或比色計）其應(yīng)用波長范圍為400850nm的可見光區(qū)。主要由輻射源（光源）、色散系統(tǒng)（或濾光片）

11、、檢測器系統(tǒng)、顯示系統(tǒng)、記錄器及吸收池等部件組成。使用前應(yīng)校正測定波長并按儀器說明書進(jìn)行操作。三、儀器的校正 按照紫外分光光度法項下的有關(guān)規(guī)定及按儀器說明書要求進(jìn)行校正。波長的準(zhǔn)確度應(yīng)在±3nm范圍內(nèi)。四、測定方法 1.用比色法測定時，應(yīng)取對照品同時操作。除另有規(guī)定外，比色法所用的空白系指用同體積的溶劑代替對照品或供試品溶液，然后依次加入等量的相應(yīng)試劑，并用同樣方法處理。在規(guī)定的波長處測定對照品和供試品溶液的吸收度后，按紫外分光光度法項下“對照品比較法”的計算式計算含量。 2.當(dāng)吸收度和濃度關(guān)系不呈線性時，應(yīng)取數(shù)份梯度量的對照品溶液，用溶劑補(bǔ)充至同一體積，顯色后測定各份溶液的吸收度，

12、然后以吸收度與相應(yīng)的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)供試品的吸收度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出其含量。三、注意事項 測定時，應(yīng)取對照品平行操作，使所用試劑用量、反應(yīng)溫度、酸堿度、反應(yīng)時間等完全一致，對隨時間變化影響顯色的品種應(yīng)準(zhǔn)確控制讀數(shù)時間，操作時應(yīng)注意避光。第三章 高效液相色譜法一、原理 高效液相色譜法是用高壓輸液泵將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相，壓入裝有固定相的色譜柱，經(jīng)進(jìn)樣閥注入供試品，由流動相帶入柱內(nèi)，在柱內(nèi)各成分被分離后，依次進(jìn)入檢測器，色譜信號由記錄儀或積分儀記錄。二、適用范圍 高效液相色譜法是一種分離分析方法，適用于揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大的高分子化合物以及離子

13、型化合物等的定性、定量分析。中國藥典主要用于藥品的含量測定、有關(guān)物質(zhì)檢查、雜質(zhì)限度檢查和鑒別等。三、儀器 高效液相色譜儀主要由輸液泵系統(tǒng)、進(jìn)樣器系統(tǒng)、色譜柱、檢測器、記錄器、顯示器及數(shù)據(jù)處理機(jī)（或兼有組分收集系統(tǒng)）等組成。使用時應(yīng)按儀器的說明書進(jìn)行操作。四、儀器的校正 1.高效液相色譜儀的柱箱控溫精度、基線噪聲、基線漂移、靈敏度或檢測限、線性范圍的檢定均按儀器說明書的技術(shù)要求進(jìn)行校驗，應(yīng)符合規(guī)定。 2.以紫外-可見光檢測器、熒光檢測器、差示折光檢測器為檢測器的實驗室通用液相色譜儀的檢定，所用各種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)使用經(jīng)國家技術(shù)監(jiān)督部門批準(zhǔn)頒發(fā)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。具體校正方法和主要技術(shù)指標(biāo)見“高效液相色譜儀檢測

14、器的校驗”。 3.泵的耐壓試驗 4.泵流量設(shè)定值誤差、流量穩(wěn)定性誤差的試驗 5.柱恒溫箱溫度設(shè)定值誤差和控溫穩(wěn)定性誤差的試驗 6.梯度準(zhǔn)確度的試驗 7.定性定量重現(xiàn)性的試驗五、對儀器的一般要求 1.色譜柱的填充劑和流動相的組分應(yīng)按各品種項下的規(guī)定。常用的色譜柱填充劑有硅膠（正相色譜）和化學(xué)鍵合硅膠，后者以十八烷基硅烷鍵合硅膠（反相色譜）最為常用，辛基硅烷鍵合硅膠次之，氰基或氨基鍵合硅膠也有使用。離子交換填充劑用于離子交換色譜；凝膠或玻璃微球等填充劑用于分子排阻色譜等。除另有規(guī)定外，柱溫為室溫，檢測器為紫外吸收檢測器。 2.藥典正文中各品種項下規(guī)定的條件除固定相種類、流動相組分、檢測器類型不得任

15、意改變外，其余如色譜柱內(nèi)徑、長度、固定相牌號、載體粒度、流動相流速、混合流動相各組分的比例、柱溫、進(jìn)樣量、檢測器的靈敏度等，均可適當(dāng)改變，以適應(yīng)具體品種并達(dá)到系統(tǒng)適用性試驗的要求。 3.一般色譜圖約于20分鐘內(nèi)記錄完畢。六、系統(tǒng)適用性試驗 按各品種項下要求對儀器進(jìn)行適用性試驗，即用規(guī)定的對照品對儀器進(jìn)行試驗和調(diào)整，應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求，或規(guī)定分析狀態(tài)下色譜柱的最小理論板數(shù)、分離度、重復(fù)性和拖尾因子。 1.色譜柱的理論板數(shù)（n） n = 5.54(tR/Wh/2)2式中 tR為保留時間（以分鐘或長度計，下同，但應(yīng)取相同單位）； Wh/2為半峰高寬。 2.分離度（R） 除另有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于1.5

16、。 2(tR2tR1) R = - W1W2式中 tR2為相鄰兩峰中后一峰的保留時間； tR1為相鄰兩峰中前一峰的保留時間； W1及W2為此相鄰兩峰的峰寬。 3.重復(fù)性 取各品種項下的對照溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，除另有規(guī)定外，其峰面積測量值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。也可按各品種校正因子測定項下，配制相當(dāng)于80%、100%和120%的對照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液，配成3種不同濃度的溶液，分別進(jìn)樣3次，計算平均校正因子，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差也應(yīng)不大于2.0%。 4.拖尾因子（T） 除另有規(guī)定外，T應(yīng)在0.951.05之間。 W0.05h T = - 2d1式中 W0.05h為0.05峰高處的峰寬；

17、 d1為峰極大至峰前沿之間的距離。七、測定法 定量測定時，可根據(jù)供試品的具體情況采用峰面積法或峰高法。測定雜質(zhì)含量時，須采用峰面積法。（一）內(nèi)標(biāo)法 加校正因子測定供試品中某個雜質(zhì)或主成分含量 1.按各品種項下的規(guī)定，精密稱（量）取對照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，分別配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子測定用的對照溶液。取一定量注入液相色譜儀，記錄色譜圖。測量對照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計算校正因子： AS/CS 校正因子（f）= - AR/CR式中 AS為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高； AR為對照品的峰面積或峰高； CS為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度； CR為對照品的濃度。 再取各品種項下含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，

18、注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測量供試品中待測成分（或其雜質(zhì)）和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計算含量： AX 含量（CX）= f·- AS/CS CX×稀釋倍數(shù) 含量（%）= ×100% GX×(1干燥失重)式中 AX為供試品（或其雜質(zhì)）的峰面積或峰高； CX為供試品（或其雜質(zhì)）的濃度； GX為供試品的稱樣量。 當(dāng)配制校正因子測定用的對照溶液和含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液使用同一份內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液時，則配制內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液不必精密稱（量）取。 2.內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的選擇 （1）內(nèi)標(biāo)物質(zhì)應(yīng)是樣品中不含有的組分，否則會使峰重疊而無法準(zhǔn)確測量內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積。 （2）內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的保

19、留時間應(yīng)與待測成分相近，并達(dá)到完全分離，分離度R1.5。 （3）內(nèi)標(biāo)物質(zhì)必須是純度符合要求的化合物，若非純品無干擾峰也可采用。已知含量的較純物質(zhì)也可用，但需扣除內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的重量。（二）外標(biāo)法 測定供試品中某個雜質(zhì)或主成分含量 1.按各品種項下的規(guī)定，精密稱（量）取對照品和供試品，配制成溶液，分別精密取一定量，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測量對照品和供試品待測成分的峰面積（或峰高），按下式計算含量： AX 含量（CX）= CR·- AR CX×稀釋倍數(shù) 含量（%）= ×100% GX×(1干燥失重) 2.由于微量注射器不易精確控制進(jìn)樣量，當(dāng)采用外標(biāo)法測定供試

20、品中某雜質(zhì)或主成分含量時，以定量環(huán)進(jìn)樣為好。（三）加校正因子的主成分自身對照法（四）不加校正因子的主成分自身對照法（五）面積歸一化法 由于峰面積歸一化法測定誤差大，因此，本法通常只能用于粗略考察供試品中的雜質(zhì)含量。除另有規(guī)定外，一般不宜用于微量雜質(zhì)的檢查。方法是測量各雜質(zhì)峰的面積和色譜圖上除溶劑峰以外的總色譜峰面積，計算各峰面積占總峰面積的百分率，即得。八、注意事項 1.雖然泵能耐壓6000PSI的壓力，但不要使泵處于4000PSI以上的壓力為宜。 2.安裝及拆卸色譜柱時應(yīng)注意柱的連接方向，千萬不能接反。否則可能導(dǎo)致柱效降低，甚至損壞色譜柱。 3.嚴(yán)禁開空泵。在無流動相通過時不要扳動進(jìn)樣閥的操

21、作桿，使用時要注意盡可能少扳動，以免磨損內(nèi)部的密封墊圈。 4.為了延長檢測器燈源的使用壽命，在色譜泵穩(wěn)定后再打開檢測器電源開關(guān)，分析結(jié)束后立即關(guān)閉檢測器。 5.應(yīng)使用高純度、高質(zhì)量的溶劑和試劑。 6.避免pH值超限，pH值應(yīng)控制在2.27.5之間。pH值偏低或偏高都會腐蝕液相系統(tǒng)的不銹鋼材料；破壞色譜柱填料的結(jié)構(gòu)，使填料失活。 7.色譜柱溫不能超過規(guī)定要求，柱溫過高會加速色譜柱填料老化，破壞其結(jié)構(gòu)。 8.使用所有溶劑必須是互溶的。這對于緩沖流動相來說是非常重要的，鹽類的析出會很快損壞要維護(hù)的部件。 9.流動相首選甲醇-水系統(tǒng)，如經(jīng)試用不適合時，再選用其他溶劑。為保護(hù)儀器，應(yīng)盡可能少用含有緩沖液

22、的流動相。如果流動相中含有緩沖劑，每日使用后應(yīng)用不含緩沖劑的流動相或新鮮純化水將儀器管路、泵、進(jìn)樣閥、色譜柱及檢測池等充分沖洗干凈。 10.如果液相系統(tǒng)使用未過濾的洗脫液、注入未過濾的樣品、系統(tǒng)中滯留緩沖洗脫液都能堵塞系統(tǒng)或劃傷泵柱塞。所以流動相、樣品使用前必須用0.45m微孔濾膜過濾；流動相并先經(jīng)脫氣處理后使用。停泵后決不允許緩沖洗脫液滯留在系統(tǒng)中，須用經(jīng)過濾后的新鮮純化水進(jìn)行清洗，并保證將緩沖劑沖洗干凈。 11.如果泵閉置在2天以上，應(yīng)將甲醇注滿液相系統(tǒng)，以避免水溶劑系統(tǒng)中可能存在微生物的繁殖。 12.色譜柱保存時應(yīng)使填充劑處在潤濕狀態(tài)，兩端密塞。反相柱（如十八烷基硅烷鍵合硅膠柱）可在甲醇

23、中保存；正相柱（如硅膠柱）可在正己烷中保存等。 13.決不能使用鹽酸溶液。一般來說，任何濃度的鹵化物都會腐蝕未經(jīng)鈍化的不銹鋼材料。 14.盡量避免使用在電化學(xué)過程中引起腐蝕的金屬離子。應(yīng)避免的典型金屬離子有錳、鉻、鋅、銅、鎳、鉬、鐵。九、允許差 含量測定的精度，除另有規(guī)定外，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。第四章 氣相色譜法一、原理 氣相色譜法的流動相為氣體，稱為載氣；色譜柱分為填充柱和毛細(xì)管柱兩種。填充柱內(nèi)裝吸附劑、高分子多孔小球或涂漬固定液的載體；毛細(xì)管柱內(nèi)壁涂漬或交聯(lián)固定液。注入進(jìn)樣口的供試品被加熱氣化，并被載氣帶入色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后先后進(jìn)入檢測器，色譜信號用記錄儀或數(shù)據(jù)處理器

24、記錄。二、適用范圍 氣相色譜法是一種分離分析方法，適用于含揮發(fā)性或經(jīng)裂解、衍生化等能氣化的藥品及多組分混合物的定性、定量分析。中國藥典主要用于原料藥中殘留溶劑、揮發(fā)性雜質(zhì)的檢查，制劑中含有乙醇量的測定以及具有一定揮發(fā)性原料藥及其制劑的含量測定。三、儀器 氣相色譜儀主要由氣路系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、色譜柱、檢測器、記錄器、顯示器及數(shù)據(jù)處理機(jī)（或兼有組分收集系統(tǒng)）等組成。使用時應(yīng)按儀器的說明書進(jìn)行操作。四、對儀器的一般要求 1.除另有規(guī)定外，載氣為氮?dú)?；色譜柱為填充柱或毛細(xì)管柱，填充柱的材質(zhì)為不銹鋼或玻璃，載體用直徑為0.250.18mm、0.180.15mm或0.150.125mm經(jīng)酸洗并硅烷化處理的硅

25、藻土或高分子多孔小球；常用玻璃或彈性石英毛細(xì)管柱的內(nèi)徑為0.20mm或0.32mm。進(jìn)樣口溫度應(yīng)高于柱溫3050；進(jìn)樣量一般不超過數(shù)微升；柱徑越細(xì)進(jìn)樣量應(yīng)越少。檢測器為氫火焰離子化檢測器，檢測溫度一般高于柱溫，并不得低于100，以免水氣凝結(jié)，通常為250350。 2.藥典正文中各品種項下規(guī)定的條件，除檢測器種類、固定液品種及特殊指定的色譜柱材料不得任意改變外，其余如色譜柱內(nèi)徑、長度、載體牌號、粒度、固定液涂布濃度、載氣流速、柱溫、進(jìn)樣量、檢測器的靈敏度等，均可適當(dāng)改變，以適應(yīng)具體品種并符合系統(tǒng)適用性試驗的要求。一般色譜圖約于30分鐘內(nèi)記錄完畢。五、系統(tǒng)適用性試驗 同高效液相色譜法項下規(guī)定。六、

26、測定法 1. 同高效液相色譜法項下規(guī)定。用氣相色譜法進(jìn)行定量分析時，應(yīng)盡量采用內(nèi)標(biāo)法為宜。同時也要注意進(jìn)樣技術(shù)的熟練，因內(nèi)標(biāo)物質(zhì)與供試品成分的蒸氣壓不同，則蒸氣壓高的進(jìn)樣量也會較多。故選擇測定用內(nèi)標(biāo)物質(zhì)時，除應(yīng)考慮內(nèi)標(biāo)峰的保留時間應(yīng)與被測成分相近，無雜質(zhì)峰重疊，尚要考慮其蒸氣壓是否近似。 2.氣相色譜法手工進(jìn)樣量不易精確控制，特別應(yīng)注意留針時間和室溫的影響。七、允許差 含量測定的精度，除另有規(guī)定外，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。第五章 旋光度測定法一、定義 偏振光透過長1dm并每1ml中含有旋光性物質(zhì)1g的溶液，在一定波長與溫度下測得的旋光度稱為比旋度。測定比旋度（或旋光度）可以區(qū)別或檢查某

27、些藥品的純雜程度，亦可用以測定含量。二、原理 當(dāng)一單色光（鈉光譜的D線即589.3nm）通過起偏鏡產(chǎn)生直線偏振光向前進(jìn)行，當(dāng)通過裝有含有某些光學(xué)活性（即旋光性）的化合物液體的測定管時，偏振光的平面（偏振面）就會向左或向右旋轉(zhuǎn)一定的角度，即該旋光性物質(zhì)的旋光度。其值可以從自動示數(shù)盤上直接讀出。 偏振光透過長1dm并每1ml中含有旋光性物質(zhì)1g的溶液，在一定波長與溫度下測得的旋光度稱為比旋度。 對液體供試品 = - ld 100 對固體供試品 = lc式中 為比旋度； D為鈉光譜的D線； t為測定時的溫度； l為測定管長度，dm； 為測得的旋光度； d為液體的相對密度； c為每100ml溶液中含有

28、被測物質(zhì)的重量，g（按干燥品或無水物計算）。三、測定方法 1.打開穩(wěn)壓電源開關(guān)，稍等片刻，俟電壓表指針穩(wěn)定地指示在220V處。 2.打開旋光儀電源開關(guān)，經(jīng)5分鐘鈉光燈發(fā)光穩(wěn)定后再工作。 3.扳上直流開關(guān)，若直流開關(guān)扳上后，燈熄滅，則再將直流開關(guān)上下重復(fù)扳動1到2次，使鈉燈在直流下點(diǎn)亮為正常。 4.將測定管用供試品所用的溶劑沖洗34遍，緩緩注入適量溶劑。 5.測定管中若有氣泡，應(yīng)先將氣泡浮在凸頸處，通光面兩端的霧狀液滴，應(yīng)用擦鏡紙揩干。 6.測定管螺帽不宜旋得過緊，以免產(chǎn)生應(yīng)力，影響讀數(shù)。 7.將測定管放入樣品室，測定管安放時，應(yīng)注意標(biāo)記的位置和方向，蓋上箱蓋。 8.打開示數(shù)，調(diào)節(jié)零位手輪，使旋

29、光示值為零。 9.取出測定管，將空白溶液倒出，用供試品溶液沖洗34遍，將供試品溶液緩緩注入測定管，用擦鏡紙擦凈測定管，特別要擦凈兩端的通光面，按相同的位置和方向正確地放入樣品室內(nèi)，蓋好箱蓋。 10.示數(shù)盤將轉(zhuǎn)出該樣品的旋光度。示數(shù)盤上紅色示值為左旋（），黑色示值為右旋（）。 11.逐次按下復(fù)測按鈕，重復(fù)讀取旋光度3次，取3次的平均值作為測定結(jié)果。 12.如果樣品超過測量范圍，儀器在±45處自動停止，此時取出測定管，按一下復(fù)測按鈕開關(guān)，儀器即轉(zhuǎn)回零位。 13.鈉燈在直流供電系統(tǒng)出現(xiàn)故障不能使用時，儀器也可在鈉燈交流供電的情況下測試。但儀器的性能可能略有降低。 14.測定完畢后，取出測定

30、管，將測定管用純化水洗凈。應(yīng)晾干，防塵保存。 15.關(guān)閉“示數(shù)”開關(guān)，示數(shù)盤復(fù)原。 16.關(guān)閉“直流”及“電源”開關(guān)。 17.關(guān)閉穩(wěn)壓電源開關(guān)，關(guān)閉總電源開關(guān)。 18.罩好防塵罩，填寫操作記錄。四、注意事項 1.中國藥典2000年版二部規(guī)定，用鈉光譜的D線（589.3nm）測定旋光度，除另有規(guī)定外，測定管長度為1dm（如使用其他管長，應(yīng)進(jìn)行換算），測定溫度為20。 2.配制溶液及測定時,均應(yīng)調(diào)節(jié)溫度至20±0.5（或各藥品項下規(guī)定的溫度）。 3.供試的液體或固體物質(zhì)的溶液應(yīng)不顯渾濁或含有混懸的小粒。如有上述情況時，應(yīng)預(yù)先濾過，并棄去初濾液。 4.每次測定前應(yīng)以溶劑作空白校正，測定后，

31、再校正1次，以確定在測定時零點(diǎn)有無變動，如第2次校正時發(fā)現(xiàn)零點(diǎn)有變動，則應(yīng)重新測定旋光度。 5.測定供試品與空白校正，應(yīng)按相同的位置和方向放置測定管于儀器樣品室，并注意測定管內(nèi)不應(yīng)有氣泡，否則影響測定的準(zhǔn)確度。 6.測定管使用后，尤其在盛放有機(jī)溶劑后,必須立即洗凈，以免橡皮圈受損發(fā)粘。測定管每次洗滌后，切不可置烘箱中干燥，以免發(fā)生變形，橡皮圈發(fā)粘。 7.測定管兩端的通光面，使用時須特別小心，避免碰撞和觸摸，只能以擦鏡紙揩試，以防磨損。應(yīng)保護(hù)其光亮、清潔，否則影響測定結(jié)果。 8.測定管螺帽不宜旋得過緊，以免產(chǎn)生應(yīng)力，影響讀數(shù)。 9.鈉燈使用時間一般勿連續(xù)使用超過2小時，并不宜經(jīng)常開關(guān)。當(dāng)關(guān)熄鈉燈

32、后，如果要繼續(xù)使用，應(yīng)等鈉燈冷后再開。 10儀器應(yīng)放置干燥通風(fēng)處，防止潮氣侵蝕，鎮(zhèn)流器應(yīng)注意散熱。搬動儀器應(yīng)小心輕放，避免震動。 11.光源積灰或損壞，可打開機(jī)殼擦凈或更換。 12.機(jī)械部分摩擦阻力增大，可以打開后門板，在傘形齒輪、蝸輪蝸桿處加稍許鐘油。 13.如果儀器發(fā)現(xiàn)停轉(zhuǎn)或其它元件損壞的故障，應(yīng)按電原理圖詳細(xì)檢查。第六章 pH值的測定法一、原理 PHS-2型酸度計是用玻璃電極作為測量電極，甘汞電極作為參考電極，當(dāng)氫離子濃度發(fā)生變化時，玻璃電極和甘汞電極之間的電動勢也隨著引起變化，而電勢變化符合能斯特方程式： RT E=Eo-2.3026×-×pH F式中 E產(chǎn)生的電極

33、電位 T絕對溫度 Eo零電位 F法拉第常數(shù) R-氣體常數(shù) pH表示被測溶液pH值和內(nèi)溶液pH值的差值 PHS-2型酸度計是利用玻璃電極和甘汞電極對被測溶液中不同酸度產(chǎn)生的直流電勢，輸入到一臺用參量振蕩深度負(fù)反饋的直流放大器，以達(dá)到pH值指示的目的。二、注意事項 1.應(yīng)注意玻璃電極裝到電極夾中時應(yīng)略高于甘汞電極，以免球膜與試杯相碰。 2.新使用或久放未用的玻璃電極在使用前應(yīng)放在純化水內(nèi)浸泡活化48小時，平時也最好浸泡在水中，以便下次使用時能迅速地工作。 3.將甘汞電極的頸端橡皮塞取下，檢查飽和氯化鉀溶液情況，溶液中應(yīng)有氯化鉀結(jié)晶析出，以確保溶液飽和，太少應(yīng)予以添加。使用前應(yīng)把電極彎管下端橡皮套除去。 4.按下電源按鍵，接通電源，按下pH按鍵，指示燈亮后，一般短時間測量，只需預(yù)熱數(shù)分鐘即可，但