HPV臨床常用檢測方法

1、精品文檔由于HPV不能在體外細胞培養(yǎng)，故不能用簡便的血清血檢測進行 HPV的診斷和分型。臨床上 用于檢測 HPV的方法包括細胞學方法、免疫組化、原位雜交、斑點雜交、核酸印跡和PCR等，其中以PCR方法的敏感性最高，是目前應(yīng)用最多感染的HPV型別、含量、持續(xù)時間決定病變的發(fā)展與預后，是進行HPV檢測的主要內(nèi)容。目前主要是通過應(yīng)用分子生物學方法進行HPV DNA勺檢測。1、現(xiàn)有的HPV驗室主要檢測手段： 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR, Polymerase Chain Reaction):擴增位于兩段已知序列之間的DNA斷的方法。該法有較高的敏感度，可進行HP/型，缺點是對實驗室環(huán)境要求較高，容易發(fā)生樣本

2、間的交叉污染，從而導致假陽性率高。核酸雜交檢測有較好的特異性和敏感度，還可以進行HPVDNA勺分型，各種核酸雜交檢測方法有一定的 優(yōu)缺點。A核酸印跡原位雜交適用于HPV分型和HPV DN心子量鑒定，雖然靈敏度高，但因操作復雜，需要新鮮組織標 本，不便在臨床上大規(guī)模使用。B斑點印跡其敏感度和特異性均低于核酸印跡原位雜交法，雖然經(jīng)濟實用，但實驗過程存在有放射性污染，是環(huán)保所不能輕視的問題。C原位雜交(in situ hybridization , 一種核酸雜交技術(shù)，可用來測定基因或特定核 甘酸序列在核酸分子的所在部位，檢測重組體DNA通過非放射性探針對石蠟組織進行檢測，能作定位檢測，假陽性率低，但

3、靈敏度不高，大大降低了臨床使用價值。D雜交捕獲法(Hybrid Capture)雜交捕獲試驗是利用化學發(fā)光對抗體捕獲的信號加以放大。首先使DNAM鏈釋放并分解成為可以雜交的核甘酸單鏈 ，DNA單鏈與RNAa合探針結(jié)合為 RNA-DN原合體，特異性抗體將 RNA-DN媒合體捕獲，偶聯(lián)有堿性磷酸酶的第二抗體與 RNA-DN原合體結(jié)合，堿性磷酸酶使酶 底物發(fā)光，根據(jù)光的強弱可確定堿性磷酸酶的含量 ，從而確定RNA-DNA合體的含量。能檢測 13 種高危型 HPV,包括 HPV16 18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68。各種檢測方法的比較各種檢測方法的比較方法學靈敏度

4、特異性技術(shù)特點細胞學(Cytology )低低操作容易，成本較低，準確度較差斑點印跡（Dot blot ）中中有一定放射性核酸印跡原位雜交(southernblothybridization )高高標準、麻煩，不宜大規(guī)模使用原位雜交(In Situhybridization )高中蠟塊組織包埋內(nèi)檢測 HPV雜交捕獲（HC HC2高中無放射性，易使用，高、低危型間有交叉反應(yīng)，且不能分型普通多聚酶鏈反應(yīng)（PCR很高中取材容易，但目前已應(yīng)用試劑的只能檢測少數(shù)單一型別，如6、11、18等，且由于技術(shù)上的問題存在假陽性2、最新推出的HPV的實驗室檢測技術(shù)高靈敏度高危型HPV分型多色熒光實時 PCR式劑：

5、為歐洲著名分子生物學研究機構(gòu)專門針對宮頸癌篩查而全新設(shè)計的高危型HP/型多色熒光實時 PCR僉測試劑，可同時檢測高危型中最主要的16、18、31/33、35/45型。了解宮頸疾病人乳頭狀瘤病毒（ HPV ）感染患者中 HPV亞型分布情況及高危型 HPV的年 齡分布。方法采用專利Invader酶切信號放大法，利用Cervista HPV HR Cervisat 核酸雜交基因分型試劑檢測宮頸脫落細胞HPV的14個亞型DNA。HPV型組亞型J備注A5/A651, 56, 66A718, 39, 45, 59, 68A916, 31, 33, 35, 52, 58精品文檔1.3 HFV DMA *因分

6、型檢費HybriMstx聯(lián)用棱酸分子雜交儀，口NA攝取忒 劑盒和人乳頭狀短痛毒核酸分子快速雜交易因分型 試劑需（HyhriMRK.美國專利6020187 ）均為凱普 生物科技有限公司產(chǎn)品口果田低密度基因芯片和導 流雜交技術(shù)（dflw-th«xii hyfcridizaiion）應(yīng)用墓核 甘酸探針雜交.口I檢出13種高危亞型（HPV 1隊 以 31, 33、35v 3g. 45、51、52、56, 58, 59、 68）. 5 種低危亞型（HPV6. LU 42、43 和 44） 及中國人特有的高危亞型（CW304, 53、66）fl具 體步膜如下：利用凱普生物化學科技公司的基 因里抽

7、提試劑盒提取樣本DNA.FTC-200 （ MJ 曲h） PCR擴增.反應(yīng)體系25皿，條件為95 T9 min, 95 T： 20 s, 5530 ar 72 12 M .r 擴增 40個循環(huán)，72 f延伸5 min中45七預熱后.在 HybriMaj醫(yī)用核酸分子快速雜交儀平臺上放入標 記有21種HPV幫因型寡核昔酸探針的低密度基因 芯片，將外增產(chǎn)物置93 X：變性5 mM.冰浴2 min, 加入檢測孔內(nèi)透行10 min的界流雜交I場標用 色：加入封阻液封閉為反應(yīng)的空白微扎，酶標顯色 后觀察檢測結(jié)果，陽性點呈現(xiàn)盤紫色圓點，多個圓 點陽性即為多重感染.每張芯片上有PCR反應(yīng)質(zhì) 控點和柒交顯色質(zhì)控

8、點各I個。HPV基因分型檢測試劑盒（PCR-反向點雜交法）【產(chǎn)品用途】對人乳頭瘤病毒（HPV）的感染情況進行定性檢測并加以分型，能夠檢測23種HPV基因型，直接提示感染HPV的基因型；包括18種高危和5種低危型，可用于臨床 HPV感染的輔助診斷?！井a(chǎn)品優(yōu)勢】1 .精確分型：能同時對 23種HPV基因型進行精確分型，包括 18種高危型和5種地位型；2 .效率高：單次檢測標本數(shù)量可達 96份；3 .性能好：特異性強、重復性好，均高于 98% ;4 .設(shè)備通用：如普通 PCR儀和雜交儀，適應(yīng)于大、中、小型實驗室；5 .內(nèi)部質(zhì)控：具有真正意義上的內(nèi)部質(zhì)控，檢測結(jié)果更加準確；6 .可以檢測多種臨床標本。【技術(shù)方法】采用 PCR 和反向點雜交法相結(jié)合的基因芯片技術(shù)【檢測原理】通過檢測雜交將大量不同序列的探針分子固定于支持物的不同位置上，然后與已做標記的樣本進行雜交，信號的強度和分布來進行分析?！緳z測標本】