新生兒溶血三項檢測的臨床應(yīng)用PPT課件

1、有報道有報道:占新生兒溶血比例ABO溶血病85.3%Rh溶血病14.6%MN溶血病0.1%新生兒溶血病新生兒溶血病(Hemolytic disease of newborn HDN）,系系指母、嬰血型不合引起的同族免疫性溶血指母、嬰血型不合引起的同族免疫性溶血;已發(fā)現(xiàn)的人類已發(fā)現(xiàn)的人類29個血型系統(tǒng)中，以個血型系統(tǒng)中，以ABO血型不合最常見，血型不合最常見，Rh血型不合血型不合較少見較少見;第1頁/共49頁胎兒從父親遺傳而來的紅細(xì)胞抗原恰為母親所缺少胎兒從父親遺傳而來的紅細(xì)胞抗原恰為母親所缺少, ,胎兒紅細(xì)胎兒紅細(xì)胞通過胎盤進(jìn)入母體血循環(huán)中刺激母體產(chǎn)生相應(yīng)的血型抗胞通過胎盤進(jìn)入母體血循環(huán)中刺激

2、母體產(chǎn)生相應(yīng)的血型抗體（體（IgGIgG）。）。 此抗體又可通過胎盤進(jìn)入胎兒血循環(huán)中導(dǎo)致胎兒、新此抗體又可通過胎盤進(jìn)入胎兒血循環(huán)中導(dǎo)致胎兒、新生兒體內(nèi)特異性抗原抗體反應(yīng)，使紅細(xì)胞致敏單核生兒體內(nèi)特異性抗原抗體反應(yīng)，使紅細(xì)胞致敏單核- -吞噬吞噬細(xì)胞系統(tǒng)內(nèi)破壞而溶血。細(xì)胞系統(tǒng)內(nèi)破壞而溶血。第2頁/共49頁ABO溶血病的病因和發(fā)病機(jī)制溶血病的病因和發(fā)病機(jī)制ABO血型的遺傳血型的遺傳有有A基因者稱基因者稱A型，有型，有B基因者稱基因者稱B型，同時有型，同時有A、B二二個基因者稱個基因者稱AB型，有型，有H基因而無基因而無A、B基因?yàn)榛驗(yàn)镺型型假如母假如母“O”型，父型，父“A”型（純合子或雜合子）

3、型（純合子或雜合子）母基因母基因型型OOAOA父基因父基因型型AA子基因型子基因型子血型子血型AOOO母基因母基因型型OO父基因父基因型型AOAO或或或或第3頁/共49頁ABO血型抗體血型抗體 正常情況下，紅細(xì)胞上缺乏正常情況下，紅細(xì)胞上缺乏A或或B抗原時，血漿中抗原時，血漿中存在相應(yīng)的抗體即抗存在相應(yīng)的抗體即抗A抗體或抗抗體或抗B抗體為天然抗體，抗體為天然抗體，以以IgM為主，實(shí)質(zhì)是由于機(jī)體與廣泛存在的類為主，實(shí)質(zhì)是由于機(jī)體與廣泛存在的類ABO物質(zhì)接觸產(chǎn)生。物質(zhì)接觸產(chǎn)生。 如果由于輸血、懷孕或類如果由于輸血、懷孕或類ABO物質(zhì)的刺激使抗物質(zhì)的刺激使抗體濃度增加，這種免疫抗體濃度增加，這種免疫

4、抗A或抗或抗B抗體多半為抗體多半為IgG，特別是特別是O型母親。型母親。第4頁/共49頁血型基因型血漿中可以存在的抗體OOO抗A抗體和抗B抗體AAA AO抗B抗體BBB BO抗A抗體ABAB無ABO血型與抗體血型與抗體第5頁/共49頁ABO溶血病可發(fā)生在懷孕第一胎溶血病可發(fā)生在懷孕第一胎 自然界存在自然界存在A或或B血型物質(zhì)如某些植物、寄生蟲、傷血型物質(zhì)如某些植物、寄生蟲、傷寒疫苗、破傷風(fēng)及白喉類毒素等。寒疫苗、破傷風(fēng)及白喉類毒素等。 O型母親在第一次妊娠前，已接受過型母親在第一次妊娠前，已接受過A或或B血型物質(zhì)血型物質(zhì)的刺激，血中抗的刺激，血中抗A或抗或抗B (IgG)效價較高。效價較高。

5、懷孕第一胎時抗體即可進(jìn)入胎兒血循環(huán)引起溶血。懷孕第一胎時抗體即可進(jìn)入胎兒血循環(huán)引起溶血。ABO血型不合中約血型不合中約20%發(fā)病發(fā)病 血漿及組織中存在的血漿及組織中存在的A和和B血型物質(zhì)，部分中和血型物質(zhì)，部分中和來自母體的抗體。來自母體的抗體。 胎兒紅細(xì)胞胎兒紅細(xì)胞A或或B抗原位點(diǎn)少，抗抗原位點(diǎn)少，抗原性弱，反應(yīng)能力差。原性弱，反應(yīng)能力差。第6頁/共49頁Rh溶血病的病因和發(fā)病機(jī)制溶血病的病因和發(fā)病機(jī)制Rh基因基因編碼編碼Rh抗原的兩個基因是抗原的兩個基因是RHD和和RHCE;Rh基因系統(tǒng)的等位基因中最重要的是基因系統(tǒng)的等位基因中最重要的是D、E、C、c、e五種，不存在五種，不存在d基因基因

6、;RHD基因編碼基因編碼D抗原，抗原，RHCE基因的編碼產(chǎn)物為基因的編碼產(chǎn)物為C/c和和E/e，C和和E一起遺傳，排列為一起遺傳，排列為DCE；無；無d抗原抗原;d表示表示D陰性表現(xiàn)型陰性表現(xiàn)型;RHD和和RHCE基因編碼的單倍型中最常見的有基因編碼的單倍型中最常見的有8種形種形式：式：Dce、dce，DCe、dCe、DcE、dcE、DCE和和dCE。第7頁/共49頁Rh溶血病溶血病 紅細(xì)胞缺乏紅細(xì)胞缺乏D抗原稱為抗原稱為Rh陰性，具有陰性，具有D抗原稱為抗原稱為Rh陽陽性，中國人絕大多數(shù)為性，中國人絕大多數(shù)為Rh陽性。陽性。母親母親Rh陰性陰性(無無D抗原抗原)，若胎兒，若胎兒Rh陽性可發(fā)生

7、陽性可發(fā)生Rh溶血溶血病。病。母親母親Rh陽性陽性(有有D抗原抗原)，但缺乏，但缺乏Rh系統(tǒng)其他抗原如系統(tǒng)其他抗原如E等，若胎兒有該抗原也可發(fā)生等，若胎兒有該抗原也可發(fā)生Rh溶血病。溶血病。RhD溶血病最常見溶血病最常見其抗原性強(qiáng)弱依次為其抗原性強(qiáng)弱依次為DECce。RhD溶血病最常見，其次為溶血病最常見，其次為RhE，Rhe溶血病罕見。溶血病罕見。第8頁/共49頁Rh溶血病一般不發(fā)生在第一胎溶血病一般不發(fā)生在第一胎由于自然界無由于自然界無Rh血型物質(zhì)血型物質(zhì) 首次妊娠末期或胎盤剝離經(jīng)過2-6月以后再次妊娠孕期幾天內(nèi)Rh陽性胎兒血 0.51ml胎兒已 娩出胎兒Rh血型同上胎少量胎兒血0.050

8、.1ml胎兒紅細(xì)胞溶血Rh陰性母血產(chǎn)生IgM抗體產(chǎn)生少量IgG抗體母血循環(huán)產(chǎn)生大量IgG抗體初發(fā)免疫反應(yīng)初發(fā)免疫反應(yīng)次發(fā)免疫反應(yīng)次發(fā)免疫反應(yīng)第一胎不溶血第一胎不溶血第二胎溶血第二胎溶血胎盤胎盤第9頁/共49頁Rh溶血病發(fā)生在第一胎的情況溶血病發(fā)生在第一胎的情況Rh陰性母親既往輸過陰性母親既往輸過Rh陽性血。陽性血。Rh陰性母親既往有流產(chǎn)或人工流產(chǎn)史。陰性母親既往有流產(chǎn)或人工流產(chǎn)史。極少數(shù)可能是由于極少數(shù)可能是由于Rh陰性孕婦的母親為陰性孕婦的母親為Rh陽性，其陽性，其母懷孕時已使孕婦致敏，故第一胎發(fā)病（外祖母學(xué)母懷孕時已使孕婦致敏，故第一胎發(fā)病（外祖母學(xué)說）。說）。RhD血型不合者約血型不合者

9、約5%發(fā)病發(fā)病母親對胎兒紅細(xì)胞母親對胎兒紅細(xì)胞Rh抗原的敏感性不同?？乖拿舾行圆煌?。第10頁/共49頁臨床表現(xiàn)臨床表現(xiàn) 臨床特點(diǎn)ABO溶血病 Rh溶血病 發(fā)生頻率常見不常見發(fā)生的母子血型主要發(fā)生在母O型胎兒A型或B型 母缺少任一Rh抗原 胎兒卻具有該Rh抗原發(fā)生胎次第一胎可發(fā)?。s半數(shù)） 一般發(fā)生在第二胎；第一胎也可發(fā)病 下一胎情況不一定大多數(shù)更嚴(yán)重臨床表現(xiàn)較輕 較重，嚴(yán)重者甚至死胎 黃疸 生后第23天出現(xiàn) 24小時內(nèi)出現(xiàn)并迅速加重 貧血 輕可有嚴(yán)重貧血或伴心力衰竭 肝脾大 很少發(fā)生 多有不同程度的肝脾增大 晚期貧血很少發(fā)生可發(fā)生，持續(xù)至生后36周 第11頁/共49頁實(shí)驗(yàn)室檢查實(shí)驗(yàn)室檢查 血

10、型檢查血型檢查母子母子ABO和和Rh血型血型溶血檢查溶血檢查 溶血時紅細(xì)胞和血紅蛋白減少，早期新生兒毛細(xì)血管血溶血時紅細(xì)胞和血紅蛋白減少，早期新生兒毛細(xì)血管血血紅蛋白血紅蛋白6%）;血涂片有核紅細(xì)胞增多（血涂片有核紅細(xì)胞增多（10/100個白細(xì)胞）個白細(xì)胞）;血清總膽紅素和未結(jié)合膽紅素明顯增加血清總膽紅素和未結(jié)合膽紅素明顯增加;致敏紅細(xì)胞和血型抗體測定致敏紅細(xì)胞和血型抗體測定第12頁/共49頁抗人球蛋白試驗(yàn)抗人球蛋白試驗(yàn)： 又稱Coombs試驗(yàn)， 利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連接與紅細(xì)胞表面抗原結(jié)合的特異抗體，使紅細(xì)胞凝集。經(jīng)常用作試驗(yàn)的有兩類方法。 直接試驗(yàn)：是檢查被檢紅細(xì)胞上有無已結(jié)合的

11、不 完全抗體（包括IgG類的抗A或抗B）。 間接試驗(yàn)：是檢查血清中游離的不完全 抗體 （包括IgG類的抗A或抗B）。第13頁/共49頁直接直接Coombs試驗(yàn)試驗(yàn)抗人免疫球蛋白自身抗體第14頁/共49頁注意事項注意事項 標(biāo)本采取后應(yīng)立即進(jìn)行試驗(yàn)，延遲試驗(yàn)或中途停止可使抗體從細(xì)胞中丟失。 抗球蛋白試劑應(yīng)按照說明最適稀釋度使用，否則可產(chǎn)生前帶或后帶現(xiàn)象而誤認(rèn)為陰性結(jié)果。 受檢紅細(xì)胞一定要用鹽水洗滌3次，除去紅細(xì)胞懸液混雜的血清蛋白，以防止假陰性結(jié)果。 最好對陰性結(jié)果進(jìn)行核實(shí)，即在該試管中再加1滴IgG致敏紅細(xì)胞如結(jié)果為陽性，則表示試管內(nèi)的抗球蛋白試劑未被消耗，陰性結(jié)果可靠。 如需了解體內(nèi)致敏紅細(xì)胞

12、的Ig類型，則可分別以抗IgM或抗C3單價抗球蛋白試劑進(jìn)行試驗(yàn)。第15頁/共49頁注意事項注意事項 紅細(xì)胞上吸附抗體太少,直接抗球蛋白試驗(yàn)可成假陰性反應(yīng)。 全凝集或冷凝集血液標(biāo)本中有很多網(wǎng)織紅細(xì)胞且抗球蛋白試劑中含有抗轉(zhuǎn)鐵蛋白時，均可使紅細(xì)胞發(fā)生凝集。 試劑：多特異性抗球蛋白試劑（IgG、C3d）；陽性對照細(xì)胞IgG抗D致敏的5%Rh(D)陽性紅細(xì)胞生理鹽水懸液。取3人份O型紅細(xì)胞等量混勻，經(jīng)生理鹽水洗滌后取壓積紅細(xì)胞，加等量抗D血清，至37水浴致敏1小時，取出后用生理鹽水洗滌3次壓積紅細(xì)胞洗滌配成5%紅細(xì)胞生理鹽水懸液；陰性對照細(xì)胞（正常人5%紅細(xì)胞生理鹽水懸液。取3人份O型紅細(xì)胞等量混勻，

13、經(jīng)生理鹽水洗滌后取壓積紅細(xì)胞，配成5%紅細(xì)胞生理鹽水懸液）。第16頁/共49頁間接間接Coombs試驗(yàn)試驗(yàn)抗人免疫球蛋白同種異型抗體第17頁/共49頁注意事項注意事項 如血清與相應(yīng)紅細(xì)胞在37 水浴中致敏1小時，75%的抗體吸附于紅細(xì)胞上，如致敏2小時，則抗體吸附達(dá)95%；如以低離子鹽水溶液代替生理鹽水配制5%紅細(xì)胞懸液，則致敏時間可減少至15-30分鐘，但抗Fy抗體需較長的孵育時間。 紅細(xì)胞洗滌應(yīng)迅速、徹底。要將生理鹽水用力沖入管底，使管底紅細(xì)胞松散分離。要防止手上的蛋白質(zhì)污染。1滴1:4000稀釋的血清可中和抗球蛋白血清1滴，導(dǎo)致假陽性結(jié)果。 離心速度和時間非常重要，應(yīng)取能使陽性對照管出現(xiàn)

14、陽性反應(yīng)的最小離心力和最短離心時間。第18頁/共49頁注意事項注意事項 當(dāng)紅細(xì)胞上的抗體分子數(shù)量在500個以上時在有利于抗球蛋白與不規(guī)則抗體的結(jié)合，當(dāng)紅細(xì)胞上抗體數(shù)量較少，可通過反復(fù)離心、搖擺，在離心的方法，增加抗原抗體的接觸，提高陽性率。 如果檢測的抗體為補(bǔ)體依賴抗體，則必須加入新鮮AB型血清. 試劑：多特異性抗球蛋白試劑（IgG、C3d）；已知抗體血清（用于檢測特殊紅細(xì)胞抗原）：5%已知抗原的紅細(xì)胞鹽水懸液（用于檢測血清中不完全抗體）；5%D陽性紅細(xì)胞鹽水懸液（陽性對照用）；不完全抗D血清：AB型血清。第19頁/共49頁抗人球蛋白試驗(yàn)的應(yīng)用 直接法： 常用于新生兒溶血癥、自身免疫性溶血癥、

15、特發(fā)性自身免疫性貧血和醫(yī)源性溶血性疾病等的檢測。 間接法： 多用于檢測母體Rh（D）抗體，以便及早發(fā)現(xiàn)和避免新生兒溶血癥的發(fā)生。亦可對紅細(xì)胞不相容的輸血所產(chǎn)生的血型抗體進(jìn)行檢測。 第20頁/共49頁游離試驗(yàn)游離試驗(yàn) 檢查新生兒血清中游離抗體檢查新生兒血清中游離抗體： 將新生兒血清與標(biāo)準(zhǔn)A(B)細(xì)胞（與新生兒同種 紅細(xì)胞） 做間接抗人球蛋白試驗(yàn)，陽性結(jié)果， 則表示有抗體存在。 新生兒血清中游離抗體檢查結(jié)果新生兒血清中游離抗體檢查結(jié)果 意義意義 指示紅細(xì)胞 意義 AC BC OC + - - 游離的抗-A - + - 游離的抗-B + + - 游離的抗-A抗-B或-AB +- +- + 游離的AB

16、O系統(tǒng)以外的抗體 - - - 無游離抗體第21頁/共49頁第22頁/共49頁 第23頁/共49頁第24頁/共49頁第25頁/共49頁第26頁/共49頁第27頁/共49頁 熱放散試驗(yàn)第28頁/共49頁熱放散試驗(yàn)方法第29頁/共49頁第30頁/共49頁熱放散試驗(yàn)注意事項第31頁/共49頁乙醚放散試驗(yàn)第32頁/共49頁酸放散第33頁/共49頁放散試驗(yàn)的應(yīng)用第34頁/共49頁 新生兒紅細(xì)胞抗體放散試驗(yàn)結(jié)果意義新生兒紅細(xì)胞抗體放散試驗(yàn)結(jié)果意義 指示紅細(xì)胞指示紅細(xì)胞 意義意義 AC BC OC + - - 放散出IgG抗-A - + - 放散出IgG抗-B + + - 放散出IgG抗-AB或同時放散 Ig

17、G抗-A或IgG抗-B +- +- + 放散出ABO血型以外的抗體 - - - 沒有放散出抗體第35頁/共49頁 新生兒血型血清學(xué)檢查結(jié)果分析新生兒血型血清學(xué)檢查結(jié)果分析 游離 釋放 結(jié)果 直抗 試驗(yàn) 試驗(yàn) 抗篩 判定 意義 +/- + + -/+ 確診 ABO HDN,抗篩（+）存在ABO以外抗體 +/- - + -/+ 確診 ABO HDN,抗篩（+）存在ABO以外抗體 +/- - + -/+ 確診 ABO HDN,抗篩（+）存在ABO以外抗體 + - - - 可疑 可疑ABO HDN - + - - 可疑 可疑ABO HDN - - - - 否定 血清學(xué)實(shí)驗(yàn)未能證實(shí)第36頁/共49頁新生

18、兒溶血三項檢測新生兒溶血三項檢測試驗(yàn)名稱目的方法結(jié)果判定意義改良直接抗人球蛋白試驗(yàn)(改良Coombs試驗(yàn))測定患兒紅細(xì)胞上結(jié)合的血型抗體“最適稀釋度”的抗人球蛋白血清與充分洗滌后的受檢紅細(xì)胞鹽水懸液混合紅細(xì)胞凝聚為陽性紅細(xì)胞已致敏，為確診實(shí)驗(yàn)Rh溶血病陽性率高而ABO溶血病低抗體釋放試驗(yàn)測定患兒紅細(xì)胞上結(jié)合的血型抗體加熱使患兒致敏紅細(xì)胞結(jié)合的母體血型抗體釋放于釋放液中，該釋放液與同型成人紅細(xì)胞混合，再加入抗人球蛋白血清紅細(xì)胞凝聚為陽性檢測致敏紅細(xì)胞的敏感試驗(yàn)，為確診實(shí)驗(yàn)Rh和ABO溶血病一般均為陽性游離抗體試驗(yàn)測定患兒血清中來自母體的血型抗體在患兒血清中加入與其相同血型的成人紅細(xì)胞，再加入抗人

19、球蛋白血清紅細(xì)胞凝聚為陽性估計是否繼續(xù)溶血和換血效果，不是確診試驗(yàn)第37頁/共49頁治療治療產(chǎn)前治療產(chǎn)前治療血漿置換血漿置換宮內(nèi)輸血宮內(nèi)輸血酶誘導(dǎo)劑酶誘導(dǎo)劑提前分娩提前分娩新生兒治療新生兒治療光療光療藥物治療藥物治療換血療法換血療法其他治療其他治療第38頁/共49頁產(chǎn)前治療產(chǎn)前治療血漿置換血漿置換 目的：換出抗體，減少胎兒溶血目的：換出抗體，減少胎兒溶血用于：血用于：血Rh抗體效價明顯增高，又不宜提前分娩的孕婦抗體效價明顯增高，又不宜提前分娩的孕婦宮內(nèi)輸血宮內(nèi)輸血直接將與孕婦血清不凝集的濃縮紅細(xì)胞在直接將與孕婦血清不凝集的濃縮紅細(xì)胞在B超下注入臍血超下注入臍血管或胎兒腹腔內(nèi)管或胎兒腹腔內(nèi)目的：

20、糾正貧血目的：糾正貧血用于：胎兒水腫或胎兒用于：胎兒水腫或胎兒Hb80g/L，肺尚未成熟者，肺尚未成熟者第39頁/共49頁產(chǎn)前治療產(chǎn)前治療酶誘導(dǎo)劑酶誘導(dǎo)劑孕婦于預(yù)產(chǎn)期前孕婦于預(yù)產(chǎn)期前12周口服苯巴比妥周口服苯巴比妥目的：誘導(dǎo)胎兒目的：誘導(dǎo)胎兒UDPGT產(chǎn)生增加，減輕新生兒黃疸產(chǎn)生增加，減輕新生兒黃疸提前分娩提前分娩 既往有輸血、死胎、流產(chǎn)和分娩史的既往有輸血、死胎、流產(chǎn)和分娩史的Rh陰性孕婦陰性孕婦本次妊娠本次妊娠Rh抗體效價逐漸升至抗體效價逐漸升至1:32或或1:64以上以上用分光光度計測定羊水膽紅素增高用分光光度計測定羊水膽紅素增高羊水羊水L/S2，提示胎肺已成熟，提示胎肺已成熟第40頁/

21、共49頁光療光療 降低血清未結(jié)合膽紅素簡單而有效的方法。通過光線照射，能使膽紅素的性質(zhì)改變后經(jīng)膽汁排泄到腸腔，或從尿內(nèi)排出。 副作用 治標(biāo)不治本第41頁/共49頁藥物治療藥物治療 白蛋白白蛋白糾正代謝性酸中毒糾正代謝性酸中毒肝酶誘導(dǎo)劑肝酶誘導(dǎo)劑靜脈用免疫球蛋白靜脈用免疫球蛋白 見新生兒黃疸見新生兒黃疸第42頁/共49頁換血療法換血療法 作用作用換出部分血中游離抗體和致敏紅細(xì)胞，減輕溶血。換出部分血中游離抗體和致敏紅細(xì)胞，減輕溶血。換出血中大量膽紅素，防止發(fā)生膽紅素腦病。換出血中大量膽紅素，防止發(fā)生膽紅素腦病。糾正貧血，改善攜氧，防止心力衰竭。糾正貧血，改善攜氧，防止心力衰竭。 第43頁/共49頁指征指征產(chǎn)前已明確診斷，出生時臍血總膽紅素68mol/L (4mg/dl)，血紅蛋白低于120g/L，伴水腫、肝脾大和心力衰竭者。生后12小時內(nèi)膽紅素每小時上升12mol/