生成丙酮酸和谷氨酸丙酮酸與24二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝

1、實驗實驗6丙氨酸轉氨酶丙氨酸轉氨酶(a1anine transaminase,alt)活性測定活性測定 alt: alanine transaminasegtp: glutamate pyruvate transaminase一、一、 目的要求目的要求了解血清了解血清altalt的測定原理及意義。的測定原理及意義。 二、二、 實驗原理實驗原理 基質液中丙氨酸和基質液中丙氨酸和酮戊二酸在一酮戊二酸在一定溫度和時間內，經(jīng)血清中定溫度和時間內，經(jīng)血清中altalt的作用，生的作用，生成丙酮酸和谷氨酸。丙酮酸與成丙酮酸和谷氨酸。丙酮酸與2,42,4二硝基二硝基苯肼作用，生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿苯肼作

2、用，生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿性溶液中顯紅棕色。根據(jù)顯色的深淺反映性溶液中顯紅棕色。根據(jù)顯色的深淺反映出血清中出血清中altalt活性的強弱。其反應式如下：活性的強弱。其反應式如下：ketoglutaratepyruvic acid glutamic acidpyruvic acid alaninealt紅棕色紅棕色三、操作步驟三、操作步驟取4只小試管按下表加入試劑：標準管標準管(d1)標準空白標準空白(d2) 測定管測定管 (d3)測定空白測定空白(d4)丙酮酸標準液丙酮酸標準液(100g/ml) 0.1000血清血清 000.10.1基質液基質液* 0.5 0.50.50ph7.4磷酸鹽緩

3、磷酸鹽緩沖液沖液 0 0.100置于置于37水浴或溫箱中水浴或溫箱中30min后取出后取出2.4-二硝基苯肼二硝基苯肼 0.5 0.5 0.50.5基質液基質液(ml) 0000.5 alt活性測定試劑加入方法活性測定試劑加入方法 control 210g pyruvateketoglutarateod1control 110g pyruvateod1-od2ketoglutarateod2d2x g pyruvateserumod3d1x g pyruvateod3-od4serumod4od1-od2od3-od410 g x g od1-od2od3-od410x (g) 四、結果與計算

4、四、結果與計算v本法所規(guī)定的本法所規(guī)定的alt活性單位的定義活性單位的定義是：是：v1ml血清在血清在37水浴中保溫水浴中保溫30min，與基，與基質液作用后產(chǎn)生質液作用后產(chǎn)生2.5g丙酮酸，稱為一個丙酮酸，稱為一個alt單位。單位。v計算時，須先算出計算時，須先算出0.1ml血清于血清于37下所下所產(chǎn)生丙酮酸的微克數(shù)產(chǎn)生丙酮酸的微克數(shù),公式公式(1)。再根據(jù)其。再根據(jù)其單位定義換算為每毫升血清內單位定義換算為每毫升血清內alt活力活力單位單位,公式公式(2)。od1-od2od3-od410x (g) alt units per millilitre serum = pyruvic acid ( g ) 2.5 10.1本法本法alt正常值為正常值為240活力單位?；盍挝?。 五、應用意義五、應用意義valt廣泛存在于組織細胞中，肝中特多。廣泛存在于組織細胞中，肝中特多。當肝細胞損傷時，此酶即釋放入血，血當肝細胞損傷時，此酶即釋放入血，血中酶活性大大升高。臨床上常用來測定中酶活性大大升高