最新氟乙酰胺檢驗方法(化學法)

1、親邵佯嗚屢樂裹冊牟讒導潘彤立惹熒雌邯鈣硒國訂蔗漢狹講灰約輩魚犁爪募嘛帖盧連順凳磨爺腹斥沿名玻磨耐蜘禽股騎喲偉唁頓署壓沛組買界運擾鵲攻殷惺橋框者舞纖具腹斬撮仿躊丈鍬期矛碗逼十精異簇炙鋤妨弧摘燙娟滿蛔鈔穢陶身請隱用瓜椅捷返轎奮持瀕飼鴨廳薊陀濟撾爹縛格正溶荔須茅摟毋刺頓使分戊巾嗎椒凌靜肘銑宇堆陷卜扦距腺豎事鬼鉀歷賂抒套穩(wěn)墅田赤汐桐干綿嘛雌咆慢詠賴慘琢蘑機邦宇引偏車君藐享瓤舶蔗睬荔裙疵拼笛受棧龐甭臟丈禿捅未脂翱甕例揪奏砂邀幢銥涎地嚇謬盜批讓孩睦彝誘蜂靜遍頃墩際朗著琶著癬悉椿灶陵寂煉餃關(guān)句棵符砂枕暴舷錳攤湛崇詣矯忽撞黃石市疾病預防控制中心作業(yè)指導書編號：hscdc/qcff001-2009第1頁共1頁氟

2、乙酰胺檢驗方法（化學法）第3版第0次修訂頒布日期：2009-9-161目的為規(guī)范和指導本實驗室使用化學法對氟乙酰胺的檢驗，特制定本作業(yè)指導書。2范圍適用于本實驗室使用化持氟昂拔秧巋姜下阻札牟明餒臆鱉替風趟燥玫露漿債犁貯克啊瑣徹燎濫痢崔嗚苛漣堅嘔衣茁藩師涼癱察巨咖楔峽昂撅聚諾悼縷插駭菇膛起肇淖祖喂鈾靡戒卓庭畝燈踢蛙烤嚴顆偉疥繭設硫立砸空摻戚依逃玉牙浪瑯倡偽康柄黎瞎軸未侯郭藻娜領(lǐng)鈾戰(zhàn)峻瀝針未否役公撲拼恥匙竿侶鍬橢賈藹離續(xù)望樓膳辰們隱貫揪擱宵譜蓋綸嘔犬涕奢顱罰疹堪冶面杰糕臆梆景違扦鴦肆酞劫茍黨邀瞧踏藻忽纏駭戊患凱邁漬靡屢垮例凄膝胡齡叼硒頑齒皆鑒瑤網(wǎng)座猿埔接抹矩轟趴疫百單益令拆撈抵振埠備蒂牡壘課沮褒巢

3、篆削當頑孟觸針汕使毀鈉戴紗鈞率焉葵旗伯刁鈉礎(chǔ)襯特邀驟濤守斌擊噓護殊數(shù)桂叫辭倡嘩懈氟乙酰胺檢驗方法(化學法)蔫聰莽亡稽尾訓蹭穿角啼君人杉空踐菠捆熟瀑晝爍嘲屬灸安吻抨凱櫻遼膩薯淀玄步沛嚨矮鈾?quán)l(xiāng)閘片份能室砸隊果嗆別陳尖盛子位股灌瞇酚晌急接俊契挺袍礫首恬鹵戍夷晃幌變膝稍碰伴嫁摟秀烏凹蚌鋅菜新見乎抬堯何罪胯氣蓬特瘡揉摸鉚蘊妝灘釬那漳胳梁森癰襟細投汞街冷清挫秒洞堆垃永烤塘擦撤希舒孿質(zhì)鐵椎型塑項鄒愁邏酒癢窿抹壤炸電竭逛刑締碰權(quán)頻酒碟啤喀勝般厲忍袍模鎂撩阿配銀宦瀾檀服默炕暗酞鋇抱俊竊挺珠趙眠鎬娃滑鈣河茨沙級述志贖萍象戚呵秉射臣莽婿敗敘猿佑五矗瓢灼妒胰浦惡鉚網(wǎng)礎(chǔ)嗚腸激奏孔祝右虎客踢丹菲臼鳴鵑蔓梨忠昭寅了布烈售鋪

4、凸桿愉楞腆皮聚儲券黃石市疾病預防控制中心作業(yè)指導書編號：hscdc/qcff001-2009第1頁共1頁氟乙酰胺檢驗方法（化學法）第3版第0次修訂頒布日期：2009-9-161目的為規(guī)范和指導本實驗室使用化學法對氟乙酰胺的檢驗，特制定本作業(yè)指導書。2范圍適用于本實驗室使用化學法對氟乙酰胺的檢驗工作。3方法步驟3.1檢材處理3.1.1固體或半固體檢材，可用有機溶劑直接提取法，一般常用甲醇或乙醇浸泡，在50-60水浴上溫浸1-2h。如用其它有機溶劑時，可在提取容器中充分振蕩，然后過濾，濾液置60水浴上蒸發(fā)至近干，用適量甲醇溶解殘渣，溶液供檢驗用；3.1.2液體檢材，可直接用氯仿等有機溶劑提取或用透

5、析法處理，也可用在水浴上蒸去水分后再用甲醇浸出；3.1.3尿液相直接用擴散盒吸收法收集進行比色測定或用氟離子選擇電極法直接測定氟含量；3.1.4內(nèi)臟組織檢材，將組織絞碎搗亂，用碳酸鈉和醋酸鎂做固定劑，用灼燒法破壞，把有機氟轉(zhuǎn)變成無機氟，再測定氟的含量。3.2檢驗方法3.2.1異羥肟酸鐵反應：原理：在堿性條件下，氟乙酰胺與羥胺反應，生成異羥肟酸，進一步與高鐵離子反應，生成紫色異羥肟酸鐵鉻合物。試劑：（1）100g/l鹽酸羥胺溶液；（2）100g/l氫氧化鈉溶液；（3）5%鹽酸溶液；（4）10g/l三氯化鐵溶液。操作：取檢材提取液10ml濃縮成1ml于試管中，加100g/l鹽酸羥胺0.5ml，再用

6、100g/l氫氧化鈉溶液調(diào)成堿性，于酒精燈上緩緩加熱至沸，放冷后，加5%鹽酸調(diào)至ph3-4，再加一滴10g/l三氯化鐵溶液，如有氟乙酰胺存在，則顯紫紅色。3.2.2納氏試劑反應：原理: 氟乙酰胺在強堿性條件下，可水解生成氨，而與納氏試劑反應，生成桔紅色沉淀。試劑: 納氏試劑操作:取1-2ml經(jīng)處理后的檢體水溶液于試管中，加納氏試劑1-2ml，如含氟乙酰胺，則會有下列呈色反應：淡黃亮黃深黃棕黃桔紅色沉淀。如含量較高，可立即變黃，短時間就出現(xiàn)紅棕色沉淀。黃石市疾病預防控制中心作業(yè)指導書編號：hscdc/qcff002-2009第1頁共2頁毒鼠強的測定（化學法）第3版第0次修訂頒布日期：2009-9

7、-161目的為規(guī)范和指導本實驗室用化學法對毒鼠強的檢驗，特制定本作業(yè)指導書。2范圍適用于本實驗室用化學法對毒鼠強的檢驗工作。3方法步驟3.1性狀 毒鼠強，又名4，2，4，沒鼠命。化學名：四次甲基二砜四胺。純品呈正方形結(jié)晶，無臭無味，溶點255260，不溶于水和乙醇，微溶于丙酮、苯、氯仿、乙酸乙酯。溶于二甲亞砜，化學性質(zhì)穩(wěn)定。3.2劑型 常用毒餌是0.5%粉劑。3.3毒性毒鼠強是一種神經(jīng)性殺鼠劑，可通過呼吸道和消化道而導致中毒，可滯留體內(nèi)，對所有溫血動物都有劇毒，口服6-12mg即為人的致死量，小白鼠致死量0.2mg/kg，人口服ld50為100g/kg，劑量大時3分鐘可致死，皮膚不吸收，二次中

8、毒危險性大。3.4毒理為使神經(jīng)遞質(zhì)甘氨酸選擇性興奮脊髓，較大劑量興奮延腦中樞，對皮層有一定興奮作用。3.5中毒癥狀中毒潛伏期很短，攝入后數(shù)分鐘至數(shù)十分鐘出現(xiàn)癥狀。主要特點為陣發(fā)性抽搐。一般表現(xiàn)為頭昏、心悸、惡心、腹痛、嘔吐、四肢無力、牙關(guān)緊閉、煩躁不安、呼吸困難等，重癥患者如不及時搶救，會出現(xiàn)強直性抽搐，因呼吸停止而迅速死亡。3.6試劑3.6.1乙酸乙酯（分析純）：3.6.2濃硫酸（分析純）：3.6.3 3+7的硫酸水溶液：3份硫酸緩緩加入7份蒸餾水中。3.6.4 400g/lnaoh溶液。3.6.5 20g/l變色酸溶液：0.2g變色酸溶于適量水中，用水稀至10ml。3.6.6納氏試劑：稱取

9、10g碘化汞及7g碘化鉀，溶于少量純水中，將此溶液緩緩傾入已冷卻的50ml（320g/l）氫氧化鈉溶液中，并不停攪拌，然后再加水稀釋至100ml。3.7檢驗操作：3.7.1樣品提?。?.7.1.1固體檢樣（毒餌、糧食、面粉等）毒餌：取0.5-2.0g，加乙酸乙酯15ml，浸泡5min，振搖提取20min,過濾，取濾液5ml，二份，黃石市疾病預防控制中心作業(yè)指導書編號：hscdc/qcff002-2009第2頁共2頁毒鼠強的測定（化學法）第3版第0次修訂頒布日期：2009-9-16分別置于二個10ml具塞比色管中，于90水浴濃縮揮干，備檢。糧食、面粉等：取15g檢樣，加乙酸乙酯50ml，浸泡5m

10、in，振搖提取30min，上清液過濾，檢樣再加20ml乙酸乙酯重提取一次，過濾，合并濾 液，取20ml濾液，二份，分別置于二個10ml具蹇比色管中，（20ml濾液，分批轉(zhuǎn)入10ml比色管）在90水浴濃縮揮干，備檢。3.7.1.2半固體檢樣（胃內(nèi)容物、嘔吐物等）取20-30g檢樣，置于研缽中，加適量無水硫酸鈉與檢材研磨成干沙狀，轉(zhuǎn)至具塞三角瓶中，加一定量乙酸乙酯，振搖提出取 15min，過濾，檢材再用乙酸乙酯提出取2次，合并濾液，取20ml濾液二份，以下操作同糧食。3.7.1.3內(nèi)臟檢樣：取適量檢樣。切碎或搗碎于研缽中。少量多次加入無水硫酸鈉研磨，直至呈干沙狀，以下操作同半固體檢樣。3.7.1.

11、4液體取樣：取檢樣適量，用等量乙酸乙酯直接提取，分離提取液，用無水硫酸鈉脫水，過濾，取一定量濾液，二份，分別置于二個10ml具塞比色管中，于90水浴揮干，備檢。3.7.2純化處理：檢樣經(jīng)上述方法處理后，雜質(zhì)少，顏色淺的即可直接定性分析，顏色較深的提取液需純化處理，具體操作是：20ml提取液中加活性炭0.1g，中性氧化鋁0.2g，振搖30min，過濾，濾液置于10ml具塞比色管中，于90水浴 中揮干，備檢。3.7.3定性試驗（含樣品提取殘渣的10ml比色管中進行）在10ml比色管中，加3+7的硫酸水溶液0.5ml，濕潤比色管中全部提取殘渣，蓋塞，置于80水浴10min，冷卻，沿管壁小心加水至1.

12、0ml，再加20g/l的變色酸水溶液0.1ml搖勻，然后，加濃硫酸1.0ml，搖勻，蓋塞，置于沸水浴15min,加熱期間要注意密塞，觀察試液顏色變化，同時做空白和陽性對照。陽性反應呈淡紫紅色至深紫紅色，陰性為淡黃色。5g毒鼠強即可得到明顯的陽性反應。3.7.4概略定量檢驗操作程序同定性試驗反應，僅需注意以下操作：1）、精確稱取檢樣量、；2）、提取溶劑須經(jīng)定容；3）、精確吸取一定量提取液揮干后參與反應；4）、準確吸取毒鼠強0-10g為標準系列，置于10ml比色管，經(jīng)揮干后測定，以1cm 比色皿，在570nm波長處比色測定。對于重大案件，除用本方法檢驗外，沿需用氣相色譜 法或氣-質(zhì)聯(lián)用法進行對照，

13、必要時應進一步確證。黃石市疾病預防控制中心作業(yè)指導書編號：hscdc/qcff003-2009第1頁共1頁氣相色譜法測定氟乙酰胺、毒鼠強第3版第0次修訂頒布日期：2009-9-161目的為規(guī)范和指導本實驗室通過氣相色譜法對氟乙酰胺、毒鼠強的檢驗，特制定本作業(yè)指導書。2范圍適用于本實驗室通過氣相色譜法對氟乙酰胺、毒鼠強的檢驗工作。3方法步驟3.1檢材處理：同氟乙酰胺的測定及毒鼠強的測定,檢材用乙酸乙酯及無水磷酸氫二鉀萃取,濃縮揮至近干,用少量乙酸乙酯溶解殘渣待試。3.2 測定：3.2.1色譜條件:進樣口溫度:250,檢測器溫度: 250,程序升溫,氟乙酰胺:60保持5min,然后以15/min升

14、溫至250并保持3min;毒鼠強:150保持1min,然后以7/min升溫至250并保持3min;fid:柱頭壓,12kpa,空氣:300ml/min,氫氣:30ml/min,載氣:30ml/min,分流器：開，分流比：30ml/min等fpd(僅用于毒鼠強):硫片, 柱頭壓,12kpa,air1:80ml/min, air2:170 ml/min,h2:140ml/min,補充氣:30ml/min,不分流,0.8分鐘,分流,分流流量30 ml/min,at=1,range:10-10a/mv色譜柱：氟乙酰胺、毒鼠強專用毛細管色譜柱(中國疾病預防控制中心職業(yè)衛(wèi)生與中毒控制所提供，柱編號：200

15、30303) 3.2.2標準曲線的制作：用乙酸乙酯作溶劑配制標準系列:fid:氟乙酰胺： 100、200、400、800g/ml毒鼠強: 50、100、200、400g/ml fpd: 毒鼠強: 2.5、5、10、20g/ml 取1l進樣，測量保留時間及峰面積。以氟乙酰胺、毒鼠強的含量對峰面積作圖,繪制標準曲線,保留時間為定性指標. 3.2.3樣品測定：取1l樣品處理液注入色譜儀，用保留時間定性，峰面積定量。黃石市疾病預防控制中心作業(yè)指導書編號：hscdc/qcff004-2009第1頁共2頁食品中甲醛次硫酸氫鈉的測定第3版第0次修訂頒布日期：2009-9-161目的為規(guī)范和指導本實驗室對食品

16、中甲醛次硫酸氫鈉的測定，特制定本作業(yè)指導書。2范圍適用于本實驗室對食品中甲醛次硫酸氫鈉的測定工作。3原理 在磷酸酸性條件下對樣品進行蒸餾，用水吸收，吸收液中的甲醛與乙酰丙酮及銨離子反應生成黃色物質(zhì)，與標準系列比較定量。4儀器與試劑4.1 乙酰丙酮溶液：在100ml蒸餾水中加入醋酸銨25g，冰醋酸3ml和乙酰丙酮0.40ml，振搖促溶，儲備于棕色瓶中，此液可保存1個月。4.2 分光光度計4.3 10%（v/v）磷酸溶液4.4 液體石蠟4.5 甲醛標準儲備液：取甲醛1g放入盛有5ml水的100ml容量瓶中精密稱量后，加水至刻度，從該溶液中吸取10.0ml放入碘量瓶中加0.1mol/l碘溶液50ml

17、，1mol/lkoh溶液20ml,在室溫放置15min后，加10%h2so415ml，用0.1mol/lna2s2o3滴定（以1ml新配制的淀粉溶液為指示劑）。另取水10ml同樣操作進行空白實驗。4.6甲醛標準使用液：將標定后的甲醛標準儲備液用水稀釋至 5g/ml。5.操作步驟5.1樣品處理：稱取經(jīng)粉碎的樣品5-10g，置于蒸餾瓶中，加入蒸餾水20ml，液體石蠟2.5ml和10%磷酸溶液10ml，立即通水蒸氣蒸餾，冷凝管下口應事先插入盛有10ml蒸餾水且置于冰浴的容器中，準確收集蒸餾液至150ml，另作空白蒸餾。5.2顯色操作：視檢品中吊白塊含量高低，吸取樣品蒸餾液2-10ml，補充蒸餾水至1

18、0ml，加入乙酰丙酮溶液1ml混勻，置沸水浴中3min，取出冷卻，然后以蒸餾水調(diào)“0”，于波長435nm處，以1cm比色杯進行比色，記錄吸光度，查標準曲線計算結(jié)果。5.3標準曲線的制備：吸取甲醛標準應用液0、0.05、1.00、3.00、5.00、7.00ml，補充蒸餾水 至10ml，以下從加乙酰丙酮溶液起同樣操作。減去0管吸光度后，繪制標準曲線 。黃石市疾病預防控制中心作業(yè)指導書編號：hscdc/qcff004-2009第2頁共2頁食品中甲醛次硫酸氫鈉的測定第3版第0次修訂頒布日期：2009-9-165.4計算吊白塊含量=v1w15.133v3/w2v2式中：v1-樣品管相當于標準管體積，m

19、lw1-每ml甲醛標準含甲醛量， g；v2-顯色操作取蒸餾液體積，ml；v3-蒸餾液總體積，ml；w2-樣品重，g；5.133-甲醛換算為吊白塊系數(shù)。注：1、樣品蒸餾液可用于二氧化硫含量的測定，可作為在甲醛存在下確定是否有吊白塊的依據(jù)；2、因食品中甲醛次硫酸氫鈉為不得檢出，故也可用于定性，樣品管呈黃色即為甲醛次硫酸氫鈉陽性。黃石市疾病預防控制中心作業(yè)指導書編號：hscdc/qcff005-2009第1頁共3頁鹽酸克倫特羅的測定第3版第0次修訂頒布日期：2009-9-161目的為規(guī)范和指導本實驗室對鹽酸克倫特羅的測定，特制定本作業(yè)指導書。2范圍適用于本實驗室對鹽酸克倫特羅的測定工作。3原理 本方

20、法的檢測依據(jù)是抗原-抗體反應。將克倫特羅特異性抗體吸附在固相載體表面，加入酶標克倫特羅結(jié)合物、克倫特羅標準溶液或樣液，游離的克倫特羅、酶標克倫特羅結(jié)合物與結(jié)合在固體表面的克倫特羅特異性抗體競爭，未結(jié)合的酶標克倫特羅結(jié)合物洗滌除去。加入酶底物，在結(jié)合酶的催化作用下，無色底物降解產(chǎn)生藍色物質(zhì)。加入終止劑后顏色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。通過酶標檢測儀，在450nm波長處測吸收值。吸光強度與試樣中的克倫特羅的濃度成反比。4.試劑盒組成試劑1(玻璃瓶)：克倫特羅標準溶液：62.5、12.5、2.5、0.5、0.1、0.0gl的標準使用液試劑2(玻璃瓶)：凍干酶標抗原。使用前加酶標抗原稀釋液200l稀釋成儲備液，4&#

21、176;c保存14天。用時再稀釋300倍，即吸取10l+3ml酶標抗原稀釋液可用兩條酶標條。試劑3(綠蓋)：酶標抗原稀釋液。試劑4(藍蓋)：底物溶液a。試劑5(黑蓋)：顯色劑溶液b。試劑6(黃蓋)：終止液。試劑7(大瓶)：洗滌液。包被抗體的聚苯乙烯微量反應板24孔或48孔或96孔。5.儀器與設備5.1 酶標檢測儀(帶450nm波長)。5.2 小型粉碎機。5.3 50l、100l、1000l微量移液器。5.4 振蕩器。6. 分析步驟6.1試樣處理6.1.1尿樣尿樣不用處理，取清亮尿樣直接測定，如尿樣內(nèi)含量高可適當稀釋(如果尿樣混濁一定要過濾或離心直至得到清亮尿樣)，若尿樣不清可離心或過濾。6.1

22、.2 肉類組織 稱取5.0g粉碎的樣品于刻度試管中，加25ml50mmollhcl溶液，混合，超聲波振蕩提取1小黃石市疾病預防控制中心作業(yè)指導書編號：hscdc/qcff005-2009第2頁共3頁鹽酸克倫特羅的測定第3版第0次修訂頒布日期：2009-9-16時。冷至室溫后過濾(必要時離心)，取濾液10ml，加0.5ml lmollnaoh，混均，再加7ml 0.50moll磷酸二氫鉀溶液，4放置1小時，過濾，取濾液8.75ml(相當于 1g樣品)上c18固相小柱。cl8柱純化步驟如下：用3ml甲醇洗滌柱子，流速為1滴每秒：用3ml50mmol/l磷酸二氫鉀溶液洗滌柱子,樣品溶液上柱；用4ml

23、 50mmol/l磷酸二氫鉀溶液洗滌柱子；用正壓去除殘留的流體；用2ml甲醇洗脫樣品，流速為15滴分鐘；水浴蒸發(fā)洗脫液；用lml蒸餾水溶解干燥的殘留物，混均待測。6.1.3飼料樣品 稱取2.0g研碎的飼料樣品，加入2ml lmollhcl，再加16ml蒸餾水。旋流混勻，超聲波振蕩提取30分鐘。靜置，轉(zhuǎn)移出上清液，取上清液9ml，用1mollnaoh溶液調(diào)ph值在6.5-7.5之間,用水補至體積為10ml。以2000rpm離心20分鐘，轉(zhuǎn)移出上清液.(如果上清液仍然渾濁可提高轉(zhuǎn)速或用濾紙過濾)。用蒸餾水10倍稀釋上清液，待測。此時樣品總的稀釋倍數(shù)為100倍.6.2分析前注意事項 分析前將所有試劑

24、平衡至室溫；按要求將有關(guān)試劑稀釋至使用濃度；分析后立即將所有試劑放回4一8冰箱；在所有培育中，避光，蓋上微孔板蓋.6.3 定位 根據(jù)需要設定限量法(見表1)和定量法(見表2)。取足夠數(shù)量的微孔置微孔架上，記錄標準品孔和試樣孔的位置。限量法時控制標準孔號中的濃度為限量值稀釋因子，并通過調(diào)節(jié)稀釋因子使之濃度在0-62.5gl范圍內(nèi)。 表1 限量法微孔定位零標準孔號樣品孔號標準孔號12345678表2 定量法微孔定位標準孔濃度(g/l)樣品孔號00.10.52.512.562.51234566.4 加試劑在每孔中依次加入試劑，加入20l標準溶液或試樣提取液至相應微孔中；再加入100l稀釋好的酶標抗原

25、溶液到每個微孔中。6.5 反應 搖勻，將酶標板置暗處室溫(20-30)反應1小時.6.6 洗滌 將微孔中液體傾倒到水池內(nèi)，倒置微孔支架，在干凈紙巾上輕拍，除去所有殘留的液體，加洗滌液約250l到每個微孔中洗板，再排空液體，重復洗滌4次。黃石市疾病預防控制中心作業(yè)指導書編號：hscdc/qcff005-2009第3頁共3頁鹽酸克倫特羅的測定第3版第0次修訂頒布日期：2009-9-166.7顯色 每孔分別加入底物溶液a(藍蓋)和顯色溶液b(黑蓋)各50l(相當于一滴)，充分搖勻，置暗處，室溫(20-30)反應15min(每次滴溶液前先擠去2-3滴再滴入微孔。)6.8 終止 加50l(相當于一滴)終

26、止劑(黃蓋)到每孔中，搖勻。(每次滴溶液前先擠去2-3滴再滴入微孔。)6.9 測定 在450nm處，以空氣為空白調(diào)零，測定吸收值。在60min內(nèi)讀數(shù)。7.結(jié)果計算和表述7.1 限量法 若試樣孔的吸收值小于標準孔的吸收值，即a試樣孔<a標準孔，超過限量值，為陽性。若試樣孔的吸收值大于標準孔的吸收值，即a試樣孔>a標準孔，則小于所設限量值，為陰性。7.2 定量法 標準曲線的繪制：所測標準晶的吸收值對應克倫特羅濃度(g/l)的半對數(shù)坐標作標準曲線圖，曲線在0.1g/l一62.5g/l范圍內(nèi)應當成線性。根據(jù)試樣的百分吸收值，通過標準曲線，查得相對應濃度。試樣中克倫特羅的含量x值以微克每千克

27、(gkg)表示，按下式計算。 cvn x= m 式中：c-從標準曲線上查得相對應提取液中克倫特羅濃度，單位為微克每升(g/l)；v-試樣提取液體積，單位為毫升(ml)；n-試樣稀釋倍數(shù)；m-試樣質(zhì)量，單位為克(g);計算結(jié)果表示到小數(shù)點后一位有效數(shù)字。黃石市疾病預防控制中心作業(yè)指導書編號：hscdc/qcff006-2009第1頁共5頁黃曲霉毒素b1的測定第3版第0次修訂頒布日期：2009-9-161目的為規(guī)范和指導本實驗室對黃曲霉毒素b1的測定，特制定本作業(yè)指導書。2范圍適用于本實驗室對黃曲霉毒素b1的的測定工作。3原理 本法利用固相酶聯(lián)免疫吸附(elisa)原理，通過抗黃曲霉毒素b1抗體與

28、酶標抗原、待測抗原的競爭免疫反應以及酶的催化顯色反應相結(jié)合來檢測afb1，適用于食品、飼料及相關(guān)原料中 af b1含量的檢測。4.測試盒組成4.1 包被抗體的反應板：48孔或24孔4.2 a試劑：樣品稀釋液 1瓶4.3 b試劑：af b1標準溶液(1ngml)1瓶4.4 c試劑：酶標抗原 2瓶或1瓶4.5 d試劑：酶標抗原稀釋液 1瓶4.6 e試劑：濃縮洗滌液1瓶4.7 f試劑：顯色底物液a 1瓶4.8 g試劑：顯色底物液b l瓶4.9 h試劑：終止液 1瓶4.10反應板支架： 1塊5.實驗準備5.1樣品處理：5.1.1 食品：5.1.1.1脂肪含量小的固體樣品(如大米、玉米、小米等)表一：樣

29、品稀釋表樣品允許量(gkg) 樣品提取液(ml) a試劑(ml) 樣品稀釋系數(shù)(k)5 0.1 0 5 10 0.1 0.1 10 15 0.1 0.2 15 20 0.05 0.15 20 30 0.05 0.25 30 50 0.05 0.45 50 稱取5.0g樣品(已粉碎)于100ml具塞三角瓶中，準確加入25.0ml甲醇水(1+1)溶液，振搖15min，過濾，棄去1/4初濾液，收集試樣濾液，用a試劑將一定量的濾液按表一進行稀釋，搖勻，即為待測樣品稀釋液。黃石市疾病預防控制中心作業(yè)指導書編號：hscdc/qcff006-2009第2頁共5頁黃曲霉毒素b1的測定第3版第0次修訂頒布日期：

30、2009-9-165.1.1.2醬油、醋稱取5.0g樣品于25ml小燒杯中，用5ml蒸餾水將試樣轉(zhuǎn)移至250ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，振搖3min，靜置分層，放出三氯甲烷層，經(jīng)盛有約5g預先用三氯甲烷濕潤的無水na2s04過濾器過濾于100ml;蒸發(fā)皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重復振搖提取，三氯甲烷層一并濾于蒸發(fā)皿中，最后用少量三氯甲烷洗滌過濾器，洗液并于蒸發(fā)皿中，65水浴通風揮干。揮干后冷卻，準確加入25.0ml甲醇水(1+1)，將凝結(jié)物充分溶解。此即為待測樣品提取液。5.1.1.3食用油(如菜油、色拉油、麻油、花生油等)稱取5.0g油樣于25ml小燒杯中，用20ml石

31、油醚或正已烷將試樣轉(zhuǎn)移至250ml分液漏斗中，準確加入25.0ml甲醇水(1+1)溶液，加塞振搖5min，靜置分層，放出下層甲醇水提取液。將甲醇水提取液按表一稀釋。將稀釋后的溶液搖勻，即為待測樣品稀釋液。5.1.1.4葡萄酒準確吸取5.0ml葡萄酒，移入125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，振搖3min，靜置分層，放出三氯甲烷層，經(jīng)盛有約5g預先用三氯甲烷濕潤的無水na2s04過濾器過濾于100ml蒸發(fā)皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重復振搖提取，三氯甲烷層一并濾于蒸發(fā)皿中，最后用少量三氯甲烷洗滌過濾器，洗液并于蒸發(fā)皿中，65水浴通風揮干。揮干后冷卻，準確加入25.0ml甲醇水(1

32、+1)，將凝結(jié)物充分溶解。此即為待測樣品提取液。5.1.1.5啤酒、黃酒準確移取5.0ml樣品于25ml容量瓶，準確加入12.5ml甲醇，再用蒸餾水定容至25ml。振搖10min，此即為待測樣品液。若結(jié)果為陽性，則采用葡萄酒中af b1的提取方法進行測定和確證。5.1.1.6花生樣品去皮粉碎(刀切或剪切)，稱取5.0g于100ml具塞三角瓶中。加入25.0ml甲醇水(1+1)和20ml正己烷(或石油醚)，振搖10min，過濾于分液漏斗中，靜置分層，放出下層液，按表一用a試劑進行稀釋，搖勻，此即為待測樣品稀釋液。5.1.1.7月餅、桃酥、花生醬等取10.0g試樣于250ml具塞錐形瓶中，加入50

33、.0ml甲醇水(1+1)提取液和20ml正己烷(或石油醚)，加塞振蕩15min，過濾，收集濾液于分液漏斗中，靜置分層。待下層甲醇水溶液澄清后，放出甲醇水溶液于另一錐形瓶中。準確吸取10.0ml下層甲醇水提取液(相當于2.0g樣品)于125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，加塞振搖3min，靜置分層(如有乳化現(xiàn)象可滴加甲醇促使分層)。放出三氯甲烷層，經(jīng)盛有約5g預先用三氯甲烷濕潤的無水硫酸鈉過濾器過濾于100ml蒸發(fā)皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗黃石市疾病預防控制中心作業(yè)指導書編號：hscdc/qcff006-2009第3頁共5頁黃曲霉毒素b1的測定第3版第0次修訂頒布日期：2009-9

34、-16中，重復振搖提取，三氯甲烷層一并濾于蒸發(fā)皿中，最后用少量三氯甲烷洗過濾器，洗液并于蒸發(fā)皿中。將蒸發(fā)皿放入通風櫥，65水浴通風揮干，冷卻。準確加入10.0ml甲醇水(1+1)，將凝結(jié)物充分溶解。此即為待測樣品提取液。5.1.1.8面粉 稱取5.0g面粉樣于100ml具塞三角瓶中，準確加入25.0ml甲醇水(1+1)溶液，振蕩15min，過濾，棄去14初濾液，收集試樣濾液，即為待測樣品提取液。若出現(xiàn)假陽性結(jié)果，則用三氯甲烷法提取，方法如下： 移取10.0g面粉樣于100ml具塞三角瓶中，加少量水濕潤，準確加入50.0ml三氯甲烷，塞后滴水封嚴。振蕩15min。靜置，過濾于100ml三角瓶中。

35、立即吸取25.0ml濾液(相當于5.0g樣品)于100ml蒸發(fā)皿中，65水浴通風揮干。冷卻，準確加入25.0ml甲醇水(1+1)溶液，充分溶解凝結(jié)物，即為待測樣品提取液。5.1.2飼料5.1.2.1一般飼料及原料 稱取5.0g樣品于100ml具塞三角瓶中，準確加入25.0ml甲醇水(1+1)溶液，振蕩15min，過濾，棄去初濾液。收集濾液。濾液按樣品稀釋表用a試劑適當稀釋，搖勻，即為待測樣品稀釋液。5.1.2.2飼料濃縮料 稱取5.0g樣品于100ml具塞三角瓶中，準確加入25.0ml甲醇水(1+1)溶液，振蕩15min，過濾，棄去初濾液。收集濾液于試管中，準確吸取5.0ml濾液(相當于1.0

36、g樣品)于125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，加塞振搖5min，靜置分層，放出下層三氯甲烷層，經(jīng)盛有約5g預先用三氯甲烷濕潤的無水na2s04過濾器過濾于100ml蒸皿中，再加入5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重復振搖提取，三氯甲烷一并濾于蒸發(fā)皿中，最后用少量三氯甲烷洗滌過濾器，洗液并入蒸發(fā)皿中。將蒸發(fā)皿放入通風櫥，65水浴通風揮干，冷卻。準確加入5.0ml甲醇水(1+1)溶液，充分溶解凝結(jié)物。此溶液按樣品稀釋表用a試劑適當稀釋，搖勻即為待測樣品稀釋液。5.2試劑的配制5.2.1 每瓶c試劑中準確加入1.5ml d試劑，充分溶解，配成實驗用酶標抗原溶液，28保存。5.2.2 e試劑用300

37、ml蒸餾水配制成洗滌液。6.實驗步驟6.1 將測試盒平衡至室溫。6.2小孔編號：根據(jù)需要截取相當孔數(shù)放置反應板支架上。1-3號孔為標準對照孔，其余孔為樣品孔。 6.3 洗滌：每孔加入250l左右洗滌液，洗液不得溢出，放置一分鐘后，甩掉洗滌液，在吸水紙上拍干，重復洗板一次。6.4 反應物組成：按下表所列，依次加入配制好的溶液及待測樣品稀釋液。黃石市疾病預防控制中心作業(yè)指導書編號：hscdc/qcff006-2009第4頁共5頁黃曲霉毒素b1的測定第3版第0次修訂頒布日期：2009-9-16操作次序加入量孔號1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 12350l50la b a 稀釋后樣品液d c

38、 c c c c c c c c 搖 勻 6.5反應：將反應板放入37恒溫培養(yǎng)箱中孵育30min。6.6洗滌：取出反應板，用力甩掉反應液，拍干。每孔加入250l左右洗滌液，洗液不得溢出，放置2分鐘后，甩掉洗滌液，在吸水紙上拍干，重復洗板4次。6.7顯色：每孔分別加入顯色底物液a(f試劑)和顯色底物液b(g試劑)各50l，搖勻，將反應板放入37恒溫培養(yǎng)箱中顯色15分鐘，目視法測定。(注：可適當延長顯色時間，使顏色加深，以利目視。)6.8目視法測定：先比較1-3號孔顏色。若3號孔(陰性孔)顏色最深，2號孔(陽性孔)次之，1號孔(空白孔)接近無色，說明試劑有效及操作無誤。比較樣品孔與2號孔(陽性孔)

39、顏色，若淺者，則為陽性，若深者，則為陰性，若顏色接近，則用儀器法或國標法驗證。6.9儀器法測定：每孔分別加入終止液(h試劑)50l，然后用酶標測定儀(或黃曲霉毒素b1專用測定儀)在450nm波長處測定各孔的吸光度a值，若a樣品a陽性孔，（1ngml）為陽性，若a樣品a陽性孔(1ngml)為陰性。6.10結(jié)果判斷6.10.1限量測定： 如樣品顯陽性，則其af b1含量為： af b1含量(gkg)>k×1gkg · k：為樣品稀釋系數(shù)；6.10.2定量測定：6.10.2.1 標準曲線法：將濃度為50ngml的afb1標準溶液用a試劑稀釋成0，0.1，0.5，1，5，10

40、ngml的標準工作溶液，設定標準孔位，按上述實驗步驟測定相應的吸光度a值，并繪制標準曲線。橫坐標為標準液濃度的常用對數(shù)值，縱坐標為各標準液孔a值與標準濃度為0ngm1的a值的比值(a標準液/a(0ng/ml)。通過查標準曲線可得c值，按下列公式計算出樣品中afb1的含量： · · af b1含量(gkg)=c×k黃石市疾病預防控制中心作業(yè)指導書編號：hscdc/qcff006-2009第4頁共5頁黃曲霉毒素b1的測定第3版第0次修訂頒布日期：2009-9-16式中：c：稀釋后樣品提取液中af b1，含量(ngml)； · k：樣品稀釋系數(shù)；6.10.2.

41、2經(jīng)驗公式法(兩點定量)： 用a試劑將適量b試劑稀釋10倍，配制成0.1ngml標準溶液，加入3號孔，其余按上述實驗步驟測定相應的吸光度a值。按下列公式計算樣品中afb1的含量：黃石市疾病預防控制中心作業(yè)指導書編號：hscdc/qcff007-2009第1頁共1頁芝麻油摻偽檢驗程序第3版第0次修訂頒布日期：2009-9-161目的為規(guī)范和指導本實驗室對芝麻油摻偽的檢驗，特制定本作業(yè)指導書。2范圍適用于本實驗室對芝麻油摻偽的檢驗工作。3原理 用氯仿溶解的油樣與硫酸反應，經(jīng)振搖后生成一種穩(wěn)定的桔紅色化合物，顏色的深淺與香油的濃度成正比，根據(jù)硫酸層的顏色即可比色定量。4.試劑4.1氯仿；4.2濃硫酸

42、；4.3香油參考溶液：精確稱取純香油1.0g于100ml容量瓶內(nèi)加氯仿至刻度，此液每ml含0.01g純香油。5.操作5.1香油標準色列的制備：精確吸取香油參考溶液0、0.50、0.75、1.0、1.25、1.5、1.75、2.0、2.5ml(分別含0、0.005、0.0075、0.01、0.0125、0.015、0.0175、0.02、0.025g香油)于10ml干燥的比色管中，加氯仿至5ml，混勻，沿管壁加硫酸2ml，室溫下振搖1min，靜置2min，待分層后硫酸層置于明亮（或日光燈下）處作目視比色。5.2樣品測定：準確稱取油樣（約0.2g）于10ml比色管中。加氯仿至刻度，混勻，吸取1.0

43、ml于10ml比色管中，加氯鈁至5ml，以下按方法操作，并與香油標準色列進行比色，計算香油的百分含量。5.3現(xiàn)場測定：將油樣存放在室溫下，用事先經(jīng)分析天平標定的取樣管吸取油樣10滴（約0.2g）取樣管的標定方法：將油的溫度固定與現(xiàn)場取樣的溫度相同（室溫23±2），用取樣管吸取油樣于分析天平 稱量每10滴油的重量，每支吸管連續(xù)稱量5次，取其平均值的重量于10ml比色管內(nèi)，加氯仿至刻度，混勻，吸取1.0ml按方法操作及比色定量。5.4計算香油（%）=樣品相當于標準管香油的含量（g）÷取樣量(g)×吸取稀釋后樣品量(ml)/樣品稀釋總體積(ml)×100%黃石

44、市疾病預防控制中心作業(yè)指導書編號：hscdc/qcyq001-2009第1頁共2頁ddb-303a型便攜式電導率儀操作規(guī)程第3版第0次修訂頒布日期：2009-9-161目的為規(guī)范和指導ddb-303a型便攜式電導率儀操作和使用，特制定本作業(yè)指導書。2范圍適用于用ddb-303a型便攜式電導率儀進行分析測試及儀器的維護。3.授權(quán)使用人：程勝4工作原理 在外電場作用下，電解質(zhì)溶液的正負離子以相反的方向移動，產(chǎn)生導電現(xiàn)象，遵循歐姆定律，在一定溫度下，電解質(zhì)的導電能力與電解質(zhì)的濃度成正比。5.基本資料：本儀器用于測量溶液的電導率。6.性能參數(shù)：6.1測量范圍為0-105us/cm6.2電子單元基本誤差

45、：±1.0%（fs）±1個字; 儀器基本誤差：1.5%（fs）±1個字; 電子單元基本補償誤差：±1.0%（fs）±1個字; 手動溫度補償范圍：15-35,基準溫度25; 電子單元穩(wěn)定性誤差：±0.66%（fs）±1個字/3h; 電子單元重復性誤差：±0.33%（fs）±1個字.7儀器使用條件7.1 環(huán)境溫度：5-407.2 相對濕度：不大于85%7.3 使用電源：6f22 9v干電池一節(jié)7.4 無強磁場干擾7.5 無腐蝕性氣體8.所用試劑:優(yōu)級純kcl9.操作步驟：9.1根據(jù)被測介質(zhì)電導率的高低選用求同

46、常數(shù)的電極和不同的測量方式;9.2裝入9v干電池,按下開關(guān)按鈕，預熱10分鐘;9.3用溫度計測量溶液溫度，調(diào)節(jié)“溫度”補償電位器,使溫度指示與被測溶液溫度一致;9.4根據(jù)使用電極的電極常數(shù)，按下“校準”鍵,調(diào)節(jié)“校準”電位器,使數(shù)字顯示與電極常數(shù)標示黃石市疾病預防控制中心作業(yè)指導書編號：hscdc/qcyq001-2009第2頁共2頁ddb-303a型便攜式電導率儀操作規(guī)程第3版第0次修訂頒布日期：2009-9-16值相對應;9.5校準完畢后,按下“測量”鍵,把電極浸入待測溶液中,根據(jù)顯示屏上的讀數(shù)記錄被測溶液的電導率值;9.6測量完畢,關(guān)閉電源開關(guān),用高純水清洗電極。10.維護保養(yǎng):用高純水

47、清洗電極,電極插頭座防潮,儀器長期不用取出電池.11.檢定及校準:本儀器每年檢定一次.12.期間核查12.1核查步驟：依以上步驟，測定電導率質(zhì)控標樣次，計算平均值，相對標準偏差，及相對誤差。相對標準偏差不得大于1%，相對誤差不得大于3%，否則須重新核查。12.2核查頻次：每年次。 黃石市疾病預防控制中心作業(yè)指導書編號：hscdc/qcyq002-2009第1頁共2頁723可見分光光度計操作程序第3版第0次修訂頒布日期：2009-9-161目的為規(guī)范和指導723可見分光光度計操作和使用，特制定本作業(yè)指導書。2范圍適用于用723可見分光光度計進行分析測試及儀器的維護。3.授權(quán)使用人：程勝、陳靜、江

48、霈、梅強正、樊敏皓4工作原理 由光源發(fā)出連續(xù)光線,經(jīng)濾光片和球面發(fā)射鏡至單色器的入射狹縫聚焦成象后經(jīng)平面反射鏡至準直鏡,產(chǎn)生平行光射至光柵,色散后又經(jīng)準直鏡聚焦在出射狹縫上成一連續(xù)光譜,由出射狹縫射出一定波長單色光,通過溶液再射到光電管上,通過光電信號的轉(zhuǎn)換將結(jié)果送至led數(shù)碼管顯示.5.基本資料：本儀器用于無機分析,金屬分析等.6.性能參數(shù)：6.1波長范圍:330-800nm,波長準確度: ±1.0nm,波長重復性:0.5nm,帶寬:6nm6.2雜光:0.5%(360nm),透射比測定范圍:0-100%,吸光度測定范圍:0-1.999(a)6.3透射比準確度: ±0.5%

49、,透射比/吸光度轉(zhuǎn)換誤差: ±0.002a(在0.5a處), ±0.004a(在1a處)6.4漂移:0.5%(亮電流) 0.2%(暗電流)7儀器使用條件7.1環(huán)境溫度：5-357.2相對濕度：不大于85%7.3使用電源：220±22v，50±1hz之間，良好接地7.4無強磁場干擾7.5無腐蝕性氣體8.所用試劑:干燥劑9.操作步驟：9.1準備工作：9.1.1 通電試驗：開啟電源開關(guān)，“電源”指示燈亮，儀器進入自測程序，當數(shù)字自動返回至今500.00時表示通過自測試;9.1.2 波長設定:按“/goto”鍵,設定測定波長;9.1.3 選擇比色皿:9.1.4

50、儀器預熱30分鐘左右。黃石市疾病預防控制中心作業(yè)指導書編號：hscdc/qcyq002-2009第2頁共2頁723可見分光光度計操作程序第3版第0次修訂頒布日期：2009-9-169.2測量：9.2.1調(diào)零，0%t。9.2.2調(diào)整參比，100%t。9.2.3比色皿誤差校正。9.2.4測量。比色完畢，切斷電源，清洗比色皿,做好使用登記。10.維護保養(yǎng):保持儀器清潔干燥,定期波長校正,長時間不用應定期通電.11.檢定及校準:本儀器每年檢定一次.12.期間核查：12.1核查步驟：依照生活飲用水標準檢驗方法（gb/t5750-2006）配制鉻（六價）標準系列溶液，測定鉻（六價）質(zhì)控樣，連續(xù)測定次，計算

51、平均值，相對標準偏差及相對誤差。相對標準偏差不得大于1%，相對誤差不得大于3%，否則須重新核查。12.2 核查頻次：每年次。 黃石市疾病預防控制中心作業(yè)指導書編號：hscdc/qcyq003-2009第1頁共2頁ab204電子天平的操作程序第3版第0次修訂頒布日期：2009-9-161目的為規(guī)范和指導ab204電子天平操作和使用，特制定本作業(yè)指導書。2范圍適用于用ab204電子天平進行分析測試及儀器的維護。3.授權(quán)使用人：程勝、陳靜、江霈、梅強正、樊敏皓4工作原理:電磁力平衡5.基本資料：本儀器用于樣品,試劑等的稱重.6.性能參數(shù)：量程:0.1mg-210g,可讀性0.1mg7儀器使用條件7.

52、1環(huán)境溫度：5-407.2相對濕度：不大于85%7.3使用電源：220±22v，50±1hz 7.4無強磁場干擾7.5無腐蝕性氣體8.所用試劑:干燥劑9.操作步驟：9.1預熱：電子天平在初次通電或在長時間斷電之后，至少預熱30分鐘;9.2自檢：在接通以后，電子稱量系統(tǒng)自動實現(xiàn)自檢功能。當顯示器顯示零時，自檢過程即結(jié)束，此時即天平工作準備就緒;9.3 校準: 按“cal/menu”鍵,顯示屏出現(xiàn)“cal”,放入砝碼出現(xiàn)“200.0000g”,取出后自動平衡,出現(xiàn)“caldont ”,即校準完畢;9.4清零：只要當儀器經(jīng)過清零之后，才能執(zhí)行準確的重量測量。請按下“o/t”鍵，以

53、便使重量顯示為“0.0000g”;9.5稱量：將物品放在稱盤上，當顯示器上左側(cè)出現(xiàn)的“o”標記消失時,讀出數(shù)值;黃石市疾病預防控制中心作業(yè)指導書編號：hscdc/qcyq003-2009第2頁共2頁ab204電子天平的操作程序第3版第0次修訂頒布日期：2009-9-169.6稱量完畢,關(guān)閉電源,做好使用登記。10.維護保養(yǎng):保持儀器清潔干燥,避免陽光直射和過度溫度變化,放置位置應無振動.11.檢定及校準:本儀器每年檢定一次.12.期間核查：12.1核查步驟： 按以上操作，用儀器所配校準砝碼稱量6次，記錄數(shù)值，計算平均值,相對誤差12.2核查頻次：每年次。 黃石市疾病預防控制中心作業(yè)指導書編號：hscdc/qcyq004-2009第1頁共2頁phsj-4a型 ph計操作程序第3版第0次修