42蛋白質(zhì)技術(shù)

1、蛋白質(zhì)技術(shù) 1.蛋白的分離純化技術(shù)蛋白的分離純化技術(shù) (略略) 2.蛋白的檢測技術(shù)蛋白的檢測技術(shù) (1)sds-page (2) western blot (3) elisa (4) 蛋白芯片蛋白芯片 (5)蛋白測序蛋白測序 (略略) (6)雙向電泳雙向電泳-新基因的獲取技術(shù)新基因的獲取技術(shù) (7)蛋白質(zhì)磷酸化分析蛋白質(zhì)磷酸化分析 (8) emsa- 蛋白與核酸相互作用的研究蛋白與核酸相互作用的研究(功能) (9)免疫共沉淀技術(shù)免疫共沉淀技術(shù) (coip)- 蛋白與蛋白相互作用的研究蛋白與蛋白相互作用的研究(功能功能)(1) sds-page 電泳電泳1、原理2、用途sds-page 電泳原理

2、1.sds(帶負(fù)電帶負(fù)電)和還原劑破壞蛋白的高級結(jié)構(gòu)和還原劑破壞蛋白的高級結(jié)構(gòu), 同同時時sds與蛋白定量結(jié)合與蛋白定量結(jié)合, 消除蛋白之間的電荷差消除蛋白之間的電荷差異異,使得使得蛋白的遷移率主要依賴分子量蛋白的遷移率主要依賴分子量 ( (分子小跑分子小跑得快得快) .) .2.2.不連續(xù)電泳不連續(xù)電泳: : 上層為濃縮膠上層為濃縮膠, ,可將樣品壓縮到同可將樣品壓縮到同一起跑線一起跑線, , 下層為分離膠下層為分離膠; ; 可獲得更高的分辨率可獲得更高的分辨率. .3.3.考馬斯亮藍(lán)進(jìn)行染色考馬斯亮藍(lán)進(jìn)行染色. .sds-page 電泳用途1.蛋白分子量的測定2.蛋白濃度的測定3.蛋白的鑒

3、定(通過1來實現(xiàn))(2). western blot名稱名稱檢測對象檢測對象探針探針檢測原理檢測原理處理過程處理過程用途用途southern blotdna標(biāo)記單鏈核酸核酸復(fù)性中堿基配對專一性瓊脂糖電泳后轉(zhuǎn)膜基因檢測（拷貝數(shù)）northern blotrna標(biāo)記單鏈核酸核酸復(fù)性中堿基配對專一性變性瓊脂糖電泳后轉(zhuǎn)膜基因表達(dá)的檢測（表達(dá)量）western blot蛋白抗體抗原抗體特異性結(jié)合sds-page后轉(zhuǎn)膜基因表達(dá)產(chǎn)物蛋白的檢測western blot(3)elisa(4) 蛋白芯片蛋白芯片(6) 雙向電泳雙向電泳 雙向電泳是蛋白質(zhì)組學(xué)中對蛋白質(zhì)組進(jìn)行研究的主要分離方法，同時能分離成百上千種蛋

4、白質(zhì)。蛋白質(zhì)在第一向根據(jù)電荷的不同（等電聚焦），第二向根據(jù)分子量的不同進(jìn)行分離（sds-page）。分離后對蛋白質(zhì)進(jìn)行染色，根據(jù)實際分析情況，分別進(jìn)行考馬斯亮蘭染色、銀染或熒光染色。掃描后用相關(guān)軟件（pdquest等）進(jìn)行圖譜分析，分析差別點等。雙向電泳與質(zhì)譜技術(shù)聯(lián)用，還可以進(jìn)一步分析差別點蛋白的特性。(7)蛋白質(zhì)磷酸化分析蛋白質(zhì)磷酸化分析 蛋白磷酸化是一種重要的細(xì)胞信號調(diào)控方式 一般在絲氨酸, 蘇氨酸和酪氨酸上磷酸化. 蛋白激酶-磷酸化; 蛋白質(zhì)磷酸酯酶-去磷酸化.a. 一般通過雙向電泳和質(zhì)譜分析.b. 也可通過磷酸化抗體western blot檢測(8) emsa 凝膠阻滯試驗(electrophoretic mobility shift assay) 體外分析dna與蛋白質(zhì)相互作用的一種特殊的凝膠電泳技術(shù). 原理: 非變性電泳中, 核酸蛋白結(jié)合后,泳動速度變慢.dna與與protein 相互作用檢測相互作用檢測(9) 免疫共沉淀技術(shù)免疫共沉淀技術(shù) (coip)