實(shí)驗(yàn)八-食品中亞硝酸鹽的測(cè)定-16090211(共3頁(yè))

1、實(shí)驗(yàn)十三 食品中亞硝酸鹽的測(cè)定（鹽酸奈乙二胺法）16090211 李亞東一、實(shí)驗(yàn)原理樣品經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、除去脂肪后，在弱酸條件下亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸重氮化以后，再與鹽酸奈乙二胺偶合形成紫紅色染料，其最大的吸收波長(zhǎng)為538nm，因此可以通過(guò)測(cè)定樣品液反應(yīng)后的吸光度并與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。二、實(shí)驗(yàn)試劑1、氯化銨緩沖液:在1L玻璃燒杯中，加入500mL水，準(zhǔn)確加入20.0mL鹽酸，混勻，準(zhǔn)確加入50mL氨水，必要時(shí)用稀鹽酸和稀氨水調(diào)試至PH9.6-9.7。2、硫酸鋅溶液（0.42mol/L）:稱取120g硫酸鋅（ZnSO47H2O）用水溶解并稀釋至1000mL。3、氫氧化鈉溶液（20mol/L）:稱取20

2、g氫氧化鈉用水溶解，稀釋至1000mL。 4、對(duì)氨基苯磺酸溶液:稱取1g對(duì)氨基苯磺酸，溶于70mL水和30mL冰乙酸中，置棕色瓶中混勻，室溫保存。5、N1-萘基乙二胺溶液:稱取0.1g N-1-萘基乙二胺，加60%乙酸溶液，并稀釋至100mL，混勻后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周內(nèi)穩(wěn)定。6、顯色劑:臨用前將N-1-萘基乙二胺溶液和氨基苯磺酸溶液等體積混合。7、亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確稱取0.2500g于硅膠干燥器中干燥24h的亞硝酸鈉，加水溶解移入500mL容量瓶中，加100mL氯化銨緩沖液，加水稀釋至刻度，混勻，在4避光保存。此溶液每毫升相當(dāng)于500ug的亞硝酸鈉，作儲(chǔ)備液。8、亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)

3、使用液:臨用前，吸取亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0mL置于100mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，此溶液每毫升相當(dāng)于5.0ug亞硝酸鈉。三、實(shí)驗(yàn)儀器 分光光度計(jì)四、實(shí)驗(yàn)步驟1、稱取10g左右的火腿于研缽中，用量筒量取70mL的水，加入一部分于研缽中，將其研成肉糜狀。2、將肉糜狀的火腿轉(zhuǎn)移至燒杯中，用剩下的水沖洗研缽，一同倒入燒杯中。加入12mL氫氧化鈉溶液，用玻璃棒攪拌均勻。3、測(cè)量液體的pH值，若其大于8，則將燒杯中所有物質(zhì)轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中；若小于8，則再加氫氧化鈉直至大于8為止。4、加入10mL硫酸鋅溶液，混勻，容量瓶中出現(xiàn)為乳白色的乳濁液。5、放入60的水浴鍋中加熱10min。6、取出，用流

4、水冷卻，加水定容。然后靜置30min。7、出去容量瓶中的上層脂肪，然后用漏斗過(guò)濾，棄去初始的20mL濾液。但是要全部過(guò)濾完得出濾液的總體積。8、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：吸取0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液（相當(dāng)于0，2.5，5，10，15，20，25ug亞硝酸鹽）分別置于25mL容量瓶中分別加入4.5mL氯化銨緩沖液，加2.5mL60%乙酸后，立即加入5.0mL顯色劑，加水至刻度，混勻，在暗處?kù)o置25min，用1cm比色杯（靈敏度低可換2cm比色杯），以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長(zhǎng)550nm處測(cè)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出回歸方程。9、測(cè)定樣品吸光值分別吸取10mL過(guò)濾好的

5、樣液于兩個(gè)容量瓶中，其他試劑按標(biāo)準(zhǔn)系列法操作。測(cè)出樣品的兩個(gè)吸光值五、計(jì)算公式：X=m2×1000m1×V2V1×1000式中:X:樣品中亞硝酸鹽的含量,mg/kg;m1:樣品質(zhì)量，g；m2:測(cè)定用樣液中亞硝酸鹽的質(zhì)量，ug；V1:樣品處理液總體積V2:測(cè)定用樣液體積結(jié)果的表述:報(bào)告算術(shù)平均值的二位有效數(shù)。允許差:相對(duì)相差10%六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果亞硝酸鹽（ug）02.5510152025吸光值00.0390.0710.1760.2440.3140.391根據(jù)數(shù)據(jù)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線如下: 兩個(gè)樣品的吸光值為0.204和0.202。計(jì)算得出的亞硝酸鹽含量分別為13.53ug和13.4ug。m1(g)m2(ug)V1(mL)V2(mL)X(mg/kg)樣品A10.013113.53218.51029.52樣品B10.013113.40218.51029.24X=(XA+XB)/2=29.38 mg/kg分析：火腿腸中亞硝酸鹽的正常含量