羅氏降鈣素檢測試劑盒(電化學(xué)發(fā)光法)說明書

1、降鈣素檢測試劑盒(電化學(xué)發(fā)光法)說明書Calcitonin【產(chǎn)品名稱】通用名稱：降鈣素檢測試劑盒(電化學(xué)發(fā)光法）英文名稱：Calcitonin包裝規(guī)格100測試/盒預(yù)期用途主要用途該產(chǎn)品適用于體外定量測定人血漿和血清中的人降鈣素(甲狀腺降鈣素)。降鈣素測定主要是結(jié)合其它臨床和實驗室檢測結(jié)果用于輔助診斷和治療一些涉及甲狀腺和甲狀旁腺的疾病，包括甲狀旁腺功能尤進(jìn)以及其他的臨床和實驗室檢査發(fā)現(xiàn)。Elecsys和cobase免疫檢測分析&的檢測原理是電化學(xué)發(fā)光法。概要人降鈣素(hCT)是由32個氨基酸構(gòu)成的肽激素，分子量為3418道爾頓，主要是由甲狀腺的濾泡旁C細(xì)胞分泌。1它是在肝臟和腎臟中代

2、謝，受到血清鈣水平調(diào)節(jié)。生理性CT對界、磷代謝有影響。它是骨吸收作用抑制劑，防止鈣應(yīng)激(例如妊娠、哺乳和生長)時的骨丟失。嬰兒中血清CT水平相機(jī)對較高，而極低出生體重嬰兒中更高。5從兒童時期到成年過程中CT水平會迅速降低，且保持著相對穩(wěn)定。一般而言，男性血清降鈣素水平髙于女性，而吸煙會導(dǎo)致血清降鈣素水平進(jìn)一步升高。CT水平升高可見于各種病理學(xué)狀況下。9,10,11CT水平的進(jìn)一步升高還可見于甲狀旁腺功能亢進(jìn)、高胃泌素血癥、腎衰和慢性炎性疾病相關(guān)狀況。1V3與CT分泌過多性疾病有關(guān)的最為突出的臨床綜合癥是甲狀腺相關(guān)疾病。這種疾病可能為散發(fā)或以表現(xiàn)為常染色體顯性遺傳特征的家族形式出現(xiàn)。這些疾病通常

3、產(chǎn)生具有診斷意義的血清降鈣素濃度升髙，因此通過免疫檢測方法測量血清降鈣素水平可獲得異常精確且具有極高特異性的診斷。此外，降興素測量值還可用于監(jiān)測產(chǎn)降媽素患者中治療的有效性。14,15然而，在小部分但卻是越來越多的患者中，基礎(chǔ)激素水平與正常水平不同。其中一些受試者處于C-細(xì)胞形成或增生的早期，適合接受手術(shù)治療，在臨床經(jīng)驗中幾乎可治愈。為了在疾病早期鑒別出這些患者，有必要針對CT分泌進(jìn)行激發(fā)試驗，以排除假陰性患者。使用鈣或五肽胃泌素或同時使用兩者后，大部分患者都會出現(xiàn)CT水平增加的反應(yīng)。16,17Elecsys降鈣素檢測使用針對人降鈣素的特異性單克隆抗體。釕復(fù)合物標(biāo)記的抗體中包括了小鼠特異性成分。

4、a)Tris(2,2,bipyridyl)ruthenium(II)-comple×(Ru(bpy)2+3三聯(lián)吡啶釕【檢驗原理】夾心法原理?？倷z測時間:18分鐘。 第1次孵育：50µL標(biāo)本、一份生物素化的hCT特異性單克隆抗體和釕復(fù)合物標(biāo)記的hCT特異性單克隆抗體一起孵育，反應(yīng)形成一”三明治”樣抗原-抗體復(fù)合物。 第2次孵育：加入鏈霉親合素包被的磁珠微粒后，該復(fù)合物通過生物素與鏈霉親合素的相互作用與固相結(jié)合。 將反應(yīng)液吸入測量池中，通過電磁作用將磁珠吸附在電極表面。未與磁珠結(jié)合的物質(zhì)通過ProCell/ProCellM除去。給電極加以定的電壓，使復(fù)合物化學(xué)發(fā)光，并通過光電倍

5、增器測量犮光強(qiáng)度。 通過檢測儀的定標(biāo)曲線得到最后的檢測結(jié)果，定標(biāo)曲線是通過2點定標(biāo)和試劑條形碼上獲得的主曲線生成的?！局饕M成成份】提供的物品包括工作溶液。工作溶液的組成如下：M鏈霉親合素包被的磁珠微粒(透明瓶蓋)，1瓶，6.5mL:鏈酶親合素包被的磁珠微粒：0.72mg/mL;防腐劑。R1生物素化的抗人降鈣素抗體(灰蓋)1瓶，8mL:生物素化的單克隆抗人降鈣素抗體(小鼠)1.50mg/L;磷酸鹽緩沖液100mmol/L,PH7.2；防腐劑。R2釕復(fù)合物標(biāo)記的抗人降鈣素抗體(黑蓋)，1瓶，8mL：釕復(fù)合物(Ru(bpy)2+3)標(biāo)記的抗人降鈣素單克隆抗體(小鼠)1.0mg/L;磷酸鹽緩沖液10

6、0mmol/L,pH7.2；防腐劑。霈要的物品(未提供）l 06445861-190,CalcitoninCalSet,4×l.0mLl 05618860-190,PreciCcmtrolVaria,規(guī)格2×3mL,分別為PreciCcmtrolVaria1和2l 03609987190。DiluentMultiAssay。規(guī)格2×16mL#本稀釋液l 實驗室基礎(chǔ)設(shè)備l Elecsys2010,MODULARANALYTICSE170,或cobase分析儀l Elecsys2010和cobasc411分析儀所需材料：l 11662988122,ProCell,6&

7、#215;380mL系統(tǒng)緩沖液l 11662970122,CleanCell,6×380mLpJ量池清洗液l 11930346122,ElecsysSysWash,l×500mL附加洗液l 11933159001,SysCleanJS配器l 11706802001tElecsys2010AssayCup,60×60反應(yīng)管l 11706799001,Elecsys2010AssayTip,30×120移液管吸頭MODULARANALYTICSE170,cobase601和cobase602分析儀所需材料：l 04880340190,ProCellM,2&#

8、215;2L系統(tǒng)緩沖液l 04880293190,CleanCellM,2×2L檢測池清洗液l 03023141001，PC/CC-Cups,12杯用于在測定前預(yù)熱ProCellM和CleanCellMl 03005712190,ProbeWashM,12×70mL洗液，用于在檢測完畢后或更換試劑時清洗試劑針。l 03004899190,PreCleanM,5×600mL檢測清洗溶液l 12102137001,AssayTip/AssayCupCombimagazineM,48盒×84反應(yīng)杯或移液管吸頭，廢物袋l 03023150001,WasteLin

9、er,廢物袋l 03027651001,SysCleanAdapterM所有分析儀需要材料：l 11298500316，ElecsysSysClean>5×l00mL系統(tǒng)清洗液【儲存條件及有效期】存儲在2-8，有效期為15個月。請垂直擺放Elecsys降鈣素試劑盒，以確保使用前自動混合過程中微粒完全有效。穩(wěn)定性：未開封試劑，2*81C有效期內(nèi)均可使用開封試劑，2-81C84天fl2周）置于分析儀上28天(4周）適用儀器羅氏全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)：Elecsys2010MODULARANALYTICSE170cobasc411cobase601cobase602【樣本要求】

10、樣本采集和制備只有以下類型的樣本可用于檢測。血清樣本須用標(biāo)準(zhǔn)試管或有分離膠的真空管收集。肝素鋰，K2-EDTA和K3-EDTA血萊以及含有分離凝膠的肝素鋰血漿試管。判斷標(biāo)準(zhǔn)：濃度<10pg/mL時，回收率總偏差S初始值的±2.0Pg/mL;濃度lOpg/mL且斜率0.9-1.1+截距±2X空白限(LoB)+相關(guān)系數(shù)0.95時，回收率在初始值±20%以內(nèi)。20-25溫度下可穩(wěn)定保存4小時，2-8溫度下可穩(wěn)定保存1天，-20：溫度下可穩(wěn)定保存3個月。只可凍存一次。所列出的被檢測的樣本類型采用經(jīng)挑選的市售樣本管采集，即并非檢測了所有廠商的試管產(chǎn)品。各生產(chǎn)商提供的樣

11、本采集系統(tǒng)可能含有不同的材料，某些情況下這些材料有可能影響到檢測結(jié)果。如果采用原始試管(樣本采集系統(tǒng))處理樣本，請參照試管生產(chǎn)商提供的說明。如果樣本中有沉淀，測定前要進(jìn)行離心。切勿使用加熱滅活的標(biāo)本。不可使用疊氮化物作為穩(wěn)定劑的樣本和質(zhì)控品。檢測前，請確保標(biāo)本、定標(biāo)液及質(zhì)控液平衡至室溫(20-25)?？紤]到可能的蒸發(fā)效應(yīng)，上機(jī)的樣本、定標(biāo)液和質(zhì)控品應(yīng)在2小時內(nèi)分析/測定?！緳z驗方法】試劑處理該試劑盒為即用型，請勿分開使用。正確操作需要的所有信息可通過相應(yīng)的試劑條碼讀取。測定為實現(xiàn)最佳檢測性能，請參照本文針對相應(yīng)分析儀所給出的指導(dǎo)說明。正確參考針對特定分析儀檢測的操作人員手冊。使用前分析儀自動對

12、磁性微粒進(jìn)行再混勻。通過試劑條碼讀取測試具體參數(shù)。在特殊情況下，分析儀無法自動讀取條碼信息時，請輸入條碼標(biāo)簽上的15位數(shù)字序列。將冷藏試劑室溫平衡至20左右，放置分析儀的試劑盤(20)內(nèi)。避免形成泡沬。分析儀能自動調(diào)節(jié)試劑溫度和開、關(guān)各試劑盒瓶蓋。定標(biāo)溯源性：這種方法已被IRPWHO89/620參考標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)化。每批ElecsysCalcitonin試劑的試劑盒上都有條形碼記錄各批號試劑特異的定標(biāo)信息。預(yù)先確定的主曲線適用于用ElecsysCalcitoninCalSrt試劑盒進(jìn)行測定的分析儀。定標(biāo)頻率：新批號試劑必須進(jìn)行定標(biāo)(新試劑盒在分析儀上放置不能超過24小時)。以下情況建議重新進(jìn)行定標(biāo)：

13、使用同一批號試劑2個月后(56天）7天后(在分析儀上使用同一試劑盒）根據(jù)需要：如質(zhì)控數(shù)據(jù)超過額定的限度質(zhì)量控制質(zhì)控采用PreciControl Varia其他合適的質(zhì)控品也可使用。各濃度質(zhì)控至少每24小時內(nèi)檢測一次，每次更換試劑盒或定標(biāo)后也須進(jìn)行質(zhì)控。應(yīng)根據(jù)各實驗室的具體要求采用適合的質(zhì)控間隔和限值。獲得的數(shù)值應(yīng)當(dāng)在設(shè)定的范圍內(nèi)。若失控每個實驗室必須采取相應(yīng)的糾正措施。請遵循政府法規(guī)和當(dāng)?shù)匦袠I(yè)導(dǎo)則進(jìn)行質(zhì)量控制。計算分析儀自動計算每一份標(biāo)本的分析物濃度，單位可為pg/mL或pmol/L(可選)。轉(zhuǎn)換因子：pg/mL×0.2926=pmol/LpMnol/L×3.4176=pg

14、/mL稀釋若標(biāo)本中降鈣素濃度超過測定范圍，則可使用DiluentMultiAssay稀釋標(biāo)本。推薦稀釋比是l:l(×)(MODULARA NALYTICSEl70,Elecsys2010和cobasdih析儀自動稀釋或者人工稀釋)。稀釋標(biāo)本的CK-MB濃度必須>20pg/mL。手動稀釋后，結(jié)果要乘上稀釋因子。分析儀稀釋后MODULARANALYTICSEl70，Elecsys2010和cobas e軟件會自動計算結(jié)果?！緟⒖贾?參考范圍)】預(yù)期值參考范圍上限是以第97.5百分位數(shù)給出各實驗室應(yīng)研宄參考值對于各自患者人群的適用性，必要時建立各自的參考范圍?！井a(chǎn)品性能指標(biāo)】分析儀的

15、代表性性能指標(biāo)如下所示。各個試驗室獲得的數(shù)據(jù)可能不同。精密度根據(jù)CLSI(臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員會啲改良方案(EP5-A2),使用Elecsys試劑、混合人血清和質(zhì)控品進(jìn)行重復(fù)性測定：每天2次重復(fù)檢測，共21天(n=84).獲得如下結(jié)果：Elecsys 2010和cobas e 411分析儀可重復(fù)性b中間精密度樣本平均值SDCVSDCVpg/mLpg/mL%pg/mL%人血清11.010.0343.40.0525.2人血清211.50.3453.00.4133.6人血清31.713.5人血清448213.82.919.240人血清5191042.6 2.265.03.4Pre

16、ciControl Varia 18.880.1912.10.2612.9PreciControl Varia 297.71.441.52.512.6b)可重復(fù)性-批內(nèi)精密度MODULARANALYTICSE170,cobase601和cobase602分析儀：可重復(fù)性中間精密度樣本平均值SDCVSDCVpg/mLpg/m%pg/m%人血淸14.190.0601.40.0822.0人血淸245.40.7941.81.021 23人血淸34566.171.4g.461.9人血淸490714.0IS19.82.2 人血淸5161325.91.634.72.2PreciControl Varia 1

17、8.870.1281.40.1461.6PreciControl Varia 293.71.671.81.872.0方法學(xué)比較使用臨床標(biāo)本比較ElecsysCalcitonin檢測(y)和商用方法(×),相關(guān)性數(shù)據(jù)如下：測量的樣本數(shù)：247Passing/Bablok 線性回掃y=970X-0.133 y=l.12×-l。92t=0.911 r=0.977樣本濃度在0.600和1866pg/mL之間。群組樣本含量N第97.5百分位數(shù)95%可信區(qū)間下艱95%可信區(qū)間上限表觀健康女性1936.40pg/mL5.17 pg/mL9.82 pg/mL表觀健康男性1629.52pg/

18、mL.831 pg/mLl4.3 pg/mL分析特異性以9.11和468pg/mL的降鈣素濃度檢測時發(fā)現(xiàn)了下列交叉反應(yīng)：交叉反應(yīng)物檢測濃度µg/L交叉反應(yīng)性%鮭魚降鈣素 1000.017豬降鈣素5000.007雞降鈣素5000.005ACTH(l-39) 人源1000.037C-肽400000.000降鈣素基因相關(guān)肽10000.002PTH(1-84)人源15O0.013TSHlOOOmlU/mL0.009胰島素(Insulin)試 劑盒說明書335000.000催乳素10000.001促胃液素I2000o.001依降鈣素1000000.000鈣抑肽400000.055限值和范圍0.

19、5-2000pg/mL(通過最低檢出限和廠商定標(biāo)曲線的最高值確定)。低于檢測下限的值報告為<0.5pg/mL。超過檢測范圍的值報告>2000pg/mL(或100倍稀釋結(jié)果可報告至200000pg/mL)。測量值下限空白限值(LoB),檢出限(LoD)和定量檢出限(LoQ)空白限=0.3pg/mL空白限=0.5pg/mL定量檢出限=1.0pg/mL,總?cè)菰S誤差30% 空白限值和定量檢出限均是按照CLSI(臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)學(xué)會)EP17-A的要求確定?？瞻紫拗祦碜杂趲状为毩y量序列中對幾份無分析物樣本260次測量所得數(shù)值的第95百分位數(shù)?？瞻紫尴喈?dāng)于低于無分析物樣本檢測值的濃度，其可能

20、性為95%。檢出限是根據(jù)空白限以及低濃度樣本的標(biāo)準(zhǔn)差來確定。檢出限相當(dāng)于可被檢測出來的最低分析物濃度(數(shù)值有95%的可能性高于空白限)。檢出限是指樣本中可精確定量檢出的分析物最低量，總?cè)菰S誤差30%。限制性-干擾因素檢測結(jié)果不受黃疸(膽紅素<1128pmol/L或<66mg/dL),溶血(血紅蛋白<0.124mmol/或<0.2g/dL),脂血(脂肪乳劑<2000mg/dL)和生物素(<40ng/mL或<163nmol/L),以及IgG<4g/dL以及IgM 0.7g/dL和IgM<1,6g/dL的影響。判斷標(biāo)準(zhǔn)：10pg/ml的樣本在初始

21、值±10%的范圍內(nèi)回收，或<10pg/mL的樣本在初始值的±1pg/mL范圍內(nèi)回收。對于接受高劑量生物素治療的患者(即>5mg/天)，必須在末次生物素治療8小時后采集樣本。類風(fēng)濕因子濃度低于1200IU/mL時無明顯干擾。降鈣素濃度最高達(dá)到1µg/mL時無高劑量鉤狀效應(yīng)。體外對17種常用和12種特殊藥物進(jìn)行試驗未發(fā)現(xiàn)會影響檢測結(jié)果，未發(fā)現(xiàn)有藥物影響檢測結(jié)果。采用下表中給出的濃度監(jiān)測特甲狀腺藥物。未發(fā)現(xiàn)有藥物影響檢測結(jié)果。判斷標(biāo)準(zhǔn)：在初始值±10%范圍內(nèi)重現(xiàn)。藥物濃度(ug/mL)碘化物0，2左甲狀腺素0,25卡比馬唑30Thiamazol80

22、丙硫氧嘧啶300Perchlorat2000普萘洛爾240胺碘達(dá)隆200潑尼松龍100氫化可的松200Fluocortolon100Octreotid0.3少數(shù)病例中極高濃度的檢測特異性抗體、鏈霉親合素或釕抗體會影響檢測結(jié)果。通過適當(dāng)?shù)膶嶒炘O(shè)計可將影響因素降到最低。用作診斷用途時，應(yīng)始終結(jié)合病人病歷、臨床檢査和其他檢測結(jié)果評估結(jié)果?！咀⒁馐马棥孔⒁鈦~項僅用于體外診斷。在使用本試劑盒時必須遵循所有試驗室試劑操作的注意事項。所有廢棄物必須按照當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)進(jìn)行處置。專業(yè)人員可索取安全數(shù)據(jù)報告。避免試劑和樣本(樣本、定標(biāo)液和質(zhì)控品)產(chǎn)生泡沫，【參考文獻(xiàn)】1。ZaidiM,MoongaBS,BevisPJR

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