薄層層析方法與注意問(wèn)題

1、薄層層析薄層層析是將作為固定相的支持劑均勻地鋪在支持板（一般是玻璃板）上，成 為薄層，把樣品點(diǎn)到薄層上，用適宜的溶劑展開，從而使樣品各組分達(dá)到分離的 層析技術(shù)。如果支持劑是吸附劑，如硅膠、氧化鋁、聚酰胺等，則稱之為薄層吸 附層析；如果支持劑是纖維素、硅藻土等，層析吋的主要依據(jù)是分配系數(shù)的不同, 則稱之為薄層分配層析；同理，如果支持劑是離子交換劑，則稱為薄層離子交換 層析；薄層若由凝膠過(guò)濾劑制成，則稱為薄層凝膠層析。薄層層析的操作與紙層析相似，但比紙層析速度快，一般僅需15-30min, 分辨力比紙層析高10-100倍，它既能分離0.01 u g的微量樣品，又能分離500mg 基至更多的樣品作制

2、備用。薄層的制備可規(guī)格化，樣品滴加后可立即展開，不受 溫度影響。其缺點(diǎn)是rf值的重現(xiàn)性比紙層析差，對(duì)生物大分子物質(zhì)的分離效果 不大理想。一、支持劑的選擇與處理薄層層析的支持劑種類很多。使用時(shí)應(yīng)根據(jù)欲分離物質(zhì)的種類進(jìn)行選擇。支持劑顆粒大小要適當(dāng)。顆粒大，展開速度快。但顆粒過(guò)大時(shí)，分離效果不 好；而顆粒過(guò)小，則展開速度太慢，容易出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象。一般有機(jī)類支持劑如纖 維索粉的顆料為70140目（直徑0.10.2mm）,薄層厚度為l-2mm；無(wú)機(jī)類支持劑 如氧化鋁、硅膠等的顆粒一般為150-300 口，薄層厚度為0.25-lmmo在薄層層析中，使用較多的是硅膠、氧化鋁等吸附劑，其處理方法同吸附柱 層析。

3、同樣，用離子交換劑，凝膠過(guò)濾劑等為支持劑時(shí)，支持劑均耍按柱層析處 理填料的相應(yīng)方法處理。二、薄層板的制作支持板要表面平整、光滑，用前應(yīng)洗凈、干燥。常用的薄層板有硬板（濕板）與軟板（干板）z分。在支持劑中加入粘合劑（鍛石 膏、淀粉、竣甲基纖維索鈉鹽等），調(diào)成糊狀物所制成的薄層板為硬板，用粉狀 支持劑直接制成的薄層板為軟板。硬板粘牢在支持板上，調(diào)成糊狀物噴顯色劑吋 不會(huì)沖散，可以直立展開，而軟板只能接近水平展開。薄層板常用的制作方法有：1. 浸涂法：將玻璃板在調(diào)好的支持劑漿液中浸一下，使?jié){液在玻璃板上形成 薄層。2. 噴涂法：用噴霧器將調(diào)好的漿液噴在玻璃板上，形成薄層。3. 傾斜涂布法：將調(diào)好的支

4、持劑漿液倒在玻璃板上，然后將玻璃板前后左右 傾斜，使支持劑漫布丁整塊玻璃板上而形成薄層。4. 推鋪法：在一根玻璃棒的兩端適當(dāng)距離處分別繞幾圈膠布條，膠布條的圈 數(shù)視所需薄層厚度而定，然后把準(zhǔn)備好的支持劑倒在玻璃板上，用玻璃棒壓在玻 璃板上，將支持劑均衡地向一個(gè)方面推動(dòng)，而制成薄層。推鋪法既適用于干板的涂布和濕板制作。其他方法只能用于濕板制作。濕板制 作屮的一個(gè)重要環(huán)節(jié)是調(diào)漿，一般支持劑與蒸傭水或緩沖液之比一般為1 ：2至 1 ： 2.5 o調(diào)漿時(shí)要調(diào)和均勻，但不宜用力過(guò)猛，以免產(chǎn)生氣泡而影響分離效果。薄層板涂好后，讓其自然干燥后方能使用。若為吸附薄層層析，制好板后還 需加熱活化，口的是使其減少

5、水分而具有一定有吸附能力。三、層析方法1 點(diǎn)樣點(diǎn)樣操作與紙上層析相似。點(diǎn)樣前，先將制好的薄層修整一下，然后在距一 端2cm左右處劃一原線，并每隔2cm左右劃一原點(diǎn)。樣品用合適的溶劑溶解， 吸附薄層層析一般用氯仿、乙醇等有機(jī)溶劑溶解，不宜用水溶解。點(diǎn)樣可用微量 注射器，或微量吸管、毛細(xì)管。點(diǎn)樣量一般在50ug之內(nèi)，點(diǎn)樣體積不宜超過(guò) 20ulo樣品液可直接點(diǎn)在薄層板的原點(diǎn)上。也可點(diǎn)在圓形濾紙片上（直徑 2-3mm）,再把濾紙片小心地放在薄層板原點(diǎn)上，并加少許可溶性淀粉糊，使濾 紙片粘牢在薄層板上。2. 展開展式方式與紙層析一樣，冇上行法、下行法等，但軟板薄層只能近水平展開（與 水平成10o-20o

6、）o吸附薄層層析所用展開劑主要是低沸點(diǎn)的冇機(jī)溶劑，一般采用2-3種組分的多元 溶劑系統(tǒng)。展開劑的選擇是根據(jù)被分離物極性、溶劑的極性以及支持劑的特性 三方面來(lái)考慮。分配薄層層析展開劑的選擇與紙上層析相似。離子交換薄層層析、 凝膠過(guò)濾薄層層析展開劑的選擇則與相應(yīng)柱層析的洗脫劑的選擇相同。3. 顯色薄層層析展開后，如果樣品木身有顏色，就可直接看到斑點(diǎn)所在位置。若是 無(wú)色物質(zhì)，則需加以顯色。顯色方法與紙層析一樣，可用顯色劑顯色，也可用 紫外光顯色。此外，如呆薄層板是由無(wú)機(jī)物質(zhì)制成的，述可以用強(qiáng)腐蝕性的顯色 劑，如硫酸、硝酸、珞酸或它們的混合物，這些強(qiáng)酸幾乎可以使所有有機(jī)化合物 變?yōu)樘迹珊谏唿c(diǎn)，但不能用于定量分析。4. 定性與定量分析薄層層析法與紙層析一樣，用rf值來(lái)表示被分離物質(zhì)在薄層上的位置，與已 知標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的rf對(duì)照，可進(jìn)行定性分析。定量分析時(shí)，可把斑點(diǎn)所在位置的支持劑連同物質(zhì)一起刮廠