青霉素類藥物工業(yè)分析與檢測方法

1、生物工程一班生物工程一班小組成員：小組成員：周春媛周春媛 莊超莊超 戚嘉卓戚嘉卓 抗生素類藥物專題菌種優(yōu)化菌種優(yōu)化抗生素發(fā)酵及抗生素發(fā)酵及提取精制提取精制工業(yè)生產方法工業(yè)生產方法及總的工藝及總的工藝抗生素生產菌抗生素生產菌的菌種的菌種菌種來源菌種來源 內內 容容 速速 覽覽抗生素總的生產工藝過程抗生素總的生產工藝過程菌種菌種孢子制備孢子制備種子制備種子制備發(fā)酵發(fā)酵發(fā)酵液預處理及過濾發(fā)酵液預處理及過濾出廠檢驗出廠檢驗提取過程提取過程成品包裝成品包裝精制過程精制過程成品檢驗成品檢驗微生物合成抗生素微生物合成抗生素下游：下游： 提取提取 預處理預處理 過濾過濾 進一步提取進一步提取菌種保存、選育、孢

2、子及種子制備菌種保存、選育、孢子及種子制備發(fā)酵發(fā)酵適宜的培養(yǎng)基適宜的培養(yǎng)基碳源碳源 氮源氮源 無機鹽（微量元素）無機鹽（微量元素）前體前體上游：上游：結晶干燥結晶干燥純品純品成品成品:制劑工作制劑工作發(fā)酵控制發(fā)酵控制視抗生素品種和發(fā)酵工藝而定。視抗生素品種和發(fā)酵工藝而定。在整個發(fā)酵過程中，需不斷通無在整個發(fā)酵過程中，需不斷通無 菌空氣和攪拌，以維持一定罐壓或溶氧。菌空氣和攪拌，以維持一定罐壓或溶氧。在罐的夾層或蛇管中需通冷卻水在罐的夾層或蛇管中需通冷卻水以維持一定罐溫。以維持一定罐溫。加泡沫劑以控制泡沫，必要時還加泡沫劑以控制泡沫，必要時還加入酸、堿以調節(jié)發(fā)酵液的加入酸、堿以調節(jié)發(fā)酵液的pH。

3、成品檢驗成品檢驗抗生素成品常規(guī)檢驗的主要項目有：抗生素成品常規(guī)檢驗的主要項目有：NSR C O N HC H3C H3C O O HO1234567青霉素類: 氫化噻唑環(huán)或氫化噻嗪環(huán)與-內酰胺并合的雜環(huán)，分別構成二者的母體：6-APA、 7-ACA。 母核: 由-內酰胺環(huán)和氫化噻唑環(huán) 組成的雙雜環(huán)。 6-APA 6-Aminopenicillanic Acid 側鏈 : RCO- 旋光性旋光性青霉素分子中含有三個手性碳原子青霉素分子中含有三個手性碳原子(C3，、，、C5、C6)有手性碳原子，具有旋光性，根據此性質，可用于有手性碳原子，具有旋光性，根據此性質，可用于青霉素藥物的定性和定量分析青霉

4、素藥物的定性和定量分析NSR C O N HC H3C H3C O O HO*紫外吸收特性紫外吸收特性青霉素類青霉素類 母核無明顯母核無明顯UV多數有苯環(huán)取代基多數有苯環(huán)取代基 但青霉素類藥物在弱酸性下水解，可以但青霉素類藥物在弱酸性下水解，可以產生具有共軛雙鍵的青霉烯酸，在紫外光區(qū)產生具有共軛雙鍵的青霉烯酸，在紫外光區(qū)有吸收。有吸收。 側鏈中有苯環(huán)等取代基的藥物，在紫外側鏈中有苯環(huán)等取代基的藥物，在紫外光區(qū)也有吸收。像芐青霉素。光區(qū)也有吸收。像芐青霉素。 N S O C H 2 R 1 C O O H R C O N H 頭孢菌素類分子中有共軛體系頭孢菌素類分子中有共軛體系（OCNCC）在在

5、260nm處有最大吸收。處有最大吸收。 不穩(wěn)定性不穩(wěn)定性干燥條件下青霉素鹽穩(wěn)定。青霉素水溶液在干燥條件下青霉素鹽穩(wěn)定。青霉素水溶液在pH6-6.8時時較穩(wěn)定。較穩(wěn)定。 -內酰胺環(huán)是該類抗生素結構最不穩(wěn)定的部內酰胺環(huán)是該類抗生素結構最不穩(wěn)定的部分。分。不穩(wěn)定性因素：四元環(huán)張力大不穩(wěn)定性因素：四元環(huán)張力大 ， 酰胺鍵易水解酰胺鍵易水解青霉素類藥物遇到某些氧化劑（酸、堿、青霉素酶，青霉素類藥物遇到某些氧化劑（酸、堿、青霉素酶，或某些金屬離子）或遭遇某種溫度，藥物將降解失效或某些金屬離子）或遭遇某種溫度，藥物將降解失效。二、青霉素類藥物的鑒別反應二、青霉素類藥物的鑒別反應（一）官能團的呈色反應：（一）

6、官能團的呈色反應：1、 羥肟酸鐵反應：堿性環(huán)境中與羥胺作用-內酰胺環(huán)破裂生成羥肟酸在稀酸中與高鐵離子呈色 ?！捐b別】（1）取本品約20mg，加水15ml溶解后，加鹽酸羥胺試液與氫氧化鈉試液各2ml，放置5分鐘后，加鹽酸溶液（1100）3ml與三氯化鐵試液1ml，隨即振搖，即顯赤褐色。2、硫酸、硫酸-硝酸呈色反應：頭孢菌素能與硫酸硝酸呈色反應：頭孢菌素能與硫酸-硝酸反應后呈黃色。硝酸反應后呈黃色。此顯色反應可區(qū)別某些頭孢菌素族抗生素，因此被一些國家藥典此顯色反應可區(qū)別某些頭孢菌素族抗生素，因此被一些國家藥典采用供鑒別。采用供鑒別。3、茚三酮反應：、茚三酮反應：-氨基酸的反應氨基酸的反應,如氨芐西

7、林遇茚三酮顯藍紫色如氨芐西林遇茚三酮顯藍紫色4、與斐林試劑反應：分子中具有、與斐林試劑反應：分子中具有(-CONH-)結構，可使堿性酒石結構，可使堿性酒石酸銅還原顯紫色酸銅還原顯紫色, 5、變色酸、變色酸-硫酸呈色反應：中國藥典硫酸呈色反應：中國藥典(1995年版年版)采用本法鑒別。采用本法鑒別。如阿莫西林林加變色酸如阿莫西林林加變色酸-硫酸試劑混合后，于硫酸試劑混合后，于150加熱加熱2-3min，因分解出甲醛與變色酸縮合而呈深褐色。因分解出甲醛與變色酸縮合而呈深褐色。 6、各種鹽的反應：火焰反應在火焰下遇鉀顯紫色遇鈉顯淡黃色、各種鹽的反應：火焰反應在火焰下遇鉀顯紫色遇鈉顯淡黃色青霉素族、頭

8、孢菌素族藥品中，許多制成鉀鹽或鈉鹽供臨床使用，青霉素族、頭孢菌素族藥品中，許多制成鉀鹽或鈉鹽供臨床使用，因而可利用其火焰反應進行鑒別。因而可利用其火焰反應進行鑒別。 （二）沉淀反應（二）沉淀反應1、在稀鹽酸中生成白色沉淀：青霉素鉀(鈉) 白色游離基沉淀2、 有機胺鹽的特殊反應：側鏈含有苯羥基基團時，能與重氮苯磺酸試液產生偶合反應而呈色。如： 黃色重氮苯磺酸頭孢哌啶（三）類似肽鍵的反應（三）類似肽鍵的反應雙縮脲反應【鑒別】（2）取樣取樣本約10mg，加水6ml溶解后，加堿性酒石酸銅試液0.5ml，即顯紫色。(四四)生物學法（抑菌能力）生物學法（抑菌能力）如青霉素鈉如青霉素鈉 鑒別鑒別 取本品與已

9、知含量的青霉素適量，分別加水制成每取本品與已知含量的青霉素適量，分別加水制成每1ml中約含中約含50g的溶液，的溶液，各取各取1ml ，加入不少于，加入不少于200 單位的青霉素酶溶液單位的青霉素酶溶液1ml,在在37滅活滅活1小時后，取滅小時后，取滅菌濾紙片，分別用上述溶液浸濕后，用濾紙吸去多余的液體，置攤布金黃色葡萄菌濾紙片，分別用上述溶液浸濕后，用濾紙吸去多余的液體，置攤布金黃色葡萄球菌球菌CMCC(B)26003的培養(yǎng)基上，在的培養(yǎng)基上，在37培養(yǎng)約培養(yǎng)約16小時后均無抑菌作用，而用小時后均無抑菌作用，而用同一方法檢查未經青霉素酶滅活的溶液均有抑菌作用。同一方法檢查未經青霉素酶滅活的溶

10、液均有抑菌作用。（1）容量法：容量分析是依據已知濃度的標準試劑溶液與被測定的一定量供試品藥物完全作用所消耗的標準試劑的體積，來計算被測定藥物中有效物質含量的方法。在抗生素類藥物分析中，常用的有酸堿滴定法、碘量法。青霉素含量的測定,青霉素在水溶液中經水解后，產生青霉噻唑酸，可用酸堿滴定法測定?；蛴弥苯拥味ǚǎ蛴媚娴畏ㄟM行測定，最后均以堿標準溶液的消耗量來計算青霉素的含量。終點觀察：用目視指示劑或電位滴定均可。溫度對指示劑的變色終點觀察：用目視指示劑或電位滴定均可。溫度對指示劑的變色范圍有影響。堿性指示劑，溫度升高時，對氫離子的靈敏度降低，范圍有影響。堿性指示劑，溫度升高時，對氫離子的靈敏度降低

11、，變色范圍偏向較低的變色范圍偏向較低的pH值，如甲基橙在室溫時為值，如甲基橙在室溫時為pH 3.14.4，在在100時，移到時，移到2.53.7。酸性指示劑對溫度的影響不太敏感。酸性指示劑對溫度的影響不太敏感。指示劑的用量不宜多，過多時，因指示劑本身也消耗酸或堿，變指示劑的用量不宜多，過多時，因指示劑本身也消耗酸或堿，變色較慢。在水溶液中，大部分羧酸在色較慢。在水溶液中，大部分羧酸在pH約約8.4時中和，一般可用時中和，一般可用酚酞指示劑（無色到紅色），也可采用百里酚酞（無色到藍色）酚酞指示劑（無色到紅色），也可采用百里酚酞（無色到藍色）或百里酚藍（黃色到藍色）等。滴定劑的選擇，一般選用氫氧化

12、或百里酚藍（黃色到藍色）等。滴定劑的選擇，一般選用氫氧化鈉或氫氧化鉀標準溶液作滴定劑。標準堿液一般采用新沸冷卻蒸鈉或氫氧化鉀標準溶液作滴定劑。標準堿液一般采用新沸冷卻蒸餾水進行稀釋制備。貯存標準堿液的容器要密封，以免吸收二氧餾水進行稀釋制備。貯存標準堿液的容器要密封，以免吸收二氧化碳而影響堿液質量。青霉素鈉的含量測定精密稱取本品約化碳而影響堿液質量。青霉素鈉的含量測定精密稱取本品約0.30.4g，加新沸過的蒸餾水，加新沸過的蒸餾水20mL使其溶解，加使其溶解，加0.01mol/L氫氫氧化鈉液中和后，精密加氧化鈉液中和后，精密加0.1mol/L氫氧化鈉液氫氧化鈉液25mL，95左右左右水浴水浴2

13、0min。冷卻后，加酚酞指示劑。冷卻后，加酚酞指示劑2滴，用滴，用0.1mol/L鹽酸滴定，鹽酸滴定，從粉紅色至無色。不加供試樣品作為空白，重復以上操作。兩者從粉紅色至無色。不加供試樣品作為空白，重復以上操作。兩者滴定數的差即為所消耗氫氧化鈉的量。滴定數的差即為所消耗氫氧化鈉的量。（2）光譜學測定法旋光法旋光法:平面偏振光通過含有某些光學活性的化合物液體或溶平面偏振光通過含有某些光學活性的化合物液體或溶液時，能引起旋光現象，使偏振光的平面向左或向右旋轉。偏液時，能引起旋光現象，使偏振光的平面向左或向右旋轉。偏振光平面旋轉的度數，稱為旋光度。使偏振光向右旋轉（順時振光平面旋轉的度數，稱為旋光度。

14、使偏振光向右旋轉（順時針方向）為右旋，以針方向）為右旋，以“”符號表示；使偏振光向左旋（逆時符號表示；使偏振光向左旋（逆時針方向）為左旋，以針方向）為左旋，以“”符號表示。偏振光透過長符號表示。偏振光透過長1dm并每并每1mL中含有旋光物質中含有旋光物質1g的溶液，在一定波長與溫度下測得的旋的溶液，在一定波長與溫度下測得的旋光度稱為比旋度。旋光法亦用于紅霉素、螺旋霉素等的效價測光度稱為比旋度。旋光法亦用于紅霉素、螺旋霉素等的效價測定。定。分光光度法分光光度法:紫外分光光度法多用于抗生素制劑中抗生素含紫外分光光度法多用于抗生素制劑中抗生素含量的測定。如測定奧格門汀（復合制劑）中羥氨芐青霉素和量的

15、測定。如測定奧格門?。◤秃现苿┲辛u氨芐青霉素和克拉維酸的含量；測定麥迪霉素膠囊中麥迪霉素的含量；用克拉維酸的含量；測定麥迪霉素膠囊中麥迪霉素的含量；用金屬離子絡合物測定土霉素制劑中的土霉素含量等等。比色金屬離子絡合物測定土霉素制劑中的土霉素含量等等。比色法用于多種抗生素的效價測定。法用于多種抗生素的效價測定。如青霉素和頭孢菌素的羥胺比色法測定抗生素效價；鏈霉素如青霉素和頭孢菌素的羥胺比色法測定抗生素效價；鏈霉素的麥芽酚法測定鏈霉素效價；三氯化鐵比色法測定土霉素效的麥芽酚法測定鏈霉素效價；三氯化鐵比色法測定土霉素效價等。價等。色譜法測定法色譜法測定法 色譜法在抗生素藥物分析中，主要用于鑒別定色

16、譜法在抗生素藥物分析中，主要用于鑒別定性及定量（如雜質、異構體的限度試驗和組分分析）。性及定量（如雜質、異構體的限度試驗和組分分析）。高效液相測定法：在每種抗生素進行檢測前要求對儀器進行高效液相測定法：在每種抗生素進行檢測前要求對儀器進行系統(tǒng)適應性試驗，即用規(guī)定的對照品對儀器進行試驗和調整，系統(tǒng)適應性試驗，即用規(guī)定的對照品對儀器進行試驗和調整，應達到規(guī)定的要求；或規(guī)定分析狀態(tài)下色譜柱的最小理論板數、應達到規(guī)定的要求；或規(guī)定分析狀態(tài)下色譜柱的最小理論板數、分離度和拖尾因子。高效液相色譜在抗生素類藥物的定性、定分離度和拖尾因子。高效液相色譜在抗生素類藥物的定性、定量分析中應用的愈來愈多，如半合成青

17、霉素的衍生物的含量測量分析中應用的愈來愈多，如半合成青霉素的衍生物的含量測定。定。（3）碘量法（剩余碘量法）原理*內酰胺類不直接與碘反應*內酰胺類水解產物可與碘發(fā)生定量反應：取裝量差異項下的內容物，精密稱取約取裝量差異項下的內容物，精密稱取約0.12g，置，置100ml量瓶中，量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置碘瓶中，置碘瓶中，加加1mol/L氫氧化鈉溶液氫氧化鈉溶液1ml放置放置20分鐘，再加分鐘，再加1mol/L鹽酸溶液鹽酸溶液1ml與醋酸與醋酸-醋酸鈉緩沖液（醋酸鈉緩沖液（pH4.5）5ml,精密加入碘滴定液精密加入碘滴定液（0

18、.01mol/L）15ml，密塞，搖勻，在，密塞，搖勻，在2025暗處放置暗處放置20分分鐘，用硫代硫酸鈉滴定液（鐘，用硫代硫酸鈉滴定液（0.01mol/L）滴定，）滴定，近終點時加淀粉指示液，繼續(xù)滴定并強力振搖，至藍色消失；近終點時加淀粉指示液，繼續(xù)滴定并強力振搖，至藍色消失；另精密量取供試品溶液另精密量取供試品溶液5ml，置碘瓶中，加醋酸，置碘瓶中，加醋酸-醋酸鈉緩沖液醋酸鈉緩沖液（pH4.5）5ml，精密加入碘滴定液（，精密加入碘滴定液（0.01mol/L）15ml，密塞，密塞，搖勻，在暗處放置搖勻，在暗處放置20分鐘，用硫代硫酸鈉滴定液（分鐘，用硫代硫酸鈉滴定液（0.01mol/L）滴

19、定，作為空白。同時用青霉素對照品同法測定作對照，算出滴定，作為空白。同時用青霉素對照品同法測定作對照，算出供試品的含量。供試品的含量。（4）電位配位滴定法汞量法1. 原理原理*內酰胺類不直接與汞鹽反應內酰胺類不直接與汞鹽反應*內酰胺類水解產物可與汞鹽內酰胺類水解產物可與汞鹽2.青霉胺發(fā)生定量反應：青霉素藥物與硝酸汞發(fā)生絡合反應。先按青霉胺發(fā)生定量反應：青霉素藥物與硝酸汞發(fā)生絡合反應。先按2分子分子青霉胺與青霉胺與1分子汞離子的比例絡合，發(fā)生第一次滴定突躍，但突躍范圍很分子汞離子的比例絡合，發(fā)生第一次滴定突躍，但突躍范圍很小，變化比較平緩，不宜用于做終點，繼續(xù)用硝酸汞滴定時，青霉胺分子小，變化比

20、較平緩，不宜用于做終點，繼續(xù)用硝酸汞滴定時，青霉胺分子與汞離子按與汞離子按1:1的比例絡合，生成穩(wěn)定的絡合物的比例絡合，生成穩(wěn)定的絡合物青霉胺絡汞，發(fā)生第青霉胺絡汞，發(fā)生第二次滴定突躍。其突躍范圍較大，變化較急劇，宜于確定終點。計算青霉二次滴定突躍。其突躍范圍較大，變化較急劇，宜于確定終點。計算青霉素胺含量并進行結果討論：素胺含量并進行結果討論：（1）電位法指示終點，以第二次滴定）電位法指示終點，以第二次滴定 突躍為終點突躍為終點 反應摩爾比反應摩爾比1:1 （2）空白試驗）空白試驗 用未降解樣品測定用未降解樣品測定（3）優(yōu)點）優(yōu)點 不需標準品不需標準品1、稀釋法：、稀釋法：稀釋法是抗生素效價

21、測定最簡單的方法之一。一稀釋法是抗生素效價測定最簡單的方法之一。一般是在一系列的試管中用液體培養(yǎng)基逐管將抗生素般是在一系列的試管中用液體培養(yǎng)基逐管將抗生素做做2倍稀釋，并于各個試管中加入同量的對該抗生倍稀釋，并于各個試管中加入同量的對該抗生素有高度敏感性的試驗菌液。將各個試管放置于素有高度敏感性的試驗菌液。將各個試管放置于37的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，觀察能抑制細菌生長的，觀察能抑制細菌生長的最低抗生素濃度作為測定終點。再與同法測得的抗最低抗生素濃度作為測定終點。再與同法測得的抗生素標準品終點做比較，即可求得被測定抗生素的生素標準品終點做比較，即可求得被測定抗生素的效價效價。2、比濁

22、法：、比濁法：細菌生長產生的濁度與細菌數的增加、細菌群體質量的增加和細細菌生長產生的濁度與細菌數的增加、細菌群體質量的增加和細菌細胞容積的菌細胞容積的 增加之間，存在著相關性，在一定的范圍內符合增加之間，存在著相關性，在一定的范圍內符合比耳定律。將抗生素標準品的稀釋液與供試品的稀釋液分別加入試比耳定律。將抗生素標準品的稀釋液與供試品的稀釋液分別加入試管中，再加入已接種試驗菌的液體培養(yǎng)基，搖勻，置管中，再加入已接種試驗菌的液體培養(yǎng)基，搖勻，置37的培養(yǎng)箱的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)中培養(yǎng)24h后，觀察試驗菌生長情況。由于抗生素濃度不同，試驗后，觀察試驗菌生長情況。由于抗生素濃度不同，試驗菌受抑制的程度也不同，

23、因而產生不同程度的混濁。用分光光度計菌受抑制的程度也不同，因而產生不同程度的混濁。用分光光度計測定其透光率或吸收度，用標準曲線法可測定出供試品的效價。取測定其透光率或吸收度，用標準曲線法可測定出供試品的效價。取每每mL含含24.0、26.8、29.9、33.5和和37.5U的鏈霉素標準品溶液各的鏈霉素標準品溶液各1mL，分別加入，分別加入15支試管中支試管中(3個平行個平行)。另取試管。另取試管3支，每管中各加支，每管中各加入供試品溶液入供試品溶液1mL。于。于18支試管中各加入已接種試驗菌的液體培養(yǎng)支試管中各加入已接種試驗菌的液體培養(yǎng)基基9mL，搖勻。將標準品管和供試品管置，搖勻。將標準品管

24、和供試品管置37培養(yǎng)箱中培養(yǎng)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，取出，分別于每管中各加入后，取出，分別于每管中各加入12甲醛溶液甲醛溶液0.5mL，搖勻，即可，搖勻，即可于分光光度計上于分光光度計上530nm處以未接種試驗菌的液體培養(yǎng)基處以未接種試驗菌的液體培養(yǎng)基9mL，加蒸，加蒸餾水餾水1mL，12甲醛溶液甲醛溶液0.5mL，搖勻作為空白，測定各管內培養(yǎng)，搖勻作為空白，測定各管內培養(yǎng)物的透光率。以透光度為縱坐標，鏈霉素濃度為橫坐標繪制標準曲物的透光率。以透光度為縱坐標，鏈霉素濃度為橫坐標繪制標準曲線，則可在標準曲線上查出供試品的效價。線，則可在標準曲線上查出供試品的效價。3、瓊脂擴散法、瓊脂擴散法：（即管

25、碟法（即管碟法)管碟法是目前國際上測定抗生素管碟法是目前國際上測定抗生素效價的通用方法。效價的通用方法。我國藥典收載的微生物檢定法也是管碟法。此我國藥典收載的微生物檢定法也是管碟法。此法靈敏度高，但操作較麻煩，影響試驗結果的法靈敏度高，但操作較麻煩，影響試驗結果的因素較多，需要從各個操作步驟嚴格控制試驗因素較多，需要從各個操作步驟嚴格控制試驗條件，盡可能減小試驗誤差，才能使試驗結果條件，盡可能減小試驗誤差，才能使試驗結果達到精密、準確。達到精密、準確。管碟法的原理：管碟法是利用抗生素在攤布特定試驗菌的瓊管碟法的原理：管碟法是利用抗生素在攤布特定試驗菌的瓊脂培養(yǎng)基內擴散，形成含一定濃度抗生素的球

26、型區(qū)，抑制了脂培養(yǎng)基內擴散，形成含一定濃度抗生素的球型區(qū)，抑制了試驗菌的繁殖，通過透明瓊脂培養(yǎng)基，可觀察到透明的抑菌試驗菌的繁殖，通過透明瓊脂培養(yǎng)基，可觀察到透明的抑菌圈。在一定的抗生素濃度范圍內，對數濃度（劑量）與抑菌圈。在一定的抗生素濃度范圍內，對數濃度（劑量）與抑菌圈面積或直徑成正比。方法設計是在同樣條件下將已知效價圈面積或直徑成正比。方法設計是在同樣條件下將已知效價的標準品溶液與未知效價的供試品溶液的劑量反應（抑菌圈）的標準品溶液與未知效價的供試品溶液的劑量反應（抑菌圈）進行比較；當標準品和供試品是屬于同一性質的抗生素時，進行比較；當標準品和供試品是屬于同一性質的抗生素時，標準品溶液和

27、供試品溶液，對一定試驗菌所得的劑量反應曲標準品溶液和供試品溶液，對一定試驗菌所得的劑量反應曲線，在一定劑量范圍內應互相平行。根據以上原理，可設計線，在一定劑量范圍內應互相平行。根據以上原理，可設計為一劑量法、二劑量法及三劑量法等，從而可以較為準確地為一劑量法、二劑量法及三劑量法等，從而可以較為準確地測定供試品的效價。測定供試品的效價。高分子雜質高分子雜質 分子量大于青霉素藥物本身的雜質總稱。分子量大于青霉素藥物本身的雜質總稱。外源性雜質蛋白、多肽、多糖或抗生素與蛋白、多肽、外源性雜質蛋白、多肽、多糖或抗生素與蛋白、多肽、多糖的結合物。多糖的結合物。主要來自于發(fā)酵工藝，致敏，如青霉噻唑蛋白、青霉噻主要來自于發(fā)酵工藝，致敏，如青霉噻唑蛋白、青霉噻唑多肽。唑多肽。雜質分類：基本特點對青霉素而言雜質分類：基本特點對青霉素而言,青霉噻唑多肽外青霉噻唑多肽外源性的（源性的（24003500）青霉素聚合物內源性的（聚合）青霉素聚合物內源性的（聚合度）母核參與的聚合反應度）母核參與的聚合反應N型聚合反應型聚合反應,側鏈參與的聚側鏈參與的聚合反應合反應L型聚合反應型聚合反應,特點：特點：（1）生產過程中的任何蛋白或碎片）生產過程中的任何蛋白或碎片都可帶入產品中，易與藥物形成多肽類都可帶入產品中，易與藥物形成多肽類雜質雜質（2）形成的聚合物也可發(fā)生不同程）形成的聚合物也可發(fā)生不同程度的降解度的