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1、1926年，美國生化學家sumner從刀豆中得到脲酶結晶，并證明了脲酶的本質(zhì)是蛋白質(zhì)。1946年獲得諾貝爾化學獎。酶 是由活細胞合成的，對其特異底物起高效催化作用的蛋白質(zhì)，是機體內(nèi)催化各種代謝反應最主要的催化劑。酶的特征常數(shù) km值等于酶促反應速度為最大速度一半時的底物濃度 酶促反應的特征常數(shù)只與酶的結構、底物和反應環(huán)境（如溫度、ph、離子強度）有關，與酶的濃度無關。實 驗 目 的1. 闡述酶促反應中特征常數(shù)的特點和意義； 2. 說出利用比色法進行km值測定的整個操作步驟；3. 思考km值的測定對臨床工作中的意義。 一一 、原理、原理v=vmax skm + s米米- -曼氏方程解釋：曼氏方程

2、解釋：當當sskmkm時，時，v v vmaxvmax ss /km/km， 即即v v正比于正比于ss當當sskmkm時，時，v vmaxv vmax, , 即即ss 而而v v不變不變 km值：值：當酶反應速率達到最大反應速率一半時的底物濃度，單位是moll。 km值最小的底物稱為該酶的最適底物也就是天然底物。km + svmax sv2vmax=km=s= 底物（脲液） 酶（脲酶液） 酶促反應所需的緩沖液（pbs，蒸餾水等） 酶促反應發(fā)生的環(huán)境（堿性條件，加入naoh；溫度，37） 1. 操作中每種試劑務必搖勻 2. 煮沸脲液時注意試管口不能對人，變性脲酶液要煮沸變性徹底3. 試管一定要

3、清洗干凈，防止其他殘留液體對實驗的影響4. 各組試管加樣注意一致性，防止人為加樣造成的誤差。重復測值，取平均數(shù)值 實驗操作管號1234對照脲液加入體積(ml)0.20.1340.10.080.081/15pb（ml）0.60.6660.70.7200.720脲酶液（ml）0.20.20.20.2-煮沸脲酶液（ml）-0.2 搖勻 ，37度水浴15min100g/l znso40.50.50.50.50.5蒸餾水333330.5mol/l naoh0.50.50.50.50.5濾液/ml11111蒸餾水/ml22222顯色液/ml0.750.750.750.750.75充分搖勻，靜置5min，過濾，分別在濾液中加入以下試劑 迅速搖勻，用迅速搖勻，用721型分光光度計，型分光光度計，420nm，以對照調(diào)零，測定各管以對照調(diào)零，測定各管a值值。 酶促反應有什么特點？ 測定酶促反應特征常數(shù)km值有意義？思考

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