枯萎病生防菌地衣芽胞桿菌的生物學(xué)特性

1、枯萎病生防菌地衣芽胞桿菌的生物學(xué)特性摘要：研究了枯萎病生防菌地衣芽胞桿菌fjat-4菌株在不同溫度下的菌落生長(zhǎng)特性、生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)及其對(duì)尖孢鐮刀菌fjat-135菌株抑制作用的濃度效應(yīng)和溫度效應(yīng)。結(jié)果表明，fjat-4菌株的菌落、菌體的生長(zhǎng)都表現(xiàn)為在20以下的環(huán)境中生長(zhǎng)緩慢、生長(zhǎng)曲線為直線型，在25-30時(shí)生長(zhǎng)較良好、生長(zhǎng)曲線為對(duì)數(shù)型，最佳的生長(zhǎng)溫度為35-40；不同溫度培養(yǎng)的fjat-4菌株培養(yǎng)液對(duì)fjat-135菌株都具有較強(qiáng)的抑制作用，且抑菌作用的強(qiáng)弱差異遠(yuǎn)小于其活菌數(shù)之間的差異；溫度對(duì)fjat-4菌株抑制fjat-135菌株的作用有顯著影響，在15條件下，fjat-4菌株對(duì)fjat-135

2、菌株的抑制作用最弱，在20-30條件下，fjat-4菌株的抑菌作用相對(duì)較強(qiáng)，在35條件下，fjat-4菌株的抑菌作用最強(qiáng)。關(guān)鍵詞：地衣芽胞桿菌 尖孢鐮刀菌 生物學(xué)特性 溫度效應(yīng) 抑菌作用biological characteristics of fusarium-wilt-disease biocontrol bacterium, bacillus licheniformisabstract: the present paper dealt with the growth characteristics of biological control strain bacillus licheni

3、formis fjat-4 at different temperature, the effect of concentration and temperature on inhibitory effect of the strain fjat-4 on fusarium oxysporum fjat-135. the results showed that the strain fjat-4 grew very slowly and the growth curve was liner type when the temperature was under 20, grew well an

4、d the growth curve was logarithmic type when the temperature was over 25. the optimal temperature for the strain fjat-4 was 35-40. the cultured liquid of strain fjat-4 raised at different temperature could effectively inhibit the growth of the fusarium strain fjat-135, and the differences among the

5、inhibitions were far less than the differences among the concentrations of the cultured liquid. there was significant differences among effects of temperatures on the inhibitions of the bacillus strain fjat-4 on the fusarium strain fjat-135, the inhibitory effect was weakest at 15, obvious at 20-30

6、and highest at 35.key words: bacillus licheniformis; fusarium oxysporum; biological characteristics; temperature effect; inhibitory effect作物枯萎病是由尖孢鐮刀菌（fusarium oxysporum schl.）侵染引起的一種毀滅性土傳性病害，該病害在世界范圍內(nèi)廣泛發(fā)生，可危害番茄、辣椒、棉花和西瓜、黃瓜等100多種植物1，導(dǎo)致植株枯死，給農(nóng)作物生產(chǎn)造成嚴(yán)重?fù)p失，以瓜類(lèi)枯萎病為例，發(fā)病地塊一般減產(chǎn)10-30%，嚴(yán)重地塊可達(dá)50-60%，甚至絕收2。目前，在

7、枯萎病的防治上，由于病原菌的多樣性和變異性，尚缺乏有效的化學(xué)藥劑和抗病品種，輪作抗病方法也因耕地資源的限制而不易實(shí)施。因此，利用微生物及其代謝產(chǎn)物進(jìn)行的生物防治研究，是枯萎病防治的一個(gè)重要研究方向，其中芽胞桿菌便是被廣泛利用的一類(lèi)微生物3-10。地衣芽胞桿菌（bacillus licheniformis）是芽胞桿菌中具有較大應(yīng)用潛力的菌種之一，在植物病害防治收稿日期：作者簡(jiǎn)介：葛慈斌（1973），男，副研究員，主要從事作物微生物防治研究（e-mail:benci2000）*通訊作者：劉波(1957)，男，博士，研究員，主要從事微生物生物技術(shù)與農(nóng)業(yè)生物藥物研究（e-mail: fzliubo）基

8、金項(xiàng)目：國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃資助項(xiàng)目(2011cb111607)，農(nóng)業(yè)部“引進(jìn)國(guó)際先進(jìn)農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)”重點(diǎn)項(xiàng)目（2011-g25），福建省財(cái)政專項(xiàng)-福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)基金(stif-y03)。11-14、動(dòng)物飼料15-16和醫(yī)藥17等行業(yè)均取得了較好的應(yīng)用研究成果。fjat-4菌株是本研究室從發(fā)生枯萎病的田塊分離得到的一株地衣芽胞桿菌18，試驗(yàn)表明該菌株對(duì)尖孢鐮刀菌具有較強(qiáng)的抑制作用，具備開(kāi)發(fā)成生防菌劑的潛在優(yōu)勢(shì)。為了探索fjat-4菌株的生長(zhǎng)特性及其抑菌作用的濃度效應(yīng)和溫度效應(yīng)，以期為生防菌劑的研制和應(yīng)用提供參考，作者測(cè)定了不同溫度下fjat-4菌株的生長(zhǎng)狀況及其對(duì)尖孢鐮刀菌

9、抑制作用的差異，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。1 材料與方法1.1 菌株與培養(yǎng)基供試的生防菌地衣芽胞桿菌fjat-4菌株為本研究室分離、鑒定、保存的菌株，平板培養(yǎng)用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（即na培養(yǎng)基：牛肉膏0.3%，蛋白胨1.0%，nacl 0.5%，瓊脂1.8%，ph=7.2），搖瓶培養(yǎng)用bpy培養(yǎng)基（蛋白胨1.0%，牛肉浸膏0.5%，酵母浸出物0.3%，葡萄糖0.5%，nacl 0.5%，ph=7.2）；指示菌西瓜枯萎病尖孢鐮刀菌fjat-135是由本實(shí)驗(yàn)室從福建省永泰縣患病的西瓜植株上分離而得到，培養(yǎng)基為土豆汁-蔗糖瓊脂（pda）培養(yǎng)基。1.2地衣芽胞桿菌fjat-4菌株菌落生長(zhǎng)特性接種活化后的fjat-

10、4菌株于bpy培養(yǎng)基，30、200r·min-1振蕩培養(yǎng)，48h后停止培養(yǎng)，用血球計(jì)數(shù)板測(cè)定培養(yǎng)液的菌體數(shù)；取少量的培養(yǎng)液，用無(wú)菌水稀釋成菌體數(shù)約為3.0×102cfu·ml-1的菌懸液，吸取菌懸液0.2ml，涂布于不同的na培養(yǎng)基平板上；另用接種環(huán)沾取fjat-4菌株培養(yǎng)液原液，劃線接種在na培養(yǎng)基平板上；分別將平板放置在15、20、25、30、35、40的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)；各處理設(shè)3個(gè)重復(fù)，在接種后的24、48、72h和96h觀察菌落生長(zhǎng)情況，并從涂布接種的平板上，隨機(jī)選取10個(gè)單菌落，測(cè)量其直徑，分析溫度對(duì)該菌株菌落生長(zhǎng)的影響。1.3地衣芽胞桿菌fjat-4菌體

11、生長(zhǎng)溫度動(dòng)力學(xué)分析從活化fjat-4菌株的na培養(yǎng)基平板上挑取菌落，懸浮于無(wú)菌水中，制成菌體數(shù)約4.3×108cfu·ml-1的菌懸液；各取菌懸液2.0ml，接入bpy培養(yǎng)基（裝瓶量為25ml·250ml-1三角瓶），分別放置在15、20、25、30、35的溫度條件下，200r·min-1振蕩培養(yǎng)；于開(kāi)始培養(yǎng)后的0、6、12、24、36、48、60、72h取樣，用稀釋涂布平板法計(jì)算培養(yǎng)液中的活菌數(shù)；各處理設(shè)3個(gè)重復(fù)，分析fjat-4菌株在不同溫度下的菌體生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)特性。1.4地衣芽胞桿菌fjat-4對(duì)尖孢鐮刀菌fjat-135抑制作用的濃度效應(yīng)分析取1.

12、3所述的在不同溫度下培養(yǎng)72h的地衣芽孢桿菌fjat-4培養(yǎng)液，并用無(wú)菌水稀釋100倍，試驗(yàn)各培養(yǎng)液原液和100倍稀釋液對(duì)fjat-135菌株的抑制作用；抑菌試驗(yàn)參照郝變青等19的方法，略加修改后進(jìn)行，即分別將生防菌培養(yǎng)液原液、100倍稀釋液與冷卻至50熔融態(tài)的pda固體培養(yǎng)基以19相混合，搖勻，倒平板，以未接種生防菌的液體培養(yǎng)基與pda混合倒成的平板為ck；待平板凝固后，在平板中央接入一塊預(yù)先培養(yǎng)7d的直徑為0.6cm的病原菌菌片，倒置在28培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)；于處理后6d用“十”字形測(cè)量法測(cè)量病原菌的菌落直徑，計(jì)算抑菌率。每處理及對(duì)照均重復(fù)3次，用dps統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。抑菌率計(jì)算公式：抑菌

13、率=（ck菌落直徑-處理組菌落直徑）/（ck菌落直徑-0.6）×100%1.5地衣芽胞桿菌fjat-4菌株對(duì)尖孢鐮刀菌fjat-135菌株抑制作用的溫度效應(yīng)分析取地衣芽胞桿菌fjat-4培養(yǎng)液（菌體數(shù)約1.0×108 cfu·ml-1），按照1.4的方法制含生防菌的培養(yǎng)基平板、接入病原菌菌片，分別將培養(yǎng)基平板倒置在15、20、25、30和35的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)；于處理后的4、6、8d用“十”字形測(cè)量法測(cè)量病原菌的菌落直徑，計(jì)算抑菌率。每處理及對(duì)照均重復(fù)3次，用dps統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，分析fjat-4菌株對(duì)fjat-135菌株抑制作用的溫度效應(yīng)。2 結(jié)果與分析1、地衣芽

14、胞桿菌fjat-4菌株的菌落生長(zhǎng)特性采用涂布法接種于na培養(yǎng)基平板的fjat-4菌株在不同溫度下的菌落直徑見(jiàn)表1和圖1。菌株fjat-4在不同溫度下的菌落直徑差異顯著（p<0.05），15下菌株幾乎不生長(zhǎng)，培養(yǎng)72h后平板上還未見(jiàn)有菌落長(zhǎng)出；20下，培養(yǎng)72h后，菌落直徑僅為0.08cm；25下，培養(yǎng)48h時(shí)，平板上還看不到有菌落長(zhǎng)出，72h后菌落直徑只有0.18cm；30以上，菌株生長(zhǎng)較為正常，并且隨著溫度的升高和培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，菌落直徑逐漸增大，但不同的溫度下、或者同一溫度下的不同培養(yǎng)時(shí)間的菌落直徑之間，差異均為顯著。表1 fjat-4菌株在不同溫度、不同時(shí)間培養(yǎng)培養(yǎng)后的菌落直徑ta

15、ble 1 colonial diameter of strain fjat-4 at different cultured time and temperature時(shí)間time（h）菌落直徑colonial diameter（cm）152025303540240.00ac0.00bc0.00bc0.07cc0.21cb0.52ca480.00ad0.00bd0.00bd0.33bc0.55bb1.01ba720.00af0.08ae0.18ad0.47ac0.75ab1.20aa同一欄內(nèi)，帶相同的小寫(xiě)字母在duncans新復(fù)極差測(cè)驗(yàn)的多重比較p<0.05時(shí)沒(méi)有差異；同一行內(nèi)，帶相同的大

16、寫(xiě)字母在duncans新復(fù)極差測(cè)驗(yàn)的多重比較p<0.05時(shí)沒(méi)有差異；下同。20253035圖1 fjat-4菌株在不同溫度下培養(yǎng)72h后的菌落fig. 1 colony of strain fjat-4 at different cultured temperature after 72h劃線接種于na培養(yǎng)基平板的fjat-4菌株在不同溫度下的生長(zhǎng)狀況與用涂布法接種的相似，也表現(xiàn)為溫度越高、時(shí)間越長(zhǎng)，菌落越旺盛。用編號(hào)0-4表示菌株生長(zhǎng)狀況的級(jí)別，可將該菌株在不同溫度、不同時(shí)間的生長(zhǎng)狀況歸納于表2。以菌株生長(zhǎng)級(jí)別為指標(biāo)，以溫度為樣本，構(gòu)建矩陣，以絕對(duì)值距離為尺度，用最短距離法對(duì)菌落生長(zhǎng)溫

17、度范圍進(jìn)行系統(tǒng)聚類(lèi)。絕對(duì)值距離矩陣見(jiàn)表3，聚類(lèi)結(jié)果見(jiàn)表4，聚類(lèi)圖見(jiàn)圖2。當(dāng)=6時(shí)，可將菌株的溫度適應(yīng)范圍分為3類(lèi)：第1類(lèi)，15-20，低溫區(qū)，在該溫區(qū)內(nèi)，fjat-4菌株生長(zhǎng)較差或幾乎不生長(zhǎng)；第2類(lèi)，25-30，中溫區(qū)，在該溫區(qū)內(nèi)，fjat-4菌株生長(zhǎng)較好；第3類(lèi)，35-40，高溫區(qū)，在該溫區(qū)內(nèi)，fjat-4菌株生長(zhǎng)旺盛。地衣芽胞桿菌fjat-4菌株在25以下溫度生長(zhǎng)緩慢，在25以上，隨著溫度的升高，生長(zhǎng)加速，最適宜的溫度為35-40。表2 地衣芽胞桿菌fjat-4菌株在不同溫度、不同時(shí)間下生長(zhǎng)狀況table 2 growths of strain fjat-4 at different cu

18、ltured time and temperature時(shí)間time（h）不同溫度下菌落生長(zhǎng)狀況growths of colony at different temperature(n)15202530354024001234480122447202234496123待添加的隱藏文字內(nèi)容23440-不生長(zhǎng)，1-極少量生長(zhǎng)，2-生長(zhǎng)較差，3-生長(zhǎng)較好，4-生長(zhǎng)旺盛表3 絕對(duì)值距離矩陣(下叁角)table 3 absolute distance matrix (lower triangular)溫度temperature（）20253035401542073259523014107535151186

19、1表4 聚類(lèi)結(jié)果table 4 clustering resultstij距離distrance=6.0016512432321443165519.5 圖2 fjat-4菌株菌落生長(zhǎng)溫度范圍聚類(lèi)分析fig. 2 clustering analysis of colony growth temperature range of strain fjat-4 2、地衣芽胞桿菌fjat-4菌株生長(zhǎng)溫度動(dòng)力學(xué)分析不同溫度下，地衣芽胞桿菌fjat-4菌株培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)液活菌數(shù)的變化情況見(jiàn)表5。在15，fjat-4菌株幾乎不生長(zhǎng)，72h后，培養(yǎng)液中的活菌數(shù)只有1.0×108cfu·ml-

20、1，為剛接種時(shí)的3倍，沒(méi)有出現(xiàn)對(duì)數(shù)增長(zhǎng)；在20下，菌株生長(zhǎng)較差，72h后培養(yǎng)液的活菌數(shù)為14.6×108cfu·ml-1；在25和30較適宜于該菌株的生長(zhǎng)，培養(yǎng)72h后，培養(yǎng)液中活菌數(shù)達(dá)到35.4×108cfu·ml-1和37.8×108cfu·ml-1；35最適合于fjat-4菌株的生長(zhǎng)，培養(yǎng)36h后，培養(yǎng)液中的活菌數(shù)就達(dá)到62.2×108cfu·ml-1，之后活菌數(shù)呈現(xiàn)波浪式變化，至培養(yǎng)72h時(shí)的活菌數(shù)為55.2×108cfu·ml-1，顯著地比其它溫度下的培養(yǎng)液活菌數(shù)大（p<0.05

21、）。表5 不同時(shí)間、不同溫度培養(yǎng)地衣芽胞桿菌fjat-4菌株培養(yǎng)液中的活菌數(shù)table 5 numbers of viable cell in cultured solution of strain fjat-4 at different cultured time and temperature 溫度（）temperature活菌數(shù)numbers of viable cell（×108cfu·ml-1）0h6h12h24h36h48h60h72h150.320.360.320.420.480.660.801.00d200.320.400.380.982.5011.2017

22、.0014.60c250.320.300.622.1010.4030.4026.8035.40b300.320.462.405.8013.2027.2020.4037.80b350.320.542.6027.4062.2058.6075.2055.20a用最小二乘法，對(duì)菌株fjat-4在不同溫度下生長(zhǎng)曲線進(jìn)行建模，結(jié)果（圖3）表明，在15時(shí)，該菌生長(zhǎng)曲線呈直線型，方程為y = 0.0729x + 7.3721（r2 = 0.9175）；在20時(shí)，該菌生長(zhǎng)曲線呈直線型，方程為y = 0.2918x + 7.0007（r2 = 0.9164）；在25時(shí)，該菌生長(zhǎng)曲線呈對(duì)數(shù)型，方程為y = 7.06

23、8e0.0418x（r2 = 0.9235）；在30時(shí)，該菌生長(zhǎng)曲線呈對(duì)數(shù)型，方程為y = 7.367e0.0366x（r2 = 0.9091）；在35時(shí)，該菌生長(zhǎng)曲線呈指數(shù)型，方程為y = 1.3357ln(x) + 7.2632（r2 = 0.8949）。1520253035圖3 fjat-4菌株在不同溫度下的生長(zhǎng)曲線fig. 3 growth curve of strain fjat-4 at different cultured temperature為劃分菌株fjat-4活菌數(shù)生長(zhǎng)的溫度范圍，以時(shí)間為指標(biāo)，以溫度為樣本，構(gòu)建矩陣，以絕對(duì)值距離為尺度，用最短距離法對(duì)菌體數(shù)生長(zhǎng)溫度范圍進(jìn)

24、行系統(tǒng)聚類(lèi)。絕對(duì)值距離矩陣見(jiàn)表6，聚類(lèi)結(jié)果見(jiàn)表7，聚類(lèi)圖見(jiàn)圖4。當(dāng)=81.17時(shí)，可將該菌株的溫度適應(yīng)范圍分為3類(lèi)：第1類(lèi)，15-20，低溫區(qū)，在該溫區(qū)內(nèi)，地衣芽胞桿菌fjat-4菌株菌體生長(zhǎng)緩慢；第2類(lèi)，25-30，中溫區(qū)，在該溫區(qū)內(nèi)，地衣芽胞桿菌fjat-4菌株菌體數(shù)生長(zhǎng)較良好；第3類(lèi)，35，高溫區(qū)，在該溫區(qū)內(nèi)，地衣芽胞桿菌fjat-4菌株菌體數(shù)生長(zhǎng)最佳。表6 絕對(duì)值距離矩陣(下叁角)table 6 absolute distance matrix (lower triangular)溫度（）202530351543.020020102.100059.160025103.220060.20

25、0020.440030277.7000234.6800175.7200174.4800表7 聚類(lèi)結(jié)果table 7 clustering resultstij距離=81.1714320.440022143.020033181.1700451215.6450 圖4 fjat-4菌株菌體數(shù)生長(zhǎng)的溫度范圍聚類(lèi)fig. 4 clustering analysis of viable cell growth temperature range of strain fjat-43、地衣芽胞桿菌fjat-4對(duì)尖孢鐮刀菌fjat-135抑制作用的濃度效應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖5。不同溫度培養(yǎng)的fjat-4菌株培養(yǎng)液對(duì)尖

26、孢鐮刀菌fjat-135菌株都具有較強(qiáng)的抑制作用，處理后6d抑制率都大于69.9%；不同的處理之間，抑制率存在差異。25、30、35培養(yǎng)的fjat-4菌液原液對(duì)菌株fjat-135的抑制率，均顯著大于15和20的培養(yǎng)液原液的抑制率（p<0.05）；20、30、35培養(yǎng)的fjat-4菌液100倍稀釋液對(duì)菌株fjat-135的抑制率之間，不存在差異，但都大于15和25的培養(yǎng)液100倍稀釋液的抑制率。15、30、35培養(yǎng)的fjat-4菌株培養(yǎng)液原液與100倍稀釋液對(duì)菌株fjat-135的抑制作用之間，不存在顯著差異；20下的培養(yǎng)液原液的抑制率顯著小于100倍稀釋液的抑制率，而25下的培養(yǎng)液原液

27、的抑制率則顯著大于100倍稀釋液的抑制率（p<0.05），但抑制率（77.1%和70.6%）之間的差異，遠(yuǎn)比培養(yǎng)液中活菌數(shù)的差異（100倍）小。baababbaaaabbaaaaaaaa圖5 不同溫度培養(yǎng)的fjat-4培養(yǎng)液對(duì)fjat-135菌株的抑制作用fig. 5 inhibitory effect of strain fjat-4 cultured at different temperature on fusarium oxysporum , strain fjat-135同一條柱上，帶不同的大寫(xiě)字母表示在相同的濃度下、不同的培養(yǎng)溫度之間存在顯著差異，帶不同的小寫(xiě)字母表示在相同的

28、培養(yǎng)溫度下、不同的濃度之間存在顯著差異(duncans新復(fù)極差測(cè)驗(yàn)的多重比較，p<0.05)4、地衣芽胞桿菌fjat-4菌株對(duì)尖孢鐮刀菌fjat-135抑制作用的溫度效應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表8、圖6。在15-35的系列溫度下，菌株fjat-4對(duì)fjat-135菌株都具有較強(qiáng)的抑制作用，但不同溫度下的抑制率之間，存在著差異。處理后4d，菌株fjat-4培養(yǎng)液在35下對(duì)fjat-135菌株的抑制作用最強(qiáng)，30時(shí)的抑制作用最弱；處理后6d和8d，菌株fjat-4培養(yǎng)液在35下的抑制率仍顯著大于其它溫度下的抑制率，15下的抑制率最小，而20、25和30下的抑制率之間，則不存在顯著差異（p<0.05

29、）。比較同一處理在不同時(shí)間對(duì)fjat-135菌株的抑制作用，可以發(fā)現(xiàn)，在15下，菌株fjat-4的抑菌作用隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)而減弱，且差異顯著；在20、25和30下，抑菌作用隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)，35下的抑菌作用則不會(huì)隨處理時(shí)間的變化而產(chǎn)生顯著的差異。表8 fjat-4菌株在不同溫度下對(duì)fjat-135菌株的抑制作用table 8 inhibitory effect of strain fjat-4 on strain fjat-135 at different temperature溫度temper-ature 處理trea-ment處理后4d 4 days after treament

30、處理后6d 6 days after treament處理后8d 8 days after treamentfjat-135菌落直徑（cm）colonial diameter 抑制率（%）inhibition ratefjat-135菌落直徑（cm）colonial diameter抑制率（%）inhibition ratefjat-135菌落直徑（cm）colonial diameter抑制率（%）inhibition rate15生防菌1.1672.8ba1.9365.3cb2.5260.5ccck2.66-4.43-5.46-20生防菌1.9969.8bcb2.6370.3bb2.677

31、4.6back5.20-7.44-8.80-25生防菌2.1369.3bcb2.6072.1bab2.7973.3back5.54-7.76-8.80-30生防菌2.1064.8cb2.6171.3ba3.0470.2back4.86-7.60-8.80-35生防菌1.1780.9aa1.5279.1aa1.4582.8aack3.58-5.01-5.53-25，ck25，處理35，ck35，處理圖6 枯萎病菌fjat-135菌株在不同溫度、不同處理下培養(yǎng)8d后的菌落fig. 6 colony of strain fjat-135 by different treatment at diffe

32、rent cultured temperature after 8d用最小二乘法，建立菌株fjat-4在不同溫度、處理后不同時(shí)間對(duì)fjat-135菌株的抑菌率（y）與溫度（x1）、處理時(shí)間（x2）的二元線性回歸方程，可得：y = 57.3333+0.5333x1 + 0.1900x2（r2 = 0.4274），方差分析見(jiàn)表9，偏回歸系數(shù)的顯著性檢驗(yàn)見(jiàn)表10。表9中，f=4.4784>f0.05（2，12），p<0.05，即抑菌率與溫度、處理時(shí)間之間存在顯著的線性關(guān)系；表10中，tbx1=2.9827>t0.05（12）=2.179，tbx2<t0.05（12），即抑菌率

33、對(duì)溫度的偏回歸顯著、對(duì)處理時(shí)間的偏回歸不顯著，這表明溫度是對(duì)抑菌率線性影響的顯著變量，而處理時(shí)間則不是顯著變量；通過(guò)比較溫度、處理時(shí)間對(duì)抑菌率的通徑系數(shù)（p）也可發(fā)現(xiàn)，px1=0.6516>px2=0.0536，表明溫度對(duì)抑菌率的影響比處理時(shí)間對(duì)抑菌率的影響更重要。表9 二元線性回歸方差分析表· table 9 variance analysis table of binary linear regression 變異來(lái)源dfssmsf值顯著水平p回歸2214.7773107.38874.47840.03525離回歸12287.752023.9793總的14502.529335

34、.8950表10 偏回歸方差分析表table 10 variance analysis table of partial regression變量variable回歸系數(shù)regression coefficient標(biāo)準(zhǔn)系數(shù)standard coefficient偏相關(guān)partial correlation標(biāo)準(zhǔn)誤standard errort值顯著水平pby57.33336.56988.72680bx10.53330.65160.65250.17882.98270.0106bx20.19000.05360.07070.77430.24540.80993 討論微生物的生長(zhǎng)易受溫度、濕度等環(huán)境因素的

35、影響。芽胞桿菌是單細(xì)胞型的生物，對(duì)溫度的變化特別敏感，因此芽胞桿菌的生長(zhǎng)具有明顯的溫度依賴性，有最低、最適宜和最高生長(zhǎng)溫度范圍20。黃曦等對(duì)有較強(qiáng)抑制荔枝霜疫霉和荔枝炭疽菌作用的枯草芽孢桿菌on-6菌株的培養(yǎng)條件進(jìn)行初步研究，結(jié)果表明，該菌株的最佳培養(yǎng)溫度32-3421；章蘊(yùn)慧等研究報(bào)道地衣芽胞桿菌w10菌株的最適培養(yǎng)溫度為27-3022；紀(jì)明山和王毅婧發(fā)現(xiàn)地衣芽胞桿菌sdyt-79菌株的最佳發(fā)酵培養(yǎng)溫度為24，20以下及32以上的溫度均不利于該菌株的生長(zhǎng)23；此外，膠凍樣類(lèi)芽胞桿菌ps04菌株、枯草芽胞桿菌bsw03菌株、地衣芽胞桿菌ts-01菌株的最適生長(zhǎng)溫度分別為30、28和4024-2

36、6。由此可見(jiàn)，不同菌株的最佳培養(yǎng)溫度均有不同，且差距較大；但較少見(jiàn)到有關(guān)芽胞桿菌的菌落生長(zhǎng)與菌體量生長(zhǎng)對(duì)溫度的適應(yīng)性是否一致方面的報(bào)道。芽胞桿菌的菌落形態(tài)是分類(lèi)的依據(jù)之一27，菌落生長(zhǎng)通常是質(zhì)量（和/或數(shù)量）性狀，表現(xiàn)在菌落的有無(wú)和大小上，而菌體生長(zhǎng)是數(shù)量性狀，常作為菌株生長(zhǎng)速度的計(jì)量指標(biāo)，都具有生物學(xué)特性上的研究意義。本研究對(duì)地衣芽胞桿菌fjat-4菌株在不同溫度下的菌落、菌體生長(zhǎng)的測(cè)定結(jié)果表明，fjat-4菌株的菌落、菌體的生長(zhǎng)明顯地受溫度的影響，但表現(xiàn)出相似的溫度適應(yīng)性，即在20以下的環(huán)境中生長(zhǎng)緩慢、菌體數(shù)呈直線型增長(zhǎng)，在25-30時(shí)生長(zhǎng)較良好、菌體數(shù)呈對(duì)數(shù)型增長(zhǎng)，最佳的生長(zhǎng)溫度為35-

37、40。盡管溫度對(duì)地衣芽胞桿菌fjat-4菌株的生長(zhǎng)有著重要的影響，不同溫度下發(fā)酵出的培養(yǎng)液菌體數(shù)量差異較大，但不同培養(yǎng)液對(duì)尖孢鐮刀菌fjat-135菌株抑制率之間的差異遠(yuǎn)小于培養(yǎng)液之間的活菌數(shù)差異，而且同一培養(yǎng)液經(jīng)稀釋后，對(duì)fjat-135菌株抑制率的下降幅度也遠(yuǎn)小于活菌數(shù)的降低程度。這表明，在不同溫度下培養(yǎng)的fjat-4菌株，其包括抑菌能力在內(nèi)的菌株性狀不會(huì)發(fā)生明顯變化，同時(shí)也進(jìn)一步明確了fjat-4菌株具有較強(qiáng)的抑制枯萎病菌作用，只要培養(yǎng)液中存在一定的活菌量，就能起到較好的抑菌效果。環(huán)境條件影響生物農(nóng)藥的防治效果28。紀(jì)明山等研究發(fā)現(xiàn)，溫度及濕度對(duì)枯草芽胞桿菌b36菌株可濕性粉劑防治番茄灰

38、霉病的效果具有較大影響，當(dāng)相對(duì)濕度在90%，溫度在30（日溫）/20（夜溫）條件下，對(duì)番茄灰霉病的保護(hù)和防治效果分別為82.48%和63.01%、防效較好，在25/15條件下的保護(hù)和防治效果分別僅為45.06%和23.85%29。本研究結(jié)果也表明，溫度也影響地衣芽胞桿菌fjat-4菌株對(duì)尖孢鐮刀菌fjat-135菌株的抑制作用，從總體上看，在15條件下，fjat-4菌株對(duì)fjat-135菌株的抑制作用相對(duì)最弱，抑菌作用還隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)而減弱；在20-30條件下，fjat-4菌株的抑菌作用相對(duì)較強(qiáng)，而且在處理期內(nèi)，抑菌作用還有隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)的趨勢(shì)；在35條件下，fjat-4菌株的抑

39、菌作用最強(qiáng)。這可能是因?yàn)榧怄哏牭毒倪m宜生長(zhǎng)溫度比地衣芽胞桿菌的低，在溫度較低（20以下）條件不利于fjat-4菌株的生長(zhǎng)、較適宜于fjat-135菌株的生長(zhǎng)，而溫度較高（30以上）時(shí)適宜于fjat-4的生長(zhǎng)、但不利于fjat-135菌株的生長(zhǎng)。參考文獻(xiàn)1 王政逸，李德葆尖孢鐮刀菌致病菌營(yíng)養(yǎng)體親和群研究j浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2001，13（1）：72-772 郝曉娟，劉波，謝關(guān)林植物枯萎病生物防治研究進(jìn)展j中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2005，21（7）：319-322,3373 肖榮鳳，劉波，史懷，等生防菌哈茨木霉fjat-9040的gfp標(biāo)記及土壤定殖示蹤j植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2011，38(6)：506-5124

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