氧化低密度脂蛋白與一氧化氮相互作用在缺血性腦卒中發(fā)病中作用

1、氧化低密度脂蛋白與一氧化氮相互作用在缺血性腦卒中發(fā)病中作用【中圖分類號(hào)】r589【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】a【文章編號(hào)】 1672-3783 (2014) 01-0011-01動(dòng)脈粥樣硬化是腦梗死的主 要病理基礎(chǔ)，近年的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，氧化低密度脂蛋白(oxldl)及一氧化氮(n0)在動(dòng)脈粥樣硬化形成中起關(guān)鍵 作用。有關(guān)缺血性腦卒中患者血漿oxldl及n0水平的變化 已有報(bào)道，但兩者間相互作用及其在腦梗死發(fā)病過(guò)程中的病 理機(jī)制尚少報(bào)道。我們通過(guò)觀察急性缺血性腦卒中患者血漿 oxldl對(duì)血小板聚集及n0的影響，進(jìn)一步探討oxldl和n0 在腦血栓形成中的共同致病機(jī)制。資料和方法一、資料急性缺血性腦卒中患者75

2、例，男49例，女26例，平 均年齡(62±13)歲(4384歲)。病程3天內(nèi)42例，47 天33例，平均(4±2)天。符合全國(guó)第二屆腦血管病學(xué)術(shù) 會(huì)議修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)。有1次以上ct和mri檢查，排除腦 出血、心肌梗死。發(fā)病前1個(gè)月內(nèi)未用過(guò)阿司匹林等抗血小 板藥和維生素e等抗氧化劑。肝、腎功能正常。單純動(dòng)脈硬 化組20例，男15例，女5例，平均年齡(66±9)歲(53 84歲)。頸動(dòng)脈彩色超聲檢查有1個(gè)以上斑塊。均無(wú)腦卒中 和心肌梗死病史。對(duì)照組為45名健康體檢者，無(wú)心腦血管 疾病、高血壓及糖尿病病史。頸動(dòng)脈彩色超聲檢查未見(jiàn)斑塊。 平均年齡（60±5）歲（

3、4969歲）。腦卒中組合并高血壓 50例（67%）,糖尿病10例（13%）,高脂血癥38例（51%）； 動(dòng)脈硬化組分別為12例（60%）, 3例（15%）和9例（45%）, 二組比較差異無(wú)顯著意義（p>0.05）。二、方法1. oxldl的測(cè)定：全部患者于入院次日早8時(shí)空腹臥位 抽取靜脈血，分離血漿，elisa法測(cè)定oxldlo試劑盒購(gòu)自 上海榮盛生物技術(shù)有限公司，按說(shuō)明書操作。2. ldl的分離：采用密度梯度超速離心法，分別分離健 康對(duì)照組、動(dòng)脈硬化組和腦卒中組患者的ldl,測(cè)含量后低 溫貯存?zhèn)溆?。ldl以膽固醇（ldl-c）計(jì)量，與血小板孵育時(shí) 的終濃度為1 g/lo3. oxldl

4、的制備：參照coffey等方法，即將分離得到的 ldl在含5 umol/l cus04的等滲鹽水（ph78）中透析（透 析液體積超過(guò)ldl的100倍），當(dāng)ldl由金黃色轉(zhuǎn)變?yōu)榛尹S 色直至無(wú)色透明時(shí)，再移至含0.5 mmol/l edta （ph 89） 的等滲鹽水中透析，如此重復(fù)4次，即得氧化型ldl。測(cè)含 量后低溫貯存?zhèn)溆?，與血小板孵育時(shí)的終濃度亦為1 g/lo4. 血小板聚集功能的測(cè)定：空腹取正常人靜脈血，3. 28% 枸椽酸鈉抗凝，500 r/min離心10分鐘，上層富含血小板的 血漿再以600 r/min離心10分鐘，獲壓積血小板，生理鹽 水洗滌2次，配成血小板懸液，血小板濃度為2x1

5、011/l, 以5 mol/l的二磷酸腺昔為誘導(dǎo)劑，在tyxn-91智能血液凝 集儀上測(cè)定血小板聚集功能，然后，仍用正常人血小板懸液 分別與健康對(duì)照組、動(dòng)脈硬化組及腦卒中組患者的ldl于 37£孵育20分鐘，再測(cè)血小板聚集功能，而后將動(dòng)脈硬化 組和腦卒中組患者經(jīng)體外氧化后獲得的oxldl分別與上述同 一正常人血小板懸液于37*孵育20分鐘后，再測(cè)血小板聚 集功能。5. n0的測(cè)定：用0. 15 mol/l硫酸鋅去蛋白后，以a蔡 乙烯二胺分光光度法測(cè)定n02-濃度來(lái)間接反映n0的含量， 分別測(cè)定正常血小板懸液與健康對(duì)照組、動(dòng)脈硬化組及腦卒 中組患者的ldl和oxldl孵育前后的n0濃度

6、。6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：數(shù)據(jù)用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(土s)表示，組 間比較用t檢驗(yàn)及直線相關(guān)分析。結(jié)果1血漿oxldl水平：健康對(duì)照組為(412±144) ug/l, 動(dòng)脈硬化組和腦卒中組分別為(689±83) ug/l和 (942±133) ug/l,均明顯高于對(duì)照組(p0. 05)o正常血 小板加動(dòng)脈硬化組患者ldl前后的最大聚集率分別為 (50土8) %和(58±8) %,差異有顯著意義(p0. 05)o動(dòng)脈 硬化組患者ldl經(jīng)體外氧化前后的血小板最大聚集率分別為(58±8) %和(74±10) %,差異有顯著意義(po. 05)o正 常血小板懸液加動(dòng)脈硬化組患者ldl前后的no水平為(0. 38±0. 04) umol/l 和(0. 30±0. 04) umol/l,差異有 顯著意義(p0.05)。正常血小板懸液加動(dòng)脈硬化組患者體外 氧化前后ldl的no水平為(030±004) umol/l和(0. 18±0. 05) umol/l,差異有顯著意義(p4血小板聚集改變和ox