金標(biāo)類診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則（征求意見稿）

1、附件4：體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則金標(biāo)類診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則（征求意見稿）本類金標(biāo)試劑是指應(yīng)用膠體金免疫技術(shù)，采用膠體金標(biāo)記 的抗體或抗原包被于玻璃纖維膜、聚脂膜或其他載體，將相關(guān)抗 原或抗體固相連接在硝酸纖維膜，應(yīng)用層析法的原理檢測(cè)樣品中 的抗原或抗體的快速檢測(cè)試劑。本技術(shù)指導(dǎo)原則適用于第三類體 外診斷試劑中金標(biāo)試劑的生產(chǎn)及質(zhì)量控制，鑒于本類診斷試劑所 應(yīng)用的原理、方法、分類等的復(fù)雜性，本指導(dǎo)原則難以一一涵蓋, 僅從試劑的主要原材料、制備工藝、半成品及成品提出質(zhì)量控制 要點(diǎn)，其他診斷試劑可作參考。國(guó)家藥品監(jiān)督管理部門將根據(jù)科 學(xué)技術(shù)發(fā)展的需要對(duì)本技術(shù)指導(dǎo)原則適時(shí)組織

2、修訂。一、基本原則（一）研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料應(yīng)當(dāng)制定相應(yīng)的質(zhì)量 指標(biāo)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。（二）診斷試劑的生產(chǎn)必須按藥品生產(chǎn)和質(zhì)量管理規(guī)范 組織生產(chǎn)；企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員，相適應(yīng)的儀器設(shè)備 和生產(chǎn)環(huán)境。（三）診斷試劑的研制應(yīng)當(dāng)按照科學(xué)、規(guī)范的原則組織研發(fā), 各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。（四）研制生產(chǎn)過程中所用的材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能 涉及的安全性方面的事宜。二、原材料質(zhì)量控制（一）主要生物原料與生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料包括各種活性抗 原、重組抗原、單克隆杭體、多克隆抗體以及多肽類生物原科。 這類原料可用于膠體金標(biāo)記、包被硝酸纖維膜及用于制備質(zhì)控

3、 線的抗原或抗體等。1、外觀肉眼觀察，大部分生物原料為澄清透明的液體，不含異物, 渾濁或搖不散的沉淀，或者為白色粉末，不含有其他顏色的雜 質(zhì)，特殊生物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。2、純度和分子量主要通過sds-page電泳和電泳結(jié)果掃描儀進(jìn)行檢測(cè)，也可 用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據(jù)所檢測(cè)生物原料的 分子量選擇適宜丙烯酸胺凝膠濃度進(jìn)行電泳。一般情況下，每 個(gè)電泳道加樣量為5皚，同時(shí)用已知分子量標(biāo)準(zhǔn)作參照，采用合 適的電泳電流和電泳時(shí)間；電泳后的凝膠可用考瑪氏亮藍(lán)染色 或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和 分子量。作為免疫診斷試劑用生物原材料，用銀染法染色后， 純度一般都要

4、大于90%,用考瑪氏亮藍(lán)染色后，純度一般都要 大于95%。3、蛋白濃度蛋白濃度可通過lowry法、208nm光吸收法、雙縮豚方法等進(jìn) 行檢測(cè)。4、效價(jià)效價(jià)的測(cè)定一般根據(jù)蛋白含量測(cè)定結(jié)果通過倍比稀釋法進(jìn) 行，效價(jià)應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。5、功能性實(shí)驗(yàn)功能性實(shí)驗(yàn)是指標(biāo)生物原料用于試劑盒試劑實(shí)際生產(chǎn)中的 情況，一般考查該原料使用后的試劑靈敏度、特異性和穩(wěn)定性。 用于制備制控線的抗原或抗體可采用其他適宜方法進(jìn)行功能性 實(shí)驗(yàn)。（二）生物輔料生物輔料指的是在生產(chǎn)過程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類生 物原料，主要包括牛血清白蛋白材料等。這些生物原料的質(zhì)量標(biāo) 準(zhǔn)應(yīng)符合2000年版的中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)上 規(guī)

5、定的標(biāo)準(zhǔn)要求，并且要適合于企業(yè)的生產(chǎn)。牛血清白蛋白外觀：應(yīng)為淺黃色凍干粉末，無吸潮，無結(jié)塊，無肉眼可見 的其他雜質(zhì)顆粒。溶解性：將牛血清白蛋白配成10%溶液，溶解時(shí)間應(yīng)不大于 15分鐘。1 %水溶液的ph值：6. 57.1; 1%水溶液0d倔值 <0.15。 總蛋白含量：用雙縮脈方法來測(cè)定，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為95%.硫酸錢含量：納氏試劑法測(cè)定，通過用標(biāo)準(zhǔn)硫酸鐵曲線可查 岀硫酸皺含量，其標(biāo)準(zhǔn)為0.1%。尿素含量：采用二乙酸一厲法測(cè)定，通過用標(biāo)準(zhǔn)尿素曲線可 查出尿素含量，其標(biāo)準(zhǔn)為0. 1%.總蛋白中的bsa含量：采用硝酸纖維素膜電泳法。其標(biāo)準(zhǔn)為 95%。bsa的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的bsa含

6、量，其標(biāo)準(zhǔn)為 90%o功能性試驗(yàn)：10%作為樣本進(jìn)行酶聯(lián)免疫測(cè)定，不得出現(xiàn)特 異性反應(yīng)。（三）化學(xué)原材料參照中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)分析純級(jí)別檢 定。主要的檢測(cè)指標(biāo)包括一些基本的一般鹽類檢測(cè)、溶液ph值檢 測(cè)。溶解情況的檢測(cè)、干燥失重的檢測(cè)。熾灼殘?jiān)取?、無機(jī)類主要包括有氯金酸、氯化鈉、磷酸氫二鈉。磷酸二氯鈉、碳 酸鈉、碳酸氫鈉等。2、有機(jī)類主要包括有枸椽酸、枸椽酸鈉、蔗糖、吐溫20、乙二胺四乙 酸二鈉、三輕基氨基甲烷、氨基毗咻、澳化鉀、氫氧化鈉、葡萄 糖、硫酸錢、硫氫酸鉀等。（四）其他原輔料1、硝酸纖維素膜硝酸纖維素膜應(yīng)具有厚度、孔徑大小等要求，毛細(xì)遷移速度，韌性（切割時(shí)膜破損引起

7、的廢品率）、均一性（厚度偏差范 圍、毛細(xì)遷移速度偏差范圍）應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。2、玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙應(yīng)具有厚度、毛細(xì)遷移速度、 重量等要求，均一性（厚度偏差范圍，毛細(xì)遷移速度偏差范圍，重量偏差范）應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。3、玻璃纖維膜適用于全血檢測(cè)的金標(biāo)試劑，過濾紅細(xì)胞所用玻璃纖維膜或其他材料具有不吸附蛋白質(zhì)的特點(diǎn)，應(yīng)具有厚度、孔徑大小等要 求。4、塑料襯片塑料襯片應(yīng)具有厚度、硬度（切割時(shí)一次未能整條切下的 百分率）、尺寸（與標(biāo)識(shí)吻合）、粘性（切割時(shí)造成玻璃纖維 與塑料襯片分離的百分率）等要求。5、其他粘膠紙、鋁箔袋、說明書、包裝外盒、瓶子和干燥劑等應(yīng)建立相應(yīng)質(zhì)量控制

8、標(biāo)準(zhǔn)。%1. 試劑盒的制備本類試劑的生產(chǎn)包括膠體金及膠體金標(biāo)記抗原或抗體的制 備，膠體金標(biāo)記的包被，檢測(cè)線及質(zhì)控線的制備，膠體金標(biāo)記物、 包被抗原或抗體等濃度確定，各種工作溶液的配置等步驟，并通 過產(chǎn)品的半成品檢定和成品檢定兩個(gè)質(zhì)控過程來完成。（一）膠體金標(biāo)記物的制備采用枸椽酸三鈉還原法或其他方法制備膠體金，膠體金顆粒 大小應(yīng)符合規(guī)定，膠體金標(biāo)記物在510550nm波長(zhǎng)處應(yīng)有最大吸 收值，置28保存，應(yīng)在規(guī)定的保存期內(nèi)使用。采用合適的方 法確定膠體金標(biāo)記物、包被抗原或抗體工作濃度，將工作濃度的 膠體金標(biāo)記物吸附于玻璃纖維或聚酯纖維膜上。（二）檢測(cè)線及質(zhì)控線的制備取已確定使用濃度的相關(guān)抗原或抗體

9、，在硝酸纖維素膜上制 備檢測(cè)線，應(yīng)用同樣方法制備質(zhì)控線，根據(jù)生產(chǎn)工藝在規(guī)定的溫 度、濕度條件下干燥，置規(guī)定的濕度（通過驗(yàn)證方法確定相對(duì)濕 度要求）條件下存放。檢測(cè)線與質(zhì)控線應(yīng)具有間隔距離要求，應(yīng) 對(duì)所用的金標(biāo)記用玻璃纖維及硝酸纖維素膜等進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，如 尺寸、外觀、包裝及吸附性能等，并記錄批號(hào)、數(shù)目、標(biāo)識(shí)，不 同批號(hào)的玻璃纖維及硝酸纖維素膜應(yīng)當(dāng)不要混用了。（三）貼膜、切割、裝袋貼膜、切割及裝袋應(yīng)在具有濕度（通過驗(yàn)證方法確定相對(duì)濕 度要求）要求條件下操作，切割的膜條應(yīng)有寬度要求。用于半成品及成品質(zhì)量控制的質(zhì)控品包括靈敏度、特異性、 均一性等指標(biāo)，如具有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品的產(chǎn)品應(yīng)使用國(guó)家標(biāo) 準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)標(biāo)化質(zhì)控品進(jìn)行檢定。（一）半成品質(zhì)控品1、半成品抽樣檢驗(yàn)人員按批號(hào)抽取規(guī)定數(shù)量的半成品，作號(hào)標(biāo)記，待檢。2、