《醫(yī)學(xué)免疫學(xué)》實驗教學(xué)大綱

1、醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實驗教學(xué)大綱實驗名稱：醫(yī)學(xué)免疫學(xué) 學(xué)時：6學(xué)時學(xué) 分: 適應(yīng)專業(yè)：護理學(xué)專業(yè) 執(zhí)筆人：邊藏麗 審定人：王愷兵一、實驗?zāi)康呐c任務(wù)實驗教學(xué)是醫(yī)學(xué)免疫學(xué)教學(xué)的重要組成部分，通過實驗教學(xué)加深對基礎(chǔ)理論知識的理解，了解常用的免疫學(xué)檢查方法，掌握免疫學(xué)基本實驗技術(shù)（試管凝集、玻片凝集、對流免 疫電泳、免疫細胞形態(tài)觀察、淋巴細胞分離、ELISA等），培養(yǎng)學(xué)生嚴謹求實的科學(xué)態(tài)度以及觀察、分析、綜合能力、創(chuàng)造思維能力和初步的科研能力。、教學(xué)基本要求醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實驗對象多為具有傳染性的材料，要求學(xué)生在實驗教學(xué)中嚴格遵守實驗室 規(guī)則，牢固樹立無菌觀念，認真操作與觀察實驗結(jié)果，實事求是的記錄實驗結(jié)果，并 對實

2、驗結(jié)果進行認真分析和討論。三、實驗項目與類型序 號實驗項目學(xué)時實驗類型備注驗證設(shè)計綜合演示創(chuàng)新必做選做1凝集反應(yīng)（試管凝集、玻片凝 集）3VV2對流免疫電泳、血型鑒定2VV3小鼠吞噬細胞及轉(zhuǎn)化細胞形態(tài) 觀察2VV4酶聯(lián)免疫吸附試驗一ELISA（HBsAg檢測）3VV5豚鼠過敏試驗2VV四、實驗教學(xué)內(nèi)容及學(xué)時分配實驗一 凝集反應(yīng)（試管凝集、玻片凝集）3學(xué)時1.目的要求掌握體外抗原抗體反應(yīng)的特點和影響因素；掌握凝集反應(yīng)原理、方法和用途。2方法原理顆粒性抗原與相應(yīng)抗體在一定條件下特異性結(jié)合而出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。3主要實驗儀器及材料試管、玻片、水浴箱、吸管、傷寒桿菌“H”“O診斷菌液、大腸埃希菌、

3、大腸埃希菌診斷血清等。4掌握要點掌握凝集反應(yīng)原理、方法和用途；血清效價；凝集現(xiàn)象的觀察。5實驗內(nèi)容：（1）玻片凝集（抗原定性試驗）（2）試管凝集（抗體定量試驗）實驗二 對流免疫電泳、血型鑒定2學(xué)時1 目的要求掌握沉淀的反應(yīng)原理、方法和用途； 了解對流免疫電泳的操作步驟，結(jié)果觀察；掌握血 型鑒定的反應(yīng)原理、方法及結(jié)果判斷。2方法原理 對流免疫電泳是將經(jīng)典沉淀反應(yīng)與電泳技術(shù)結(jié)合而設(shè)計的一項實驗。 沉淀反應(yīng)是指可溶 性抗原與相應(yīng)抗體在一定條件下發(fā)生結(jié)合并出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物的一種血清學(xué)反應(yīng)。帶電的膠體顆?？稍陔妶鲋幸苿?，其移動方向與膠體顆粒所帶電荷有關(guān)?？乖赑H8.6的緩沖帶負電荷，將抗原加于瓊脂

4、板陰極端的小孔中， 由陰極向陽極移動； 抗體為球蛋 因電滲作用而流向陰極。 當抗原抗體在兩孔間相遇時， 在兩者比例適當處形成白色沉淀 線。此種在雙向瓊指擴散基礎(chǔ)上加電泳的方法，稱為對流免疫電泳。 血型鑒定屬直接凝集反應(yīng)。將已知標準抗A和抗B血型抗體分別與待測紅細胞混合。如果抗原與抗體相對應(yīng)， 則引起紅細胞凝集， 反之則不凝集， 據(jù)其凝集現(xiàn)象可判斷血型。3主要實驗儀器及材料標準的抗A和抗B單克隆抗體（抗A為藍色，抗B為黃色）、酒精棉球、采血針、載 玻片、待測血清、甲胎蛋白診斷血清，肝癌病人陽性血清，PH8.6 0.05mol/L巴比妥緩 沖液，瓊脂對流免疫板、打孔器、加樣器、電泳儀等。4掌握要點

5、（1）對流免疫電泳的操作步驟，結(jié)果觀察；（2）血型鑒定的方法及結(jié)果判斷。5實驗內(nèi)容： （1）講述沉淀的反應(yīng)原理、方法和用途；對流免疫電泳的操作步驟，結(jié)果觀察；血型 鑒定的反應(yīng)原理、方法及結(jié)果判斷；（2）對流免疫電泳的操作及結(jié)果觀察；（3）血型鑒定的操作及結(jié)果觀察；實驗三 小鼠吞噬細胞及轉(zhuǎn)化細胞形態(tài)觀察2學(xué)時1.目的要求 觀察吞噬細胞的吞噬現(xiàn)象； 了解機體的非特異性免疫功能。 觀察轉(zhuǎn)化細胞、 淋巴母細胞 的形態(tài)了解機體的特異性免疫功能。2方法原理巨噬細胞可吞噬異種或異體細胞等體積較大的異物， 中性粒細胞可吞噬多種細菌。 觀察 這兩類細胞的吞噬現(xiàn)象， 可計算出吞噬異物的細胞數(shù)和吞噬細胞中吞入的異物

6、數(shù)， 用以 評價機體的免疫狀態(tài)。淋巴細胞， 在受抗原的刺激后， 可轉(zhuǎn)化為淋巴母細胞， 淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的高低可反映機 體細胞免疫水平。3主要實驗儀器及材料 昆明小白鼠、表皮葡萄球菌、瑞氏染液、顯微鏡、玻片等。4掌握要點 小白鼠腹腔解剖；觀察吞噬細胞的吞噬現(xiàn)象；觀察轉(zhuǎn)化細胞、淋巴母細胞的形態(tài)。5實驗內(nèi)容：（1）小白鼠腹腔解剖；（2）標本片制作（3）瑞氏染液、（4）油鏡下觀察轉(zhuǎn)化細胞、淋巴母細胞的形態(tài)。實驗四 酶聯(lián)免疫吸附試驗一ELISA（HBsAg檢測）2學(xué)時1.目的要求了解ELISA的類型，雙抗體夾心法的操作方法，掌握結(jié)果觀察及實際應(yīng)用。2方法原理 酶聯(lián)免疫吸附試驗是一種用酶標化抗原或抗體， 以

7、提高抗原抗體反應(yīng)的靈敏度的免疫學(xué) 檢測方法。本技術(shù)肯有敏感性高，特異性強，易觀察結(jié)果，便于大規(guī)模檢測的特點。ELISA的類型有間接法、雙抗體夾心法、抗原競爭法等。雙抗體夾心法是將抗原結(jié)合于 已預(yù)先包被的已知抗體上， 再以酶標抗體與抗原結(jié)合， 通過觀察酶對底物的摧化反應(yīng)所 產(chǎn)和的顏色變化，來判斷抗原的存在及含量。3主要實驗儀器及材料HBsAg酶標試劑盒，內(nèi)含：已包被抗-HBs微量反應(yīng)板、陽性控制血清、陰性控制血清、 酶標抗-HBs、酶底物A、酶底物B中止液、洗滌液。待檢血清、微量加樣器、吸頭等。4掌握要點準確加樣；準確掌握每步操作時間；認真觀察分析結(jié)果5實驗內(nèi)容：ELISA檢測HBsAg（或抗一

8、HBsAg）實驗五 豚鼠過敏試驗2學(xué)時1.目的要求了解實驗性過敏性休克的方法及結(jié)果觀察；在此基礎(chǔ)上掌握I型超敏反應(yīng)的機制、臨床表現(xiàn)及特點。2方法原理豚鼠過敏反應(yīng)屬I型超敏反應(yīng)，與人類的青霉素和異種血清所引起的過敏性休克相似。先給豚鼠注射異種蛋白， 經(jīng)過一定時間， 動物產(chǎn)生IgE后處于致敏狀態(tài)。 當?shù)诙蜗嗤?較大量抗原注射時， 抗原與IgE結(jié)合， 導(dǎo)致肥大細胞和堿性粒細胞脫顆粒， 釋放活性介 質(zhì)，作用于效應(yīng)器官，產(chǎn)生嚴重的過敏性休克。3主要實驗儀器及材料豚鼠：體重150g左右的幼小豚鼠、馬血清（或人血清） 、注射器、剪刀、酒精棉球等。4掌握要點 掌握抗原注射劑量；第二次相同抗原注射時間；豚鼠發(fā)敏、過敏性休克現(xiàn)象觀察。5實驗內(nèi)容：（1）豚鼠致敏注射（2）豚鼠發(fā)敏、過敏性休克現(xiàn)象觀察。五、考核辦法考勤、實驗操作50%；