豬6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說

1、豬6酮前列腺素fla(6-keto-pgfla)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍：96t2ng/ml -80ng/ml使用目的：本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中6酮前列腺索fla(6-kcto-pgfla)含 量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本屮豬6酮前列腺素fla(6ketopgfla)水平。川純 化的豬6酮前列腺素fla(6-keto-pgfla)抗體包被微孔板，制成i古i和抗體，往包被單抗的微 孔中依次加入6酮前列腺索fla(6-kcto-pgfla),再與hrp標(biāo)記的6酮前列腺索 fla(6-keto-pgfla)抗體結(jié)合，形成抗體抗原酶

2、標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物tmb 顯色。tmb在hrp腮的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深 淺和樣品中的6酮前列腺素fla(6-keto-pgfla)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長卜測定吸 光度(od值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品屮豬6酮前列腺素fla(6-keto-pgfla)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml x 1 瓶7終止液6mlxl 瓶2腮標(biāo)試劑6mlxl 瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(160ng/ml)0.5ml x 1 瓶3酶標(biāo)包被板12孔x8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml xi 瓶4樣晶稀釋液6ml x 1 瓶10說明書1份5顯色劑a液6mlxl 瓶11封板

3、膜2張6顯色劑b液6mlx 1/ 瓶12密封袋1個標(biāo)本要求1. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行捉取，捉取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，捉取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能 馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)木放于20°c保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2. 不能檢測含nan3的樣品,因nan3抑制辣根過氧化物酶的(hrp)活性。操作步驟1. 標(biāo)準(zhǔn)晶的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。80ng/ml5號標(biāo)準(zhǔn)品150(11的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150(11標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液40ng/ml4號標(biāo)準(zhǔn)品150卩1的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150卩1標(biāo)準(zhǔn)甜稀釋液20ng/ml3號標(biāo)準(zhǔn)品150|11的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150pl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1

4、0ng/ml2號標(biāo)準(zhǔn)品150j.il的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150j.il標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液5ng/ml1號標(biāo)準(zhǔn)品150卩1的2號標(biāo)準(zhǔn)站加入150pl標(biāo)準(zhǔn)甜稀釋液2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及晦標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、 待測樣品孔。在酚標(biāo)辺被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50卩1,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40卩1, 然后再加待測樣品10pl （樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3. 溫育：用封板膜封板后逍37°c溫育30分鐘。4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸憎水30倍稀釋后備用5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿

5、洗滌液，靜置30秒后棄去，如此 重復(fù)5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50j.il,空口孔除外。7. 溫育：操作同3。& 洗滌：操作同5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑a50pl,再加入顯色劑b50m，輕輕震蕩混勻，37°c避光顯色 15分鐘.10. 終止：每孔加終止液50川，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11. 測定：以空片空調(diào)零，450nm波長依序測聚各孔的吸光度（od值）。測定應(yīng)在加終止 液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié)：準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品計算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，od值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的 0d值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋

6、倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度ijod值計算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的od值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù), 即為樣品的實際濃度。注意事項1. 試劑盒從冷藏環(huán)境小取出應(yīng)在室溫平衡1530分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未 用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2. 濃洗滌液可能會冇結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3. 各步加樣均應(yīng)使川加樣器，并經(jīng)常校對具準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好 控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)木中待測物質(zhì)含量過高（樣木od值 人于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的od值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計 算時請垠后乘以總稀釋倍數(shù)（xnx5）。5. 封板膜只限-次性使用，以避免交叉污染。6 底物請避光保存。7嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8. 所冇樣品，洗滌