中藥化學成分提取分離方法--中國中醫(yī)科學院中藥所 邊寶林

1、中藥中藥化學成分提取分離方法化學成分提取分離方法中國中醫(yī)科學院中藥所中國中醫(yī)科學院中藥所邊寶林邊寶林日本學者：（長井長義） 天然藥物化學研究定義天然藥物化學研究定義： 1、將藥品（生藥）改變成為利于人體吸 收的形式。 2、對有效成分不明的草根、樹皮進行分 析，明確有效成分。 3、通過成分的改造、合成、創(chuàng)造新藥。中藥有效成分的研究中藥有效成分的研究 基于以上內(nèi)容，突出中醫(yī)用藥理論，繼承、基于以上內(nèi)容，突出中醫(yī)用藥理論，繼承、 發(fā)揚中醫(yī)藥寶庫，造福人類。發(fā)揚中醫(yī)藥寶庫，造福人類。1 1、已有數(shù)千年的用藥史（經(jīng)驗和理論）、已有數(shù)千年的用藥史（經(jīng)驗和理論）2 2、飲片用藥的特點、飲片用藥的特點CH2O

2、HO- -GLCOOOOCH3CH3CH3O1.揭示中藥有效性的物質(zhì)基礎(chǔ)揭示中藥有效性的物質(zhì)基礎(chǔ) Salicin（柳（柳皮）皮） Khellin、Ammi、 visnaga （科）科） 解熱解熱 冠脈擴張作用冠脈擴張作用 morphine鎮(zhèn)痛劑鎮(zhèn)痛劑 ergotamine 麥角麥角OCH3HOHONHNHCONHCH3NNOOHH3C HOH CH2 2、開開發(fā)發(fā)新新藥藥的的有有效效途途徑徑之之一一 生生物物測測定定法法策策 劃劃信信息息植植物物、動動物物、微微生生物物等等藥藥材材的的保保證證分分子子水水平平酶酶水水平平器器官官、組組織織、細細胞胞水水平平整整體體動動物物病病態(tài)態(tài)模模型型動動物

3、物提提 取取粗粗分分離離篩篩 選選細細分分離離、精精制制構(gòu)構(gòu)造造研研究究合合 成成應應用用開開發(fā)發(fā)譯譯價價醫(yī)醫(yī)藥藥品品藥藥物物設(shè)設(shè)計計中中藥藥設(shè)設(shè)計計一一類類、 （單單位位成成分分）二二類類、 （有有效效成成分分群群） 3、控制中藥材質(zhì)量標準的手段之一、控制中藥材質(zhì)量標準的手段之一 中中 藥藥 材材 GAP 中藥飲片中藥飲片 GMP 提取提?。逯螅逯螅?制制 劑劑 GCP 臨臨 床床中藥有效成分的分中藥有效成分的分離、分析是監(jiān)控藥離、分析是監(jiān)控藥材栽培、炮制工材栽培、炮制工藝、制劑生產(chǎn)和產(chǎn)藝、制劑生產(chǎn)和產(chǎn)品貯藏、銷售的重品貯藏、銷售的重要手段。要手段。中藥中藥化學成分提取分離方法化學成分

4、提取分離方法 常用化學成分提取分離方法常用化學成分提取分離方法 大孔吸附樹脂分離有效成分的應用大孔吸附樹脂分離有效成分的應用 分離實例分離實例一、有效成分的提取一、有效成分的提取 溶劑提取法溶劑提取法 水蒸氣蒸餾法水蒸氣蒸餾法 升華法升華法 超臨界流體萃取法超臨界流體萃取法其他方法其他方法 溶劑提取法溶劑提取法 溶劑提取法系選擇適當溶劑將中草藥中的化學成分從藥材中溶劑提取法系選擇適當溶劑將中草藥中的化學成分從藥材中提取出來。遵循提取出來。遵循“相似相溶相似相溶”規(guī)律。規(guī)律。 天然藥物中的化學成分在溶劑中的溶解度直接與溶劑性質(zhì)有天然藥物中的化學成分在溶劑中的溶解度直接與溶劑性質(zhì)有關(guān)。溶劑可分為水

5、、親水性有機溶劑和親脂性有機溶劑。一關(guān)。溶劑可分為水、親水性有機溶劑和親脂性有機溶劑。一些常見溶劑的脂性的強弱順序如下：些常見溶劑的脂性的強弱順序如下： 石油醚石油醚 苯苯 氯仿氯仿 乙醚乙醚 乙酸乙酯乙酸乙酯 丙酮丙酮 乙醇乙醇 甲醇甲醇 水水 天然藥物化學成分可通過結(jié)構(gòu)估計它們的極性。天然藥物化學成分可通過結(jié)構(gòu)估計它們的極性。 溶劑提取法溶劑提取法 甙類的分子中結(jié)合有糖分子，羥基數(shù)目多，能表現(xiàn)強親水性，甙類的分子中結(jié)合有糖分子，羥基數(shù)目多，能表現(xiàn)強親水性，而甙元則屬于親脂性化合物，而生物堿鹽，能夠離子化，加而甙元則屬于親脂性化合物，而生物堿鹽，能夠離子化，加大了極性，就變成了親水性化合物。

6、鞣質(zhì)是多羥基衍生物，大了極性，就變成了親水性化合物。鞣質(zhì)是多羥基衍生物，列為親水性化合物。油脂、揮發(fā)油、蠟、脂溶性色素都是強列為親水性化合物。油脂、揮發(fā)油、蠟、脂溶性色素都是強親脂性成分。親脂性成分。 萜類、甾體等脂環(huán)類及芳香類化合物因為極性較小，易溶于萜類、甾體等脂環(huán)類及芳香類化合物因為極性較小，易溶于氯仿、乙醚等親脂性溶劑中；氯仿、乙醚等親脂性溶劑中； 糖苷、氨基酸等成分極性較大，易溶于水及含水醇中；糖苷、氨基酸等成分極性較大，易溶于水及含水醇中； 酸性、堿性及兩性化合物，因為存在狀態(tài)（分子或離子形式）酸性、堿性及兩性化合物，因為存在狀態(tài)（分子或離子形式）隨溶液而異，故溶解度將隨隨溶液而異

7、，故溶解度將隨pHpH而改變。而改變。 水蒸氣蒸餾法水蒸氣蒸餾法水蒸氣蒸餾法只適用于具有揮發(fā)性、能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞，與水不發(fā)生反應，且難溶或不溶于水的成分的提取。天然藥物中的揮發(fā)油、某些小分子生物堿如麻黃堿、煙堿、檳榔堿以及某些小分子的酚性物質(zhì)如牡丹酚等的提取可采用水蒸氣蒸餾法。 升華法升華法某些固體物質(zhì)如水楊酸、苯甲酸、樟腦等受某些固體物質(zhì)如水楊酸、苯甲酸、樟腦等受熱在低于其熔點的溫度下，不經(jīng)過熔化就可直接熱在低于其熔點的溫度下，不經(jīng)過熔化就可直接轉(zhuǎn)化為蒸氣，蒸氣遇冷后又凝結(jié)成固體稱為升華。轉(zhuǎn)化為蒸氣，蒸氣遇冷后又凝結(jié)成固體稱為升華。天然藥物中有一些成分具有升華性質(zhì)，能利用升天然藥物中

8、有一些成分具有升華性質(zhì)，能利用升華法直接中藥材中提取出來。但天然藥物成分一華法直接中藥材中提取出來。但天然藥物成分一般可升華的很少。般可升華的很少。 超臨界流體萃取法超臨界流體萃取法 超臨界萃取法 是一種集提取和分離于一體，又基本上不用有機溶劑的新技術(shù)。 超臨界流體 是處于臨界溫度（Tc）和臨界壓力（Pc）以上，介于氣體和液體之間的流體。這種流體同時具有液體和氣體的雙重特性。 可以作為超臨界流體的物質(zhì)：CO2、NH3、C2H6、CCL2F2、C7H16等，實際應用CO2較多。超臨界流體萃取法超臨界流體萃取法 CO2超臨界流體對物質(zhì)溶解作用有一定選擇性，主要與物質(zhì)的極性、沸點、分子量相關(guān)密切。極

9、性較低的化合物易萃取，化合物極性基團多，萃取較難。對此，近年來采用再超臨界流體萃取中加入夾帶劑的方法。 夾帶劑是在被萃取溶質(zhì)和超臨界流體組成的二元系統(tǒng)中加入的第三組分，從而改善原來溶質(zhì)的溶解度。常用的夾帶劑：甲醇、乙醇、丙酮等超臨界流體萃取法超臨界流體萃取法超臨界流體萃取中藥成分的主要優(yōu)點：可以在接近室溫下進行工作，防止某些對熱不穩(wěn)定的成分被破壞或逸散。如：通過對丹參超臨界萃取物的高效液相色譜法分析表明，丹參酮A含量為43.55%，以丹參酮為3.29%，丹參酮為7.60%，與普通方法相比總丹參酮類成分得到較好富集；再有人對丹參中活性成分的超臨界二氧化碳萃取工藝進行研究，現(xiàn)已第1夾帶劑進行萃取得

10、丹參酮類活性部位，再用第2夾帶劑繼續(xù)萃取，得丹參素和原兒茶醛等酚酸類有效成分。萃取過程中幾乎不用有機溶劑，萃取物中無有機物溶劑 殘留，對環(huán)境無公害提取效率高，節(jié)約能耗等其他方法其他方法組織破碎法組織破碎法某些對熱不穩(wěn)定成分又可溶于水時，可用組織破碎提取法壓榨法壓榨法某些成分在新鮮原料中含量較高或新鮮原料富含肉質(zhì)可用壓榨法微波提取法微波提取法二、有效成分的分離與精制二、有效成分的分離與精制化學成分分離精制常用方法原理化學成分分離精制常用方法原理 根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進行分離根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進行分離 根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進行分離根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進行分離 （逆流色譜技術(shù)）

11、（逆流色譜技術(shù)） 根據(jù)物質(zhì)的吸附性差別進行分離根據(jù)物質(zhì)的吸附性差別進行分離 （ODSODS與大孔吸附樹脂技術(shù)）與大孔吸附樹脂技術(shù)） 根據(jù)物質(zhì)分子大小差異進行分離根據(jù)物質(zhì)分子大小差異進行分離 （膜分離與凝膠技術(shù)）（膜分離與凝膠技術(shù)） 根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進行分離根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進行分離 1、利用溫度不同引起溶解度的改變、利用溫度不同引起溶解度的改變2、改變混合溶劑的極性、改變混合溶劑的極性3、調(diào)節(jié)溶液的、調(diào)節(jié)溶液的pH值，改變分子的存在狀態(tài)值，改變分子的存在狀態(tài)4、沉淀法、沉淀法 5、鹽析法、鹽析法 根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進行分離不同進行分離 分配系數(shù)（分配

12、系數(shù)（K K） 兩種相互不能任意混溶的溶劑（如氯兩種相互不能任意混溶的溶劑（如氯仿與水）如置分液漏斗中充分振搖，放置后即可分成兩仿與水）如置分液漏斗中充分振搖，放置后即可分成兩相。此時如果其中含有溶質(zhì)，則溶質(zhì)在兩相溶劑中的分相。此時如果其中含有溶質(zhì)，則溶質(zhì)在兩相溶劑中的分配比（配比（K）在一定溫度及壓力下為一常數(shù)，可以下式表示：）在一定溫度及壓力下為一常數(shù)，可以下式表示：K=CU/CL K：分配系數(shù)；：分配系數(shù)；CU：溶質(zhì)在上相溶劑中的濃度；：溶質(zhì)在上相溶劑中的濃度；CL：溶：溶質(zhì)在下相溶劑中的濃度。質(zhì)在下相溶劑中的濃度。 根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進行分離不

13、同進行分離1、液、液-液萃取法液萃取法2、逆流連續(xù)萃取法、逆流連續(xù)萃取法3、逆流分配法（、逆流分配法（CounterCurrent Distribution，CCD） 4、液滴逆流色譜法（、液滴逆流色譜法（DCCC）5、高速逆流色譜法（高速逆流色譜法（HSCCC）6、氣液分配色譜（、氣液分配色譜（GC或或GLC）7、液、液-液分配色譜（液分配色譜（LC或或LLC）1 1、液、液- -液萃取法液萃取法利用混合物中各成分在兩種互不相溶的溶劑中分配系數(shù)的不同而達到利用混合物中各成分在兩種互不相溶的溶劑中分配系數(shù)的不同而達到分離的方法。分離的方法。萃取時如果各成分的分配系數(shù)相差越大，分離效率越高。萃取

14、時如果各成分的分配系數(shù)相差越大，分離效率越高。水提取液中的有效成分是親脂性的物質(zhì)，一般多用親脂性有機溶劑，水提取液中的有效成分是親脂性的物質(zhì)，一般多用親脂性有機溶劑，如苯、氯仿或乙醚進行兩相萃取；有效成分是偏于親水性的物質(zhì)，需如苯、氯仿或乙醚進行兩相萃??；有效成分是偏于親水性的物質(zhì)，需用弱親脂性的溶劑，例如乙酸乙酯、丁醇等。用弱親脂性的溶劑，例如乙酸乙酯、丁醇等。提取黃酮類成分多用乙酸乙脂和水的兩相萃取。提取親水性強的皂甙提取黃酮類成分多用乙酸乙脂和水的兩相萃取。提取親水性強的皂甙則多選用正丁醇、異戊醇和水作兩相萃取。則多選用正丁醇、異戊醇和水作兩相萃取。2 2、高速逆流色譜、高速逆流色譜 (

15、High-speed Countercurrent Chromatography，HSCCC) 大多數(shù)色譜法都需要有固相載體某種形式的選擇性吸附作大多數(shù)色譜法都需要有固相載體某種形式的選擇性吸附作用。在應用固相載體色譜分離中，往往會存在不同程度的用。在應用固相載體色譜分離中，往往會存在不同程度的不可逆吸附，造成被分離樣品的損失，尤其在分離微量樣不可逆吸附，造成被分離樣品的損失，尤其在分離微量樣品時受到限制。品時受到限制。 高速逆流色譜，是近十年迅速發(fā)展起來的新型液高速逆流色譜，是近十年迅速發(fā)展起來的新型液液分配液分配色譜技術(shù)。與其它液相色譜分離方法相比它不使用固相色譜技術(shù)。與其它液相色譜分離方

16、法相比它不使用固相載體作固定相，被分離物質(zhì)在互不相溶兩相分配分離，克載體作固定相，被分離物質(zhì)在互不相溶兩相分配分離，克服了固相載體帶來的樣品吸附、損失、污染、峰形拖尾等服了固相載體帶來的樣品吸附、損失、污染、峰形拖尾等缺點。且花費溶劑少，分辨率高，可進行純品制備。利用缺點。且花費溶劑少，分辨率高，可進行純品制備。利用HSCCCHSCCC，中草藥粗提物的分離純化制備可同步完成，被分，中草藥粗提物的分離純化制備可同步完成，被分離物可定量回收。離物可定量回收。 HSCCCHSCCC的應用的應用 1. HSCCC的分離效率與氣相色譜和高效液相色譜等技術(shù)相比較，前者不適宜用它完成組成復雜的混合物的全譜分

17、離分析。而其對于樣品的預處理條件較放松及回收率高，制備量大，特別適用于特定部位和特定組分的分離純化與制備。 HSCCCHSCCC的應用的應用2 .制備制備中藥化學對照品中藥化學對照品3. 中草藥化學對照品應具有高度均勻性，量值準確性和良中草藥化學對照品應具有高度均勻性，量值準確性和良好穩(wěn)定性，其純度要求很高。制備型好穩(wěn)定性，其純度要求很高。制備型HPLC曾是國外常曾是國外常用的主要手段。但是其設(shè)備和載體填料價格很高對樣用的主要手段。但是其設(shè)備和載體填料價格很高對樣品前期處理要求嚴格，存在不可逆吸附，溶劑用量大的品前期處理要求嚴格，存在不可逆吸附，溶劑用量大的缺點。因此致力于缺點。因此致力于HS

18、CCC分離、統(tǒng)化、制備中草藥有分離、統(tǒng)化、制備中草藥有效成分對照品的研究和產(chǎn)業(yè)化，具有現(xiàn)實意義。效成分對照品的研究和產(chǎn)業(yè)化，具有現(xiàn)實意義。3 3、高效液相色譜、高效液相色譜( (HPLC)HPLC) 中藥的成分非常復雜，以往常用的薄層色譜等中藥的成分非常復雜，以往常用的薄層色譜等方法因其精密度、準確度、靈敏度、重現(xiàn)性差而方法因其精密度、準確度、靈敏度、重現(xiàn)性差而不能滿足中藥現(xiàn)代化發(fā)展的需要。高效液相色譜不能滿足中藥現(xiàn)代化發(fā)展的需要。高效液相色譜正是以其穩(wěn)定、可靠、高效的特點成為中藥研究正是以其穩(wěn)定、可靠、高效的特點成為中藥研究的最重要的分析方法。中藥質(zhì)量的控制、天然藥的最重要的分析方法。中藥質(zhì)

19、量的控制、天然藥物化學成分的分離及分析測定等。物化學成分的分離及分析測定等。3 3、高效液相色譜、高效液相色譜( (HPLC)HPLC) 檢測器是液相色譜的三大關(guān)鍵部件（高壓輸液泵、高效檢測器是液相色譜的三大關(guān)鍵部件（高壓輸液泵、高效色譜柱和檢測器）之一。其發(fā)展在某種意義上決定著色譜柱和檢測器）之一。其發(fā)展在某種意義上決定著HPLCHPLC技術(shù)的進步。理想的檢測器應具有以下特點：技術(shù)的進步。理想的檢測器應具有以下特點： 靈敏度高；靈敏度高； 對溫度變化和流量波動不敏感；對溫度變化和流量波動不敏感； 死體積小，不使峰額外地擴展；死體積小，不使峰額外地擴展； 對溶劑無響應，能用于梯度洗脫操作對溶劑

20、無響應，能用于梯度洗脫操作 線性范圍寬；線性范圍寬； 對所有樣品都有響應；對所有樣品都有響應； 對樣品無破壞性。對樣品無破壞性。常用的常用的HPLCHPLC檢測器檢測器（1 1） 紫外紫外- -可見分光檢測器可見分光檢測器（2 2） 示差折光檢測器示差折光檢測器（3 3） 二極管陣列檢測器二極管陣列檢測器（4 4） 蒸發(fā)光檢測器蒸發(fā)光檢測器（5 5） 質(zhì)譜檢測器質(zhì)譜檢測器（6 6）C C、H H核磁檢測器核磁檢測器高效液相色譜的應用高效液相色譜的應用 中藥化學成分分析中藥化學成分分析 成分分離制備成分分離制備 (1) 特別適用于極性較大的成分特別適用于極性較大的成分(如皂苷類如皂苷類)分離；分

21、離； (2) 先以分析色譜摸索分離條件；先以分析色譜摸索分離條件； (3) 樣品一定要用流動相溶解，再以濾膜過濾。樣品一定要用流動相溶解，再以濾膜過濾。 根據(jù)物質(zhì)的吸附性差別進行分離根據(jù)物質(zhì)的吸附性差別進行分離 在天然有機化合物分離及精制工作中，吸附現(xiàn)象利用得十在天然有機化合物分離及精制工作中，吸附現(xiàn)象利用得十分廣泛。其中又以固分廣泛。其中又以固-液吸附用得最多，其分：液吸附用得最多，其分： 物理吸附物理吸附( (表面吸附，表面吸附，physical adsorption)physical adsorption)：以：以硅膠、硅膠、氧化鋁及活性炭為吸附劑氧化鋁及活性炭為吸附劑 化學吸附（化學吸

22、附（chemical adsorptionchemical adsorption） 半化學吸附（半化學吸附（semichemicalsemichemical adsorption adsorption）：聚酰胺層析）：聚酰胺層析1 1、物理吸附、物理吸附 液液- -固物理吸附色譜是運用較多的一種方法，特別適用于固物理吸附色譜是運用較多的一種方法，特別適用于很多中等分子量的樣品（分子量小于很多中等分子量的樣品（分子量小于1 1，000000的低揮發(fā)性的低揮發(fā)性樣品）的分離，尤其是脂溶性成分。一般不適用于高分樣品）的分離，尤其是脂溶性成分。一般不適用于高分子量樣品如蛋白質(zhì)、多糖或離子型親水性化合物

23、等的分子量樣品如蛋白質(zhì)、多糖或離子型親水性化合物等的分離。離。 吸附層析的分離效果，決定于吸附劑、溶劑和被分離化吸附層析的分離效果，決定于吸附劑、溶劑和被分離化合物的性質(zhì)這三個因素。合物的性質(zhì)這三個因素。 吸附劑吸附劑 硅膠硅膠 氧化鋁氧化鋁 活性炭活性炭吸附劑的特點吸附劑的特點 硅膠和氧化鋁為極性吸附劑，有以下特點：硅膠和氧化鋁為極性吸附劑，有以下特點： 對極性物質(zhì)具有較強的親和能力。故同為溶質(zhì)，極性強對極性物質(zhì)具有較強的親和能力。故同為溶質(zhì)，極性強者將被優(yōu)先吸附。者將被優(yōu)先吸附。 溶劑極性越弱，則吸附劑對溶質(zhì)將表現(xiàn)出越強的吸附能溶劑極性越弱，則吸附劑對溶質(zhì)將表現(xiàn)出越強的吸附能力。溶劑極性增

24、強，則吸附劑對溶質(zhì)的吸附能力即隨之減力。溶劑極性增強，則吸附劑對溶質(zhì)的吸附能力即隨之減弱。弱。 溶質(zhì)即使被硅膠、氧化鋁吸附，但一旦加入極性較強的溶質(zhì)即使被硅膠、氧化鋁吸附，但一旦加入極性較強的溶劑時，又可被后者置換洗脫下來。溶劑時，又可被后者置換洗脫下來。 吸附劑的特點吸附劑的特點 活性炭因為是非極性吸附劑，故與硅膠、氧化鋁相反，活性炭因為是非極性吸附劑，故與硅膠、氧化鋁相反，對非極性物質(zhì)具有較強的親和能力，在水中對該類物質(zhì)對非極性物質(zhì)具有較強的親和能力，在水中對該類物質(zhì)表現(xiàn)出強的吸附能力。表現(xiàn)出強的吸附能力。 溶劑極性降低，則活性炭對該類物質(zhì)的吸附能力也隨之溶劑極性降低，則活性炭對該類物質(zhì)的

25、吸附能力也隨之降低。故從活性炭上洗脫被吸附物質(zhì)時，洗脫溶劑的洗降低。故從活性炭上洗脫被吸附物質(zhì)時，洗脫溶劑的洗脫能力將隨溶劑極性的減弱而增強脫能力將隨溶劑極性的減弱而增強。 溶劑溶劑 洗脫劑的選擇，須根據(jù)被分離物質(zhì)與所選用的吸附劑性洗脫劑的選擇，須根據(jù)被分離物質(zhì)與所選用的吸附劑性質(zhì)這兩者結(jié)合起來加以考慮。在用極性吸附劑進行層析質(zhì)這兩者結(jié)合起來加以考慮。在用極性吸附劑進行層析時，當被分離物質(zhì)為弱極性物質(zhì)，一般選用弱極性溶劑時，當被分離物質(zhì)為弱極性物質(zhì)，一般選用弱極性溶劑為洗脫劑；被分離物質(zhì)為強極性成分，則須選用極性溶為洗脫劑；被分離物質(zhì)為強極性成分，則須選用極性溶劑為洗脫劑。如果對某一極性物質(zhì)用

26、吸附性較弱的吸附劑為洗脫劑。如果對某一極性物質(zhì)用吸附性較弱的吸附劑（如以硅藻土或滑石粉代替硅膠），則洗脫劑的極性劑（如以硅藻土或滑石粉代替硅膠），則洗脫劑的極性亦須相應降低。亦須相應降低。 被分離物質(zhì)的性質(zhì)被分離物質(zhì)的性質(zhì) 被分離的物質(zhì)與吸附劑，洗脫劑共同構(gòu)成吸附層析中的被分離的物質(zhì)與吸附劑，洗脫劑共同構(gòu)成吸附層析中的三個要素，彼此緊密相連。在指定的吸附劑與洗脫劑的三個要素，彼此緊密相連。在指定的吸附劑與洗脫劑的條件下，各個成分的分離情況，直接與被分離物質(zhì)的結(jié)條件下，各個成分的分離情況，直接與被分離物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)有關(guān)。對極性吸附劑而言，成分的極性大，吸構(gòu)與性質(zhì)有關(guān)。對極性吸附劑而言，成分的極

27、性大，吸附性強。附性強。2 2、吸附、吸附薄層色譜薄層色譜 薄層層析是一種簡便、快速、微量的層析方法。一般將薄層層析是一種簡便、快速、微量的層析方法。一般將吸附劑撒布到平面如吸附劑撒布到平面如玻璃片玻璃片上，形成一薄層進行層析時，上，形成一薄層進行層析時，即稱即稱薄層層析。（硅膠、聚酰胺等）薄層層析。（硅膠、聚酰胺等） 針對某些性質(zhì)特殊的化合物的分離與檢出，有時需采用針對某些性質(zhì)特殊的化合物的分離與檢出，有時需采用一些特殊薄層。一些特殊薄層。特殊薄層特殊薄層 熒光薄層熒光薄層 絡(luò)合薄層絡(luò)合薄層 酸堿薄層和酸堿薄層和PHPH緩沖薄層緩沖薄層 薄層層析法應用薄層層析法應用 化學成分的預試化學成分的

28、預試 化學成分的鑒定化學成分的鑒定 探索柱層分離的條件探索柱層分離的條件3 3、吸附柱色譜（柱層析）、吸附柱色譜（柱層析） 吸附劑的用量吸附劑的用量 一般為樣品量的一般為樣品量的3060倍。樣品極性較小、難以分離者，倍。樣品極性較小、難以分離者，吸附劑用量可適當提高到樣品量的吸附劑用量可適當提高到樣品量的100200倍。據(jù)此可倍。據(jù)此可選擇適當規(guī)格的色譜管，實驗室中常用色譜管的規(guī)格如選擇適當規(guī)格的色譜管，實驗室中常用色譜管的規(guī)格如下所示，其高度與直徑比（下所示，其高度與直徑比（h/d）約為（）約為（15 1）（）（20：1）。）。 柱色譜用的硅膠及氧化鋁通常以柱色譜用的硅膠及氧化鋁通常以100

29、200目或目或200 300目為宜，或甚至直接采用薄層色譜用規(guī)格，其分離效目為宜，或甚至直接采用薄層色譜用規(guī)格，其分離效果可以大大提高。果可以大大提高。3 3、吸附柱色譜、吸附柱色譜 洗脫劑的選擇，以洗脫劑的選擇，以TLCTLC摸索洗脫條件裝柱，濕法摸索洗脫條件裝柱，濕法裝柱（以起始洗脫劑拌勻裝柱）或干法裝柱裝柱（以起始洗脫劑拌勻裝柱）或干法裝柱。3 3、吸附柱色譜、吸附柱色譜（3 3）樣品的預處理）樣品的預處理 能直接溶于洗脫劑的樣品用適量洗脫劑溶解樣品，盡可能能直接溶于洗脫劑的樣品用適量洗脫劑溶解樣品，盡可能少，以利樣品在吸附劑柱上形成狹窄的原始譜帶。少，以利樣品在吸附劑柱上形成狹窄的原始

30、譜帶。 不能溶解于洗脫劑的樣品，則將用能使之溶解的溶劑溶解不能溶解于洗脫劑的樣品，則將用能使之溶解的溶劑溶解后，再用少量吸附劑拌勻，并減壓抽干溶劑或在后，再用少量吸附劑拌勻，并減壓抽干溶劑或在60下加下加熱揮盡溶劑，置真空干燥器中減壓干燥或直接減壓抽干、熱揮盡溶劑，置真空干燥器中減壓干燥或直接減壓抽干、研粉后再小心鋪在吸附劑柱上。研粉后再小心鋪在吸附劑柱上。3 3、吸附柱色譜、吸附柱色譜（4 4）洗脫用溶劑的極性宜逐步增加，跳躍不能太大。）洗脫用溶劑的極性宜逐步增加，跳躍不能太大。 實踐中多用混合溶劑，并通過巧妙調(diào)節(jié)比例以實踐中多用混合溶劑，并通過巧妙調(diào)節(jié)比例以改變極性，達到梯度洗脫分離物質(zhì)的

31、目的。一般混改變極性，達到梯度洗脫分離物質(zhì)的目的。一般混合溶劑中強極性溶劑的影響比較突出，故不可隨意合溶劑中強極性溶劑的影響比較突出，故不可隨意將極性差別很大的兩種溶劑組合在一起使用。將極性差別很大的兩種溶劑組合在一起使用。3 3、吸附柱色譜、吸附柱色譜（5 5）為避免發(fā)生化學吸附，酸性物質(zhì)宜用硅膠、堿性物質(zhì)）為避免發(fā)生化學吸附，酸性物質(zhì)宜用硅膠、堿性物質(zhì)則宜用氧化鋁進行分離。則宜用氧化鋁進行分離。 硅膠、氧化鋁用適當方法處理成中性時，情況會有所硅膠、氧化鋁用適當方法處理成中性時，情況會有所緩解。通常在分離酸性（或堿性）物質(zhì)時，洗脫溶劑中緩解。通常在分離酸性（或堿性）物質(zhì)時，洗脫溶劑中分別加入

32、適量醋酸（或氨、吡啶、二乙胺），?？墒盏椒謩e加入適量醋酸（或氨、吡啶、二乙胺），常可收到防止拖尾、促進分離的效果。防止拖尾、促進分離的效果。4 4、聚酰胺吸附色譜法、聚酰胺吸附色譜法 聚酰胺（聚酰胺（poliamidepoliamide）吸附屬于氫鍵吸附，是）吸附屬于氫鍵吸附，是一種用途十分廣泛的分離方法，極性物質(zhì)與非極一種用途十分廣泛的分離方法，極性物質(zhì)與非極性物質(zhì)均可適用，但特別適合分離酚類、醌類、性物質(zhì)均可適用，但特別適合分離酚類、醌類、黃酮類化合物。黃酮類化合物。5 5、大孔吸附樹脂、大孔吸附樹脂 大孔吸附樹脂是一種具有多孔立體結(jié)構(gòu)人工合成大孔吸附樹脂是一種具有多孔立體結(jié)構(gòu)人工合成的聚

33、合物吸附劑，具有較好的吸附性能。它的吸的聚合物吸附劑，具有較好的吸附性能。它的吸附作用是通過表面吸附、表面電性或形成氫鍵。附作用是通過表面吸附、表面電性或形成氫鍵。 大孔樹脂吸附分離技術(shù)是采用特殊的吸附劑，選大孔樹脂吸附分離技術(shù)是采用特殊的吸附劑，選擇地吸附其中的有效成分，去除無效成分的一種擇地吸附其中的有效成分，去除無效成分的一種提取精制的新工藝。提取精制的新工藝。 大孔吸附樹脂的性質(zhì)大孔吸附樹脂的性質(zhì) 大孔吸附樹脂多為白色的球狀顆粒大孔吸附樹脂多為白色的球狀顆粒粒度多為粒度多為20206060目目，通常分為非極性和極性兩大類，根據(jù)極性大小還可分為通常分為非極性和極性兩大類，根據(jù)極性大小還可

34、分為弱極性、中等極性和強極性。弱極性、中等極性和強極性。 常用的為苯乙烯型和丙烯腈型，在樹脂合成時常用的為苯乙烯型和丙烯腈型，在樹脂合成時根據(jù)需要根據(jù)需要 引入引入極性基團則成為極性樹脂從而增強吸附能力。極性基團則成為極性樹脂從而增強吸附能力。 大孔吸附樹脂的理化性質(zhì)穩(wěn)定，大孔吸附樹脂的理化性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于酸、堿及有機溶不溶于酸、堿及有機溶劑劑。對有機物的選擇性較好，不受無機鹽類及強離子低。對有機物的選擇性較好，不受無機鹽類及強離子低分子化合物存在的分子化合物存在的影響。影響。 大孔吸附樹脂的分離原理大孔吸附樹脂的分離原理 吸附性吸附性 范德華引力或生成氫鍵的結(jié)果。范德華引力或生成氫鍵的結(jié)果。

35、 篩選原理篩選原理 本身多孔性結(jié)構(gòu)所決定。本身多孔性結(jié)構(gòu)所決定。 由于吸附和篩選原理，有機化合物根據(jù)由于吸附和篩選原理，有機化合物根據(jù)吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附脂上經(jīng)一定的溶劑洗脫而分開。附脂上經(jīng)一定的溶劑洗脫而分開。 大孔吸附樹脂的分離原理大孔吸附樹脂的分離原理 有機物與無機物的分離（離子交換樹脂） 一般很容易將二者分離，在中藥成份的提取中，此特征可使提取物中的重金屬和灼燒灰分降至要求的范圍內(nèi)。 大孔吸附樹脂的分離原理大孔吸附樹脂的分離原理 解離物與非解離物的分離 吸附樹脂對有機解離物與非解離物的吸附能力有很大差異，因此可將二者分離，如有機酸在

36、高PH值成鹽，很難被吸附，因此在堿性條件下可把有機酸分離出來，生物堿在酸性介質(zhì)中可以成鹽，因而能通過調(diào)節(jié)PH值進行分離。 大孔吸附樹脂的分離原理大孔吸附樹脂的分離原理 一般有機物與強水溶性物質(zhì)的分離 一般有機物，包括大多數(shù)中藥有效成分，是指有一定的水溶性，但溶解度不大的物質(zhì)，這些物質(zhì)容易被樹脂吸附。強水溶性物質(zhì)如低級醇類、低級胺類、糖及多糖，多數(shù)氨基酸、肽類、蛋白質(zhì)等，難被普通吸附樹脂吸附，用普通樹脂可很容易地將此兩類物質(zhì)分離。（3 3）大孔吸附樹脂分離條件的確立）大孔吸附樹脂分離條件的確立1 1、樹脂的選擇、樹脂的選擇 首先，要根據(jù)被分離化合物的分子體積的大小首先，要根據(jù)被分離化合物的分子體

37、積的大小通過預實驗確定適當孔徑的樹脂。通過預實驗確定適當孔徑的樹脂。 其次，要根據(jù)分子中是否含有酚羥基、羧基或堿其次，要根據(jù)分子中是否含有酚羥基、羧基或堿性氮原子來確定樹脂的型號和分離條件。性氮原子來確定樹脂的型號和分離條件。 大孔吸附樹脂分離條件的確立大孔吸附樹脂分離條件的確立2 2、洗脫液的選擇、洗脫液的選擇 對非極性大孔吸附樹脂，洗脫劑極性越小，洗脫能力越對非極性大孔吸附樹脂，洗脫劑極性越小，洗脫能力越強。對中等極性大孔樹脂和極性較大的化合物來說，則強。對中等極性大孔樹脂和極性較大的化合物來說，則用極性較大的洗脫劑為佳。用極性較大的洗脫劑為佳。 根據(jù)吸附力強弱選用不同的洗脫劑及濃度。為達

38、到滿意根據(jù)吸附力強弱選用不同的洗脫劑及濃度。為達到滿意的效果，可通過幾種洗脫劑濃度的比較來確定最佳洗脫的效果，可通過幾種洗脫劑濃度的比較來確定最佳洗脫濃度。濃度。實際工作中實際工作中甲醇、乙醇、丙酮甲醇、乙醇、丙酮應用較多。應用較多。 大孔吸附樹脂在中藥生產(chǎn)中應用大孔吸附樹脂在中藥生產(chǎn)中應用的優(yōu)點的優(yōu)點1 1、縮小劑量，提高制劑的內(nèi)在質(zhì)量、縮小劑量，提高制劑的內(nèi)在質(zhì)量 大孔吸附樹脂處理可減少提取物中的雜質(zhì)大孔吸附樹脂處理可減少提取物中的雜質(zhì)，提高效成分的含量，使制劑劑量減小，提高效成分的含量，使制劑劑量減小，有利于制成現(xiàn)代劑型的中藥制劑，并便于有利于制成現(xiàn)代劑型的中藥制劑，并便于質(zhì)量控制。質(zhì)量

39、控制。 大孔吸附樹脂在中藥生產(chǎn)中應大孔吸附樹脂在中藥生產(chǎn)中應用的優(yōu)點用的優(yōu)點2 2、減小產(chǎn)品的吸濕性、減小產(chǎn)品的吸濕性 傳統(tǒng)的提取方法所提的中成藥大部分傳統(tǒng)的提取方法所提的中成藥大部分具有較強的吸潮性，是中藥生產(chǎn)及儲藏中長期存在的問題。具有較強的吸潮性，是中藥生產(chǎn)及儲藏中長期存在的問題。而經(jīng)大孔吸附樹脂處理可有效去除吸潮成分，增強產(chǎn)品的而經(jīng)大孔吸附樹脂處理可有效去除吸潮成分，增強產(chǎn)品的穩(wěn)定性。穩(wěn)定性。3 3、有效去除重金屬、有效去除重金屬 既保證了患者的用藥安全，同時也解決既保證了患者的用藥安全，同時也解決了中藥重金屬超標的難題，為中藥進入國際市場創(chuàng)造了了中藥重金屬超標的難題，為中藥進入國際市

40、場創(chuàng)造了條條件。件。 再生能力強再生能力強 大孔吸附樹脂在中藥生產(chǎn)中的應用大孔吸附樹脂在中藥生產(chǎn)中的應用 活性成分的提取分離活性成分的提取分離 如皂甙（人參總皂甙、蒺藜總皂昔）、黃酮（葛如皂甙（人參總皂甙、蒺藜總皂昔）、黃酮（葛根總黃酮、山楂總黃酮、淫羊藿總黃酮）、內(nèi)酯、生物堿根總黃酮、山楂總黃酮、淫羊藿總黃酮）、內(nèi)酯、生物堿等化合物等化合物。 大孔吸附樹脂在中藥生產(chǎn)中的應用大孔吸附樹脂在中藥生產(chǎn)中的應用 質(zhì)量標準制定質(zhì)量標準制定（樣品的前處理）（樣品的前處理） 除去干擾成分，如金向群等在用薄層掃描法測定益壽永真除去干擾成分，如金向群等在用薄層掃描法測定益壽永真口服液中人參皂甙口服液中人參皂甙

41、Rg1的含量時，用的含量時，用YPRII型大孔吸附型大孔吸附樹脂對樣品進行處理，樹脂對樣品進行處理，70乙醇的洗脫液即為含人參皂甙乙醇的洗脫液即為含人參皂甙Rg1的流分，由于去除了人參皂甙的流分，由于去除了人參皂甙Rg1的色譜位置的干擾的色譜位置的干擾成分，可進行薄層掃描來確定人參皂苛成分，可進行薄層掃描來確定人參皂苛Rg1的含量，為復的含量，為復方中的人參皂甙方中的人參皂甙Rg1的含量測定提供了一個簡便可行的方的含量測定提供了一個簡便可行的方法。法。 大孔吸附樹脂的處理大孔吸附樹脂的處理 市售大孔吸附樹脂一般含有未聚合的單體、致孔劑（多市售大孔吸附樹脂一般含有未聚合的單體、致孔劑（多為長碳鏈

42、的脂肪醇類）、分散劑和防腐劑等雜質(zhì)，使用為長碳鏈的脂肪醇類）、分散劑和防腐劑等雜質(zhì)，使用前必須經(jīng)過處理。前必須經(jīng)過處理。 處理方法是：采用乙醇濕法裝柱，隨用乙醇在柱上作流處理方法是：采用乙醇濕法裝柱，隨用乙醇在柱上作流動清洗，并不時檢查流出的乙醇，直至流出的乙醇液與動清洗，并不時檢查流出的乙醇，直至流出的乙醇液與水混合不呈現(xiàn)白色乳濁現(xiàn)象即可，然后用大量蒸餾水洗水混合不呈現(xiàn)白色乳濁現(xiàn)象即可，然后用大量蒸餾水洗去乙醇。去乙醇。 大孔吸附樹脂柱色譜大孔吸附樹脂柱色譜 樣品一般用水溶液上柱。洗脫時根據(jù)吸附作用強弱不同樣品一般用水溶液上柱。洗脫時根據(jù)吸附作用強弱不同選用不同濃度的甲醇、乙醇等含水溶劑，直

43、至純的甲醇、選用不同濃度的甲醇、乙醇等含水溶劑，直至純的甲醇、乙醇，乃至丙酮、乙酸乙酯等。對非極性大孔吸附樹脂，乙醇，乃至丙酮、乙酸乙酯等。對非極性大孔吸附樹脂，洗脫溶劑極性越小，洗脫能力越強。對于中等極性的大洗脫溶劑極性越小，洗脫能力越強。對于中等極性的大孔吸附樹脂和極性較大的化合物來說，則以用極性較大孔吸附樹脂和極性較大的化合物來說，則以用極性較大的溶劑為宜。的溶劑為宜。 根據(jù)物質(zhì)分子大小差異進行分離根據(jù)物質(zhì)分子大小差異進行分離 天然有機化合物分子大小各異，中藥的化學成分天然有機化合物分子大小各異，中藥的化學成分非常復雜，通常含有無機鹽、生物堿、氨基酸和非常復雜，通常含有無機鹽、生物堿、氨

44、基酸和有機酸、酚類、酮類、皂昔、甾族和萜類化合物有機酸、酚類、酮類、皂昔、甾族和萜類化合物以及蛋白質(zhì)、多糖、粘液質(zhì)、鞣質(zhì)、淀粉、纖維以及蛋白質(zhì)、多糖、粘液質(zhì)、鞣質(zhì)、淀粉、纖維素、無機鹽等。素、無機鹽等。相對分子質(zhì)量的分布很寬，從幾相對分子質(zhì)量的分布很寬，從幾十到幾百萬十到幾百萬。故可據(jù)此進行分離。表。故可據(jù)此進行分離。表1 1列出了部列出了部分中藥所含主要成分的相對分子質(zhì)量范圍。分中藥所含主要成分的相對分子質(zhì)量范圍。部分中藥主要成分的相對分子質(zhì)量部分中藥主要成分的相對分子質(zhì)量 根據(jù)物質(zhì)分子大小差異進行分離根據(jù)物質(zhì)分子大小差異進行分離 一般來講，高相對分子質(zhì)量物質(zhì)主要是膠體和纖維素等一般來講，高

45、相對分子質(zhì)量物質(zhì)主要是膠體和纖維素等非藥效成分或藥效較低的成分，非藥效成分或藥效較低的成分，藥物有效部位的相對分藥物有效部位的相對分子質(zhì)量一般較小，僅有幾百到幾千道爾頓子質(zhì)量一般較小，僅有幾百到幾千道爾頓 。 根據(jù)物質(zhì)分子大小差異進行分離根據(jù)物質(zhì)分子大小差異進行分離1 1、凝膠過濾法、凝膠過濾法2 2、膜分離法膜分離法3 3、超濾法、超濾法4 4、超速離心法、超速離心法 凝膠過濾法（gel filtration） 也叫凝膠滲透色譜法（也叫凝膠滲透色譜法（gel permeation gel permeation chromatographychromatography）、分子篩過濾（）、分子篩過濾（molecular molecular sieve filtrationsieve filtration）、排阻色譜）、排阻色譜 (exclusion (exclusion chromatographychromatography）。）。 利用分子篩分離物質(zhì)的一種方法。利用分子篩分離