神經(jīng)外科ICU病房鮑曼不動桿菌耐藥性基因研究分析

1、神經(jīng)外科icu病房鮑曼不動桿菌耐藥性基因研究分析馬英花，楊桂清，曹銀光聊城市人民醫(yī)院，252000【摘 要】目的：調(diào)查分析聊城市神經(jīng)外科icu病房109株鮑曼不動桿菌耐 藥性及β-內(nèi)酰胺酶基因型。方法：用k-b法測定臨床分離的109株鮑曼不動 桿菌對13種抗菌藥物的耐藥性，采用pcr法檢測β-內(nèi)酰胺酶耐藥基因型。 結(jié)果：除imp外,109株鮑曼不動桿菌對其余13種抗菌藥物的耐藥率均超過50%, pcr擴(kuò)增對imp中介或耐藥的53株鮑曼不動桿菌有11株擴(kuò)增到blaoxa-23,產(chǎn) esbls 組 29 株中有 5株擴(kuò)增出 blashv>blactx-m-

2、14>blactx-m-3,2株出現(xiàn) blashv、 blactx-m-lo結(jié)論：聊城市神經(jīng)外科icu病房鮑曼不動桿菌多重耐藥常見，β 內(nèi)酰胺酶產(chǎn)牛率高，碳青霉烯酶以blaoxa-23型為主，esbls、ampc酶兩種β- 內(nèi)酰胺酶基因的多重pcr陽性率均低?！娟P(guān)鍵詞】鮑曼不動桿菌；β內(nèi)酰胺酶；基因型【中圖分類號】r446.5【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】a【文章編號12096-0867(2016)-03-049-02 不動桿菌是近年來醫(yī)院感染中分離率增長非?？斓木N，其中鮑曼不動桿菌 最為常見1。鮑曼不動桿菌是一類不發(fā)酵糖類、氧化酶陰性、沒有動力的

3、革蘭 陰性細(xì)菌，是目前引起院內(nèi)感染的重要的條件致病菌,隨著廣譜抗牛素的廣泛使用 及介入性操作的使用，鮑曼不動桿菌在非發(fā)酵菌中分離率僅次于銅綠假單胞菌而 位居第二，而在不動桿菌屬中分離率最高。該菌在醫(yī)院環(huán)境中分布很廣且可以長 期存活，極易造成危重患者的感染，因此常從被感染患者的血、體液、膿液及呼 吸道分泌物等標(biāo)木中分離出，在非發(fā)酵菌中感染僅次于假單胞菌2。本研究對 2009年1月2014年6月，109株鮑曼不動桿菌耐藥的表型和常見的β-內(nèi)酰 胺酶基因類型進(jìn)行了檢測，現(xiàn)報告如下。1材料與方法1.1菌株來源：2009年1月2014年6月間共從聊城市人民醫(yī)院神經(jīng)外科icu 住院病人送

4、檢標(biāo)本中分離出鮑曼不動桿菌109株，標(biāo)本類型包括痰液、創(chuàng)面分泌 物、血液、導(dǎo)管等，全部菌株均分別使用法國梅里埃vetec2compact進(jìn)行細(xì)菌 鑒定試驗。使用的標(biāo)準(zhǔn)菌株為人腸埃希菌atcc25922和銅綠假單胞菌atcc27853。1.2藥敏試驗：采用k-b法測定13種抗菌藥物的敏感性。本實驗采用的方法 和判讀標(biāo)準(zhǔn)均按照美國clsi2014的規(guī)定進(jìn)行。1.3ampc粗提酶液制備與三維試驗：參照文獻(xiàn)操作31.4基因檢測：均為pcr法:β-內(nèi)酰胺酶基因檢測本研究共進(jìn)行了 18種 β內(nèi)酰胺酶、氨基糖昔類修飾酶基因檢測，引物和產(chǎn)物見表x表1靶基因pcr引物序列no

5、te： blaadcgene,wholegeneamplificationsequencingfoward primer： 5’-atgcgatttaaaaaaatttcttgtc/tta-3’, re verseprimer： 5’-ttatttctttattgcattc-agcac aa/gc-3’.pcrproductisll52bp.2結(jié)果我們對聊城市人民醫(yī)院神經(jīng)外科icu病房培養(yǎng)的109株鮑鰻不動桿菌釆用 k-b法進(jìn)行了 13種抗菌藥物敏感性試驗，用pcr檢測了β內(nèi)酰胺酶耐藥基 因型，結(jié)

6、果如下：2.1 2009年1月2014年6月神經(jīng)外科icu鮑曼不動桿菌對13種抗菌藥物的 藥敏結(jié)果（表2）表2鮑曼不動桿菌對13種抗菌藥物的耐藥率和敏感率（）2.2 esbls基因的多重pcr結(jié)果為：71株鮑曼不動桿菌對ctx/caz均耐 藥，對該71株菌中的每一株均進(jìn)行了 shv、ctx-m-3和ctx-m-14基因pcr的電 泳分析，結(jié)果表明，29株菌中共有5株擴(kuò)增出條帶（該29株菌均來自三維試驗 產(chǎn)esbls組），其中3株表現(xiàn)為大小不等的3條單一條帶，分別約150bp、300bp、 450bp,分別是blashv、blactx-m-14> blactx-m-3； 5株擴(kuò)增條帶中的另

7、外2株 出現(xiàn)大小一致的雙條帶，均約為150bp、300bp大小,考慮同時存在blashv、 blactx-m-1兩種基因型（圖2）。42株鮑曼不動桿菌（該42株菌均來自三維試驗 不產(chǎn)生esbls組）的pcr擴(kuò)增電泳結(jié)果均沒有條帶出現(xiàn)。3討論鮑曼不動桿菌感染的治療一直是臨床上很大的難題，因為鮑曼不動桿菌極易 對各種消毒劑和抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性,對重癥患者、icu病房的患者等威脅很大。 多重耐藥鮑曼不動桿菌、泛耐藥鮑曼不動桿菌、耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌等的 廣泛傳播更是成了醫(yī)生和患者的噩夢。鮑曼不動桿菌是醫(yī)院感染重要的條件致病 菌，其環(huán)境釋放能力強(qiáng)，傳播速度快，已成為呼吸道院內(nèi)感染的主要致病菌，也

8、可引發(fā)菌血癥、尿道感染、繼發(fā)性腦膜炎等。鮑曼不動桿菌的環(huán)境生存能力強(qiáng)、 耐藥率高，近年來已成為重要的院內(nèi)感染條件致病菌，其在醫(yī)院環(huán)境中廣泛分布 且可長期存活，易老弱危重及免疫力低下的人群中爆發(fā)流行4-5o本研究檢測了 腦外科鮑曼不動桿菌的耐藥性、ampc酶、β內(nèi)酰胺酶基因，報告如下：本研究發(fā)現(xiàn)，鮑曼不動桿菌對β內(nèi)酰胺類抗生素耐藥率均在27.9%-77.9% （ipm除外）。耐藥率相對較低的包括頭砲哌酮/舒巴坦及氨茱西林/舒巴坦，這可 能是β 內(nèi)酰胺酶能夠被舒巴坦可抑制，又可通過作用于細(xì)菌的青霉素結(jié)合蛋 白，增加了其抗藥活性6。阿米卡星耐藥率

9、較低（29.5%）,但臨床用藥后的反饋證 明該藥單獨(dú)使用療效不佳。左旋氧氟沙星耐藥率已經(jīng)達(dá)到39.3%,這可能與近年來 臨床廣泛使用這類抗生素有關(guān)。該研究表明，鮑曼不動桿菌對ipm的耐藥率最 低（<3.6%）,可能與該藥對多數(shù)β-內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定有關(guān)。從表2可以看出鮑曼 不動桿菌已經(jīng)出現(xiàn)泛耐藥菌株，109株鮑曼不動桿菌耐藥率除亞胺培南外，其余 藥物耐藥率均在73.40%以上，并口呈上升趨勢，對亞胺培南耐藥率已達(dá)到34.5%。本研究實驗對ipm中介或耐藥的136株鮑曼不動桿菌的基因，采用了引物 oxa-23> oxa-24進(jìn)行pcr擴(kuò)增，結(jié)果是blaoxa-23

10、陽性，blaoxa-24陰性。但感 染攜帶blaoxa-23基因的鮑曼不動桿菌（33株）者，擇其臨床資料完整的25例， 其中有23例被診斷為醫(yī)院感染，這說明存在對ipm耐藥的鮑曼不動桿菌醫(yī)院感 染流行，且基因型為blaoxa-230結(jié)合臨床使用藥物情況分析，鮑曼不動桿菌對 ipm、美羅培南等碳青霉烯類藥物耐藥由于產(chǎn)生了 0xa-23型和0xa-6型碳青霉烯 酶7。本研究多重pcr檢測了鮑曼不動桿菌的esbls、ampc酶，在13株鮑曼不動 桿菌中，有3株esbls基因型陽性，2株ampc酶基因型陽性，兩者陽性率均低。 該結(jié)果說明這些基因型在鮑曼不動桿菌中沒有大量出現(xiàn)，可能屬于散發(fā)，故推測 可能

11、與耐藥鮑曼不動桿菌醫(yī)院感染流行無關(guān)。然而，這些基因型在鮑曼不動桿菌 中發(fā)生率雖然不高，似乎與醫(yī)院感染的傳播關(guān)系不人，但該結(jié)果提示質(zhì)粒的水平 傳遞已經(jīng)存在。這應(yīng)引起臨床醫(yī)生的足夠重視，嚴(yán)格按照抗生素使用規(guī)定，合理 使用抗生素，減少或防止院內(nèi)感染耐藥菌的傳播。參考文獻(xiàn)：鄒玖明，張愛平,李智山，等.不動桿菌屬與醫(yī)院感染j中國感染與化療雜 志,2011.11(4):314-316.2王丹，許穎鮑曼不動桿菌的分布特征及耐藥性分析j國際檢驗醫(yī)學(xué)雜 志,2013, 2 ( 3 ):361-363.3李乃健，徐襯健，孫慧冰，等多重耐藥鮑曼不動桿菌的耐藥性與ampc 耐藥基因的研究j中國熱帶醫(yī)學(xué),2010.6 (10)： 669-671.4何臣，徐羽中，李元廣，等下呼吸道鮑曼不動桿菌感染的臨床分布及耐 藥性分析j臨床肺科雜志,2013,9 (18):1563-1566.周秀珍，盧巖，王艷玲，等.1999-2010年連續(xù)