大鼠失血性休克繼發(fā)凝血活化的實(shí)驗(yàn)治療

1、大鼠失血性休克繼發(fā)凝血活化的實(shí)驗(yàn)治療作者：王曉蓉潘景業(yè)朱椰凡陳潔王明山王衛(wèi)全世超唐敏 【摘要】為了探討不同復(fù)蘇液對(duì)失血性休克大鼠凝血功能的影響和可能機(jī)制，將50只sd大鼠隨機(jī)分為5組：對(duì) 照組、假手術(shù)組、休克組、復(fù)蘇1組和復(fù)蘇2組，每組10只 大鼠。建立失血性休克大鼠模型后，復(fù)蘇組在失血性休克1 小時(shí)后給予不同復(fù)蘇液，復(fù)蘇2小時(shí)后采血，檢測(cè)血漿組織 型纖溶酶原激活劑、組織型纖溶酶原激活劑抑制物 1、組 織因子(tf)的變化。研究結(jié)果表明：與對(duì)照組、假手術(shù)組比 較，休克組和復(fù)蘇1組的t pa、t pa/pai 1、tf水 平均明顯升高(p【關(guān)鍵詞】失血性休克；凝血因子；輸液 治療；萬墳液；林格液

2、exper imentaltherapeutic studyforactivatedc oagulationbyhemorr hagicshockinratsa bstractthestudywas aimedtoinvestigatethechangesofbloodcuringhemorrhagicshectsofvariousofresuscitationfluidsondcoagulationfactor agicshockandtoclaranism. 50sdratsweroagulationfactorsdockinratsandtheeffexpressionofbloosin

3、ratswithhemorrhifyitspossiblemech erandomly dividedinto5groups：control ck, resuscitation!.(1slactate)andresus nwith6%v0luven), eratsinresuscitatin2 groupsweresubje hock，rhageshockforlhour performedwithringeuven. afterresuscit ation，shamoperation,shoinfusionwithringercitation2 (infusioloratspergroup.

4、 thonlandresuscitatioctedtohemorrhagicsafter hemorresuscitationwasr* slactateand6%v0l for2hoursth e changesoftpa, pai 1，tfweremeasured . atthesametime, the ratsinshockandtheshamoperationgroupswerebloodletedoutsoastotest.theresultsshowedthatthel evelsof plasmat pa，t pa/pai, tfinthes hockandresuscitat

5、i onl groupsweresignificantlyhighertha shamoperationgroup hagicshock；bloodconthat incontroland s (pkeywordshemorr agulationfactor;transfusiontherapy； 6 %v0luven； ringerf slactate jexphematol xx; 15 (2): 396-398 休克的發(fā)生發(fā)展機(jī)制未徹底闡明，其病理生理學(xué)過程非常復(fù)雜?，F(xiàn)在對(duì)休克與彌散性血管內(nèi)凝血的關(guān)系研究得比較 明確，在休克發(fā)展到晚期均有可能發(fā)生dic 1。休克一旦 并發(fā)了 dic,病情

6、將惡化，微循環(huán)和各器官功能將受到嚴(yán)重 影響，給治療造成極大的困難。創(chuàng)傷后因失血或血漿滲出所致的循環(huán)血量減少，在臨床 處理上通常給予輸液復(fù)蘇。此治療措施可獲得一定療效，但 關(guān)于液體復(fù)蘇目前尚存在一些爭(zhēng)議2，3。有研究者認(rèn)為 創(chuàng)傷失血后，輸液復(fù)蘇過程本質(zhì)上是一種缺血再灌注的損傷 過程。缺血再灌注損傷時(shí)，首先受損的是血管內(nèi)皮細(xì)胞，血 管內(nèi)皮細(xì)胞受損使血管內(nèi)皮下組分暴露、血小板激活和凝血 因子及組織因子的釋放，從而使血液凝固性增高。本研究探 討大鼠失血性休克后采用林格液和6%萬汶液復(fù)蘇時(shí)血漿組 織型纖溶酶原激活劑、組織型纖溶酶原激活劑抑制物 1、 組織因子(t f)的變化，以闡明失血性休克早期凝血啟動(dòng)

7、機(jī)制 為在休克早期保護(hù)機(jī)體功能、提高休克后存活率提供理論指 導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組選用溫州醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供的健康、成年sd大鼠， 體重250-300g,雌雄不限。50只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、假 手術(shù)組、休克3小時(shí)組、復(fù)蘇1組和復(fù)蘇2組液+2倍失血量 的乳酸林格氏液，復(fù)蘇2小時(shí)后取血標(biāo)本。每組到預(yù)定的時(shí) 間采集靜脈血ml，加入含有ml (109mmol/l)枸櫞酸鈉的抗凝塑料試管中，顛倒混勻后402 8xg離心10分鐘，分離血漿，立刻置于_40°c冰箱保存待檢。觀察指標(biāo)與檢測(cè)方法在所有實(shí)驗(yàn)大鼠中觀察map的變化。血漿t pa、pai 1及tf含量采用雙抗體夾心abc elis a法檢測(cè)，并

8、計(jì)pa/pai 1比值。以上試劑盒均購(gòu)自上海西唐生物科技有限公司，各項(xiàng)目嚴(yán)格按照說明書操作，在變色龍自動(dòng) 酶標(biāo)儀上比色測(cè)定。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)以均值土標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用spss統(tǒng)計(jì)軟件包處理 多組間相同指標(biāo)的比較采用單因素方差分析，如差異有統(tǒng)計(jì) 學(xué)意義則進(jìn)一步行組內(nèi)兩兩間比較，方差齊同者采用 studentne wman keuls檢驗(yàn)，方差不齊同者采用tamhane 檢驗(yàn)。結(jié)果各組的t pa、tpa/pai 1和tf含量的變化見附表， 由表可知，休克組和復(fù)蘇1組的t pa、t pa/pai 1、 tf含量均明顯高于對(duì)照組、假手術(shù)組（p討論在引起dic的眾多病理因素中，休克是一個(gè)常見的因素。 研究表

9、明，休克導(dǎo)致dic的機(jī)制可能與下列因素有關(guān)：失 血性休克過程中，缺血、缺氧及氧自由基的釋放導(dǎo)致血管內(nèi) 皮細(xì)胞損傷。血管內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)于調(diào)節(jié)凝血、抗凝、纖溶平衡 具有重要作用。生理情況下，血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌血栓調(diào)節(jié)素 等抗栓物質(zhì)，防止血栓形成。病理狀態(tài)時(shí)，血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌 組織因子、纖溶酶原抑制劑等促栓物質(zhì)，發(fā)揮止血作用。當(dāng) 血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷持續(xù)存在，抗栓因子過度釋放時(shí)，即出現(xiàn) 凝血、抗凝、纖溶失衡。創(chuàng)傷時(shí)組織因子釋放入血，直接 啟動(dòng)凝血途徑。細(xì)胞因子的大量釋放，激活凝血途徑。正常 情況下，機(jī)體凝血、抗凝血處于動(dòng)態(tài)平衡。但各種病理過程 可打亂該平衡，引起凝血系統(tǒng)的激活。如果觸發(fā)因素持續(xù)存 在，凝血因子

10、被大量消耗，將導(dǎo)致凝血系統(tǒng)的崩潰，最終出現(xiàn) 失代償性dic 5。代償性dic時(shí)，常規(guī)凝血檢測(cè)指標(biāo)可在 正常范圍內(nèi)。但敏感性、特異性較高的分子標(biāo)記物在凝血紊 亂早期即可發(fā)生改變。與國(guó)外報(bào)道相符，本研究發(fā)現(xiàn)休克大 鼠組織型纖溶酶原激活劑、纖溶酶原激活物抑制劑(pai 1)等分子標(biāo)記物在休克早期就發(fā)生了變化，在林格液、萬墳 液的干預(yù)下，又各自發(fā)生了特點(diǎn)不同的改變。血漿t pa是 由血管內(nèi)皮細(xì)胞和組織細(xì)胞合成，主要在肝臟清除，其抑制 劑p ai也主要由內(nèi)皮細(xì)胞和血小板產(chǎn)生。機(jī)體纖溶功能的強(qiáng) 弱主要取決于內(nèi)皮細(xì)胞分泌t pa/pai 1的相對(duì)比例6。 如果纖溶系統(tǒng)未充分激活，纖維蛋白將沉積在微循環(huán)，形成

11、 微血栓，導(dǎo)致多臟器功能衰竭。反之，纖溶系統(tǒng)過分激活將引 起出血。當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞受損傷時(shí)，t -pa由內(nèi)皮細(xì)胞釋放 入血,使纖溶酶原轉(zhuǎn)變成纖溶酶，激活纖溶系統(tǒng)。為維持纖溶 平衡，pai大量釋放，導(dǎo)致血漿pai水平升高。本研究結(jié)果顯示：大鼠失血性休克3小時(shí)時(shí)t pa含 量和t pa/pai 1比值明顯高于假手術(shù)組，表明此時(shí)機(jī) 體纖溶功能處于亢進(jìn)狀態(tài)，血小板和凝血系統(tǒng)被活化。本實(shí) 驗(yàn)采用林格液復(fù)蘇2小時(shí)時(shí)，t pa含量和t pa/pai 1的比值反而高于休克組，萬汶液+林格液復(fù)蘇2小時(shí)時(shí)，上 述指標(biāo)均明顯下降。萬墳液是新一代羥乙基淀粉的等張氯化 鈉溶液，其平均相對(duì)分子質(zhì)量為130000,取代級(jí)為，

12、取代方 式約為9/1，分布容積為l，血漿半衰期小時(shí)。上述特點(diǎn)使 其更容易從腎臟排泄，從而在血漿和組織內(nèi)蓄積明顯降低， 患者不良反應(yīng)少，過敏反應(yīng)低，有利于調(diào)節(jié)機(jī)體的凝血功能 7,8。大鼠失血性休克后輸液復(fù)蘇，存在著缺血再灌注損 傷過程。補(bǔ)充林格液時(shí)，雖對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞能起到一定的保 護(hù)作用，但血管內(nèi)皮細(xì)胞同時(shí)也受到損傷，如同實(shí)驗(yàn)結(jié)果所 示，t pa釋放增加、t pa/pai 1比值升高等，而使 用萬墳液+林格液復(fù)蘇時(shí)，t pa、tf水平均明顯下降。故 失血性休克后采用萬汶液+林格液復(fù)蘇在調(diào)節(jié)凝血功能方面 優(yōu)于單用林格液。另外，休克3小時(shí)時(shí)林格液復(fù)蘇組tf量 明顯升高。輸注萬汶液+林格液復(fù)蘇時(shí)tf水

13、平明顯下降。tf 存在于血管內(nèi)皮細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及各種組織上， 在血栓性疾病、彌散性血管內(nèi)凝血、惡性腫瘤時(shí)均可見表迗 增高并釋放至血漿，啟動(dòng)凝血途徑9。這提示萬墳液對(duì)凝 血具有保護(hù)作用。綜上所述，大鼠失血性休克可導(dǎo)致機(jī)體凝血功能一系列 的變化；休克早期給予新一代容量復(fù)蘇劑一萬墳液對(duì)凝血和 纖溶功能起到一定的調(diào)控作用，對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞可能具有直接和 特殊的藥物效應(yīng)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1梅冰，康舟，霍正祿.創(chuàng)傷性休克后血漿黏附分子的變 化及不同復(fù)蘇液的影響.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，xx; 21: 1544-15462陳曉雄，葉恭永，帥學(xué)軍等.重癥胸部創(chuàng)傷合并創(chuàng)傷失 血性休克限制性液體復(fù)蘇的療效評(píng)價(jià).中國(guó)急救

14、醫(yī)學(xué)，xx; 24： 178-1803羅正曜.休克學(xué).天津：天津科學(xué)技術(shù)出版 社.2001:143-1 44, 7544張艷杰，潘景業(yè)，王明山.失血性休克大鼠凝血因子的 變化研究.中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，xx; 13: 110-1135mammenef. d isseminatedintrava scularcoagulation ( dic).clinlabsci,20 00； 13： 239-2456徐斐，王明山，王紅等.肝硬化患者纖維蛋白溶解功能 的變化及其意義.肝臟雜志，xx; 9: 275-2767friesd , innerhoferp,kling lera,etal. theeffe

15、ctofthecombinedadmidsandlactatedringenistrationofcolloir1ssolutiononthecoagulationsystem：an invitrostudyusingt hrombelastographco agulationanalysis. anesthanalg, 2002； 9 4： 1280-12878lange rono,doelbergm,ang et,etal. voluven,alowersubstitutednovelhydroxyethylstarch (hes130/),causesfewereffectsoncoagulationinmajororthopedicsurgeryth