C5凝集反應(yīng)zx

1、年代年代學(xué)者學(xué)者貢獻(xiàn)貢獻(xiàn)18941894J. BordetJ. Bordet補(bǔ)體與溶菌活性補(bǔ)體與溶菌活性18961896H. Durham, M. von GruberH. Durham, M. von Gruber特異凝集反應(yīng)特異凝集反應(yīng)18961896G. Widal, A. SicadG. Widal, A. Sicad肥達(dá)試驗(yàn)肥達(dá)試驗(yàn)18971897R. KrausR. Kraus沉淀試驗(yàn)沉淀試驗(yàn)19001900J. Bordet, O. GengouJ. Bordet, O. Gengou補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)19001900K. LandsteinerK. Landsteiner

2、人類人類ABOABO血型及其抗體血型及其抗體19061906A. WassermannA. Wassermann梅毒補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)梅毒補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)19351935M. Heidelberger, F. KendallM. Heidelberger, F. Kendall純化抗體純化抗體, ,定量沉淀反應(yīng)定量沉淀反應(yīng)19411941A. CoonsA. Coons免疫熒光標(biāo)記免疫熒光標(biāo)記19461946J. OudinJ. Oudin凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)19481948O. Ouchterlony, S. ElekO. Ouchterlony, S. Elek雙擴(kuò)散沉淀反應(yīng)雙擴(kuò)散沉淀反應(yīng)1

3、9531953P. Grabar, C. WilliamsP. Grabar, C. Williams免疫電泳分析免疫電泳分析,Ig,Ig多樣性多樣性19601960R. Yallow, S. BersonR. Yallow, S. Berson放射免疫標(biāo)記放射免疫標(biāo)記19661966S. Avrames, J. Uriel, et alS. Avrames, J. Uriel, et al酶標(biāo)免疫技術(shù)酶標(biāo)免疫技術(shù)19751975G. Kohler, C. MilsteinG. Kohler, C. Milstein雜交瘤技術(shù)與單克隆抗體雜交瘤技術(shù)與單克隆抗體免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展史免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展

4、史指顆指顆粒性抗原粒性抗原(細(xì)菌、細(xì)胞等細(xì)菌、細(xì)胞等)與相應(yīng)的抗體，或與相應(yīng)的抗體，或可溶性抗原（亦可用抗體）吸附于與免疫無(wú)可溶性抗原（亦可用抗體）吸附于與免疫無(wú)關(guān)的載體形成致敏顆粒（免疫微球）與相應(yīng)關(guān)的載體形成致敏顆粒（免疫微球）與相應(yīng)的抗體（或抗原），在適量電解質(zhì)存在下發(fā)的抗體（或抗原），在適量電解質(zhì)存在下發(fā)生特異性反應(yīng)，形成肉眼可見(jiàn)生特異性反應(yīng)，形成肉眼可見(jiàn)凝集凝集現(xiàn)象?，F(xiàn)象。1896, Widal，診斷傷寒病。，診斷傷寒病。1900,Landsteiner:ABO血型，血型，1930年年 Nobel Prize?！緫?yīng)用應(yīng)用】廣泛用于細(xì)菌的鑒定和分型、抗原廣泛用于細(xì)菌的鑒定和分型、抗原分

5、析、測(cè)定抗體和診斷疾病等臨床檢驗(yàn)。分析、測(cè)定抗體和診斷疾病等臨床檢驗(yàn)。1 1 、抗原性質(zhì)：顆粒性抗原或可溶性抗原、抗原性質(zhì)：顆粒性抗原或可溶性抗原致敏顆粒致敏顆粒2 2、 特異性特異性3 3、 階段性：反應(yīng)分兩個(gè)階段階段性：反應(yīng)分兩個(gè)階段（1 1）結(jié)合）結(jié)合（2 2）出現(xiàn)凝集塊）出現(xiàn)凝集塊1） 玻片凝集試驗(yàn)：玻片凝集試驗(yàn)：試驗(yàn)試驗(yàn)2） 試管凝集試驗(yàn)：試管凝集試驗(yàn)：（效價(jià)）試驗(yàn)（效價(jià)）試驗(yàn) 肥達(dá)試驗(yàn)（肥達(dá)試驗(yàn)（Widal test） 外斐試驗(yàn)（外斐試驗(yàn)（Weil-Felix test） 交叉配血交叉配血定性試驗(yàn)定性試驗(yàn)1 1）鑒定細(xì)菌：用已知抗體作為診斷血清來(lái)）鑒定細(xì)菌：用已知抗體作為診斷血清來(lái)

6、診斷相應(yīng)抗原，適用于從病人標(biāo)本中分離得診斷相應(yīng)抗原，適用于從病人標(biāo)本中分離得到的菌種的診斷或分型。到的菌種的診斷或分型。 陰性陰性陽(yáng)性陽(yáng)性抗抗A A抗抗B B1%1%血球血球2）ABO血型鑒定血型鑒定人類人類ABO血型鑒定試驗(yàn)結(jié)果示意圖血型鑒定試驗(yàn)結(jié)果示意圖AB陰性陰性陽(yáng)性陽(yáng)性 在微生物學(xué)檢驗(yàn)中常用已知細(xì)菌在微生物學(xué)檢驗(yàn)中常用已知細(xì)菌作為抗原液與一系列稀釋的受檢血清作為抗原液與一系列稀釋的受檢血清混合，保溫后觀察每管內(nèi)抗原凝集程混合，保溫后觀察每管內(nèi)抗原凝集程度，通常度，通常作為血清中抗體的作為血清中抗體的，亦稱，亦稱為為。 方法：方法： 1）倍比稀釋待檢血清：）倍比稀釋待檢血清：1：20待檢

7、血清待檢血清生理鹽水生理鹽水ml 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 稀釋梯度稀釋梯度 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml試管凝集試驗(yàn)試管凝集試驗(yàn) + + + + + + - + -試管號(hào)試管號(hào)1 2 3 4 5 6 7 8 91 2 3 4 5 6 7 8 9血清稀釋血清稀釋1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 菌液菌液每管每管0.5ml0.5ml最終稀釋倍數(shù)

8、最終稀釋倍數(shù)1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 凝集現(xiàn)象凝集現(xiàn)象+ + + + + + + + + + + + - - + + - - 稀釋梯度稀釋梯度 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640假設(shè)結(jié)果假設(shè)結(jié)果 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + - + + - - - 將將（或抗體）吸附于適當(dāng)大小的顆（或抗體）吸附于適當(dāng)大小的顆粒性載體表面，再與相應(yīng)

9、抗體（或抗原）作用，粒性載體表面，再與相應(yīng)抗體（或抗原）作用，在適宜電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)特異性凝集在適宜電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)特異性凝集現(xiàn)象?，F(xiàn)象。致敏顆粒致敏顆粒相應(yīng)抗體（抗原）相應(yīng)抗體（抗原）抗原（抗體）抗原（抗體）+ + 載體載體常用載體：醛化紅細(xì)胞、聚苯乙烯膠乳顆粒常用載體：醛化紅細(xì)胞、聚苯乙烯膠乳顆粒1）正向間接凝集試驗(yàn)：）正向間接凝集試驗(yàn)：測(cè)測(cè)Ab, 如類風(fēng)濕因子如類風(fēng)濕因子2）反向間接凝集試驗(yàn)：）反向間接凝集試驗(yàn)：測(cè)測(cè)Ag, 如如AFP 3）間接凝集抑制試驗(yàn)）間接凝集抑制試驗(yàn)4）協(xié)同凝集試驗(yàn)（）協(xié)同凝集試驗(yàn)（coagglutination）：）： SPA-IgG Fc段段-

10、Ag【應(yīng)用應(yīng)用】用抗原致敏載體以檢測(cè)標(biāo)本中的用抗原致敏載體以檢測(cè)標(biāo)本中的 相應(yīng)抗體。相應(yīng)抗體。 載載體體待檢性待檢性抗原抗原已知已知抗體抗體【應(yīng)用應(yīng)用】用特異性抗體致敏載體以檢測(cè)標(biāo)本中用特異性抗體致敏載體以檢測(cè)標(biāo)本中 的相應(yīng)抗原。的相應(yīng)抗原。 【應(yīng)用應(yīng)用】診斷試劑為抗原致敏的顆粒載體及相診斷試劑為抗原致敏的顆粒載體及相應(yīng)的抗體，用于檢測(cè)標(biāo)本中是否存在與致敏抗應(yīng)的抗體，用于檢測(cè)標(biāo)本中是否存在與致敏抗原相同的抗原；同理可用抗體致敏的載體及相原相同的抗原；同理可用抗體致敏的載體及相應(yīng)的抗原作為診斷試劑，以檢測(cè)標(biāo)本中的抗體應(yīng)的抗原作為診斷試劑，以檢測(cè)標(biāo)本中的抗體 葡萄球菌葡萄球菌SPA IgG抗體抗體

11、抗原抗原三、間接血凝試驗(yàn)三、間接血凝試驗(yàn)以紅細(xì)胞為載體以紅細(xì)胞為載體抗核抗體、類風(fēng)濕因子抗核抗體、類風(fēng)濕因子反應(yīng)中的紅細(xì)胞是反應(yīng)中的紅細(xì)胞是未經(jīng)致敏的受檢者新鮮紅未經(jīng)致敏的受檢者新鮮紅細(xì)胞細(xì)胞。主要試劑材料為抗人主要試劑材料為抗人O型紅細(xì)胞的單克隆抗體型紅細(xì)胞的單克隆抗體反應(yīng)中的標(biāo)本為受檢者的全血。反應(yīng)中的標(biāo)本為受檢者的全血。自身紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)自身紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)四、膠乳凝集試驗(yàn)四、膠乳凝集試驗(yàn)五五. .明膠凝集試驗(yàn)：以粉紅色明膠為載體明膠凝集試驗(yàn)：以粉紅色明膠為載體檢測(cè)抗紅細(xì)胞不完全抗體的一種方法檢測(cè)抗紅細(xì)胞不完全抗體的一種方法 凝集反應(yīng)中凝集反應(yīng)中IgMIgM的作用比的作用比IgGIgG大數(shù)

12、百倍大數(shù)百倍IgGIgG與抗原結(jié)合后，常不出現(xiàn)凝集反應(yīng)，與抗原結(jié)合后，常不出現(xiàn)凝集反應(yīng)，稱不完全抗體稱不完全抗體第第三三節(jié)節(jié) 抗球蛋白試驗(yàn)抗球蛋白試驗(yàn)（Coombs試驗(yàn)）試驗(yàn)）【原理原理】利用抗球蛋利用抗球蛋白抗體為第二抗體達(dá)白抗體為第二抗體達(dá)到橋梁作用，連接紅到橋梁作用，連接紅細(xì)胞表面抗原結(jié)合的細(xì)胞表面抗原結(jié)合的特異性抗體，使紅細(xì)特異性抗體，使紅細(xì)胞凝集。胞凝集。類型：類型：（1） 直接直接Coombs試驗(yàn)：檢測(cè)紅細(xì)胞上的試驗(yàn)：檢測(cè)紅細(xì)胞上的不完全抗體。不完全抗體。（2）間接）間接Coombs試驗(yàn)：檢測(cè)游離在血清試驗(yàn)：檢測(cè)游離在血清中的不完全抗體中的不完全抗體 抗球蛋白參與的間接血凝試驗(yàn)抗球

13、蛋白參與的間接血凝試驗(yàn)（Coombs試驗(yàn)）試驗(yàn)）（一）直接（一）直接CoombsCoombs試驗(yàn)試驗(yàn)不完全抗體不完全抗體檢測(cè)紅細(xì)胞上抗體檢測(cè)紅細(xì)胞上抗體（二）（二）間接間接CoombsCoombs試驗(yàn)試驗(yàn)檢測(cè)血清中的抗紅細(xì)胞抗體檢測(cè)血清中的抗紅細(xì)胞抗體Rh陽(yáng)性陽(yáng)性 O型紅細(xì)胞型紅細(xì)胞* *輸血前的配血試驗(yàn)：不完全抗體輸血前的配血試驗(yàn)：不完全抗體* *血型抗原抗體的檢查血型抗原抗體的檢查* *新生兒溶血性貧血性疾病的診斷新生兒溶血性貧血性疾病的診斷* *溶血性貧血的研究溶血性貧血的研究* *對(duì)細(xì)菌或立克次體的不完全抗體的檢查對(duì)細(xì)菌或立克次體的不完全抗體的檢查Coombs試驗(yàn)應(yīng)用試驗(yàn)應(yīng)用可溶性抗原

14、（如多糖、蛋白質(zhì)、類可溶性抗原（如多糖、蛋白質(zhì)、類脂等）與相應(yīng)抗體在適量電解質(zhì)存在下發(fā)生脂等）與相應(yīng)抗體在適量電解質(zhì)存在下發(fā)生特異性結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的沉淀現(xiàn)象。特異性結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的沉淀現(xiàn)象。1898，Kraus首次發(fā)現(xiàn)毒素首次發(fā)現(xiàn)毒素-抗毒素的沉淀抗毒素的沉淀現(xiàn)象。現(xiàn)象。1.抗原性質(zhì)：抗原性質(zhì)：2.特異性：特異性：3.階段性：階段性：（1）Ab與相應(yīng)可溶性與相應(yīng)可溶性Ag發(fā)生特異性結(jié)合發(fā)生特異性結(jié)合（2）形成可見(jiàn)現(xiàn)象：沉淀線（環(huán)）形成可見(jiàn)現(xiàn)象：沉淀線（環(huán)）（一）液體內(nèi)沉淀試驗(yàn)（一）液體內(nèi)沉淀試驗(yàn)（二）凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)（二）凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)( (瓊脂糖瓊脂糖) )（三）凝膠免疫電泳試驗(yàn)（三）

15、凝膠免疫電泳試驗(yàn) 以含鹽緩沖液為反應(yīng)介質(zhì)的抗原抗體特異以含鹽緩沖液為反應(yīng)介質(zhì)的抗原抗體特異性結(jié)合的沉淀試驗(yàn)。性結(jié)合的沉淀試驗(yàn)。環(huán)狀沉淀環(huán)狀沉淀絮狀沉淀絮狀沉淀免疫濁度測(cè)定免疫濁度測(cè)定【原理原理】將抗原溶液與相應(yīng)抗體溶液混合，將抗原溶液與相應(yīng)抗體溶液混合，在電解質(zhì)存在的條件下，抗原與抗體結(jié)合出在電解質(zhì)存在的條件下，抗原與抗體結(jié)合出現(xiàn)可見(jiàn)的現(xiàn)可見(jiàn)的絮狀沉淀絮狀沉淀?！緫?yīng)用應(yīng)用】測(cè)定抗原抗體反應(yīng)的測(cè)定抗原抗體反應(yīng)的最適比最適比?！痉椒ǚ椒ā?.抗原稀釋法：抗原最適比例抗原稀釋法：抗原最適比例2.抗體稀釋法：抗體最適比例抗體稀釋法：抗體最適比例3.方陣滴定法：抗原抗體最適比例方陣滴定法：抗原抗體最適比

16、例 是將現(xiàn)代光學(xué)測(cè)量?jī)x器與自動(dòng)分析是將現(xiàn)代光學(xué)測(cè)量?jī)x器與自動(dòng)分析檢測(cè)系統(tǒng)相結(jié)合應(yīng)用于沉淀反應(yīng)，可對(duì)各種液檢測(cè)系統(tǒng)相結(jié)合應(yīng)用于沉淀反應(yīng)，可對(duì)各種液體介質(zhì)中的微量抗原、抗體和藥物及其他小分體介質(zhì)中的微量抗原、抗體和藥物及其他小分子半抗原物質(zhì)進(jìn)行子半抗原物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定?！驹碓怼慨?dāng)可溶性抗原與相應(yīng)的抗體特異結(jié)當(dāng)可溶性抗原與相應(yīng)的抗體特異結(jié)合在兩者比例合適時(shí)，在特殊的緩沖液中快合在兩者比例合適時(shí)，在特殊的緩沖液中快速形成一定大小的速形成一定大小的，使反應(yīng)，使反應(yīng)液出現(xiàn)液出現(xiàn)。1.1.基本原則：基本原則：在反應(yīng)體系中保持在反應(yīng)體系中保持，遵循海德堡曲線，遵循海德堡曲線，避免高劑量避免高劑量。2.抗

17、體的質(zhì)量：特異性強(qiáng)、效價(jià)高、親和力抗體的質(zhì)量：特異性強(qiáng)、效價(jià)高、親和力強(qiáng)、抗體來(lái)源（強(qiáng)、抗體來(lái)源（R型抗體）等。型抗體）等。3.反應(yīng)溶液：反應(yīng)溶液：pH6.58.5/磷酸鹽緩沖液。磷酸鹽緩沖液。4.增濁劑：增濁劑：PEG/吐溫吐溫-20。（1）透射比濁法）透射比濁法（2）散射比濁法）散射比濁法 終點(diǎn)散射比濁法、終點(diǎn)散射比濁法、 固定時(shí)間散射比濁法、固定時(shí)間散射比濁法、 速率散射比濁法速率散射比濁法（3）免疫乳膠比濁法）免疫乳膠比濁法將可溶性抗原與相應(yīng)抗體分別放入將可溶性抗原與相應(yīng)抗體分別放入凝膠內(nèi)凝膠內(nèi)進(jìn)行擴(kuò)散，兩者在比例合適的位置形進(jìn)行擴(kuò)散，兩者在比例合適的位置形成肉眼可見(jiàn)的沉淀線或沉淀環(huán)。

18、成肉眼可見(jiàn)的沉淀線或沉淀環(huán)?！痉椒ǚ椒ā?.單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) 2.雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)最常用凝膠：最常用凝膠：又稱單向輻射狀免疫擴(kuò)散（又稱單向輻射狀免疫擴(kuò)散（SRID）。）。沉淀環(huán)直徑或面積大小與抗原量呈正相關(guān)，同沉淀環(huán)直徑或面積大小與抗原量呈正相關(guān)，同時(shí)還和分子量和擴(kuò)散時(shí)間有關(guān)。時(shí)還和分子量和擴(kuò)散時(shí)間有關(guān)。環(huán)的直徑與環(huán)的直徑與抗原含量成抗原含量成正相關(guān)正相關(guān)沉淀環(huán)沉淀環(huán)1965年，年，Mancini 建立。建立。 ：適用于大分子抗原和長(zhǎng)時(shí)：適用于大分子抗原和長(zhǎng)時(shí)間擴(kuò)散（間擴(kuò)散（48h） C/d2K ：適用于小分子抗原和長(zhǎng)時(shí)間：適用于小分子抗原和長(zhǎng)時(shí)間擴(kuò)散（擴(kuò)散（2

19、4h） logC/d KT T1 1為為16162424h h；T T2 2為為24244848h h；T T3 3為為4848h h以以上上, ,可見(jiàn)可見(jiàn)T T3 3為直線，為直線，T T1 1為反拋物線為反拋物線t t1 1為為16162424h h；t t2 2為為24244848h h；t t3 3為為4848h h以上以上, ,可見(jiàn)可見(jiàn)t t1 1為直線，為直線，t t3 3為反拋物線為反拋物線ManciniMancini曲線曲線FaheyFahey曲線曲線【應(yīng)用應(yīng)用】曾用于曾用于IgG、gM、IgA、C3、C4、轉(zhuǎn)鐵蛋白、抗胰蛋白酶、糖蛋白和前白蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白、抗胰蛋白酶、糖蛋白和前

20、白蛋白等多種血漿蛋白。等多種血漿蛋白。僅針對(duì)某待測(cè)抗原的單價(jià)特異抗血清；僅針對(duì)某待測(cè)抗原的單價(jià)特異抗血清；已知含量的標(biāo)準(zhǔn)品；已知含量的標(biāo)準(zhǔn)品；待測(cè)樣品含量在待測(cè)樣品含量在1.25g/ml1.25g/ml以上以上1、抗體質(zhì)量、抗體質(zhì)量2、標(biāo)準(zhǔn)曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線 ，質(zhì)控血清，質(zhì)控血清3、結(jié)果與真實(shí)含量不符、結(jié)果與真實(shí)含量不符單克隆抗體；多克隆抗體；可出現(xiàn)假性降單克隆抗體；多克隆抗體；可出現(xiàn)假性降低與增高低與增高 4、雙環(huán)現(xiàn)象、雙環(huán)現(xiàn)象不同擴(kuò)散率抗原性相同的兩個(gè)組分不同擴(kuò)散率抗原性相同的兩個(gè)組分 將抗原和抗體分別放入凝膠將抗原和抗體分別放入凝膠的對(duì)應(yīng)孔中，讓兩者自由擴(kuò)散，當(dāng)兩者比例的對(duì)應(yīng)孔中，讓兩者自由

21、擴(kuò)散，當(dāng)兩者比例合適發(fā)生結(jié)合時(shí)形成白色沉淀線。是合適發(fā)生結(jié)合時(shí)形成白色沉淀線。是抗原抗抗原抗體鑒定的最基本方法之一體鑒定的最基本方法之一1 1、檢測(cè)抗原、檢測(cè)抗原/ /抗體存在與否及估算其相對(duì)含量抗體存在與否及估算其相對(duì)含量 2 2、分析抗原或抗體相對(duì)分子量、分析抗原或抗體相對(duì)分子量相對(duì)含量相對(duì)含量 3 3、分析抗原的性質(zhì)、分析抗原的性質(zhì)1:4Ag1:21:81:161:321:645.抗原或抗體純度的鑒定抗原或抗體純度的鑒定優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 1. 1.加快反應(yīng)的速度。加快反應(yīng)的速度。 2. 2.提高了靈敏度。提高了靈敏度。3.3.增加了分辨率。增加了分辨率。 電泳分析電泳分析沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)免疫

22、電泳技術(shù)類型免疫電泳技術(shù)類型對(duì)流免疫電泳（對(duì)流免疫電泳（CIEP）：雙向擴(kuò)散）：雙向擴(kuò)散 + 電泳電泳火箭免疫電泳（火箭免疫電泳（RIE）：?jiǎn)蜗驍U(kuò)散）：?jiǎn)蜗驍U(kuò)散 + 電泳電泳免疫電泳（免疫電泳（IE）：區(qū)帶電泳）：區(qū)帶電泳 + 免疫雙擴(kuò)散免疫雙擴(kuò)散免疫固定電泳（免疫固定電泳（IFE） ：區(qū)帶電泳：區(qū)帶電泳 + 免疫沉淀免疫沉淀 一、一、 對(duì)流免疫電泳對(duì)流免疫電泳(counter immunoelectrophoresis,CLEP)【原理原理】定向加速電泳定向加速電泳+ +雙向免疫擴(kuò)散雙向免疫擴(kuò)散抗原：置陰極，通電后向陽(yáng)極泳動(dòng)抗原：置陰極，通電后向陽(yáng)極泳動(dòng) 抗體：解離少，分子量大，加上電滲作用

23、，抗體：解離少，分子量大，加上電滲作用， 負(fù)極泳動(dòng)。負(fù)極泳動(dòng)。pH8.4結(jié)果分析：結(jié)果分析：無(wú)沉淀線出現(xiàn)則表明無(wú)相無(wú)沉淀線出現(xiàn)則表明無(wú)相應(yīng)的抗原。應(yīng)的抗原。沉淀線位于抗原抗體孔中沉淀線位于抗原抗體孔中間，說(shuō)明兩者比例較適合。間，說(shuō)明兩者比例較適合。沉淀線偏向抗原孔一方，沉淀線偏向抗原孔一方，表示抗體濃度抗原，反表示抗體濃度抗原，反之，則是抗體濃度抗原之，則是抗體濃度抗原濃度。濃度。對(duì)流免疫電泳對(duì)流免疫電泳（1）簡(jiǎn)便、快速、敏感度較雙擴(kuò)提高）簡(jiǎn)便、快速、敏感度較雙擴(kuò)提高816倍，可倍，可測(cè)蛋白質(zhì)濃度達(dá)測(cè)蛋白質(zhì)濃度達(dá) ug/ml。 （2）要求抗原、抗體比例嚴(yán)格，盡可能使用高效價(jià)）要求抗原、抗體比例

24、嚴(yán)格，盡可能使用高效價(jià)免疫血清，必要時(shí)對(duì)待檢樣品采用不同稀釋度免疫血清，必要時(shí)對(duì)待檢樣品采用不同稀釋度 （3）不適宜抗原抗體都是球蛋白的檢測(cè)）不適宜抗原抗體都是球蛋白的檢測(cè) 。（4）由于電滲的緣故，）由于電滲的緣故，【 CIEP方法評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià)】含抗體的凝膠含抗體的凝膠加入抗原加入抗原 若抗體濃度保持不變，峰的高度與抗原量呈正若抗體濃度保持不變，峰的高度與抗原量呈正比，抗原含量越高，火箭峰越長(zhǎng)；反之亦然。比，抗原含量越高，火箭峰越長(zhǎng)；反之亦然。 （1） 定性：直接觀察、染色定性：直接觀察、染色 （2） 定量：根據(jù)峰高定量：根據(jù)峰高-濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算 （3）為提高靈敏度，可加入少

25、量）為提高靈敏度，可加入少量標(biāo)記的標(biāo)準(zhǔn)抗原標(biāo)記的標(biāo)準(zhǔn)抗原共同電泳，則可在含抗體的瓊脂中形成不可見(jiàn)的火共同電泳，則可在含抗體的瓊脂中形成不可見(jiàn)的火箭峰，采用箭峰，采用。根據(jù)自顯影火箭峰降。根據(jù)自顯影火箭峰降低的程度（競(jìng)爭(zhēng)法）可計(jì)算出抗原的濃度。低的程度（競(jìng)爭(zhēng)法）可計(jì)算出抗原的濃度。 【結(jié)果判定結(jié)果判定】 1.1.瓊脂（無(wú)電滲或電滲很小的）影響火箭形狀瓊脂（無(wú)電滲或電滲很小的）影響火箭形狀不規(guī)則。不規(guī)則。2.2.電泳終點(diǎn)時(shí)間的確定。電泳終點(diǎn)時(shí)間的確定。3.3.標(biāo)本數(shù)量多時(shí)應(yīng)先通電后加樣標(biāo)本數(shù)量多時(shí)應(yīng)先通電后加樣, ,防止寬底峰形防止寬底峰形. .4.IgG4.IgG定量時(shí)，可用甲醛與定量時(shí)，可用甲

26、醛與IgGIgG上的氨基結(jié)合上的氨基結(jié)合（甲?；?，抵消了電滲作用。（甲?；?，抵消了電滲作用?！居绊懸蛩赜绊懸蛩亍坑捎陔姖B的緣故，目前已不推薦使用。由于電滲的緣故，目前已不推薦使用。1. Ag分離分離2. 槽內(nèi)加入抗血清（槽內(nèi)加入抗血清（Ab）3. Ag-Ab擴(kuò)散和沉淀擴(kuò)散和沉淀- -+ +免疫電泳示意圖免疫電泳示意圖【方法評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià)】（1）分辨率高）分辨率高 （2）僅定性）僅定性 （3）耗時(shí)（）耗時(shí)（1824h）、結(jié)果不易分析）、結(jié)果不易分析（4）沉淀線的數(shù)目和分辨率受許多因素影響。）沉淀線的數(shù)目和分辨率受許多因素影響。 （5）目前大量應(yīng)用于純化抗原和抗體成分的分）目前大量應(yīng)用于純化抗原

27、和抗體成分的分析及正常和異常體液蛋白的識(shí)別等方面。析及正常和異常體液蛋白的識(shí)別等方面。區(qū)帶電泳區(qū)帶電泳 + + 免疫沉淀免疫沉淀 類似免疫電泳，不同之處是類似免疫電泳，不同之處是將抗血清直接將抗血清直接加于電泳后蛋白質(zhì)區(qū)帶表面加于電泳后蛋白質(zhì)區(qū)帶表面，或?qū)⒔锌寡?，或?qū)⒔锌寡宓臑V紙貼于其上，抗原與對(duì)應(yīng)抗體直接發(fā)生沉的濾紙貼于其上，抗原與對(duì)應(yīng)抗體直接發(fā)生沉淀反應(yīng)，形成的復(fù)合物嵌于固相支持物中。淀反應(yīng)，形成的復(fù)合物嵌于固相支持物中。區(qū)帶電泳區(qū)帶電泳 + + 免疫沉淀免疫沉淀 將未結(jié)合的游離抗原或抗體洗去，則僅將未結(jié)合的游離抗原或抗體洗去，則僅保留被結(jié)合固定的某種蛋白。因不同抗原電保留被結(jié)合固

28、定的某種蛋白。因不同抗原電泳移動(dòng)距離不同，染色后通過(guò)著色帶了解到泳移動(dòng)距離不同，染色后通過(guò)著色帶了解到某一抗原的存在。某一抗原的存在。 區(qū)帶電泳支持物選用濾紙、醋纖膜、瓊區(qū)帶電泳支持物選用濾紙、醋纖膜、瓊脂或聚丙烯酰胺皆可。脂或聚丙烯酰胺皆可。 待檢蛋白電泳待檢蛋白電泳 貼浸有抗血清的濾紙貼浸有抗血清的濾紙 抗原與對(duì)應(yīng)抗體反應(yīng)抗原與對(duì)應(yīng)抗體反應(yīng) 沉淀沉淀 漂洗漂洗 染色染色 某一抗原的存在某一抗原的存在? ? 左圖為左圖為IgG IgG 型型, , 中圖為中圖為IgG IgG 型，右為正常型，右為正常 SP G AM SP G AM SPG AM 免疫固定電泳示意圖免疫固定電泳示意圖（1）:

29、整個(gè)操作過(guò)程僅需1.5一2h， （免疫電泳需要過(guò)夜孵育）（2）：能檢測(cè)到50一150mg/dl含量的單克隆蛋白。（免疫電泳：1g/dl。） （3）:利用非常短的電泳移動(dòng)距離分離出單克隆組分。 （4）:通過(guò)抗原抗體在凝膠內(nèi)的沉淀模式直接對(duì)照常規(guī)電泳模式分析。最常用于血清最常用于血清M蛋白的檢測(cè)蛋白的檢測(cè)也可用于尿液本周蛋白的檢測(cè)與也可用于尿液本周蛋白的檢測(cè)與、分型分型腦脊液中寡克隆蛋白的檢測(cè)與分型腦脊液中寡克隆蛋白的檢測(cè)與分型其他體液標(biāo)本中蛋白異常表達(dá)其他體液標(biāo)本中蛋白異常表達(dá)凝集反應(yīng)的臨床應(yīng)用凝集反應(yīng)的臨床應(yīng)用 抗原的檢測(cè)抗原的檢測(cè) HCGHCG檢測(cè)、檢測(cè)、ABOABO血型鑒定、微生物的檢測(cè)等

30、血型鑒定、微生物的檢測(cè)等 抗體的檢測(cè)抗體的檢測(cè) 交叉配血、測(cè)微生物感染后的抗體、自身抗體交叉配血、測(cè)微生物感染后的抗體、自身抗體檢測(cè)等檢測(cè)等 沉淀反應(yīng)的應(yīng)用沉淀反應(yīng)的應(yīng)用1.1.主要用于血液、體液中蛋白質(zhì)的測(cè)定。主要用于血液、體液中蛋白質(zhì)的測(cè)定。2.2.優(yōu)點(diǎn)：穩(wěn)定性好，敏感度高，精確度高，簡(jiǎn)便快優(yōu)點(diǎn)：穩(wěn)定性好，敏感度高，精確度高，簡(jiǎn)便快速，易于自動(dòng)化，無(wú)放射性核素污染，適合大批量速，易于自動(dòng)化，無(wú)放射性核素污染，適合大批量標(biāo)本檢測(cè)。標(biāo)本檢測(cè)。3.3.對(duì)流免疫電泳與火箭免疫電泳技術(shù)由于電滲的緣對(duì)流免疫電泳與火箭免疫電泳技術(shù)由于電滲的緣故已不推薦使用。故已不推薦使用。4.4.免疫電泳擴(kuò)散時(shí)間長(zhǎng)，影

31、響因素多，結(jié)果不易分免疫電泳擴(kuò)散時(shí)間長(zhǎng)，影響因素多，結(jié)果不易分析。析。5.5.免疫固定電泳分辨力強(qiáng)，敏感度高，結(jié)果易于分免疫固定電泳分辨力強(qiáng)，敏感度高，結(jié)果易于分析，常用于析，常用于M M蛋白的鑒定與分型。蛋白的鑒定與分型。 u掌握：掌握：?jiǎn)蜗驍U(kuò)散試驗(yàn)（平板法）、雙向擴(kuò)散試驗(yàn)（平板法）單向擴(kuò)散試驗(yàn)（平板法）、雙向擴(kuò)散試驗(yàn)（平板法）的基本原理、結(jié)果判斷及影響因素，免疫濁度測(cè)定基本原理的基本原理、結(jié)果判斷及影響因素，免疫濁度測(cè)定基本原理及臨床應(yīng)用，沉淀反應(yīng)和凝集反應(yīng)的基本區(qū)別。免疫電泳技及臨床應(yīng)用，沉淀反應(yīng)和凝集反應(yīng)的基本區(qū)別。免疫電泳技術(shù)原理；免疫固定電泳、免疫電泳的原理和方法。術(shù)原理；免疫固定電泳、免疫電泳的原理和方法。u熟悉：熟悉：沉淀反應(yīng)的概念、絮狀沉淀試驗(yàn)的基本原理。火箭免沉淀反應(yīng)的概念、絮狀沉淀試驗(yàn)的基本原理。火箭免疫電泳的原理