G試驗過去與現(xiàn)在

1、G試驗 過去與現(xiàn)在南京軍區(qū)南京總醫(yī)院呼吸與重癥醫(yī)學科南京軍區(qū)南京總醫(yī)院呼吸與重癥醫(yī)學科 趙蓓蕾趙蓓蕾20152015年年7 7月月二、二、G試驗的現(xiàn)狀試驗的現(xiàn)狀三、三、G試驗的影響因素試驗的影響因素四、四、G試驗的臨床應用策略試驗的臨床應用策略一、一、G試驗簡介試驗簡介一、G試驗簡介IFI的診斷方法m影像學影像學m組織病理學組織病理學/ /細胞學細胞學m培養(yǎng)培養(yǎng)m血清學方法：抗體檢測血清學方法：抗體檢測m真菌抗原和菌體成分檢測真菌抗原和菌體成分檢測 半乳甘露聚糖（Galactomannan，GM） (13)-D-葡聚糖m分子生物學方法：分子生物學方法：PCRPCR（unavailableuna

2、vailable）傳統(tǒng)方法趙蓓蕾侵襲性真菌感染的診斷方法中華結核和呼吸雜志2007; 11:m半乳甘露聚糖（galactomannan，GM）m1,3-D-葡聚糖（1,3-beta-d-glucan，BDG）m其他菌體成分（或抗原） 烯醇化酶：48kD烯醇化酶為假絲酵母菌屬特異性抗原 假絲酵母菌熱敏抗原 隱球菌莢膜多糖抗原 組織胞漿菌抗原m真菌代謝產(chǎn)物 D-阿拉伯糖醇真菌菌體成分與代謝產(chǎn)物檢測趙蓓蕾，文昱婷，等中華結核和呼吸雜志 2007; 30(11) ：839-43文昱婷，趙蓓蕾，等中華結核和呼吸雜志 2008; 31(4) ：287-90呂沛華, 趙蓓蕾, 等中華結核和呼吸雜志, 200

3、7, 30(1): 31-34呂沛華, 趙蓓蕾, 等 中華醫(yī)院感染雜志. 2007; 11GM檢測與G試驗l半乳甘露聚糖（GM） 診斷閾值：1.5 敏感性72.7（大鼠） 78.6（病人），特異性84.287.5 隨感染時間延長，診斷IPA的敏感性增高 有可能判斷療效與預后趙蓓蕾，文昱婷，等中華結核和呼吸雜志，2007；30(11) ：839-43文昱婷，趙蓓蕾，等中華結核和呼吸雜志，2008； 31(4) ：287-90l1,3-D葡聚糖（BDG） 診斷閾值20ng/L（Fungitec-G試劑盒），敏感性84%，特異性91% 不能區(qū)分曲霉與念珠菌感染呂沛華，趙蓓蕾， 等 中華醫(yī)院感染雜志，

4、2007；17 (11)：1328-31 呂沛華，趙蓓蕾，等中華結核和呼吸雜志，2007；30 (1)：31-347G試驗早期診斷價值1 BG值升高平均早于發(fā)熱 5 d 早于呼吸道癥狀平均 10.7 d 早于HRCT檢查平均 9.3 d對于念珠菌血癥, G試驗是首選檢查2 1.高蕾,周 新.中國感染與化療雜志,2008,3 (2),123-125. 2. J. Clin. Microbiol. 2008.46:10091013.G試驗（BDG檢測）m1,3-D-葡聚糖（1,3-beta-d-glucan，BDG） 由D-葡萄糖聚合而成，以（13）糖苷鍵連接的葡萄糖殘基骨架作為主鏈，分枝狀（16

5、）糖苷鍵連接的葡萄糖殘基作為側鏈 廣泛存在于除接合菌外的真菌細胞壁中，占真菌細胞壁成分的50%以上，在酵母菌中含量最高，其他微生物如細菌、病毒，以及動物、人體細胞均無此成分 G試驗mBDG檢測原理 能特異性激活自鱟變形細胞溶解產(chǎn)物提取的G因子，因此一般用G試驗方法檢測m常用的檢測試劑盒有Fungitec-G和Glucatell 主要試劑G因子來自于不同種的鱟 診斷IFI的推薦閾值Fungitec-G：20ng/LGlucatell：60ng/L G試驗m臨床意義血漿BDG檢測是篩選IFI的有用方法診斷IFI的敏感性、特異性約80%90%淺表真菌感染或真菌定植：BDG極少釋放入血液中有效的抗真菌

6、治療能降低血漿BDG水平，連續(xù)檢測有助于判斷病情變化和治療反應不能區(qū)分曲霉與酵母菌感染不能用于新生隱球菌感染和曲霉球的診斷肺曲霉球：曲霉呈寄居狀態(tài)而非侵襲性感染新生隱球菌為葡聚糖，且具有厚莢膜存在問題m影響因素多m不同的研究結果之間存在較大差異m各實驗室之間差異大，質量控制m診斷閾值m臨床應用價值有待進一步的評價二、G試驗的現(xiàn)狀相關指南相關指南 歐洲指南G試驗已作為微生物學證據(jù)列入歐洲IFD的診斷指南。中國感染與化療雜志 2008 年 9 月 20 日第 8 卷第 5 期 Chin J Infect Chemother, September 2008, Vol. 8, No 5侵襲性真菌病修訂

7、定義歐洲癌癥研究和治療組織/侵襲性真菌感染協(xié)作組和美國國立變態(tài)反應和感染病研究院真菌病研究組(EORTC/ MSG)共識組微生物學標準直接檢查( 細胞學、直接鏡檢或培養(yǎng)) :1 . 痰液、支氣管肺泡灌洗液、支氣管刷標本、或鼻竇抽取液呈霉菌陽性, 顯示下列中 1 項:呈現(xiàn)真菌成分顯示為霉菌培養(yǎng)檢出霉菌( 即曲霉、鐮刀霉、接合菌和賽多孢菌)間接檢查( 檢測抗原或細胞壁組分)2. 曲霉病: 血漿、血清、支氣管肺泡灌洗液或腦脊液標本檢測出半乳甘露聚糖抗原3. IFD, 除外隱球菌屬和接合菌: 血清1,3-D 葡聚糖檢測陽性。ESCMIDESCMID* * guideline for the diagn

8、osis and management of Candida diseases guideline for the diagnosis and management of Candida diseases 2012: diagnostic procedures2012: diagnostic procedures相關指南相關指南歐洲臨床微生物與感染性疾病學會歐洲臨床微生物與感染性疾病學會(ESCMID) : 2012念珠菌血癥診斷指南念珠菌血癥診斷指南 推薦級別相關指南相關指南 美國指南 G試驗已作為微生物學證據(jù)列入美國IFI的診斷指南。傳染病信息 2014 年 02 月 28 日第 27 卷

9、第 1 期 Infect Dis Info, Vol. 27, No. 1, February 28, 20142013年美國感染性疾病微生物學實驗室 診斷應用指南簡介病原及標本處理部分表6醫(yī)療相關和醫(yī)院獲得性肺炎及呼吸機相關性肺炎實驗室診斷 Table 6 Laboratory diagnosis of healthcare -associated pneumonia, hospital-acquired pneumonia and ventilator-asso-ciated pneumonia相關指南相關指南 中國指南G試驗作為診斷標準已納入肺部真菌感染患者診斷標準與治療原則中。中華結核

10、和呼吸雜志 2007 年 11月第30卷第 11期 Chin J Tuberc Respir Dis，Novembert 2007 , Vol.30, No. 11肺真菌病診斷和治療專家共識中華醫(yī)學會呼吸病 學分會感染 學組 中華結核和呼吸雜 志編輯委 員會共識中聲明，G試驗(1，3-D葡聚糖)、GM試驗陽性是肺部真菌病的臨床診斷中微生物學證據(jù)之一三、影響G試驗的因素G試驗的影響因素m臨床方面標本溶血、黃疸和脂肪血；標本中存在葡聚糖酶采集、處理過程中污染疾病某些細菌敗血病患者（尤其是鏈球菌敗血癥），G-桿菌敗血癥診療操作應用纖維素膜進行血液透析患者醫(yī)療物品中含有葡聚糖：棉紗布、海綿某些血液制品

11、可能含有葡聚糖白蛋白、凝血因子、免疫球蛋白等藥物抗腫瘤類藥物（香菇多糖、裂殖菌多糖），磺胺類藥物，多粘菌素E，厄他培南，頭孢噻肟，頭孢吡肟，氨芐西林舒巴坦，等食物：蘑菇類m實驗室方面影響G試驗結果的實驗室因素1 試劑因素2 設備因素3 實驗條件4 標本要求1.1.試劑因素試劑因素：金山川：金山川 VS FungitellVS Fungitell診斷試劑盒診斷試劑盒符合率敏感性特異性金山川診斷試劑盒Fungitell診斷試劑盒檢測相同血清樣本評估 3家三甲醫(yī)院 288樣本符合率分析符合率分析陽性符合率為93.6%，陰性符合率為90.7%，總符合率為91.7%由Kappa分析可知，Kappa值為0

12、.844（P0.001）；兩者有很好的一致性敏感性和特異性分析敏感性和特異性分析考核試劑的敏感性為81.11%，特異性為87.16%；與臨床實驗結果相符(與血培養(yǎng)、組織病理血結果比較)Fungitell (Associates ofFungitell (Associates ofCape Cod, Inc., Cape Cod, MA)Cape Cod, Inc., Cape Cod, MA)Clin. Vaccine Immunol.-2011-Del Bono-2113-7受試分組、受試分組、GG試驗結果試驗結果Clin. Vaccine Immunol.-2011-Del Bono-21

13、13-73 3組患者的組患者的BGBG水平水平32416227Clin. Vaccine Immunol.-2011-Del Bono-2113-7敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值與敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值與閾值閾值的關系的關系Clin. Vaccine Immunol.-2011-Del Bono-2113-7敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值與敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值與閾值閾值的關系的關系Clin. Vaccine Immunol.-2011-Del Bono-2113-7具備開機自檢程序，提示用戶儀器性能信息；具備開機自檢程序，提示用戶儀器性能信息；

14、具備問題診斷程序，指導客戶處理儀器問題；具備問題診斷程序，指導客戶處理儀器問題；完善用戶管理系統(tǒng)，提高安全性；完善用戶管理系統(tǒng)，提高安全性；操作簡便，記錄并自動生成最終檢測報告。操作簡便，記錄并自動生成最終檢測報告。2. 設備因素設備因素儀器升級優(yōu)勢儀器升級優(yōu)勢S型 450波長 比色法X型 405波長 堿處理法廣州某醫(yī)院典型對比差異數(shù)據(jù)分析廣州某醫(yī)院典型對比差異數(shù)據(jù)分析X型儀器優(yōu)于S型儀器 試驗應在試驗應在無菌、無灰塵、無電流干擾和無震動無菌、無灰塵、無電流干擾和無震動的環(huán)境中進行，建的環(huán)境中進行，建 議使用生物安全柜。議使用生物安全柜。 試驗時應盡量試驗時應盡量避免陽光直接照射，試驗環(huán)境溫度

15、為避免陽光直接照射，試驗環(huán)境溫度為10-30。 試驗中使用的試驗中使用的所有器具和耗材均應符合無菌、無熱源要求所有器具和耗材均應符合無菌、無熱源要求。 操作者應有一定防護措施，至少應戴口罩、手套（不能有滑石操作者應有一定防護措施，至少應戴口罩、手套（不能有滑石 粉）、帽子和工作服。粉）、帽子和工作服。3.3.實驗條件實驗條件 使用無菌無熱原的真空血清采血管，公司推薦使用使用無菌無熱原的真空血清采血管，公司推薦使用BD真真空采血管?？詹裳?。 標本為標本為血清血清。 標本采集應無菌操作。標本采集應無菌操作。 按照按照3000r/min（1600g），），10min的規(guī)范方法分離血清。的規(guī)范方法分離血清。 黃疸、溶血和脂肪血黃疸、溶血和脂肪血視為特殊標本。視為特殊標本。4.4.標本要求標本要求Clin. Vaccine Immunol.-2011-Del Bono-2113-7G試驗對于念珠菌血癥的診斷似乎可靠，但需要仔細解釋其陽性或陰性結果，密切結合臨床10.Singh N，Paterson DL. Clin Microbiol Rev.200518：44-