發(fā)酵豆粕常見指標(biāo)檢測方法

1、粗蛋白含量檢測GB/T6432 一、原理：凱氏法測定樣中的含氮量、即在催化劑作用下，用硫酸破壞有機物，使含氮物轉(zhuǎn)化成硫酸銨。加 入強堿進(jìn)行蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，測出氮含量，將結(jié)果乘以換算系數(shù)6.25, 計算出粗蛋白含量。二、儀器設(shè)備：1. 高速粉碎機，粉碎時間1分鐘。2. 分樣篩；0.45mm、40目3. 分析天平；感量 0.0001g4. 消化爐5. 滴定管；酸式50mL6. 錐形瓶；250mL7. 定氮儀；以凱氏原理制造的半自動蛋白測定儀三、試劑1. 硫酸：含量98%2. 氫氧化鈉：40%水溶液mN3. 硼酸：2%水溶液m/V4. 混合催化劑：0.4g硫酸銅5個結(jié)晶水，6

2、g硫酸鉀或硫酸鈉，磨碎混勻。5. 混合指示劑：甲基紅0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠0.5%乙醇溶液，兩溶液等體積混合，在陰涼處 保存期為三個月。6. 0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：8.3 mL鹽酸注入1000 mL蒸餾水中。標(biāo)定：減量法稱取0.8g左右在270-300 C灼燒2h的無水NaCOs，加水50mL溶解，加10滴混合 指示劑，用配好的鹽酸滴定成暗紅色，煮沸2min，冷卻水中后再滴至暗紅色，同時作空白試驗不加Na2C03。計算：m X 1000C=V1-V2M 式硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液之物質(zhì)的量濃度mol/L )文案大全m無水碳酸鈉的質(zhì)量， gV1 鹽酸溶液的用量， mLV2 空白試驗鹽酸溶液

3、的用量，mLM 無水碳酸鈉的摩爾質(zhì)量數(shù)值， 單位為克每摩爾 g/mol M1/2NaCO 3=52.994 7. 蔗糖8. 硫酸銨：分析純，枯燥四、分析步驟：國標(biāo)推薦法1. 試樣的消煮2. 稱取試0.5g 含氮量580mg 準(zhǔn)確至0.0002g，放入消化管中，參加6.4g混合催化劑，與 試樣混合均勻，再參加12mL硫酸，于420 C消化爐中消化3小時。冷卻后，參加蒸餾水 20ml , 待用。3. 氨的蒸餾；采用半自動定氮儀，將帶消化液的消化管插在蒸餾裝置上，以 25mL 硼酸為吸收液，參加 2-3 滴 混 合指示劑，蒸餾裝置的冷凝管末端要浸入裝有吸收液的錐形瓶內(nèi)，然后向消化管中參加氫氧化鈉 溶

4、 液，以溶液變黑為宜，即當(dāng)生成黑色的氫氧化銅時，加堿量已夠。假設(shè)加堿量缺乏或過量，分解 液呈 藍(lán)色而不顯黑色，假設(shè)加堿不夠，需再增加氫氧化鈉用量，直到分解液呈黑色為止。蒸餾，蒸 餾時間 以吸收液體積到達(dá) 150mL 以上時為宜，降下錐形瓶，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均需 流入錐形 瓶內(nèi)。4. 滴定：用 0.1mol/L 的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液滴定吸收液，溶液由藍(lán)綠色變淡紫色為終點。5. 空白測定：稱取蔗糖 0.5g ，代替試樣， 按以上分析步驟進(jìn)行測定， 消耗 0.1mol/L 的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液的體積 不 得超過 0.2mL ，消耗 0.02mol/L 的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液的體積不得超過 0.3mL。五、計

5、算：粗蛋白% V1 - V0CHCl 6.25 0.014 1 00m式中：V1滴定試樣時所需標(biāo)準(zhǔn)酸溶液體積，mL V0滴定空白時所需標(biāo)準(zhǔn)酸溶液體積，mLChcl鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/L m試樣質(zhì)量，g0.014 每毫克當(dāng)量氮的克數(shù)6.25 氮換算成蛋白質(zhì)的平均系數(shù)水分檢測GB/T6435 2006一、適用范圍： 本標(biāo)準(zhǔn)適用于配合飼料、濃縮飼料和各種單一飼料中水分的測定，但用作飼料 的奶制品、動物 和植物油脂、礦物質(zhì)除外。二、原理：試樣在105 C烘箱內(nèi)，在大氣壓下烘干，直至恒重，逸失的重量為水分。三、試劑和儀器設(shè)備：1高速粉碎機，粉碎時間 1 分鐘。2分析篩 孔徑 0.25mm 60 目

6、。3分析天平感量 0.0001g4 電熱恒溫箱烘箱可控制溫度在105 ± 2 C5稱樣皿玻璃或鋁質(zhì) , 直徑 40mm 以上 , 高 25mm 以下 6枯燥器以氯化鈣或變色硅膠為枯燥劑四、試樣的選取和制備：選取具有代表性的試樣，其原始樣量應(yīng)在1000g以上，用四分法縮減至500g，風(fēng)干后粉碎 至全部通過 40 目篩，再用四分法縮減至 200g ，裝于密封容器中，防止試樣成分的變化或變質(zhì)。如試樣為多汁的鮮樣，或無法粉碎時，應(yīng)預(yù)先枯燥處理，稱取試樣200300g，在105 °C烘箱中烘15min，立即降至65 C，烘干56h。取出后，在室內(nèi)空氣中冷卻 4h，稱重，即得風(fēng)干試 樣

7、。分析步驟：1. 潔凈稱樣皿，在103 C烘箱內(nèi)烘1h，取出，在枯燥器中冷卻30min，稱準(zhǔn)至0.0002g，再烘干 30min ，同樣冷卻，稱重，直至兩次重量之差小于 0.0005g 為恒重。2. 用已恒重稱樣皿稱取兩份平行試樣，每份 22.5g 含水重 0.1g 以上，樣品厚度 4mm 以下準(zhǔn)確至0.0002g，不蓋稱樣皿蓋，在105 C烘箱內(nèi)烘3.5h，取出，蓋好稱樣 皿蓋，在枯燥器中冷 卻30min ，稱重。五、計算水分含量 %按下式計算：W1 W2100%水分%=XW1 W0式中：W1 105 c烘干前試樣及稱樣皿重，gW2 105 C烘干后試樣及稱樣皿重，gWo已恒重的稱樣皿重，g

8、粗灰分檢測GB/T6438一、原理：飼料樣品在550 C灼燒后所得殘渣，用質(zhì)量百分率表示。殘渣中主要是氧化物、鹽類等礦物質(zhì)， 也包括混入飼料中的砂石、土等，故稱粗灰分。二、儀器設(shè)備：1. 高速粉碎機：粉碎時間 1 分鐘。2. 分樣篩：孔徑 0.25mm 60 目3. 分析天平：感量 0.0001g4. 咼溫爐：有咼溫計且可控制爐溫在 550 ± 20 C5. 坩堝：瓷質(zhì)，容積 50mL6. 枯燥器：用氯化鈣枯燥試劑或變色硅膠作枯燥劑三、試樣的選取和制備：選取具有代表性的試樣用四分法縮減至 200g ，粉碎后全部通過 40 目篩，裝于密封容器中， 防止試樣成分的變化或變質(zhì)。四、 分析步

9、驟：將干凈坩堝放入高溫爐，在550 ± 2 C下灼燒30min。取出，在空氣中冷卻約1min , 放入枯燥器冷卻 30min ，稱其質(zhì)量。再重復(fù)灼燒、冷卻、稱量，直至兩次質(zhì)量之差小于0.0005g 為恒質(zhì)。在恒質(zhì)的坩堝中稱取 22.5g試料灰分質(zhì)量在0.05g以上，準(zhǔn)確至0.0002g，在電爐中碳 化 至無煙狀態(tài)夏季和冬季，可適當(dāng)延長時間 20min ，于550 ± 20 C下灼燒3.5h至灰白色，冷 卻到200 C。取出，在空氣中冷卻約 1min，放入枯燥器中冷卻至室溫，稱取質(zhì)量。五、計算：粗灰分含量 %按下式計算：m2 m0粗灰分% =X 100m1 m0式中：m2為灰

10、化后坩堝加灰分的的質(zhì)量，gm1為坩堝加試料的質(zhì)量，gmo為恒質(zhì)空坩堝，g所得結(jié)果應(yīng)表示至 0.01%酸溶蛋白肽含量的測定據(jù) QB/T 2653-2004 制定一、原理大分子蛋白質(zhì)和肽鏈較長的多肽用三氯醋酸溶液進(jìn)行沉淀，并將其中的短鏈小肽用酸 溶解出 來，其中包括小肽和局部 a-氨基酸。然后經(jīng)離心、過濾、消化、蒸餾，測定其蛋白質(zhì)含 量即酸溶蛋白。、試劑及儀器100ml燒杯、10ml和25ml移液管、半微量粗蛋白質(zhì)測定試劑和裝置、40目標(biāo)準(zhǔn)篩、15 %三氯醋酸溶液TCA溶液、4500轉(zhuǎn)/分鐘的離心機、定性濾紙等。三、試驗方法1 準(zhǔn)確稱取樣品4.0000g樣品，參加15%TCA溶液20ml，混合均勻

11、，靜置5分鐘。用定性 濾紙過濾，取濾液約5ml，4500轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，取上清液4ml注入枯燥的消化管中，參加 硫酸銅0.2g，硫酸鈉3g，再加濃硫酸10ml，消化方法及蒸餾方法與蛋白的測定方法相同。2 計算公式：肽絕對含量Xi V Vo C hcl 0.0140 6.25 5 N 100 % mX1樣品中肽含量%Chcl 標(biāo)準(zhǔn)鹽酸摩爾/當(dāng)量濃度V1樣品消耗鹽酸體積V0試劑空白消耗鹽酸體積m 樣品重量精確到 0.0001 X1X 0樣品中的粗相對含量%100 %X。N為微量法測定粗蛋白時的稀釋倍數(shù)，假設(shè)全量法測定那么為1不良寡糖定性檢測薄層層析法一、原理薄層層析是以涂布于玻板或滌綸片等載

12、體上的基質(zhì)為固定相，以液體為流動相的一種 層析方法。一般層析操作包括薄板活化、點樣、展層、顯色和結(jié)果分析等步驟。二、試劑配制注意：須在通風(fēng)櫥中進(jìn)行1、展層劑正丁醇：異丙醇：乙酸：蒸餾水 =14： 10： 48：8 如有拖尾現(xiàn)象，可適當(dāng)加大乙酸的量展層劑混勻后倒入展層缸。2、顯色劑苯胺1ml ,二苯胺1g ,濃磷酸5ml，丙酮50ml先將二苯胺溶于丙酮中，最后加濃磷酸。因為二苯 胺不溶于水。 顯色劑避光保存，有毒，小心操作。三、操作步驟1、樣品處理：稱取5g試樣溶于40mL蒸餾水，于70 C水浴1h。2、離心8000rpm， 20min 取上清，放入 4 C冰箱保存。3、 硅膠板的活化：將硅膠板

13、置于烘箱中，110 °C活化1h備用。4、 點樣，用水蘇糖、棉籽糖和蔗糖做標(biāo)準(zhǔn)5mg/mL 。 配制方法：稱取 5mg 的水蘇糖或棉籽糖、蔗糖，參加 1mL 蒸餾水。 在硅膠板底部留兩厘米，用鉛筆劃一直線，隔開間距畫上點樣孔，用毛細(xì)管點樣，干了再點第二次，干透后展層。 注意：點樣時假設(shè)發(fā)現(xiàn)上清已變渾濁，那么必須重新離心。 6、展層：將點好樣的薄層板放入預(yù)先飽和的展層裝置內(nèi)，讓點樣一端浸入展層劑中，其深度約 0.5cm 切記：樣品點不能浸入展層劑中 。當(dāng)展層劑上升到離硅膠板的頂端 0.5-1.0cm 時，停 止 展層，迅速吹干。7、 顯色：將顯色劑噴霧，95 C烘箱顯色6min。8、拍

14、照：關(guān)閉閃光燈，微距拍攝。揮發(fā)性鹽基氮檢測GB/T 5009.45 2003一、原理： 由于酶和細(xì)菌的作用，樣品腐敗過程中，使蛋白質(zhì)分解而產(chǎn)生氨以及胺類等堿性物 質(zhì)。此類物 質(zhì)具有揮發(fā)性，在堿性溶液蒸出后，用標(biāo)準(zhǔn)酸溶液滴定計算含量。二、試劑和儀器設(shè)備：1鹽酸溶液 0.01mol/L ：取測蛋白用的 0.1mol/L 鹽酸溶液 100.0mL 于 1000mL 溶量瓶中，加水 定 容至刻度。2氧化鎂混懸液 10g/L ：稱取 1.0 克氧化鎂，加 100mL 水，振搖成混懸液。 3指示劑：甲 基紅乙醇指示劑 2g/L ，次甲基藍(lán)指示劑 1g/L 。4 硼酸吸收液20g/L ,可用蛋白測定用的硼酸

15、吸收液5 半微量定氮儀三、分析步驟：稱取10克試樣準(zhǔn)確至O.OOOIg 于碘量瓶中，加100.0mL水，放入振蕩器中振蕩 30分鐘， 再倒入離心機中離心5-10分鐘。取上清液倒入錐形瓶中。上清液置冰箱中備用。蒸餾滴定：將盛有20mL吸收液及5-6滴混合指示液的錐形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插入吸 收液的液面下，準(zhǔn)確吸取 10.0mL上述離心清液于蒸餾器反響室內(nèi)，加10mL氧化鎂混懸液，迅進(jìn)行蒸餾5分鐘即停止， 吸收液用鹽酸標(biāo)液滴定， 至終點速蓋 塞，并加水以防漏氣， 通入蒸氣，藍(lán)紫色，同時做試劑空白試驗。四、計算：X 100V Vq)X 14 X C X 10X (mg/100g )=式中：

16、X試樣中揮發(fā)性鹽基氮的含量，單位為毫克每百克mg/100g V測定用樣液消耗鹽酸溶液體積，單位為毫升mL ：V0試劑空白消耗鹽酸溶液體積，單位為毫升 mL ：C 鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的實際濃度，單位為摩爾每升 mol/L :14 與 1.00mL鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 C HCl =1.000mol/L 相當(dāng)?shù)牡馁|(zhì)量，單位為毫克 mg m 試樣質(zhì)量，單位為克g。計算結(jié)果保存三位有效數(shù)字蛋白溶解度檢測GB/T19541 2004一、方法原理 氫氧化鉀蛋白溶解度可以反映大豆粕加熱過度的情況，不同加熱程度的大豆 粕，氫氧化鉀蛋白 溶解度不同。先測定大豆粕樣品在規(guī)定的條件下，可溶于氫氧化鉀溶液中 的粗蛋白質(zhì)含量；再測定 同一大豆粕樣品中總的粕蛋白質(zhì)含量，計算出氫氧化鉀蛋白質(zhì)溶解 度。二、試劑 10.2% 氫氧化鉀溶液，相當(dāng)于 0.04N ，pH=12.5 2.44gKOH 配成 1L 2凱氏定氮 所需的標(biāo)準(zhǔn)試劑三、儀器1. 高速粉碎機，粉碎時間 1 分鐘。2. 樣品篩：孔徑 0.25mm3. 磁力攪拌器4. 離心機 : 轉(zhuǎn)速為 2700r/min 以上 四、試樣的選取和制備取具有代表性的大豆粕樣品，用四分法縮減至 200g ，粉碎后全部通過 0.25 mm 孔徑的樣品 篩，充分混勻，裝于密封容器中備用。五、操作步驟稱取大豆粕試樣 1.0 克，精確到 0