硝酸甘油注射液含量檢驗(yàn)方法驗(yàn)證(定量限)

1、編號(hào)：z-v-aq004-03硝酸甘油注射液含量檢驗(yàn)方法驗(yàn)證方案1、起草、審核與批準(zhǔn)22、目的23、范圍24、職責(zé)25、概述36、執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范37、驗(yàn)證前的支持性確認(rèn)38、驗(yàn)證內(nèi)容59、數(shù)據(jù)分析910、偏差911、確認(rèn)結(jié)果評(píng)定與結(jié)論912、再驗(yàn)證周期9所屬部門(mén)職務(wù)簽名日期起草年 月口審核年 月口審核年 月曰批準(zhǔn)年 月fi2、目的:硝酸廿油注射液在產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程中，需用高效液相色譜法測(cè)定其含量，為確定其對(duì)含量測(cè) 定檢驗(yàn)方法的適用性，特制定木驗(yàn)證方案。3、范圍：木方案適用于硝酸甘油注射液含量檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證。4、職責(zé):組長(zhǎng)姓名職務(wù)/職稱(chēng)部門(mén)職責(zé)qc主管質(zhì)量檢驗(yàn)室1負(fù)責(zé)組織起草確認(rèn)方案。2.負(fù)責(zé)協(xié)調(diào)、

2、組織確認(rèn)工作。成員經(jīng)理質(zhì)量管理部1. 負(fù)責(zé)確認(rèn)方案的審核和監(jiān)督。2. 負(fù)責(zé)確認(rèn)方案的審核與批準(zhǔn)。主管質(zhì)量管理部1 負(fù)責(zé)確認(rèn)方案、報(bào)告的審核。2.負(fù)責(zé)起草確認(rèn)合格證書(shū)。主管設(shè)備工程部1負(fù)責(zé)儀器儀表均已校準(zhǔn)合格，且在有效期內(nèi)。2.執(zhí)行安裝、運(yùn)行和性能確認(rèn)。確認(rèn)專(zhuān)員質(zhì)量管理部1. 負(fù)責(zé)相關(guān)確認(rèn)項(xiàng)目的測(cè)試。2. 保證測(cè)試數(shù)據(jù)的真實(shí)性。確認(rèn)專(zhuān)員質(zhì)量管理部1. 負(fù)責(zé)相關(guān)確認(rèn)項(xiàng)口的測(cè)試。2. 保證測(cè)試數(shù)據(jù)的真實(shí)性。5、概述:高效液相色譜法(high performance liquid chromatography, hplc)系采用高壓輸液泵將流 動(dòng)相泵入到裝有填充劑的色譜柱，對(duì)供試品進(jìn)行分離測(cè)定的色譜方

3、法。注入的供試品，由流 動(dòng)相帶入注內(nèi)，各組分在柱內(nèi)被分離，并依次進(jìn)入檢測(cè)器，由積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色 譜圖并進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，得到測(cè)定結(jié)果。由于應(yīng)用了各種特性的微粒填料和加壓的液體流動(dòng) 相，本法具有分離性能高、分析速度快的特點(diǎn)。硝酸甘油注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定，在產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程半成品和成品檢驗(yàn)，需用高效液相 色譜法測(cè)定其含量。6、執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)與規(guī)范：本方案以lc-20a高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程、pc-2001高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn) 操作規(guī)程、硝酸廿油注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)，制定了硝酸甘油注射液驗(yàn)證方案。7、驗(yàn)證前的支持性確認(rèn)：儀器確認(rèn)前應(yīng)確認(rèn)與本次確認(rèn)相關(guān)聯(lián)的完成情況。7. 1文件的檢杳確認(rèn)：序號(hào)文件名稱(chēng)

4、文件編號(hào)檢查結(jié)果1硝酸u油注射液含量檢驗(yàn)方法驗(yàn)證方案z-v-aq004-03合格不合格2硝酸甘油注射液檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程s0p-3505合格不合格3lc-20a型高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程s0p-q6115合格不合格4pc-2001型高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程s0p-q6041合格不合格5高效液相色譜儀日常清潔維護(hù)與保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作s0p-q6044合格不合格6玻璃儀器清洗與貯存標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程sop-q0064合格不合格7屯子天平標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程s0p-q6017合格不合格8電子天平h常清潔維護(hù)與保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程s0p-q6018合格不合格檢查人/日期：復(fù)核人/h期：7.2儀器儀表的檢杳確認(rèn)：7.2.1儀

5、器儀表量程、規(guī)格必須符合測(cè)試及設(shè)計(jì)規(guī)范要求。7.2.2儀器儀表使用前必須經(jīng)具有相應(yīng)資質(zhì)機(jī)構(gòu)校驗(yàn)，且在有效期內(nèi)。7.3公用工程系統(tǒng)的檢查確認(rèn)：系統(tǒng)名稱(chēng)文件編號(hào)檢查人檢查結(jié)果合格不合格合格不合格合格不合格7.4相關(guān)人員的培訓(xùn):7.4.1文件培訓(xùn)文件培訓(xùn)表序號(hào)文件名稱(chēng)文件編碼檢查結(jié)果1硝酸甘油注射液含量檢驗(yàn)方法驗(yàn)證方案z-v-aq004-03是口否口2硝酸甘汕注射液檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程s0p-3505是口否口3lc-20a型高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程s0p-q6115是口否口4pc-2001型高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程s0p-q6041是口否口5高效液相色譜儀日常清潔維護(hù)與保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程s0p-q60

6、44是口否口6玻璃儀器清洗與貯存標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程sop-q0064是口否口7電子天平標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程s0p-q6017是口否口8電子天平日常清潔維護(hù)與保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程s0p-q6018是口否口偏差說(shuō)明/結(jié)論：檢查人日期復(fù)核人口期7.4.2人員培訓(xùn)人員培訓(xùn)表序號(hào)姓名是否培訓(xùn)健康狀況1是口否口是口否口2是口否口是口否口3是口否口是口否口4是口否口是口否口偏差說(shuō)明/結(jié)論：檢查人日期復(fù)核人日期8、驗(yàn)證內(nèi)容：8.1硝酸甘汕注射液含量測(cè)定方法&1.1儀器與用具：電子天平、高效液相色譜儀、容量瓶、移液管。8.1.2試劑與試液：乙膳水（50： 50）、硝酸甘油對(duì)照品。8.1.3條件：照高效液相色譜法測(cè)定。色譜

7、條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙月芥水（50： 50） 為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為215mm取硝酸甘油對(duì)照品約1.25g,置25ml量瓶中，加0.1mol/l鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度， 即得（每lml中約含0.5mg的溶液）o置水浴中加熱10分鐘,放冷,用0.1mol/l氫氧化鈉 溶液調(diào)節(jié)ph值至小性，取20卩1,注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，在相對(duì)保留時(shí)間約0.4 處應(yīng)出現(xiàn)兩個(gè)降解產(chǎn)物峰（1,2二硝酸甘油和1,3二硝酸甘油峰），兩峰z間的分離度應(yīng)大 t l.oo理論板數(shù)按硝酸甘汕峰計(jì)算不低t 2000o樣品溶液制備：精密量取木品lml,置50ml量瓶屮，加流動(dòng)相稀釋至刻度

8、，搖勻，即得（每lml中約含硝酸甘油0.1 mg的溶液）o對(duì)照溶液制備：取硝酸甘油對(duì)照品約0.5g,置50ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖 勻，即得。測(cè)定方法：精密量取樣品溶液與對(duì)照溶液各20ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標(biāo) 法以峰面積計(jì)算，即得。ax xcr xl.o 1aao/計(jì)算公式：含量（） = ar x 1/50x5 %°式?。篴x-表示供試品溶液所得色譜圖中主成分的峰面積；ar -表示對(duì)照品溶液的峰面積；cr -表示對(duì)照品的濃度。判定標(biāo)準(zhǔn)：木品含硝酸甘油（c3h5n3o9）應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%110.0%。8.2重復(fù)性試驗(yàn)：821取同一批硝酸甘油注射液樣品，按硝

9、酸甘油注射液含量測(cè)定方法同一人共制備6份 供試液測(cè)定，所得結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差w2.0%。重復(fù)性試驗(yàn)記錄名稱(chēng)硝酸甘油注射液批號(hào)：儀器型號(hào)：對(duì)照品批號(hào)來(lái)源含量：配制口期年 月 口有效期至年月系統(tǒng)性試驗(yàn)分離度：理論板數(shù)：對(duì)照品稱(chēng)樣量對(duì)1：對(duì)2：樣品取樣量樣品 1:l-*50ml樣品 2:l->50ml對(duì)照1峰面積平均值：對(duì)照2峰面積平均值：樣品序號(hào)1 23456峰面積含量rsd%（應(yīng) w2.0%）結(jié)論檢驗(yàn)人日期復(fù)核人日期8.3屮間精密度試驗(yàn)8.3.1同一批硝酸甘油注射液，由2個(gè)不同的人在不同時(shí)間不同儀器分別測(cè)定2次的結(jié)果, 所得結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差w2.0%。表1中間精密度試驗(yàn)記錄名稱(chēng)硝酸廿油注

10、射液批號(hào)：儀器型號(hào):對(duì)照品批號(hào)來(lái)源含量：配制日期年 月曰有效期至年月日系統(tǒng)性試驗(yàn)分離度：理論板數(shù)：對(duì)照品稱(chēng)樣量對(duì)1：對(duì)厶樣品取樣量樣品 1:1-> 50ml樣品 2:l->50ml對(duì)照1峰面積平均值：對(duì)照2峰面積平均值：樣品序號(hào)m1-2平均值含量1含量2峰面積樣品序號(hào)2-12-2平均值含量1含量2峰面積平均含量rsd%（應(yīng)w2. 0%）檢驗(yàn)人日期復(fù)核人日期表2中間精密度試驗(yàn)記錄名稱(chēng)硝酸甘油注射液批號(hào)：儀器型號(hào):對(duì)照品批號(hào)來(lái)源含量：配制日期年 月曰有效期至年月日系統(tǒng)性試驗(yàn)分離度：理論板數(shù)：對(duì)照品稱(chēng)樣量對(duì)1：對(duì)厶樣品取樣量樣品 1:lf50inl樣品 2:1-501111對(duì)照1峰面積平

11、均值：對(duì)照2峰面積平均值：樣品序號(hào)1-11-2平均值含量1含量2峰面積樣品序號(hào)2-12-2平均値含量1含量2峰面積平均含量rsd%（應(yīng)w2. 0%）檢驗(yàn)人口期復(fù)核人日期表3中間精密度驗(yàn)證結(jié)果（兩人）名稱(chēng)硝酸甘油注射液批號(hào)含量測(cè)定結(jié)果結(jié)果% % %rsd%（應(yīng)w2. 0%）結(jié)論檢驗(yàn)人口期復(fù)核人fi期8.4. 定量限確認(rèn)8.4.1.定義定量限是指樣品中被測(cè)物質(zhì)能被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精 密度。&42方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙睛水（50： 50）為 流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為215nmo取硝酸甘油對(duì)照品約1.25g,置25ml量瓶中，

12、加0.1mol/l鹽酸溶液溶解并稀釋至刻 度，即得（每lml中約含0.5mg的溶液）。置水浴中加熱10分鐘，放冷，用0.1mol/l氫氧 化鈉溶液調(diào)節(jié)ph值至屮性，取20卩1,注入液相色譜儀屮，記錄色譜圖，在相對(duì)保留吋間約 0.4處應(yīng)出現(xiàn)兩個(gè)降解產(chǎn)物峰（1, 2二硝酸廿油和1, 3二硝酸廿油峰）,兩峰之間的分離 度應(yīng)大于l.oo理論板數(shù)按硝酸甘油峰計(jì)算不低于2000o對(duì)照品溶液制備：取硝酸廿油對(duì)照品約0.5g,置50ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度， 搖勻，即得。供試品溶液制備：精密量取硝酸甘油對(duì)照品 g,置 ml量瓶中，加流動(dòng)和稀釋至刻 度，搖勻，即得（每1訕中約含硝酸廿油0.1 mg的溶液）

13、。測(cè)定法：精密量取上述兩種溶液各20卩1,分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法 以峰面積計(jì)算，即得。計(jì)算公式：含量（）= arxl/50x5 x10°%式屮：£ -表示供試品溶液所得色譜圖屮主成分的峰而積;ar -表示對(duì)照品溶液的峰面積；cr -表示對(duì)照品的濃度。8.4.3. 可接受標(biāo)準(zhǔn)以s/n = 10時(shí)的相應(yīng)濃度作為本品含量檢測(cè)的定量限。8.4.4. 定量限確認(rèn)記錄見(jiàn)附表5。附表5定量限確認(rèn)記錄色譜條件使用儀器對(duì)照品批號(hào)來(lái)源色譜柱型號(hào)品牌流動(dòng)相試劑名稱(chēng)批號(hào)生產(chǎn)廠(chǎng)家檢測(cè)波長(zhǎng)流速柱溫進(jìn)樣量初始濃度(mg/ml)信噪比(x)稀釋濃度(mg/ml) (初始濃度 *x/10)

14、信噪比稀釋濃度(mg/ml) (初始濃度 *x/10)標(biāo)準(zhǔn)要求以信噪比s/n = 10吋的相應(yīng)濃度作為木品含量檢測(cè)的定量限。結(jié)論確認(rèn)人日期復(fù)核人口期9、數(shù)據(jù)分析:通過(guò)對(duì)硝酸甘油注射液含量檢驗(yàn)方法學(xué)試驗(yàn)，重復(fù)性相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏<2.0%；中間精密度和 對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(rsd) <2.0%；以上試驗(yàn)均應(yīng)符合驗(yàn)證合格標(biāo)準(zhǔn)。10、偏差：10在確認(rèn)過(guò)程中有無(wú)偏弟，如有偏弟應(yīng)找出原因，并通知被檢測(cè)部門(mén)進(jìn)行調(diào)查處理。10.2偏差調(diào)查記錄應(yīng)ft!質(zhì)量管理部存檔。11驗(yàn)證結(jié)果評(píng)定與結(jié)論：質(zhì)量管理部負(fù)責(zé)收集各項(xiàng)確認(rèn)、試驗(yàn)結(jié)果記錄，根據(jù)確認(rèn)、試驗(yàn)結(jié)果起草驗(yàn)證報(bào)告，報(bào) 驗(yàn)證委員會(huì)。驗(yàn)證委員會(huì)負(fù)責(zé)對(duì)結(jié)果進(jìn)行綜合評(píng)審，作出確認(rèn)結(jié)論，發(fā)放證書(shū)，確認(rèn)硝酸甘 油注射液含量檢驗(yàn)方法的各項(xiàng)結(jié)果達(dá)到合格標(biāo)準(zhǔn)。并對(duì)確認(rèn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)審，內(nèi)容包扌乩確認(rèn)結(jié)果評(píng)審表評(píng)審項(xiàng)目評(píng)審結(jié)果試驗(yàn)是否冇遺漏？是 否dn/a實(shí)施過(guò)程中對(duì)驗(yàn)證方案有無(wú)修改？是否l1n/a修改原因、依據(jù)以及是否經(jīng)過(guò)批準(zhǔn)？是否l1n/a記錄是否完整？是 否dn/a試驗(yàn)結(jié)果是