DB13T1107乳及乳制品中4種內(nèi)酰胺類(lèi)藥物殘留量的測(cè)定方法液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法4353_第1頁(yè)
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1、db13t 1107-2009 乳及乳制品中4種內(nèi)酰胺類(lèi)藥物殘留量的測(cè)定方法 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法4353ics 67. 100x 16河 北 省 地d b 1 3方 標(biāo) 準(zhǔn)db13/t 1107-2009乳及乳制品中4種a一內(nèi)酞胺類(lèi)藥物殘留量 的測(cè)定方法液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法 determination of four kinds of阝一lactams residues in milk and milk products lc-ms/ms method2009-05-27發(fā)布 2009-06-11實(shí)施河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布食品伙伴網(wǎng)/ics 67.100 x 16 ?可 北 省 地db13

2、方 標(biāo) 準(zhǔn)db 13/t 1107-2009 乳及乳制品中4種 ?-內(nèi)酌肢類(lèi)藥物殘留量的測(cè)定方法 液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法determination of four kinds of ?-lactams residues in milk and milk products lc-ms/ms method 2009-0號(hào)27 發(fā)布 2009-06-11 實(shí)施河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布db13/ t 1107- 2009月 i j 呂 本標(biāo)準(zhǔn)中的附錄a、附錄b為資料性附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)由河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出并歸口。 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:河北省食品安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、河北省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院、河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)

3、醫(yī)學(xué)院、河北師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院、河北省化學(xué)工業(yè)研究院。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:張巖、李揮、張敬軒、呂品、劉辰魁、王麗霞、李叢芬、范斌、康素芬、蘇紅維、劉敬澤、楊小龍。食品伙伴網(wǎng)/db 13ft 1107-2009 目ij ?=i 本標(biāo)準(zhǔn)中的附錄a、附錄b為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:河北省食品安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、河北省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院、河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院、河北師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院、河北省化學(xué)工業(yè)研究院。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:張巖、李揮、張敬軒、品品、文ij辰魁、王麗霞、李叢芬、范斌、康素芬、蘇紅維、劉敬澤、楊小龍。db 13/t 1107-2009乳及乳

4、制品中4種p一內(nèi)酰胺類(lèi)藥物殘留量的測(cè)定方法 液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了乳及乳制品中青霉素g.青霉素v、氨芐西林、阿莫西林4種0一內(nèi)酞胺類(lèi)藥物殘留量的液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于生鮮乳、巴士殺菌(滅菌)乳和乳粉中青霉素g、青霉素v.氨芐西林、阿莫西林殘留量的測(cè)定。 本標(biāo)準(zhǔn)的方法檢出限:青霉素g、青霉素v為1. 0 ?g/kg;氨芐西林、阿莫西林為2. 0 ?g/kg.2規(guī)范性引用文件 一9><>f列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn),然而,鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)

5、成協(xié)議的各方研究是否使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 gb/t 6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法原理 試樣中的4種p一內(nèi)酰胺類(lèi)藥物殘留,用oasis hlb或相當(dāng)?shù)墓滔噍腿≈鶅艋?,液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定,外標(biāo)法定量。4試劑和材料 除另有說(shuō)明外,所用試劑均為優(yōu)級(jí)純,水為gb/t 6682規(guī)定的一級(jí)水。4.,甲醇:色譜純。4. 2乙睛:色譜純。4. 3乙酸:優(yōu)級(jí)純。4.4乙睛十水(1+3):量取25 ml乙睛與75 ml水混合。4. 5 oasis hlb固相萃取柱或相當(dāng)者:500 mg, 6 ml。使用前分別用5 ml甲醇和10 ml水預(yù)處理,保持柱

6、體濕潤(rùn)。4. 6青霉素g、青霉素v,氨芐西林、阿莫西林:純度)99%04. 7青霉素g、青霉素v,氨芐西林、阿莫西林標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液:準(zhǔn)確稱(chēng)取適量的每種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),分別用乙腈配制成濃度為1. 0 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。儲(chǔ)備液貯存在一18冰柜中。4. 8青霉素g.青霉素v,氨芐西林、阿莫西林標(biāo)準(zhǔn)e作溶液:根據(jù)需要吸取適量青霉素g.青霉素v.氨節(jié)西林、阿莫西林標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液,用空白樣品稀釋成適當(dāng)濃度的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。儀器液相色譜一串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀:配有電噴霧離子源(esi)0分析天平:感量0. 1 mg和0.01 g0漩渦混勻器。固相萃取真空裝置。貯液器:50 ml 0微量進(jìn)樣器:25?l, 1

7、00?l0刻度樣品管:5 ml,精度為0. 1 mlo?9?qu,?010食品伙伴網(wǎng)/db13/t 1107? 2009 乳及乳制品中4種自-內(nèi)酷服類(lèi)藥物殘留量的測(cè)定方法液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了乳及乳制品中青霉素 g、青霉素 v、氨韋西林、阿莫西林 4 種札內(nèi)酷肢類(lèi)藥物殘留量的液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于生鮮乳、巴士殺菌(滅菌)乳和乳粉中青霉素 g、青霉素 v、氨韋兩林、阿莫西林殘留量的測(cè)定。本標(biāo)準(zhǔn)的方法檢出限:青霉素 g、青霉素 v 為1. 0 g/kg; 氨書(shū)西林、阿莫西林為 2.0 趴鳴。2 規(guī)范性引用文件<>f列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為

8、本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn),然而,鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。gb/t6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3 原理試樣中的 4 種 內(nèi)酷肢類(lèi)藥物殘留,用 oasis hlb 或相當(dāng)?shù)墓滔噍腿≈鶅艋?,液相色i普·串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定,外標(biāo)法定量。4 試劑和材料除另有說(shuō)明外,所用試劑均為優(yōu)級(jí)純,水為 gb/t 6682 規(guī)定的-級(jí)水。4. 1 甲醇t 色譜純。4. 2 乙睛:色譜純。4. 3 乙酸:優(yōu)級(jí)純。4.4 乙睛+水(1+3): 量取 2

9、5 ml 乙睛與 75 ml 水混合。4. 5 oasis hlb 固相萃取柱或相當(dāng)者 500 mg , 6 ml。使用前分別用 5 ml 甲醇和 10 ml 水預(yù)處理,保持柱體濕潤(rùn)。4. 6 青霉素 g、青霉素 v、氨書(shū)西林、阿莫西林:純度;三99%。4. 7 青霉素 g、青霉素 v、氨節(jié)回林、阿莫西林標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備榕液:準(zhǔn)確稱(chēng)取適量的每種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),分別用乙脂配制成濃度為1. 0 mglml 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。儲(chǔ)備液貯存在一18;c冰柜中。4. 8 青霉素 g、青霉素 v、氨節(jié)回林、阿莫兩林標(biāo)準(zhǔn)作溶液:根據(jù)需要吸取適量青霉素 g、青霉素v、氨書(shū)同林、阿莫兩林標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備榕液,用空白樣品稀釋成適當(dāng)濃度的基

10、質(zhì)淚合標(biāo)準(zhǔn) r作梅液。5 儀器5. 1 液相色譜.串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀:配有電噴霧離子源 (esi) 。5.2 分析天平:感量 0.1 mg 和 0.01 g 。5. 3 璇渦溫勻器。5.4 困相萃取真空裝置。5. 5 貯液器 50ml 。5. 6 微量進(jìn)樣器 25l, 100 l 。5. 7 刻度樣品管 5ml,精度為 0.1 ml 。db13/ t 1107- 20095. 8真空泵:真空度應(yīng)達(dá)到80 kpa?5. 9 ph計(jì):測(cè)量精度度0.02.5.10氮吹儀。6測(cè)定步驟6. 1試樣溶液的制備 稱(chēng)取5g試樣(精確到0.01 g)置于150 m l二角瓶中,加人45 ml去離子水,于漩渦混勻器

11、上快速混合1 min。樣液移至下接oasis hlb柱的貯液器中,以小于或等于3 ml/min的流速通過(guò)固相萃取柱后,用5 ml水洗柱,棄去全部流出液。在65 kpa的負(fù)壓下,減壓抽干20 min,最后用3 ml甲醇洗脫,收集洗脫液于刻度樣品管中,于40水浴中用氮吹儀吹干,用乙睛定容至1 ml,搖勻后,供液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。6. 2測(cè)定6.2. 1液相色譜條件 色譜柱:sunfiretm c 18 3. 5林m, 150 mm x 2. 1 mm或相當(dāng)者。 流動(dòng)相及流速見(jiàn)表10 柱溫: 30?c o 進(jìn)樣量:20 ?l0表1液相色譜梯度洗脫條件時(shí)間min 流速(協(xié)l /min) 水(含0

12、.4乙酸)() 乙睛()0.00 200 60.0 40. 015. 00 200 35. 0 65. 015. 01 200 60. 0 40. 025. 01 200 60. 0 40. 06. 2. 2質(zhì)譜條件 離子源:電噴霧離子源(esi)o 掃描方式:正離子掃描。 檢測(cè)方式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)。 電噴霧電壓:5 500 v 霧化氣壓力:0. 055 mpao 氣簾氣壓力:0. 079 mpao 輔助氣流速:6 l/mind 離子源溫度:400 ?c 定性離子對(duì)、定量離子對(duì)和去簇電壓(dp),聚焦電壓(fp)、碰撞能量(ce)及碰撞室出口電壓 (cxp),見(jiàn)表206.2. 3液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜

13、測(cè)定6.2.3. 1定性測(cè)定 在相同試驗(yàn)條件下,樣品中待測(cè)物質(zhì)與基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)物質(zhì)的保留時(shí)間偏差在士2. 5之內(nèi);樣品色譜圖中各定性離子對(duì)相對(duì)豐度與濃度接近的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖中離子相對(duì)豐度相比,若偏差不超過(guò)表3規(guī)定的范圍,則可判定為樣品中存在該殘留。6.2.3.2定量測(cè)定 在儀器最佳工作條件下,用青霉素g、青霉素v,氨芐西林、阿莫西林標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液配成的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進(jìn)樣,以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。用標(biāo)準(zhǔn)食品伙伴網(wǎng)/5.8 真空泵:真空度應(yīng)達(dá)到 80 kpa。5.9 ph 計(jì):測(cè)量精度度 0.0205.10 氮吹儀。6 測(cè)定步驟6. 1 試樣溶

14、液的制備db 13ft 1107-2009 稱(chēng)取 5g 試樣(精確到 0.01 g )置于 150 m l 三角瓶中,加人 45 ml 去離子水,于欖渦棍勻器上快速淚合 1 min。樣液移至下接 oasis hlb 柱的貯液器中,以小于琪等于 3 mllmin 的流速通過(guò)固相萃取柱后,用 5 ml 水洗柱,棄去全部流出液。在 65 kpa 的負(fù)壓下,減壓抽干 20 min,最后用 3 ml 甲醇洗脫,收集洗脫液于刻度樣品管中,于 40.c水浴中用氮吹儀吹干,用乙睛定容至 1 ml,搖勻后,供液相色譜.串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。6.2 測(cè)定6.2. 1 液相色譜條件色譜柱 sunfire? c18 3.

15、5m , 150 mmx2. 1 mm 或相當(dāng)者。流動(dòng)相及流速見(jiàn)表 1 。柱溫 30.c 。進(jìn)樣量 20l 。表 1 液相色譜梯度洗脫條件時(shí)間imin 流速i ( l/min) 水(含 0.4%乙酸 ) i (%) 0.00 15.00 15.01 25.01 6. 2. 2 質(zhì)譜條件離子源:電噴霧離子源 (esi)。掃描方式:正離子掃描。檢測(cè)方式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)。電噴霧電壓 5 500v 。霧化氣壓力 0.055 mpa。氣簾氣壓力 0.079 mpa。輔助氣流速 6 llmino 離子源溫度 400.c 。200 60.0 200 35.0 200 60.0 200 60.0 乙睛i (%)

16、40.0 65.0 40.0 40.0 定性離子對(duì)、定量離子對(duì)和去簇電壓 (dp),聚焦電壓 (fp)、碰撞能量 cce) 及碰撞室出口電壓(cxp),見(jiàn)表 2。6.2.3 液捆色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定6.2.3.1 定性測(cè)定在相同試驗(yàn)條件 <>f,樣品中待測(cè)物質(zhì)與基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)物質(zhì)的保留時(shí)間偏差在士2.5%之內(nèi):樣品色譜圖中各定性離子對(duì)相對(duì)豐度與濃度接近的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖中離子相對(duì)豐度相比,若偏差不超過(guò)表 3 規(guī)定的范圍,則可判定為樣品中存在該殘留。6.2.3.2 定量測(cè)定在儀器最佳工作條件下,用青霉素 g、青霉素 v、氨韋西林、阿莫西林標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備榕液配成的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)榕液分別進(jìn)

17、樣,以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。用標(biāo)準(zhǔn)2 db13/ t 1107-2009工作曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量,樣品溶液中青霉素g、青霉素v,氨芐西林、阿莫西林的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測(cè)定的線性范圍內(nèi)。 在上述色譜條件下,青霉素g、青霉素v,氨芐西林、阿莫西林的總離子流圖參見(jiàn)附錄a.青霉素g、青霉素v,氨芐西林、阿莫西林的保留時(shí)間見(jiàn)附錄b.表2四種0一內(nèi)酞胺類(lèi)藥物的定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、去簇電壓、聚焦電壓、 碰撞能量和碰撞室出口電壓名稱(chēng) 定性離子對(duì) (m/z)定量離子對(duì) (m/z)碰撞能量 v去簇電壓 v聚焦電壓 v碰撞室出口電 壓/v青霉素g 335/160335/176

18、35/1602 02345 200 11青霉素v 351/160351/192351/16020154 0 200 11氨芐西林 350八92350/160350/16023202 0 200 11阿莫西林 366/114366/208366/2083 01921 200 11表3定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度 &gt; 5 0 &gt; 2 0 - 5 0 &gt; 10-20 1 0允許的最大偏差 士20 士25 士30 士506. 3平行試驗(yàn) 按上述步驟,對(duì)同一試樣進(jìn)行平行試驗(yàn)測(cè)定。6.4空白試驗(yàn) 除不稱(chēng)取試樣外均按上述分析步驟進(jìn)行。結(jié)果計(jì)算從標(biāo)

19、準(zhǔn)工作曲線上得到試樣中相應(yīng)的r-內(nèi)酞胺類(lèi)藥物濃度后,結(jié)果按公式(1)計(jì)算: cxvx1000a二,?¤?¤?¤?¤?¤?¤?,?¤?,?¤?,二,. (1 ) m x 1000x試樣中被測(cè)組分殘留量,單位為微克每千克(林g/kg )一從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的試樣溶液中被測(cè)組分的濃度,單位為納克每毫升(ng/ml).v試樣溶液定容體積,單位為毫升(ml).m最終試樣溶液所代表的試樣質(zhì)量,單位為克(g).注:計(jì)算結(jié)果需將空白值扣除。8精密度 在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的15%a食品伙伴

20、網(wǎng)/db131t 1107-2009 工作曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量,樣品溶液中青霉素 g、青霉素 v、氨書(shū)西林、阿莫西林的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測(cè)定的線性范圍內(nèi)。在上述色譜條件r,青霉素 g、青霉素 v、氨書(shū)面林、阿莫西林的總離子流圖參見(jiàn)附錄 a。青霉素g、青霉素 v、氨韋西林、阿莫西林的保留時(shí)間見(jiàn)附錄 b 。表 2 四種自?xún)?nèi)m?蟲(chóng)類(lèi)藥物的定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、去簇電壓、聚焦電壓、碰撞能量和碰撞室出口電壓名稱(chēng)定性離于對(duì) 定量離子對(duì) 碰撞能量 去旗電壓 聚焦電壓(rn!z) cm/z) v v v 壓/v335/160 20 青霉素 g 35/160 45 200 11 335/176 23 351/16

21、0 20 青霉素 v 351/160 40 200 11 351/192 15 350/192 23 氨&#039;*西林 350/160 20 200 11 350/160 20 366/114 30 阿莫西林 366/208 21 200 11 366/208 19 -&#039;- 一一一一表 3 定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度允許的最大偏差&gt;50 士 20&gt;2050 :t 25 叫-m&gt; 運(yùn) 10士 506. 3 平行試驗(yàn)按上述步驟,對(duì)同-試樣進(jìn)行平行試驗(yàn)測(cè)定。6.4 空白試驗(yàn)除不稱(chēng)取試樣外均按上述分析步驟進(jìn)行。7 結(jié)果計(jì)算從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上得到試樣中相應(yīng)的薩內(nèi)酷膠類(lèi)藥物濃度后,結(jié)果按公式(1)計(jì)算:cx vx 1000 x= . (1) mxl000 x一-試樣中被測(cè)組分殘留量,單位為微克每千克 (glkg) 。r一一從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的試樣溶液中被測(cè)組分的濃度,單位為納克每毫升 (nglmu 。v一一試樣洛液定容體積,單位為毫升 (ml) 。m一一最終試樣溶液所代表的試樣質(zhì)量,單位為克 cg) 。注:計(jì)算結(jié)果需將空白值扣除。8 精密度在重復(fù)

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