玉米小斑病抗性鑒定課件

1、玉米小斑病抗性鑒定1學(xué)習(xí)和初步掌握玉米小斑病抗性鑒定技術(shù)。學(xué)習(xí)和初步掌握玉米小斑病抗性鑒定技術(shù)。1 1、玉米小斑病的主要癥狀特征觀察。、玉米小斑病的主要癥狀特征觀察。2 2、玉米小斑病的接種方法。、玉米小斑病的接種方法。3 3、玉米小斑病的病情與抗性級別鑒定。、玉米小斑病的病情與抗性級別鑒定。玉米小斑病抗性鑒定2玉米小斑?。ㄓ衩仔“卟。╤elminthosporium maydis）是是溫曖潮濕地區(qū)玉米產(chǎn)區(qū)廣泛發(fā)生的一種病害，也是我溫曖潮濕地區(qū)玉米產(chǎn)區(qū)廣泛發(fā)生的一種病害，也是我國玉米生產(chǎn)上的主要病害之一，流行年份往往造成嚴(yán)國玉米生產(chǎn)上的主要病害之一，流行年份往往造成嚴(yán)重?fù)p失。選育抗病自交系和雜

2、交種，是防治小斑病最重?fù)p失。選育抗病自交系和雜交種，是防治小斑病最經(jīng)濟(jì)有效的措施。玉米從幼苗到成株均可發(fā)病，通常經(jīng)濟(jì)有效的措施。玉米從幼苗到成株均可發(fā)病，通常從下部葉片開始向上蔓延，先從葉面產(chǎn)生褐色小點(diǎn)，從下部葉片開始向上蔓延，先從葉面產(chǎn)生褐色小點(diǎn)，后擴(kuò)大成后擴(kuò)大成23mm的褐色病斑，病斑受葉脈限制，常的褐色病斑，病斑受葉脈限制，常常成不規(guī)則形。發(fā)病適溫為常成不規(guī)則形。發(fā)病適溫為2530 。玉米小斑病抗性鑒定3玉米小斑病抗性鑒定4 根據(jù)小斑病菌侵染特點(diǎn)的不同，可將小斑病菌劃分為根據(jù)小斑病菌侵染特點(diǎn)的不同，可將小斑病菌劃分為o小種和小種和t小種兩個生理小種。小種兩個生理小種。t小種對小種對t型細(xì)

3、胞質(zhì)有?；图?xì)胞質(zhì)有?；拘裕视N上應(yīng)盡量避免使用有?；缘募?xì)胞質(zhì)類型。毒性，故育種上應(yīng)盡量避免使用有?；缘募?xì)胞質(zhì)類型。玉米對小斑病抗性表現(xiàn)亦有兩種，一是多基因控制，表玉米對小斑病抗性表現(xiàn)亦有兩種，一是多基因控制，表現(xiàn)為病斑數(shù)量少，在保濕條件下，病斑形成的孢子少，現(xiàn)為病斑數(shù)量少，在保濕條件下，病斑形成的孢子少，孢子形成時間較長。二是由隱性單基因孢子形成時間較長。二是由隱性單基因rhm控制，表現(xiàn)控制，表現(xiàn)為小的褪綠病斑。為小的褪綠病斑。 鑒定玉米育咱材料抗小斑病的方法有自然誘發(fā)鑒定，鑒定玉米育咱材料抗小斑病的方法有自然誘發(fā)鑒定，大田誘發(fā)鑒定和人工接種鑒定。但以人工接種鑒定較為大田誘發(fā)鑒定和人

4、工接種鑒定。但以人工接種鑒定較為可靠。可靠。 玉米小斑病抗性鑒定5玉米小斑病抗性鑒定6玉米小斑病抗性鑒定7（一）所需用品（一）所需用品1、材料：供試玉米材料、玉米抗病和感病對照材料。材料：供試玉米材料、玉米抗病和感病對照材料。玉米小斑病菌種，玉米小斑病菌種，t小種的培養(yǎng)物；上一季感染小種的培養(yǎng)物；上一季感染o小小種小斑病的玉米植株病葉。種小斑病的玉米植株病葉。2、儀器用具：高壓滅菌鍋、超凈工作臺、酒精燈、接儀器用具：高壓滅菌鍋、超凈工作臺、酒精燈、接種環(huán)、恒溫箱、燒杯、漏斗、試管、紗布、玻璃棒、種環(huán)、恒溫箱、燒杯、漏斗、試管、紗布、玻璃棒、培養(yǎng)皿、顯微鏡、小噴霧器、保濕罩等。培養(yǎng)皿、顯微鏡、小

5、噴霧器、保濕罩等。3、藥品試劑：藥品試劑：75%酒精、酒精、0.1%升汞溶液、葡萄糖、升汞溶液、葡萄糖、瓊脂、馬鈴薯等。瓊脂、馬鈴薯等。玉米小斑病抗性鑒定8用具用具玉米小斑病抗性鑒定9（二）操作方法（二）操作方法1.苗期接種鑒定苗期接種鑒定（1）菌種的培養(yǎng)）菌種的培養(yǎng)病原菌的分離病原菌的分離選取新鮮病葉作為分離材料，在滅菌室內(nèi)進(jìn)行操作。先將選取新鮮病葉作為分離材料，在滅菌室內(nèi)進(jìn)行操作。先將病斑剪成病斑剪成45mm2大小，約大小，約3040塊，然后分別將病組織小塊置塊，然后分別將病組織小塊置于于0.1%升汞溶液中消毒升汞溶液中消毒1min，立即取出，按無菌操作方法投，立即取出，按無菌操作方法投入

6、無菌水中清洗三次，每次入無菌水中清洗三次，每次23min。最后以無菌操作方法，。最后以無菌操作方法，將病斑組織按正方形四點(diǎn)排列，栽種在將病斑組織按正方形四點(diǎn)排列，栽種在pda平板培養(yǎng)基（去皮平板培養(yǎng)基（去皮馬鈴薯馬鈴薯20g，葡萄糖，葡萄糖1020g，瓊脂，瓊脂1720g，水，水100ml）上，置）上，置2530 溫箱中培養(yǎng)約溫箱中培養(yǎng)約7天。天。 玉米小斑病抗性鑒定10玉米小斑病抗性鑒定11菌種的純化菌種的純化 選取培養(yǎng)性狀典型的菌落，按無菌操作方法移植選取培養(yǎng)性狀典型的菌落，按無菌操作方法移植到斜面培養(yǎng)基上（每個典型菌落移到斜面培養(yǎng)基上（每個典型菌落移3管），然后再放管），然后再放在在25

7、 恒溫下培養(yǎng)。待產(chǎn)生孢子后，選取菌落較一致恒溫下培養(yǎng)。待產(chǎn)生孢子后，選取菌落較一致的斜面的斜面12管，挑取一點(diǎn)，觀察孢子的形狀、分隔數(shù)、管，挑取一點(diǎn)，觀察孢子的形狀、分隔數(shù)、臍點(diǎn)特點(diǎn)。然后計測孢子大小。確認(rèn)純種后，再用斜臍點(diǎn)特點(diǎn)。然后計測孢子大小。確認(rèn)純種后，再用斜面培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)，讓其產(chǎn)生大量孢子后，置冰箱中面培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)，讓其產(chǎn)生大量孢子后，置冰箱中保存待用。保存待用。 玉米小斑病抗性鑒定12菌絲形態(tài)菌絲形態(tài)玉米小斑病抗性鑒定13（2 2）孢子懸浮液的制備）孢子懸浮液的制備 用少量無菌水倒入已產(chǎn)孢子的斜面培養(yǎng)基試管中，用少量無菌水倒入已產(chǎn)孢子的斜面培養(yǎng)基試管中，猛力搖動沖洗孢子。也可輔以

8、接種環(huán)表層刮除。最后猛力搖動沖洗孢子。也可輔以接種環(huán)表層刮除。最后將所有沖洗孢子液集中在潔凈的三角瓶中。用紗布濾將所有沖洗孢子液集中在潔凈的三角瓶中。用紗布濾去菌絲及培養(yǎng)基，濾液用蒸餾水稀釋，調(diào)至在去菌絲及培養(yǎng)基，濾液用蒸餾水稀釋，調(diào)至在100倍倍顯微鏡下每個視野有顯微鏡下每個視野有5個孢子濃度的懸浮液待用。個孢子濃度的懸浮液待用。 玉米小斑病抗性鑒定14（3）接種病菌）接種病菌 接種小斑病的適宜時期是在玉米接種小斑病的適宜時期是在玉米6個葉片左右。個葉片左右。接種前在配制好的孢子液中加入接種前在配制好的孢子液中加入2%蔗糖，以促進(jìn)病蔗糖，以促進(jìn)病菌孢子萌發(fā)。接種菌液量是每株菌孢子萌發(fā)。接種菌

9、液量是每株12ml。用微型噴霧。用微型噴霧器均勻噴霧，噴后立即以塑料袋套盆保溫，置器均勻噴霧，噴后立即以塑料袋套盆保溫，置25左左右溫度下保濕右溫度下保濕24小時。小時。 玉米小斑病抗性鑒定15（4）病情鑒定和分級標(biāo)準(zhǔn)）病情鑒定和分級標(biāo)準(zhǔn) 接種后接種后710天即可進(jìn)行病情鑒定。鑒定應(yīng)在同一天內(nèi)完成。天即可進(jìn)行病情鑒定。鑒定應(yīng)在同一天內(nèi)完成。鑒定項(xiàng)目和標(biāo)準(zhǔn)如下：鑒定項(xiàng)目和標(biāo)準(zhǔn)如下：發(fā)病程度發(fā)病程度以葉片為單位進(jìn)行鑒定。根據(jù)病斑占葉片面積的百分率，記載每以葉片為單位進(jìn)行鑒定。根據(jù)病斑占葉片面積的百分率，記載每片葉的感病程度。發(fā)病程度分為片葉的感病程度。發(fā)病程度分為9級（級（表表1）。鑒定接種部位的

10、）。鑒定接種部位的葉片，每株葉片，每株4片葉，每個供試材料片葉，每個供試材料10株共株共40片。片。以整株為單位，根據(jù)整株的發(fā)病情況，分為以整株為單位，根據(jù)整株的發(fā)病情況，分為7個等級（個等級（表表2）。而）。而后，以葉片為單位，后，以葉片為單位，計算病葉率和病情指數(shù)計算病葉率和病情指數(shù)。玉米小斑病抗性鑒定16病情病情計算公式 %100調(diào)查葉片總數(shù)發(fā)病葉片數(shù)病葉率100最高一級代表數(shù)值調(diào)查總?cè)~數(shù)該級的代表數(shù)值各級病葉數(shù)病情指數(shù)玉米小斑病抗性鑒定17表表1 玉米小斑病葉片發(fā)病程度分級標(biāo)準(zhǔn)玉米小斑病葉片發(fā)病程度分級標(biāo)準(zhǔn) 等等 級級病斑占葉片面積病斑占葉片面積（%）01234567801256101

11、120213031505170700級級1級級2級級3級級4級級5級級6級級7級級8級級玉米小斑病抗性鑒定18表表2 玉米小斑病整株發(fā)病程度分級標(biāo)準(zhǔn)玉米小斑病整株發(fā)病程度分級標(biāo)準(zhǔn) 級別級別 全株葉片病斑占總?cè)~面積（全株葉片病斑占總?cè)~面積（%） 0全株葉片無病全株葉片無病0.5植株下部葉片有零星病斑（占葉片面積植株下部葉片有零星病斑（占葉片面積10%以下）以下）1植株下部葉片有少量病斑（占葉片面積植株下部葉片有少量病斑（占葉片面積11%25%）2植株下部葉片有中量病斑（占葉片面積植株下部葉片有中量病斑（占葉片面積26%50%）3植株下部葉片有多量病斑（占葉片面積植株下部葉片有多量病斑（占葉片面積

12、51%以上），出現(xiàn)大片枯死以上），出現(xiàn)大片枯死現(xiàn)象，中上部葉片有中量病斑（占葉面積現(xiàn)象，中上部葉片有中量病斑（占葉面積26%50%），上部葉片），上部葉片有少量病斑（占葉面積有少量病斑（占葉面積1025%）4植株下部葉片基本枯死，中部葉片有多量病斑（占葉面積植株下部葉片基本枯死，中部葉片有多量病斑（占葉面積50%以以上），出現(xiàn)大片枯死現(xiàn)象，上部葉片有中量病斑（占葉面積上），出現(xiàn)大片枯死現(xiàn)象，上部葉片有中量病斑（占葉面積2650%）。）。5全株基本枯死。全株基本枯死。0.5級級1級級2級級3級級4級級5級級0級級玉米小斑病抗性鑒定19病情鑒定和分級標(biāo)準(zhǔn)病情鑒定和分級標(biāo)準(zhǔn)（續(xù)）（續(xù)）病斑長度病斑長

13、度隨機(jī)測量隨機(jī)測量40個獨(dú)立的病斑，每株個獨(dú)立的病斑，每株4個，以個，以mm為單位。為單位?？共⌒缘姆磻?yīng)型抗病性的反應(yīng)型病斑反應(yīng)型分為三級，分級標(biāo)準(zhǔn)見病斑反應(yīng)型分為三級，分級標(biāo)準(zhǔn)見表表3。玉米小斑病抗性鑒定20表表3 3 玉米小斑病抗性反應(yīng)型分級標(biāo)準(zhǔn)玉米小斑病抗性反應(yīng)型分級標(biāo)準(zhǔn) 病斑型病斑型病斑癥狀病斑癥狀壞死型壞死型 病斑中央的壞死部分為黃褐色，周圍有深色的病斑中央的壞死部分為黃褐色，周圍有深色的邊緣，病斑周圍和兩端沒有暗綠色的浸潤區(qū)。邊緣，病斑周圍和兩端沒有暗綠色的浸潤區(qū)。萎蔫型萎蔫型 病斑中央的壞死部分為灰褐色至近似灰白色，病斑中央的壞死部分為灰褐色至近似灰白色，沒有深色邊緣，在壞死斑周

14、圍或兩端有綠色的浸沒有深色邊緣，在壞死斑周圍或兩端有綠色的浸潤區(qū)，在高溫、潮濕、光照弱的條件下浸潤區(qū)擴(kuò)潤區(qū)，在高溫、潮濕、光照弱的條件下浸潤區(qū)擴(kuò)展快，并且葉片迅速呈暗綠色，萎蔫死亡。展快，并且葉片迅速呈暗綠色，萎蔫死亡。褪綠病斑型褪綠病斑型 病斑小，病斑中央為白色壞死，沒有綠色邊緣，病斑小，病斑中央為白色壞死，沒有綠色邊緣，病斑周圍有褪綠暈圈。病斑周圍有褪綠暈圈。 壞死型壞死型萎蔫型萎蔫型褪綠病斑型褪綠病斑型玉米小斑病抗性鑒定212.2.成株期接種鑒定成株期接種鑒定 接種接種：抽雄前將粉碎的頭一年病葉撒入心葉喇叭口，：抽雄前將粉碎的頭一年病葉撒入心葉喇叭口，接種應(yīng)在下午或傍晚濕度較大時進(jìn)行。天

15、氣干燥時，接種應(yīng)在下午或傍晚濕度較大時進(jìn)行。天氣干燥時，接種后可在每株心葉噴水。接種后可在每株心葉噴水。 病情鑒定和分級標(biāo)準(zhǔn)病情鑒定和分級標(biāo)準(zhǔn)：抽絲后：抽絲后15天左右進(jìn)行病情天左右進(jìn)行病情鑒定，鑒定應(yīng)在同一天內(nèi)完成。發(fā)病程度以整株為單鑒定，鑒定應(yīng)在同一天內(nèi)完成。發(fā)病程度以整株為單位，分位，分7個等級。分級標(biāo)準(zhǔn)見個等級。分級標(biāo)準(zhǔn)見表表2。一般用于苗期和成。一般用于苗期和成株期抗病性鑒定。整株調(diào)查中，植株上、中、下葉片株期抗病性鑒定。整株調(diào)查中，植株上、中、下葉片的劃分，以第一果穗上下兩片葉為中部葉，其下為下的劃分，以第一果穗上下兩片葉為中部葉，其下為下部葉，其上為上部葉。部葉，其上為上部葉。玉

16、米小斑病抗性鑒定22表表2 玉米小斑病整株發(fā)病程度分級標(biāo)準(zhǔn)玉米小斑病整株發(fā)病程度分級標(biāo)準(zhǔn) 級別級別 全株葉片病斑占總?cè)~面積（全株葉片病斑占總?cè)~面積（%） 0全株葉片無病全株葉片無病0.5植株下部葉片有零星病斑（占葉片面積植株下部葉片有零星病斑（占葉片面積10%以下）以下）1植株下部葉片有少量病斑（占葉片面積植株下部葉片有少量病斑（占葉片面積11%25%）2植株下部葉片有中量病斑（占葉片面積植株下部葉片有中量病斑（占葉片面積26%50%）3植株下部葉片有多量病斑（占葉片面積植株下部葉片有多量病斑（占葉片面積51%以上），出現(xiàn)大片枯死以上），出現(xiàn)大片枯死現(xiàn)象，中上部葉片有中量病斑（占葉面積現(xiàn)象，中

17、上部葉片有中量病斑（占葉面積26%50%），上部葉片），上部葉片有少量病斑（占葉面積有少量病斑（占葉面積1025%）4植株下部葉片基本枯死，中部葉片有多量病斑（占葉面積植株下部葉片基本枯死，中部葉片有多量病斑（占葉面積50%以以上），出現(xiàn)大片枯死現(xiàn)象，上部葉片有中量病斑（占葉面積上），出現(xiàn)大片枯死現(xiàn)象，上部葉片有中量病斑（占葉面積2650%）。）。5全株基本枯死。全株基本枯死。0.5級級1級級2級級3級級4級級5級級0級級玉米小斑病抗性鑒定23病株率和病情指數(shù)計算病株率和病情指數(shù)計算 病株率和病情指數(shù)計算方法是以整株為單位進(jìn)行。病株率和病情指數(shù)計算方法是以整株為單位進(jìn)行。 %100調(diào)查總株數(shù)發(fā)病株數(shù)病株率100最高一級代表數(shù)值調(diào)查總株數(shù)該級的代表數(shù)值各級病株數(shù)病情指數(shù)玉米小斑病抗性鑒定241、玉米小斑病發(fā)病的適宜條件是什么？、玉米小斑病發(fā)病的適宜條件是什么？2、