動(dòng)物細(xì)胞工程二

1、如果將奶牛的細(xì)胞與植物細(xì)胞雜交，得到綠色的小奶牛，那豈不是只要曬曬太陽(yáng)就可以擠出牛奶嗎？動(dòng)物細(xì)胞也能融合嗎？ 細(xì)胞融合是正常的生命活動(dòng)兩個(gè)細(xì)胞正在融兩個(gè)細(xì)胞正在融合合 受精作用受精作用泰寧第一中學(xué) 高二生物備課組三、動(dòng)物細(xì)胞融合1、概念：也稱細(xì)胞雜交。是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。融合后形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。思考題思考題1.植物體細(xì)胞雜交時(shí)首先應(yīng)用什么方法去掉細(xì)胞壁？ 酶解法，如纖維素酶或果膠酶2.動(dòng)物細(xì)胞融合時(shí)需要進(jìn)行去壁處理嗎？為什么？無(wú)需，因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞無(wú)細(xì)胞壁3.植物體細(xì)胞雜交誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些？離心、電激等物理方法；

2、peg等化學(xué)方法4.動(dòng)物細(xì)胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法嗎？能 還可以利用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo)5.植物體細(xì)胞雜交應(yīng)先進(jìn)行原生質(zhì)體的融合再進(jìn)行組織培養(yǎng)形 成完整的雜種個(gè)體，動(dòng)物細(xì)胞融合后能形成雜種動(dòng)物個(gè)體嗎？不能細(xì)胞細(xì)胞a細(xì)胞細(xì)胞b雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞滅活的病毒滅活的病毒物理法物理法化學(xué)法化學(xué)法仙臺(tái)病毒仙臺(tái)病毒皰疹病毒皰疹病毒新城雞瘟病毒新城雞瘟病毒動(dòng)物動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞融合融合滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理：n病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。n滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力

3、，但并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)。用滅活的病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過程用滅活的病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過程細(xì)胞核細(xì)胞核病毒顆粒病毒顆粒細(xì)胞核細(xì)胞核6.你推測(cè)一下動(dòng)物細(xì)胞融合有哪些方面的應(yīng)用嗎？思考題思考題 利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)誘導(dǎo)形成雜交瘤細(xì)胞7.在生產(chǎn)實(shí)際中雜交瘤細(xì)胞有怎樣的應(yīng)用？ 生產(chǎn)單克隆抗體2 2、誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法、誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法3 3、動(dòng)物細(xì)胞融合的用途、動(dòng)物細(xì)胞融合的用途制備單克隆抗體：仙臺(tái)病毒：仙臺(tái)病毒紫外線紫外線喪失感染活性喪失感染活性（不感染細(xì)胞）（不感染細(xì)胞）保留融合活性保留融合活性（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）物理法物理法化學(xué)法化學(xué)法生物法生物法動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)

4、胞融合雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞愈傷組織愈傷組織雜種植株雜種植株植物細(xì)胞植物細(xì)胞a植物細(xì)胞植物細(xì)胞b 原生質(zhì)體原生質(zhì)體a原生質(zhì)體原生質(zhì)體b植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交去壁去壁融合融合組培組培物理法物理法化學(xué)法化學(xué)法生物法：生物法：滅活的病毒滅活的病毒動(dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞a動(dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞b雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株主要用途物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振動(dòng)、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合 細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性細(xì)胞融合的原理動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞

5、融合的比較n思考： 1.抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？ 效應(yīng)b細(xì)胞（漿細(xì)胞）。 2.一個(gè)淋巴細(xì)胞(漿細(xì)胞)能分泌多種抗體嗎？ 每一個(gè)淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。四、單克隆抗體四、單克隆抗體提出問題：提出問題：長(zhǎng)期以來(lái)，人們?yōu)榱双@得抗體，采用的是長(zhǎng)期以來(lái)，人們?yōu)榱双@得抗體，采用的是把某種抗原反復(fù)注射到動(dòng)物體內(nèi)，然后從動(dòng)物血清中把某種抗原反復(fù)注射到動(dòng)物體內(nèi)，然后從動(dòng)物血清中分離出所需抗體的方法。用這種方法獲得的抗體，不分離出所需抗體的方法。用這種方法獲得的抗體，不僅產(chǎn)量低，而且抗體的特異性差，純度低，反應(yīng)不夠僅產(chǎn)量低，而且抗體的特異性差，純度低，反應(yīng)不夠靈敏。靈敏。提問？提問？3.一種抗原侵入機(jī)體之后

6、，引起機(jī)體免疫反應(yīng)產(chǎn)生的抗體只有一種嗎？ 動(dòng)物在免疫反應(yīng)過程中，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類可多達(dá)百萬(wàn)種以上。4. 簡(jiǎn)述獲得抗體的傳統(tǒng)途徑？ 抗原 動(dòng)物體 抗體 抗原不純 抗體不純刺激漿細(xì)胞6.如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體 體外培養(yǎng)單個(gè)淋巴細(xì)胞，提取分泌的抗體5.這種方法獲得的抗體有什么缺陷？ 產(chǎn)量低，純度低，特異性差7、體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞能無(wú)限增殖嗎?怎樣解決這個(gè)問題?8、請(qǐng)概括單克隆抗體的概念、請(qǐng)概括單克隆抗體的概念9、根據(jù)阿根廷科學(xué)家米爾斯坦和德國(guó)科學(xué)家柯勒設(shè)根據(jù)阿根廷科學(xué)家米爾斯坦和德國(guó)科學(xué)家柯勒設(shè)計(jì)的計(jì)的 實(shí)驗(yàn)方案，思考實(shí)驗(yàn)過程與原理？實(shí)驗(yàn)方案，思考實(shí)驗(yàn)過程與原理？提問？1.概括單

7、克隆抗體的概念概括單克隆抗體的概念單：?jiǎn)蝹€(gè)細(xì)胞單：?jiǎn)蝹€(gè)細(xì)胞克隆克隆:無(wú)性繁殖無(wú)性繁殖 抗體抗體:化學(xué)性質(zhì)單一、特異化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)性強(qiáng)n實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?制備單克隆抗體制備單克隆抗體.n實(shí)驗(yàn)原理：實(shí)驗(yàn)原理：n實(shí)驗(yàn)材料：小白鼠實(shí)驗(yàn)材料：小白鼠n實(shí)驗(yàn)器材：培養(yǎng)皿、針筒等等。實(shí)驗(yàn)器材：培養(yǎng)皿、針筒等等。n實(shí)驗(yàn)過程：？實(shí)驗(yàn)過程：？2.根據(jù)阿根廷科學(xué)家米爾斯坦和德國(guó)科學(xué)家根據(jù)阿根廷科學(xué)家米爾斯坦和德國(guó)科學(xué)家柯勒設(shè)計(jì)的柯勒設(shè)計(jì)的 實(shí)驗(yàn)方案，回答下列問題：實(shí)驗(yàn)方案，回答下列問題：b淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生抗體，骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生抗體，骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖，雜交瘤細(xì)胞既能產(chǎn)生抗體又能無(wú)限增殖，雜交瘤細(xì)胞

8、既能產(chǎn)生抗體又能無(wú)限增殖。限增殖。（1）設(shè)計(jì)方案：一個(gè)b淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞能夠無(wú)限增殖雜種細(xì)胞（2）制備過程：（1）為什么用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與）為什么用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與b淋巴淋巴細(xì)胞融合？細(xì)胞融合？思考思考：（2）單克隆抗體制備過程中應(yīng)）單克隆抗體制備過程中應(yīng)用哪些細(xì)胞用哪些細(xì)胞 工程技術(shù)手段工程技術(shù)手段？（3）制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選？）制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選？1、因?yàn)閎淋巴細(xì)胞具有分泌特異性抗體的能力，而骨髓瘤細(xì)胞具有在體外培養(yǎng)條件下大量增殖的本領(lǐng)，所以由某種b淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合產(chǎn)生的雜交瘤細(xì)胞，能夠在體外大量繁殖，并且產(chǎn)生特定的單克隆抗體。3、拓展：聚乙

9、二醇、拓展：聚乙二醇處理后，培養(yǎng)液中處理后，培養(yǎng)液中存在哪幾種細(xì)胞？存在哪幾種細(xì)胞？脾脾-脾脾 脾脾-瘤瘤 瘤瘤-瘤瘤 未融合的脾細(xì)胞未融合的脾細(xì)胞 未融合的瘤細(xì)胞未融合的瘤細(xì)胞2、動(dòng)物細(xì)胞融合、細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合、細(xì)胞培養(yǎng)已知細(xì)胞合成已知細(xì)胞合成dna有有d和和s兩條途徑，其中兩條途徑，其中d途徑能被氨基嘌呤阻斷，人淋巴細(xì)胞中有這兩途徑能被氨基嘌呤阻斷，人淋巴細(xì)胞中有這兩種種dna的合成途徑，但一般不分裂增殖。鼠的合成途徑，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤細(xì)胞盡管沒有骨髓瘤細(xì)胞盡管沒有s途徑，但能不斷分裂增途徑，但能不斷分裂增殖，將這兩種細(xì)胞在試管中混合，加聚乙二醇殖，將這兩種細(xì)胞在試管中混合，

10、加聚乙二醇促融，獲得雜交瘤細(xì)胞，請(qǐng)回答：促融，獲得雜交瘤細(xì)胞，請(qǐng)回答：（1）試管中除融合的雜交瘤細(xì)胞外，還有）試管中除融合的雜交瘤細(xì)胞外，還有_種融合細(xì)胞。（考慮兩兩融合）種融合細(xì)胞。（考慮兩兩融合）（2）設(shè)計(jì)一方法（不考慮機(jī)械方法），從培）設(shè)計(jì)一方法（不考慮機(jī)械方法），從培養(yǎng)液中分離出雜交瘤細(xì)胞，并說明原理。養(yǎng)液中分離出雜交瘤細(xì)胞，并說明原理。方法：方法： 原理：原理：試試身手試試身手解析：解析：（1）試管中有人的淋巴細(xì)胞和小鼠骨髓）試管中有人的淋巴細(xì)胞和小鼠骨髓瘤細(xì)胞，在促溶劑的作用下，可能出現(xiàn)以下瘤細(xì)胞，在促溶劑的作用下，可能出現(xiàn)以下3種細(xì)胞的融合情況，人的淋巴細(xì)胞和淋巴細(xì)胞種細(xì)胞的融合

11、情況，人的淋巴細(xì)胞和淋巴細(xì)胞融合，小鼠的骨髓瘤細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，融合，小鼠的骨髓瘤細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，人的淋巴細(xì)胞和小鼠的骨髓瘤細(xì)胞融合，實(shí)驗(yàn)人的淋巴細(xì)胞和小鼠的骨髓瘤細(xì)胞融合，實(shí)驗(yàn)需要的是第需要的是第3種細(xì)胞，即雜交瘤細(xì)胞；種細(xì)胞，即雜交瘤細(xì)胞；（2）要將雜交瘤細(xì)胞分離出來(lái)，可以在）要將雜交瘤細(xì)胞分離出來(lái)，可以在培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖的細(xì)胞；加培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖的細(xì)胞；加入氨基嘌呤后，使入氨基嘌呤后，使d合成途徑阻斷，僅有合成途徑阻斷，僅有d合成合成途徑的骨髓瘤細(xì)胞及其彼此融合的細(xì)胞就不能途徑的骨髓瘤細(xì)胞及其彼此融合的細(xì)胞就不能增殖，但人淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后的

12、雜增殖，但人淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后的雜種細(xì)胞中可以利用淋巴細(xì)胞中的種細(xì)胞中可以利用淋巴細(xì)胞中的s途徑合成途徑合成dna而增殖。而增殖。某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)了一個(gè)生產(chǎn)破方法，設(shè)計(jì)了一個(gè)生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案。傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案。據(jù)圖回答：據(jù)圖回答：（）該方案能達(dá)到預(yù)期（）該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？效果嗎？（）圖中（）圖中為為 過程，常用過程，常用作為誘導(dǎo)劑。作為誘導(dǎo)劑。該細(xì)胞繼承了該細(xì)胞繼承了 因此不僅能分因此不僅能分泌泌，還，還有有 的本領(lǐng)。的本領(lǐng)。不能不能細(xì)胞融合細(xì)胞融合特異性抗體特異性抗體在體外培養(yǎng)條件下大量增殖在體外培養(yǎng)條件下大量增殖滅活的病

13、毒滅活的病毒（或聚乙二醇）（或聚乙二醇）試一試試一試雙親細(xì)胞的雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)遺傳物質(zhì)單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和b淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞。在這種培養(yǎng)基上不后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞。在這種培養(yǎng)基上不能存活、增殖的細(xì)胞是能存活、增殖的細(xì)胞是 （ ） b淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 小鼠骨髓瘤細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞 b淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞 小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞雜交瘤細(xì)雜交瘤細(xì)胞胞 a b c da3.單克隆抗體的應(yīng)用： 在基礎(chǔ)理論研究中具有重要意義 在疾病診斷、治療和

14、預(yù)防方面，具有 生物導(dǎo)彈特異性強(qiáng)、靈敏度高 等優(yōu)越性。用抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體做成的“早早孕診斷試劑盒”，靈敏度很高，在妊娠第8天就可以做出診斷，比原來(lái)的診斷方法提前了10天左右，可以避免孕婦在不知道妊娠的情況下因服用藥物而對(duì)胎兒造成不利影響。該方法檢測(cè)的準(zhǔn)確率在90以上?？偨Y(jié)兩個(gè)過程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個(gè)“一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法 滅活的病毒一個(gè)新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)單克隆抗體特異性 強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)教學(xué)反饋1.動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)最重要的用途是 （ ）a.克服遠(yuǎn)源雜交不親和 b.制備單克隆抗體c.培育新物種 d.生產(chǎn)雜種細(xì)胞b2.單克隆抗體是由下列哪種細(xì)胞產(chǎn)生的

15、（ ）a.b淋巴細(xì)胞 b.t淋巴細(xì)胞 c.骨髓瘤細(xì)胞 d.雜交瘤細(xì)胞 d3.（多選）1975年米爾斯坦和柯勒成功地獲得了單克隆抗體。下列細(xì)胞中與單克隆抗體的制備有關(guān)的是（ ）a.效應(yīng)b細(xì)胞 bt淋巴細(xì)胞c.骨髓瘤細(xì)胞 d雜交瘤細(xì)胞 a b c db b體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔a ac c 4.下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的實(shí)驗(yàn)方案制備單克隆抗體不能，沒有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無(wú)法獲得產(chǎn)生單一抗體的b淋巴細(xì)胞。(1).該實(shí)驗(yàn)方案的目的是：_(2).該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？(3).a是從小鼠的脾

16、臟中取得_ 該細(xì)胞能夠產(chǎn)生_ 。(4).圖中b為_過程，常用_作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承_的遺傳特性，既能_,又能_。(5).c過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括_培養(yǎng)和_培養(yǎng)兩個(gè)階段，其中_代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。b淋巴細(xì)胞抗體細(xì)胞融合滅活的病毒雙親細(xì)胞分泌抗體無(wú)限增殖原代傳代50課后習(xí)題課后習(xí)題1. 單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和b淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是 （ ）淋巴細(xì)胞 小鼠骨髓瘤細(xì)胞 b淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞a. b.c. d. c2.動(dòng)物細(xì)胞融合和植物原生質(zhì)融合決定于 ( )a.細(xì)胞膜的流動(dòng)性

17、 b細(xì)胞膜的選擇透過性c.細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)性d細(xì)胞質(zhì)酶的活性 a一.選擇題3.“生物導(dǎo)彈”是指 （ ）a.單克隆抗體 b.雜交瘤細(xì)胞c.產(chǎn)生特定抗體的b淋巴細(xì)胞 d.在單克隆抗體上連接抗癌藥物 d4.只能使動(dòng)物細(xì)胞融合的常用誘導(dǎo)方法是 （ ）apeg b滅活的病毒 c電刺激 d離心a二.簡(jiǎn)答題1.淋巴細(xì)胞是由動(dòng)物體-中的-細(xì)胞分化發(fā)育而來(lái)的。2.雜交瘤細(xì)胞從培養(yǎng)基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是-骨髓造血干主動(dòng)運(yùn)輸三.思考與探究1.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)有什么不同？2.制備單克隆抗體時(shí)，為什么要選用b淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞？提示：植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)基

18、本相同，不同的是植物體細(xì)胞融合前需去掉細(xì)胞壁，然后再融合；動(dòng)物細(xì)胞融合是兩個(gè)體細(xì)胞直接融合。 提示：哺乳動(dòng)物感染抗原后，其體內(nèi)會(huì)形成相應(yīng)的b淋巴細(xì)胞，b淋巴細(xì)胞 能分泌相應(yīng)的抗體凝聚或殺死這些抗原。動(dòng)物在免疫反應(yīng)的過程中，每一種b淋巴細(xì)胞能分泌一種特異性抗體，要想獲得大量的特異性抗體，必須使能分泌該單一抗體的b淋巴細(xì)胞大量增殖。b淋巴細(xì)胞具有產(chǎn)生單一抗體的能力，但不能在體外增殖；骨髓瘤細(xì)胞是一種癌細(xì)胞，它能在體外培養(yǎng)條件下無(wú)限增殖，但不能產(chǎn)生抗體。因此，把一種b淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，它會(huì)兼有兩個(gè)親本細(xì)胞的特性在體外培養(yǎng)條件下能不斷增殖，同時(shí)能產(chǎn)生出某種特異性的抗體。

19、 教學(xué)參考教學(xué)參考1.已成功的動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)例還有哪些？ 生物種類 細(xì)胞來(lái)源 成功年代 酵母菌雞 原生質(zhì)體血紅細(xì)胞 1975年人胡蘿卜 腹水癌細(xì)胞原生質(zhì)體 1976年人小鼠 纖維肉瘤細(xì)胞畸胎瘤細(xì)胞 1978年要知道更多的實(shí)例，需經(jīng)常查閱更多科研報(bào)道。2.為什么不用兩個(gè)而要用多個(gè)細(xì)胞進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞間的融合？ 就目前常用的細(xì)胞融合方法來(lái)看，不管是用物理的、化學(xué)的方法，還是生物的方法，其融合率都不可能是100%。僅用兩個(gè)細(xì)胞融合，其效率太低，不一定能得到融合細(xì)胞。更重要的是，即使兩個(gè)細(xì)胞已發(fā)生融合，但并不一定是研究者期望得到的細(xì)胞類型。目前動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)最有價(jià)值的應(yīng)用就是單克隆抗體的制備。我們以制備

20、單克隆抗體為例來(lái)說明這一問題。我們知道，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類可多達(dá)百萬(wàn)種以上，但是每一個(gè)b淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體，如果僅取一個(gè)脾細(xì)胞（含b淋巴細(xì)胞）和一個(gè)瘤細(xì)胞雜交，我們不能確定該脾細(xì)胞分泌的抗體是否正是我們所需要的；若用大量的脾細(xì)胞和瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，就可以從融合細(xì)胞中篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。3.如何進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的抗體檢測(cè)及克隆化培養(yǎng)？ 融合后的細(xì)胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細(xì)胞就是雜交瘤細(xì)胞。但這些雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞，通常用“有限稀釋法”來(lái)選擇。將雜交瘤細(xì)胞稀釋，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超過一個(gè)，通過培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測(cè)各孔上清液中細(xì)

21、胞分泌的抗體（常用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法），那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽(yáng)性孔。陽(yáng)性孔中的細(xì)胞還不能保證是來(lái)自單個(gè)細(xì)胞，挑選陽(yáng)性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋，一般需進(jìn)行34次，直至確信每個(gè)孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。該過程即為雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。單克隆抗體是指單克隆抗體是指 （ ） a單個(gè)骨髓瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的抗體單個(gè)骨髓瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的抗體b單個(gè)單個(gè)b淋巴細(xì)胞增殖產(chǎn)生的抗體淋巴細(xì)胞增殖產(chǎn)生的抗體 c單個(gè)雜交瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的抗體單個(gè)雜交瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的抗體d單個(gè)抗體通過克隆化，產(chǎn)生大量抗體單個(gè)抗體通過克隆化，產(chǎn)生大量抗體c（江蘇高考題，（江蘇高考題，2003）將小鼠骨髓瘤細(xì)胞與一種）將小鼠骨

22、髓瘤細(xì)胞與一種b淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞融合，可使融合的細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)產(chǎn)生單克隆抗體，其依據(jù)是融合，可使融合的細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)產(chǎn)生單克隆抗體，其依據(jù)是（多選）（多選） （ ）ab淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體，但不能無(wú)限增殖淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體，但不能無(wú)限增殖bb淋巴細(xì)胞只有與骨髓瘤細(xì)胞融合后才能產(chǎn)生抗體淋巴細(xì)胞只有與骨髓瘤細(xì)胞融合后才能產(chǎn)生抗體c骨髓瘤細(xì)胞可以無(wú)限增殖，但不能產(chǎn)生抗體骨髓瘤細(xì)胞可以無(wú)限增殖，但不能產(chǎn)生抗體d骨髓瘤細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體，但不能無(wú)限增殖骨髓瘤細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體，但不能無(wú)限增殖ac（2004年高考理綜生物部分（全國(guó)新課程卷年高考理綜生物部分（全國(guó)新課程卷）（河南、湖）（河南、湖北、湖南等）第北、湖南

23、等）第5題）用動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)獲取單克隆抗體，題）用動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)獲取單克隆抗體，下列實(shí)驗(yàn)步驟中錯(cuò)誤的是下列實(shí)驗(yàn)步驟中錯(cuò)誤的是 （ ）a將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的b淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞b用纖維素酶處理用纖維素酶處理b淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞c用聚乙二醇作誘導(dǎo)劑，促使能產(chǎn)生抗體的用聚乙二醇作誘導(dǎo)劑，促使能產(chǎn)生抗體的b淋巴細(xì)胞與小淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓資金積累細(xì)胞融合鼠骨髓資金積累細(xì)胞融合d篩選雜交資金積累細(xì)胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗體的細(xì)篩選雜交資金積累細(xì)胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗體的細(xì)胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體胞群，培養(yǎng)后提取單克

24、隆抗體 b上圖是單克隆抗體制備過程示意圖。據(jù)圖回答：上圖是單克隆抗體制備過程示意圖。據(jù)圖回答：（1）通過）通過過程得到的過程得到的b淋巴細(xì)胞從小鼠體內(nèi)分離出之前，應(yīng)淋巴細(xì)胞從小鼠體內(nèi)分離出之前，應(yīng)對(duì)小鼠進(jìn)行的處理是對(duì)小鼠進(jìn)行的處理是_，該處理的實(shí)質(zhì)是在小，該處理的實(shí)質(zhì)是在小鼠體內(nèi)發(fā)生鼠體內(nèi)發(fā)生_反應(yīng)。反應(yīng)。（2）骨髓瘤細(xì)胞與進(jìn)行原代培養(yǎng)的細(xì)胞相比較，核內(nèi)的結(jié)構(gòu)）骨髓瘤細(xì)胞與進(jìn)行原代培養(yǎng)的細(xì)胞相比較，核內(nèi)的結(jié)構(gòu)發(fā)生的主要變化是發(fā)生的主要變化是_，從而違背了，從而違背了“程序程序性細(xì)胞死亡性細(xì)胞死亡”規(guī)則，打破了細(xì)胞產(chǎn)生與死亡的動(dòng)態(tài)平衡。規(guī)則，打破了細(xì)胞產(chǎn)生與死亡的動(dòng)態(tài)平衡。（3）培養(yǎng)瓶中的雜交瘤

25、細(xì)胞在有絲分裂中期，核內(nèi)）培養(yǎng)瓶中的雜交瘤細(xì)胞在有絲分裂中期，核內(nèi)dna分子分子數(shù)：染色體數(shù)數(shù)：染色體數(shù)=_ _。（4）試設(shè)想運(yùn)用生物工程其它領(lǐng)域的技術(shù)制備單克隆抗體的）試設(shè)想運(yùn)用生物工程其它領(lǐng)域的技術(shù)制備單克隆抗體的一條途徑：一條途徑：_ 。 （1）注射相應(yīng)抗原 體液免疫 （2）遺傳物質(zhì)（原癌基因）發(fā)生了改變 （3） 2：1 （4）運(yùn)用基因工程方法制造含有某種抗體的基因的工程菌進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)。 下圖表示細(xì)胞融合技術(shù)的一些過程，請(qǐng)回答：下圖表示細(xì)胞融合技術(shù)的一些過程，請(qǐng)回答：(1)由由a、b兩種細(xì)胞人工融合成兩種細(xì)胞人工融合成c細(xì)胞的過程中，常用細(xì)胞的過程中，常用作為誘導(dǎo)劑。融合過程包括作為誘導(dǎo)

26、劑。融合過程包括和和兩方面，兩方面，d細(xì)胞稱為細(xì)胞稱為 細(xì)胞。細(xì)胞。(2)若由若由d細(xì)胞培育成植株，可用細(xì)胞培育成植株，可用技術(shù)，這一培養(yǎng)過程技術(shù)，這一培養(yǎng)過程要經(jīng)過要經(jīng)過和和兩個(gè)階段。目前，植兩個(gè)階段。目前，植物體細(xì)胞雜交還有許多理論和技術(shù)問題沒有解決，如雜種物體細(xì)胞雜交還有許多理論和技術(shù)問題沒有解決，如雜種植物還不能按照人們的需要表現(xiàn)出親代的優(yōu)良性狀，從遺植物還不能按照人們的需要表現(xiàn)出親代的優(yōu)良性狀，從遺傳學(xué)角度分析，其內(nèi)在因素很可能是傳學(xué)角度分析，其內(nèi)在因素很可能是 。(3)如需制備單克隆抗體，則如需制備單克隆抗體，則d細(xì)胞應(yīng)具有細(xì)胞應(yīng)具有 和和 的能力。的能力。 (1) peg(聚乙二

27、醇聚乙二醇)(或滅活的病毒或滅活的病毒) 膜融合膜融合 核融合核融合 雜種雜種(2)植物細(xì)胞培養(yǎng)脫分化再分化控制優(yōu)良性狀的植物細(xì)胞培養(yǎng)脫分化再分化控制優(yōu)良性狀的基因還不能表達(dá)基因還不能表達(dá)(3)分泌特異性抗體大量增殖分泌特異性抗體大量增殖（廣東卷）（廣東卷）5、關(guān)于單克隆抗體，下列敘述不、關(guān)于單克隆抗體，下列敘述不正確的是（正確的是（ ）a、可以制成診斷盒用于疾病的珍斷、可以制成診斷盒用于疾病的珍斷 b、可以與藥物結(jié)合，用于病變細(xì)胞的定向治、可以與藥物結(jié)合，用于病變細(xì)胞的定向治療療 c、可以利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)、可以利用基因工程技術(shù)生產(chǎn) d、可以在生物體內(nèi)生產(chǎn)，不能體外生產(chǎn)、可以在生物體內(nèi)生產(chǎn)，不能體外生產(chǎn)d變式訓(xùn)練變式訓(xùn)練生產(chǎn)單克隆抗體時(shí)，要在培養(yǎng)液中加入某種試生產(chǎn)單克隆抗體時(shí)，要在培養(yǎng)液中加入某種試劑才能篩選出雜交瘤細(xì)胞，因?yàn)樵撛噭﹦┎拍芎Y選出雜交瘤細(xì)胞，因?yàn)樵撛噭?a能抑制淋巴細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞的能抑制淋巴細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞的dna復(fù)制復(fù)制 b能阻止淋巴細(xì)胞的原癌基因被激活能阻止淋巴細(xì)胞的原癌基因被激活 c選擇性抑制骨髓瘤細(xì)胞的選擇性抑制骨髓瘤細(xì)胞的dna復(fù)制復(fù)制 d能阻止雜交瘤細(xì)胞核糖體上所有蛋白質(zhì)的合能阻止雜交瘤細(xì)胞核糖體上所有蛋白質(zhì)的合成成（3）將分離出的雜種細(xì)胞在不同的）將分離出的雜種細(xì)胞在不同的條件下繼續(xù)培養(yǎng)，獲得條件下繼續(xù)培養(yǎng)，獲得a、b