診斷學(xué)基礎(chǔ)第十七章臨床常用免疫學(xué)檢查

1、第十七章 臨床常用免疫學(xué)檢查一、血清免疫球蛋白測定【原理】 免疫球蛋白（immunoglobulin, Ig）是一組具有抗體活性的球蛋白，由B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后增殖分化形成的漿細(xì)胞合成和分泌，存在于人體的血液、體液、外分泌液及某些細(xì)胞（如淋巴細(xì)胞）膜上。應(yīng)用免疫電泳和超速離心分析，可將Ig分為IgG 、IgA 、IgM 、IgD 和IgE 五類。IgG 主要由脾臟和淋巴結(jié)中漿細(xì)胞合成與分泌，約占血清中Ig的7080%，是唯一能夠通過胎盤的Ig。血清中80的抗細(xì)菌、抗病毒、抗毒素抗體屬于IgG。IgA 分為血清型IgA 與分泌型IgA ( slgA）兩種。血清型IgA 占血清中Ig的1015;

2、分泌型IgA 由呼吸道、消化道、泌尿生殖道的淋巴樣組織大量合成，在外分泌液系統(tǒng)中發(fā)揮其重要的免疫功能。IgM 是分子量最大的Ig，占血清中Ig的510。是機(jī)體受抗原刺激后最先產(chǎn)生的抗體，其殺菌、溶菌、溶血、促吞噬及凝集作用比IgG 高5001000倍，在機(jī)體早期的免疫防御中占有重要地位。IgD 在正常人血清中僅占Ig 的0.021 %，且極易被纖溶酶和（或）胰蛋白酶水解。已發(fā)現(xiàn)有些抗核抗體、抗基底膜抗體、抗甲狀腺抗體和抗鏈球菌溶血素“O”抗體等屬于IgD。IgE 主要由消化道、上呼吸道黏膜下漿細(xì)胞分泌，在血清中是最少的一種抗體(0.002%）。IgE 是親細(xì)胞抗體，在型變態(tài)反應(yīng)性疾病的發(fā)病中具

3、有重要作用。【參考值】 單項(xiàng)免疫擴(kuò)散法（RID）: IgG 7.616.6g/ L; IgA 0.713.3 g/L ; IgM 0.482.12 g/L。 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA ) : IgD 0.62.0mg/L ; IgE 0.10.9 mg /L。【臨床意義】 1. Ig減低 見于各類先天性和獲得性體液免疫缺陷、聯(lián)合免疫缺陷的病人及長期使用免疫抑制劑患者。此時(shí)五種Ig均有降低。2. Ig增高（1）單克隆性增高：表現(xiàn)為五種Ig中僅有某一種Ig增高而其他Ig不增高或可降低，主要見于免疫增殖性疾病。如：原發(fā)性巨球蛋白血癥時(shí)，表現(xiàn)為IgM 單獨(dú)明顯增高；多發(fā)性骨髓瘤時(shí)可分別見到IgG 、

4、IgA 、IgD 、IgE 增高，并據(jù)此分為IgG 型、IgA 型、IgD 型和IgE 型多發(fā)性骨髓瘤；過敏性皮炎、外源性哮喘及某些寄生蟲感染可表現(xiàn)為IgE 增高。（2）多克隆性增高：表現(xiàn)為IgG 、IgA 、IgM 均增高。常見于各種慢性感染、慢性肝病、肝癌、淋巴瘤以及系統(tǒng)性紅斑狼瘡（IgG 、IgA 或IgG 、IgM 同時(shí)升高）、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎( IgM 增高為主）等自身免疫性疾病。二、血清補(bǔ)體的檢查補(bǔ)體（complement , C）是血清中具有酶活性的一組不耐熱的大分子球蛋白。補(bǔ)體由三組球蛋白大分子組成：第一組分由9 種球蛋白大分子組成，即C1C9，其中C1還有3個(gè)亞單位，即C1q

5、、C1r 和C1s ；第二組分包括B因子、D因子和P因子等；第三組分包括C1抑制物、I因子、H因子、C4結(jié)合蛋白、過敏毒素滅活因子等。補(bǔ)體分子分別由肝細(xì)胞、巨噬細(xì)胞以及腸系膜上皮細(xì)胞等多種細(xì)胞分泌，它的產(chǎn)生與抗原刺激無關(guān)，但可被抗原 - 抗體的復(fù)合物所活化而產(chǎn)生溶菌和溶細(xì)胞現(xiàn)象，亦參與破壞自身組織或自身細(xì)胞而造成的免疫損傷。（一） 總補(bǔ)體溶血活性（total hemolytic complement activity , CH5）測定【原理】 補(bǔ)體系統(tǒng)能被溶血素致敏的綿羊紅細(xì)胞（抗原 - 抗體復(fù)合物）所激活，導(dǎo)致補(bǔ)體的連鎖性活化，引起致敏綿羊紅細(xì)胞溶解（溶血）。補(bǔ)體活性與溶血程度之間在一定范圍

6、內(nèi)(2080溶血率）呈正相關(guān)系，故一般以50溶血作為終點(diǎn)（即CH50）較為準(zhǔn)確?！緟⒖贾怠?試管法：5萬10萬U/L。 【臨床意義】 主要反映補(bǔ)體經(jīng)典激活途徑（C1C9）活化的活化程度。CH50增高：見于各種急性炎癥、組織損傷和某些惡性腫瘤，妊娠時(shí)亦可見升高。CH50減低意義更大，見于補(bǔ)體成分大量消耗，如血清病、鏈球菌感染后腎小球腎炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、自身免疫性溶血性貧血、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及同種異體移植排斥反應(yīng)等；也見于補(bǔ)體大量丟失，如外傷、手術(shù)和大失血的病人；還可見于補(bǔ)體合成不足，如肝硬化、慢性肝炎和重型肝炎等。（二）血清C3測定【原理】 C3是一種2球蛋白，主要由肝細(xì)胞合成與分泌，是血清中含

7、量最多的補(bǔ)體成分，無論經(jīng)典途徑還是旁路途徑C3都參與，因而可以反映出補(bǔ)體的活化情況。【參考值】 免疫比濁法：0.851.70 g/L。 【臨床意義】 由于C3在經(jīng)典激活途經(jīng)與旁路激活途經(jīng)中均發(fā)揮重要作用，所以C3的檢查對于反映非特異性免疫相關(guān)疾病更具意義。C3增高：C3作為急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，在各種急性炎癥、傳染病早期、某些惡性腫瘤（以肝癌最明顯）病人及排異反應(yīng)時(shí)增高。C3減低可作為腎臟病的鑒別診斷：如70以上的急性腎小球腎炎病人（病程6周）血清C3減少，這對一些輕型、不典型急性腎炎的診斷有幫助；85以上的鏈球菌感染后腎炎患者血清C3下降，而病毒性腎炎患者則85以上的病例血清C3含量正常，這有助

8、于腎炎的病因鑒別；78的狼瘡性腎炎患者血清C3減低，當(dāng)治療后病情轉(zhuǎn)為穩(wěn)定時(shí)C3含量又恢復(fù)正常。三、細(xì)胞免疫檢查淋巴細(xì)胞是構(gòu)成機(jī)體免疫系統(tǒng)的主要細(xì)胞群體，人體的淋巴細(xì)胞分為T細(xì)胞、B細(xì)胞、K細(xì)胞（killer cell）和NK細(xì)胞（natural killer cell）等細(xì)胞群，它們又分別有若干亞群，各有其特異的表面標(biāo)志和功能。臨床上各種免疫病均可出現(xiàn)不同群淋巴細(xì)胞數(shù)量和功能的變化，對它們進(jìn)行檢查可用以判斷細(xì)胞免疫功能。（一）T細(xì)胞免疫檢測1. T細(xì)胞花結(jié)形成試驗(yàn)【原理】 T細(xì)胞表面具有特異性綿羊紅細(xì)胞（SRBC）受體，可與綿羊紅細(xì)胞結(jié)合形成玫瑰花結(jié)樣細(xì)胞，稱為紅細(xì)胞玫瑰花結(jié)形成試驗(yàn)E玫瑰花結(jié)

9、形成試驗(yàn)（erythrocyte rosette formation test , ERFT）。以黏附3個(gè)或3個(gè)以上綿羊紅細(xì)胞者為花結(jié)形成細(xì)胞。本試驗(yàn)所得花結(jié)的百分率，基本代表了被檢標(biāo)本中T細(xì)胞占淋巴細(xì)胞的百分率?！緟⒖贾怠?64.4±6.7?！九R床意義】 升高見于：甲狀腺功能亢進(jìn)癥、慢性淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎、重癥肌無力、中度慢性肝炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡活動期及器官移植排斥反應(yīng)等。降低見于：免疫缺陷性疾病，如AIDS、聯(lián)合免疫缺陷病等。亦見于惡性腫瘤、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、麻疹、流感等病毒感染，以及放療、化療和應(yīng)用糖皮質(zhì)激素等。 2. T細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn) 【原理】 T淋巴細(xì)胞表面存在著有絲分裂原受體

10、，在有絲分裂原如植物血凝素(PHA）、刀豆蛋白A(ConA）、美洲商陸（PWM）等作用下，T淋巴細(xì)胞代謝活躍，蛋白質(zhì)、RNA和DNA的合成增加，從而轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，部分細(xì)胞發(fā)生有絲分裂?？梢勒招螒B(tài)學(xué)方法計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞及轉(zhuǎn)化母細(xì)胞數(shù)，求出轉(zhuǎn)化百分率。也可以用放射免疫的方法反映轉(zhuǎn)化情況，以刺激指數(shù)（SI）表示，反映T細(xì)胞的免疫功能?！緟⒖贾怠?形態(tài)學(xué)法：轉(zhuǎn)化百分率為60.1±7.6.。 3H - TdR摻入法：正常SI<2。【臨床意義】 判定機(jī)體細(xì)胞免疫功能：轉(zhuǎn)化率降低，見于細(xì)胞免疫缺陷或細(xì)胞免疫功能低下患者，如惡性腫瘤、重癥結(jié)核、重癥真菌感染、慢性肝病及接受放療、化療或應(yīng)用免疫抑

11、制劑治療等。判定疾病的療效和預(yù)后：如惡性腫瘤經(jīng)治療后，T細(xì)胞轉(zhuǎn)化率升至正常，提示治療有效，反之則預(yù)后不良。3. T細(xì)胞分化抗原測定【原理】 白細(xì)胞（包括血小板、血管內(nèi)皮細(xì)胞等）在正常分化成熟和激活過程中細(xì)胞表面存在被單克隆抗體（monoclonal antibodies）識別膜表面分子，稱為分化抗原（cluster of differentiating,CD分子）。T細(xì)胞是由一群功能不同的異質(zhì)性淋巴細(xì)胞組成，在鏡下按形態(tài)難以區(qū)分，但借助于其細(xì)胞膜表面分子具有不同的抗原性（有100多種特異性抗原）加以區(qū)別，現(xiàn)已制備了多種單克隆抗體。CD分子是主要的T細(xì)胞分化抗原，比較明確地表達(dá)在T細(xì)胞表面的CD

12、分子有CD2、CD3、CD4、CD8，等。應(yīng)用這些細(xì)胞的單克隆抗體與T細(xì)胞表面抗原結(jié)合后，再與熒光標(biāo)記二抗（兔或羊抗鼠IgG）反應(yīng)（免疫熒光法），用熒光激活細(xì)胞分離儀（FACS）進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)CD陽性細(xì)胞的百分率?！緟⒖贾怠?CD3+T細(xì)胞：6185% CD4+T細(xì)胞：2858。 CD8+T細(xì)胞：1948。 CD4+T細(xì)胞CD8+T 細(xì)胞比值為：1.66±0.33（>1）。【臨床意義】(1) CD3+T細(xì)胞：CD3+T分子表達(dá)于所有成熟T淋巴細(xì)胞表面，是T細(xì)胞表面所特有的標(biāo)志，能反映T細(xì)胞總數(shù)的變化。CD3+T細(xì)胞降低見于免疫缺陷性疾病，如AIDS、聯(lián)合免疫缺陷病等，亦見于惡性

13、腫瘤、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、采用放療及化療或應(yīng)用免疫抑制劑等。CD3+T細(xì)胞升高見于甲狀腺功能亢進(jìn)癥、慢性淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎、重癥肌無力、中度慢性肝炎及器官移植后排斥反應(yīng)等。(2) CD4+T細(xì)胞：輔助性T細(xì)胞（Th）表面表達(dá)CD4分子。CD4分子是人類免疫缺陷病毒（HIV）主要受體。CD4+T細(xì)胞降低見于某些病毒感染性疾病，如AIDS、巨細(xì)胞病毒感染、全身麻醉、嚴(yán)重創(chuàng)傷及應(yīng)用免疫抑制劑等。CD4+T細(xì)胞升高見于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎活動期。 (3) CD8+T 細(xì)胞：CD8分子是抑制、殺傷性T細(xì)胞的標(biāo)志，CD8+T細(xì)胞減低見于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、重癥肌無力、2 型糖尿病、膜性腎小球腎炎等；CD8+T細(xì)胞升高見

14、于傳染性單核細(xì)胞增多癥、巨細(xì)胞病毒感染、慢性乙型肝炎等。(4) CD4+T細(xì)胞CD8+T細(xì)胞比值：降低常見于AIDS（常0.5）、惡性腫瘤進(jìn)行期和復(fù)發(fā)時(shí)，亦見于傳染性單核細(xì)胞增多癥、巨細(xì)胞病毒感染等。增高見于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎活動期、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化癥、重癥肌無力、膜性腎小球腎炎等。器官移植后CD4+T細(xì)胞CD8+T細(xì)胞比值動態(tài)增高，預(yù)示可能發(fā)生排斥反應(yīng)。（二）B細(xì)胞免疫檢側(cè)B淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)的抗體產(chǎn)生細(xì)胞，其表面有多種表面抗原和表面受體。表面抗原主要包括CD19、CD20、CD22等；表面受體主要包括B細(xì)胞抗原受體（BCR）、補(bǔ)體受體(CR）及Fc受體等。1紅細(xì)胞-抗體-補(bǔ)體花結(jié)

15、形成試驗(yàn)【原理】 B細(xì)胞表面存在著膜表面免疫球蛋白（Smlg）、Fc受體和補(bǔ)體受體等。雞（羊）紅細(xì)胞經(jīng)相應(yīng)的抗紅細(xì)胞抗體（EA）致敏后，當(dāng)與B細(xì)胞混合時(shí)，EA的Fc段與B細(xì)胞表面Fc受體結(jié)合所形成的花結(jié)樣細(xì)胞稱為EA花結(jié)形成細(xì)胞（EA - RFC）。如在EA致敏紅細(xì)胞中再加人補(bǔ)體，與B細(xì)胞表面的補(bǔ)體受體結(jié)合，則形成EAC花結(jié)形成細(xì)胞(EAC - RFC）。B細(xì)胞表面還具有小鼠紅細(xì)胞受體，能與小鼠紅細(xì)胞結(jié)合，形成鼠紅細(xì)胞花結(jié)（M - RFC）。這組試驗(yàn)總稱為紅細(xì)胞 - 抗體 - 補(bǔ)體花結(jié)形成試驗(yàn)（erythrocyte - antibody - complement rosette format

16、ion test）?！緟⒖贾怠?EA RFC :812%; EAC RFC: 812% ; M - RFC:8.5±2.8?！九R床意義】 降低見于：免疫缺陷性疾病，如原發(fā)性和繼發(fā)性免疫缺陷病等，尤以M - RFC降低更明顯。升高見于：淋巴增殖性疾病，如慢性淋巴細(xì)胞白血病、多毛細(xì)胞白血病等。2. B細(xì)胞分化抗原測定【原理】 CD19和CD20分子是B細(xì)胞特有表面標(biāo)志，存在于前B細(xì)胞、未成熟B細(xì)胞和成熟的B細(xì)胞表面，其主要功能是調(diào)節(jié)B細(xì)胞活化。CD19是全部B細(xì)胞共有的表面抗原，B細(xì)胞活化后不消失，是最重要的B細(xì)胞標(biāo)記分子。CD20在B細(xì)胞激活后消失。CD22分子只存在于成熟的B細(xì)胞中。

17、應(yīng)用CD19、CD20和CD22等單克隆抗體，分別與B細(xì)胞表面抗原結(jié)合，通過免疫熒光法、免疫酶標(biāo)法或流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測，分別求出CD19、CD20和CD22等陽性細(xì)胞百分率和B淋巴細(xì)胞數(shù)。主要檢測CD19?！緟⒖贾怠?熒光激活細(xì)胞分離儀（FACS) : CD19 11.7±3.37?！九R床意義】 CD19+細(xì)胞升高見于B細(xì)胞系統(tǒng)惡性腫瘤；CD19+細(xì)胞降低見于體液免疫缺陷病及使用化療或免疫抑制劑后。四、感染免疫檢測病原體及其代謝產(chǎn)物（抗原）刺激人體免疫系統(tǒng)可產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，采用現(xiàn)代檢驗(yàn)手段對抗原、抗體進(jìn)行檢測，有利于感染性疾病診斷。包括：特異性試驗(yàn)，即所用的抗原為病原體特異性抗原（整

18、個(gè)病原體、病原體成分或產(chǎn)物），為較常用的方法；非特異性試驗(yàn)，即有一部分抗體檢測使用病原體的共同抗原，這類試驗(yàn)為非特異性試驗(yàn)。（一）抗鏈球菌溶血素“O”(ASO）測定【原理】 鏈球菌溶血素“O”"( streptalysi“O”）是A群溶血性鏈球菌的代謝產(chǎn)物之一，為具有溶血活性蛋白質(zhì)，能溶解人類和一些動物的紅細(xì)胞。鏈球菌溶血素“0”具有一定的抗原性，能刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體，稱為抗鏈球菌溶血素“O”(anti - streptolysin“0”,ASO）。加一定量的鏈球菌溶血素“O”（抗原）于倍比稀釋的被檢血清中，如被檢血清中存在ASO（抗體），則可使所加鏈球菌溶血素“0”失去溶解紅細(xì)胞

19、的能力?！緟⒖贾怠?乳膠凝集法（LAT）: ASO <500U 。【臨床意義】1. ASO升高常見于A群溶血性鏈球菌感染及感染后免疫反應(yīng)所致疾病，如感染性心內(nèi)膜炎及扁桃腺炎，風(fēng)濕熱、鏈球菌感染后急性腎小球腎炎等。2. ASO在溶血性鏈球菌感染1周后開始升高，46周達(dá)高峰，并可持續(xù)至病愈后數(shù)月到數(shù)年。故ASO增高，提示曾有溶血性鏈球菌感染，不一定是近期感染指標(biāo)。鏈球菌感染后ASO動態(tài)升高，且C反應(yīng)蛋白（C - RP）、血沉陽性，有利于風(fēng)濕熱診斷。3 確已感染溶血性鏈球菌，但ASO一直不見增高，可由于：該溶血性鏈球菌不產(chǎn)生或產(chǎn)生很少量鏈球菌溶血素“O”，此時(shí)應(yīng)檢查與溶血性鏈菌球感染有關(guān)的其他

20、抗體，如抗透明質(zhì)酸酶、抗鏈激酶等。感染早期就應(yīng)用大量抗生素或糖皮質(zhì)激素。此種情況下，其他抗體也多不升高。4高膽固醇血癥、巨球蛋白血癥及多發(fā)性骨髓瘤病人，ASO也可增高。（二）傷寒與副傷寒的血清學(xué)檢查 傷寒沙門菌屬于沙門菌的D群，副傷寒甲、乙、丙沙門菌分別屬于沙門菌屬中的A、B、C群，均為G-桿菌。機(jī)體感染傷寒、副傷寒沙門菌1周后，逐漸產(chǎn)生相應(yīng)抗體，第4周血清中抗體達(dá)高峰。檢測傷寒與副傷寒沙門菌的相關(guān)抗原及抗體，有助于傷寒與副傷寒的診斷。 1肥達(dá)（Widal）反應(yīng) 【原理】 肥達(dá)反應(yīng)是檢測患者血清中有無傷寒、副傷寒沙門菌抗體的一種反應(yīng)。將被檢血清倍比稀釋后，分別與傷寒沙門菌菌體“O”抗原、鞭毛“

21、H”抗原和副傷寒沙門菌甲、乙、丙的鞭毛抗原“A”、“B”、“C”，在生理鹽水介質(zhì)中進(jìn)行凝集價(jià)測定。凝集效價(jià)明顯升高或動態(tài)上升有助于傷寒、副傷寒明確診斷?！緟⒖贾怠?“0”凝集價(jià)l : 80；傷寒“H”凝集價(jià)1 : 160 ；副傷寒“A”“B”“C”凝集價(jià)l : 80。【臨床意義】（l）正常人因隱性感染或預(yù)防接種，血清中可含有一定量相關(guān)抗體，可超過正常值范圍，其效價(jià)隨地區(qū)而有差異。（2）由于抗體產(chǎn)生需要一定時(shí)間，有時(shí)單次抗體效價(jià)增高不能確定時(shí)，應(yīng)在病程中逐周復(fù)查，若抗體效價(jià)依次遞增或恢復(fù)期較急性期升高4倍或以上，則有診斷意義。（3）“O ”抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生IgM類抗體，出現(xiàn)較早，持續(xù)約半年；“H

22、”抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生IgG類抗體，出現(xiàn)較晚，持續(xù)時(shí)間長達(dá)數(shù)年，且消失后易受非特異性抗原刺激而能短暫地重現(xiàn)。因此：“O”、“H”均升高則傷寒感染的可能性大；均低于正常值，則患傷寒的可能性甚小。若“H”升高而“O”不升高，則有可能是預(yù)防接種或是非特異性的“回憶反應(yīng)”。若“O”升高而“H”等鞭毛抗原的凝集效價(jià)不升高，則可能是傷寒類感染的早期。 （4）“O”抗原為傷寒沙門菌和副傷寒甲、乙沙門菌的共同抗原，血清中檢出高效價(jià)的“O”抗體，不能區(qū)別3個(gè)不同的病原菌感染；但3者鞭毛抗原（“H”、“A ”、“B”）不同，可從3種鞭毛的特異性抗體效價(jià)上升來判斷感染的菌種。副傷寒丙沙門菌感染時(shí)，“O”凝集效價(jià)不高，而

23、只有其鞭毛抗原“C”的凝集效價(jià)升高。（5）10傷寒病人，肥達(dá)反應(yīng)始終陰性?？赡艿脑蚴前l(fā)病早期已大量應(yīng)用有效抗菌藥物，或應(yīng)用糖皮質(zhì)激素類免疫抑制劑，或者體液免疫功能不足。2酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA) 【原理】 EllSA是用酶促反應(yīng)放大作用來顯示初級免疫學(xué)反應(yīng)，既可檢測抗體又可檢測抗原?？乖镔|(zhì)進(jìn)人人體后刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體，首先出現(xiàn)的抗體是IgM 抗體。以傷寒沙門菌脂多糖（內(nèi)毒素的主要成分）為抗原，用間接ELISA法檢測傷寒病人血清中特異性IgM抗體，有助于傷寒的早期診斷。Vi ( virulence）抗原存在于傷寒沙門菌表面，可以阻止傷寒沙門菌“O”抗原與其相應(yīng)抗體的凝集反應(yīng)。當(dāng)體內(nèi)

24、有傷寒沙門菌存在時(shí)就有一定量Vi抗體存在，細(xì)菌清除后抗體亦隨之消失，故測定Vi抗體有助于檢出傷寒帶菌者。用高純度的傷寒沙門菌Vi抗原包被反應(yīng)板，以ELISA 法可以測定病人血清中的Vi抗體?！緟⒖贾怠?ELISA 法：正常人IgM 抗體為陰性或滴度l:20 ; Vi抗體滴度1：20?！九R床意義】 （l）抗傷寒沙門菌脂多糖的IgM型抗體，于發(fā)病1周后即見明顯升高，故有早期診斷價(jià)值，此時(shí)肥達(dá)反應(yīng)大多呈陰性反應(yīng)。（2）如果Vi抗體滴度1:20，有助于檢出傷寒慢性帶菌者。若要進(jìn)一步肯定診斷，則應(yīng)反復(fù)取糞便進(jìn)行分離培養(yǎng)。如果Vi抗體效價(jià)平穩(wěn)下降，提示帶菌狀態(tài)消除。 3膠乳凝集試驗(yàn)（LAT）【原理】 用傷

25、寒沙門菌“Vi”、“H”、“O”的高效價(jià)抗血清致敏膠乳顆粒，產(chǎn)生膠乳抗體，用此抗體與病人血清（不同倍比稀釋為1 : 20以上）混合后，若病人血清中含有傷寒沙門菌“Vi”、“H”、“O”抗原，則可出現(xiàn)凝集顆粒而為陽性。【參考值】 正常人為陰性或“O”凝集效價(jià)1 : 80 ,“H”凝集效價(jià)l : 160。【臨床意義】（l）傷寒沙門菌侵人人體后，血中即有特異性抗原存在，其陽性時(shí)期早于肥達(dá)反應(yīng)，也早于檢查傷寒特異性IgM型抗體。（2）傷寒早期，尿中也有其特異性抗原，故也可借尿液膠乳凝集試驗(yàn)陽性而作出診斷。（3）本試驗(yàn)對診斷那些未能產(chǎn)生抗體的傷寒病人尤其有幫助。（三）其他感染的免疫檢查其他感染的免疫檢查

26、，參見下表。 其他感染的免疫檢查擬診疾病或檢測項(xiàng)目檢測的抗體或抗原臨床意義結(jié)核病結(jié)核特異性抗體（TB Ab）陽性表示有結(jié)核分枝桿菌感染。其靈敏度唱過90%，特異性超過85%，但應(yīng)防止污染引起的假陽性幽門螺桿菌感染幽門螺桿菌抗體（Hp -Ab ) 陽性見于胃、十二指腸幽門螺桿菌感染腎綜合征出血熱漢坦病毒（HTV）抗體IgM陽性有助于腎綜合征出血熱（HFRS）的診斷流行性乙型腦炎流行性乙型腦炎病毒抗體IgM陽性有助于乙型腦炎的早期診斷弓形蟲感染弓形蟲抗體和DNA 測定IgM升高提示近期感染，IgG增高是既往感染的指標(biāo)。DNA陽性對弓形蟲病的診斷意義更大血吸蟲病日本血吸蟲抗體測定IgE、IgM陽性提

27、示病程處于早期;IgG陽性提示疾病已是恢復(fù)期，可持續(xù)數(shù)年囊蟲病囊蟲抗體測定IgG陽性見于囊蟲病，其中腦囊蟲病占60%80%。亦可用于流行病學(xué)調(diào)查瘧疾瘧原蟲抗體和抗原測定抗體陽性提示近期感染。抗原檢測或血液涂片找瘧原蟲有利于確診梅毒非特異性抗體（反應(yīng)素）及特異性抗體檢測反應(yīng)素用于梅毒的初篩，一、二期梅毒陽性率高，應(yīng)注意假陽性；特異性抗體陽性即可確診為梅毒艾滋病人獲得性免疫缺陷病毒抗體及RNA 測定抗體檢測用于篩選試驗(yàn)，敏感性高但特異性差;RNA測定有利于HIV感染的確診 五、腫瘤標(biāo)志物檢測腫瘤標(biāo)志物（tumor marker）是由腫瘤細(xì)胞自身合成、釋放或者是由機(jī)體對腫瘤細(xì)胞反應(yīng)而產(chǎn)生的一類物質(zhì)（

28、主要包括蛋白質(zhì)類、糖類和酶類）。檢測這些物質(zhì)，可反映細(xì)胞惡變各個(gè)階段的表現(xiàn)及基因特征。（一）血清甲胎蛋白（AFP）測定【原理】 甲胎蛋白（alpha fetoprotein , AFP）是人胚胎時(shí)期血液中含有的一種特殊的糖蛋白，由胎兒肝細(xì)胞和卵黃囊合成，其濃度從胎齡6周后逐漸上升，至1620 周達(dá)高峰（可達(dá)13 g/L)，然后逐漸下降，出生時(shí)臍血中AFP含量為10100mg/L，出生后1個(gè)月降至正常成人水平。AFP生成量與胎兒肝臟或出生后的肝臟再生時(shí)分裂細(xì)胞數(shù)呈正相關(guān)，故認(rèn)為AFP是診斷肝細(xì)胞癌的重要指標(biāo)?！緟⒖贾怠?放射免疫法（RIA) ：血清25ugL(25ng/ml）?！九R床意義】1.

29、原發(fā)性肝癌 AFP是目前診斷肝細(xì)胞癌最特異的標(biāo)志物，血清中AFP>300 ug /L可作為原發(fā)性肝癌的診斷閾值，但也有1030病人，AFP不增高或增高不明顯，可能與瘤體大小、分化程度有關(guān)。一般認(rèn)為，病理分化接近正常的肝細(xì)胞或分化程度極低者，AFP常較低或測不出。2. 病毒性肝炎、肝硬化 隨著受損肝細(xì)胞的修復(fù)再生，幼稚化的肝細(xì)胞重新具有產(chǎn)生AFP的能力（常200ug/L）。急性肝炎患者，當(dāng)ALT開始下降、肝細(xì)胞轉(zhuǎn)入修復(fù)期時(shí)AFP升高，常在病程第4周達(dá)高峰后逐漸下降，隨肝細(xì)胞修復(fù)而AFP逐漸減少至消失。重型肝炎時(shí)，若見AFP增高，則提示壞死肝細(xì)胞再生；反之，則提示肝細(xì)胞大量壞死，預(yù)后不良。3

30、. 妊娠 妊娠34個(gè)月后，AFP上升，78個(gè)月達(dá)高峰（< 400 ug /L)，分娩后約3周即恢復(fù)正常。孕婦血清中AFP異常升高，有可能為胎兒神經(jīng)管畸形。4. 其他 先天性膽管閉鎖、生殖腺胚胎性腫瘤等，血中AFP也可增加。（二）癌胚抗原（CEA）測定【原理】 癌胚抗原（carcinoembryonic antigen,CEA）最初發(fā)現(xiàn)于成人結(jié)腸癌組織中，是一種富含多糖的蛋白復(fù)合物。胚胎期主要存在于胎兒的消化管、胰腺及肝臟，出生后組織內(nèi)含量極低。惡性腫瘤患者的血清中可發(fā)現(xiàn)CEA含量有異常升高?！緟⒖贾怠?ELISA 和RIA法：血清5ug/L?！九R床意義】 CEA測定無特異性，也缺乏早期診

31、斷價(jià)值，臨床主要用于：1. 消化器官癌癥的診斷 CEA升高主要見于結(jié)腸癌、胃癌、胰腺癌等。CEA隨病程的進(jìn)展而升高，對判斷療效和預(yù)后有一定價(jià)值。如結(jié)腸癌術(shù)后24天CEA即可下降至參考值范圍，如術(shù)后CEA持續(xù)不降或尚未降至參考值范圍又再回升，提示腫瘤有殘存或復(fù)發(fā)。2. 鑒別原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性肝癌 原發(fā)性肝癌CEA升高者不超過9%，而轉(zhuǎn)移性肝癌CEA 陽性率高達(dá)90 %，且絕對值明顯增高。故CEA對鑒別原發(fā)和轉(zhuǎn)移性肝癌有幫助。3. 其他 肺癌、乳腺癌、膀胱癌、尿道癌、前列腺癌等CEA亦可增高。CEA輕度增高也可見于潰瘍性結(jié)腸炎、肝硬化、阻塞性黃疽以及吸煙者和老年人。（三）癌抗原125 ( CA125）

32、測定【原理】 癌抗原125 ( cancer antigen 125 ,CA125）為一種糖蛋白性腫瘤相關(guān)抗原，存在于卵巢腫瘤的上皮細(xì)胞內(nèi)。主要用于輔助診斷惡性漿液性卵巢癌、上皮性卵巢癌，亦用于卵巢癌療效觀察。【參考值】 RIA 和ELISA 法：男性及50歲以下女性2.5萬u/L。2040歲女性4.0萬U/L( RIA）?！九R床意義】 卵巢癌病人血清CA125水平明顯升高，其陽性率可達(dá)97%，故CA125對診斷卵巢癌有較大臨床價(jià)值，尤其對觀察治療效果和判斷復(fù)發(fā)較為靈敏。其他癌癥，如宮頸癌、乳腺癌、胰腺癌、膽道癌、肝癌、胃癌、結(jié)腸直腸癌、肺癌等也有一定的陽性反應(yīng)。非惡性腫瘤，如良性卵巢瘤、子宮

33、肌瘤、肝炎等病人血清CA125也會增高，但多數(shù)不超過10萬U/L 。肝硬化失代償期血清CA125明顯增高。（四）癌抗原15 3 ( CA15 3）測定【原理】 癌抗原15 3 ( cancer antigen 15 3, CA15 3）是一種乳腺癌相關(guān)抗原，屬糖蛋白，對乳腺癌的診斷及術(shù)后隨訪監(jiān)測有一定的價(jià)值。【參考值】 RIA法和化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA ) ：血清25 000u/L?！九R床意義】 乳腺癌時(shí)3050的患者可見CA15 3 明顯升高，但在早期乳腺癌時(shí)，它的陽性僅為2030左右。乳腺癌治療后復(fù)發(fā)及乳腺癌轉(zhuǎn)移后陽性率可達(dá)80 。其他惡性腫瘤，如轉(zhuǎn)移性卵巢癌、結(jié)腸癌、支氣管肺癌、原

34、發(fā)性肝癌等，CA15 3 也有不同程度的升高。妊娠婦女，血清CA15 3 水平也可增高。（五）組織多肽抗原（TPA）測定【原理】 組織多肽抗原（tissue polypeptide antigen，TPA）是一種非特異性腫瘤標(biāo)志物，體外實(shí)驗(yàn)時(shí)，有絲分裂期間的增殖細(xì)胞TPA分泌活躍，因此，血清中TPA增高主要用于輔助診斷迅速增殖的惡性腫瘤，且在惡性腫瘤的療效觀察上敏感性較高。【參考值】 RIA法：血清130u/L ?！九R床意義】 惡性腫瘤患者血清TPA水平均可顯著升高，與腫瘤發(fā)生部位和組織類型無相關(guān)性，多見于膀胱轉(zhuǎn)移細(xì)胞癌，其次見于前列腺癌、乳腺癌及消化道惡性腫瘤等。惡性腫瘤經(jīng)治療好轉(zhuǎn)后，TPA

35、水平降低；若TPA再次增高，提示有腫瘤復(fù)發(fā)。TPA與CEA同時(shí)檢測可有利于惡性與非惡性乳腺病的鑒別診斷。急性肝炎、胰腺炎、肺炎及妊娠后期等血清中TPA亦可升高。（六）前列腺特異抗原（PSA）測定【原理】 前列腺特異抗原（prostate specific antigen , PSA）是一種由前列腺上皮細(xì)胞分泌的蛋白酶，為單鏈糖蛋白，正常人血清中PSA含量極微，在前列腺癌時(shí)，前列腺腺管破壞，導(dǎo)致血清PSA水平明顯升高。【參考值】 RIA法和CLIA法：血清4.0ug/L?！九R床意義】 PSA是高度的前列腺組織特異抗原，9097前列腺癌患者血清PSA明顯升高，手術(shù)后降至正常，若再次升高，應(yīng)考慮腫瘤

36、的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移。（七）糖類抗原CA19 - 9 【原理】 CA19 - 9 是腫瘤病人血清中一種類黏蛋白的糖蛋白成分，是一項(xiàng)較好的腫瘤標(biāo)志物。在消化道腺癌病人血清中，濃度可明顯升高，特別是胰腺和膽道系統(tǒng)的惡性腫瘤更為明顯。【參考值】 < 37U/ml。【臨床意義】 CA19 - 9測定有助于胃腸道惡性腫瘤診斷，尤其對胰腺癌有較高的敏感度及特異性。連續(xù)監(jiān)測CA19 - 9對病情進(jìn)展、手術(shù)療效、預(yù)后估價(jià)及復(fù)發(fā)早期發(fā)現(xiàn)都有重要價(jià)值。此外，對消化道良惡性疾病鑒別診斷（如胰腺癌與胰腺炎、胃癌與胃潰瘍）也有一定價(jià)值。六、自身抗體檢查人體的免疫系統(tǒng)具有高度的“自我識別”能力，一般情況下，機(jī)體對“非己”抗

37、原發(fā)生免疫排斥，而對自身抗原呈現(xiàn)自身免疫耐受（autoimmune tolerance )，即機(jī)體免疫系統(tǒng)對自身抗原不產(chǎn)生免疫應(yīng)答，無免疫排斥的現(xiàn)象。如機(jī)體免疫系統(tǒng)對自身抗原發(fā)生免疫應(yīng)答，產(chǎn)生自身抗體（autoimmune antibody）和（或）自身致敏淋巴細(xì)胞的現(xiàn)象，稱為自身免疫(autoimmunity）。當(dāng)自身免疫表現(xiàn)為質(zhì)和量異常，自身抗體和（或）自身致敏淋巴細(xì)胞攻擊自身靶抗原細(xì)胞和組織，使其產(chǎn)生病理改變和功能障礙時(shí)，即形成自身免疫性疾病（au- toimmune disease，AID）。AID按自身抗原分布的范圍可分為器官特異性（如橋本甲狀腺炎等）和非器官特異性（如系統(tǒng)性紅斑狼瘡

38、等），另有一類中間型（損傷局限于某一器官，而自身抗體卻是非器官特異性的，如原發(fā)性膽汁性肝硬化）。自身抗體的檢查，對自身免疫病的診斷、療效觀察均具有重要意義。（一）類風(fēng)濕因子（RF）檢查【原理】 類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor , RF）是一種以變性IgG為靶抗原的自身抗體，無種族特異性，有IgG、IgA、IgM、IgD、IgM五型。主要存在于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的血清和關(guān)節(jié)液中，易與變性的IgG的Fc段結(jié)合，形成抗原 - 抗體復(fù)合物。主要檢測IgM型?！緟⒖贾怠?乳膠凝集試驗(yàn)正常人為陰性；血清稀釋度1 : 10?！九R床意義】 未經(jīng)治療的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人，RF陽性率為80%，且滴

39、度常l : 160。臨床上動態(tài)觀察滴度變化，可作為病變活動及藥物治療后療效的評價(jià)。系統(tǒng)性紅斑狼瘡、硬皮病、皮肌炎等風(fēng)濕性疾病，及感染性疾病如傳染性單核細(xì)胞增多癥、感染性心內(nèi)膜炎、結(jié)核病等，RF也可陽性，但其滴度均較低。約有14的正常人可呈弱陽性反應(yīng)，尤以75歲以上的老年人多見。（二）抗核抗體的檢查抗核抗體（anti nuclear antibody , ANA）是以細(xì)胞的核成分為靶抗原的自身抗體的總稱，無器官及種族特異性。依其與細(xì)胞核不同抗原成分起反應(yīng)而分為抗核蛋白抗體、抗雙鏈DNA抗體、抗單鏈DNA抗體、抗可溶性核成分抗體及抗核仁抗體。1. 抗核抗體（ANA ）測定【參考值】 IFA法為陰性

40、，血清滴度1 : 40?！九R床意義】 （l） 陽性主要見于系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）。未經(jīng)治療的SLE患者，ANA陽性率可達(dá)96%（滴度在1 : 1281 : 2048之間），但特異性較差。約有6的正常人可呈弱陽性反應(yīng)。（2）類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性硬化病、皮肌炎、干燥綜合征、慢性肝炎等也可出現(xiàn)陽性反應(yīng)，但滴度均較低。（3）根據(jù)細(xì)胞核著染后熒光類型，ANA可分為4種。均質(zhì)型（彌漫型）：全部細(xì)胞核呈均勻熒光，與抗dsDNA和抗組蛋白抗體有關(guān)，多見于SLE及硬皮病、皮肌炎等；膜型（周邊型）：核邊緣處熒光較強(qiáng)，呈輪狀，對應(yīng)的抗體為抗dsDNA抗體，見于SLE活動期；斑點(diǎn)型（顆粒型）：核內(nèi)呈斑塊狀或點(diǎn)塊狀

41、熒光，抗體類型為可提取性核抗原( ENA）抗體，見于硬皮病及肢端動脈痙攣病；核仁型：僅核仁處發(fā)熒光，抗體類型為RNA，見于硬皮病及干燥綜合征。2抗雙鏈DNA抗體測定 抗雙鏈DNA抗體（double stranded DNA antibody , dsDNA)的靶抗原是細(xì)胞核中DNA的雙股螺旋結(jié)構(gòu)，這種抗體是SLE的活動性標(biāo)志，尤其是SLE合并狼瘡性腎炎時(shí)。常用間接熒光抗體法（IFAT）測定?！九R床意義】 抗dsDNA抗體對SLE的特異性較高，其活動期陽性率達(dá)7090。其他疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性肝炎、干燥綜合征等亦可出現(xiàn)陽性。3可提取性核抗原（ENA）抗體譜測定 核內(nèi)可提取性核抗原（ext

42、ractable nuclear antigen , ENA）由多種分子質(zhì)量不同的多鈦構(gòu)成。抗體譜主要包括抗RNP抗體和抗Sm抗體。采用免疫印跡試驗(yàn)可以對這些自身抗體進(jìn)行檢測，用以診斷自身免疫性疾病?！緟⒖贾怠?免疫印跡試驗(yàn)（IBT ) ：陰性。【臨床意義】 抗Sm抗體為SLE所特有，特異性達(dá)99%，但敏感度低（20%)；抗Sm抗體陽性的SLE患者，內(nèi)臟病變發(fā)病率較高，對治療反應(yīng)性差?？筊NP抗體陽性主要見于混合性結(jié)締組織病，亦見于SLE、進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化病、皮肌炎、重疊綜合征等?？筊NP抗體陽性的SLE患者，腎臟損害一般較輕。4狼瘡細(xì)胞（LE細(xì)胞）檢查 狼瘡（lupus erythemato

43、sus , LE）因子是一種重要的抗核蛋白抗體，多為IgG。LE因子與輕微損傷的白細(xì)胞上抗原決定簇作用時(shí)，使細(xì)胞核膨脹，核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)不清，嗜堿性減弱，形成一種淡紫紅色的均質(zhì)體，即LE小體。在補(bǔ)體作用下，LE小體被正常的中性分葉核粒細(xì)胞所吞噬，形成LE細(xì)胞。有時(shí)還可見到游離的LE小體周圍有中性分葉核粒細(xì)胞圍繞形成花簇細(xì)胞現(xiàn)象?！九R床意義】 未經(jīng)治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）病人LE細(xì)胞陽性率5080。急性期或活動期陽性率較高，激素治療后陽性率降低。LE細(xì)胞陽性亦可見于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性硬化病、皮肌炎、慢性肝炎等疾病。 （三）抗組織和抗細(xì)胞漿抗體檢測1抗線粒體抗體（anti - mitochon

44、dria antibody , AMA）測定 AMA是一組以線粒體內(nèi)、外膜為靶抗原的自身抗體，主要是IgG。AMA的檢測主要用于肝臟自身免疫病的診斷。 【參考值】 IFA法為陰性（血清滴度1 : 10）。正常人群陽性率10?！九R床意義】 主要用于原發(fā)性膽汁性肝硬化的診斷，陽性率在90.592.5。肝硬化、慢性肝炎、藥物性肝損傷亦可出現(xiàn)陽性，陽性率在2030。2抗甲狀腺球蛋白抗體測定 甲狀腺球蛋白（thyroid globulin , TG）是由甲狀腺濾泡細(xì)胞合成的一種糖蛋白。抗TG抗體（anti - thyroglobulin antibody , ATG）主要是IgG?！緟⒖贾怠?間接血凝法滴度蕊 1 : 32 ; ELISA和RIA法均為陰性?！九R床意義】 血清ATG是診斷甲狀腺自身免疫性疾病的一個(gè)特異性指標(biāo)。ATG陽性多見于橋本