凝聚胺交叉配血試驗PPT課件

1、目的目的：掌握凝聚胺交叉配血法的原理、方法。 原理原理：聚凝胺分子是帶高價陽離子多聚季銨鹽，溶解后帶有很多正電荷可以中和紅細(xì)胞表面負(fù)電荷，有利于紅細(xì)胞凝聚，低離子強度溶液也能降低紅細(xì)胞的Zeta電位 ，可進(jìn)一步增加抗原抗體間的吸引力。 當(dāng)血清中存在IgM或IgG類血型抗體時，與紅細(xì)胞發(fā)生緊密結(jié)合，此時加入枸櫞酸鹽解聚液以消除聚凝胺的正電荷，使IgM或IgG類血型抗體與紅細(xì)胞產(chǎn)生的凝集不散開；如果血清中不存在IgM或IgG類血型抗體，加入解聚液可使非特異性凝集消失。第1頁/共16頁試驗分步原理血清紅細(xì)胞懸液加入LIM混合液Polybrene受體血型抗原I g G 抗 體迅速致敏第2頁/共16頁試

2、驗分步原理Polybrene分子連接到紅細(xì)胞上加入Polybrene第3頁/共16頁試驗分步原理離心Polybrene拉近紅細(xì)胞間的距離并造成凝集1個IgG分子同時連接兩個紅細(xì)胞第4頁/共16頁試驗分步原理加入重懸液減弱了Polybrene的作用加重懸液第5頁/共16頁試驗分步原理已被血型抗體致敏的紅細(xì)胞不會散開陽性結(jié)果第6頁/共16頁試驗分步原理未被血型抗體致敏的紅細(xì)胞很快散開陰性結(jié)果第7頁/共16頁試劑試劑: 凝聚胺試劑盒；生理鹽水器材器材：小試管、滴管、試管架、記 號筆、顯微鏡、離心機。 標(biāo)本標(biāo)本：靜脈血。第8頁/共16頁操作操作 1. 取試管兩支，標(biāo)明主側(cè)次側(cè)，主側(cè)管加受血者血清(血漿

3、)1滴，和供血者35紅細(xì)胞懸液(洗滌或不洗滌均可)1滴，次側(cè)管受血者35紅細(xì)胞懸液(洗滌或不洗滌均可)l滴，加供血者血清(血漿)1滴。 2. 各加LIM溶液3滴，混合均勻后，再各加Polybrene溶液1滴，并混合均勻，置室溫1分鐘或參照說明書。 3普通離心機1000g離心15秒，然后把上清液倒掉，不要瀝干，讓管底殘留約0.1ml液體。第9頁/共16頁 4輕輕搖動試管，目測紅細(xì)胞有無凝集，如無凝集，則必須重作。 5最后加入Resuspending2滴，輕輕轉(zhuǎn)動試管混勻并同時觀察結(jié)果。 6. 結(jié)果判定：如果在30秒內(nèi)（或按說明書）凝集散開，代表是由Polybrene引起的非特異性聚集，配血結(jié)果相

4、合；如凝集不散開，則為紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)合的特異性反應(yīng)，配血結(jié)果不相合。如反應(yīng)可疑，可進(jìn)一步倒在玻片上用顯微鏡觀察。第10頁/共16頁 1.可以用含EDTA抗凝血漿代替血清使用。 2.若受血者血清(血漿)含肝素，如洗腎患者，須多加46滴Po1ybrene溶液以中和肝素。 3.試劑使用前請放置至室溫平衡后再行操作?！咀⒁馐马椬⒁馐马棥康?1頁/共16頁 4.在冬天室溫極低的情況下進(jìn)行交叉配血試驗操作，由于某些受血者血清中可能含有寒冷凝集素等因素，而導(dǎo)致假陽性的結(jié)果出現(xiàn)，建議進(jìn)行交叉配血試驗操作時室溫保持在22左右，最后滴加Resuspending時，將試管立即置入37水浴中，輕輕轉(zhuǎn)動試管混合，并在30秒內(nèi)觀察結(jié)果。 5不同的凝聚胺試劑盒操作方法各不相同，實驗時請嚴(yán)格按照說明書操作。第12頁/共16頁【方法學(xué)評價方法學(xué)評價】1. 凝聚胺介質(zhì)配血法反應(yīng)較鹽水法靈敏度高，能檢測幾乎所有規(guī)則與不規(guī)則血型抗體，適用于各類輸血患者的配血。2. 鹽水介質(zhì)配血法操作簡單、反應(yīng)快速，但只能發(fā)現(xiàn)完全抗體。3. 酶介質(zhì)配血法操作較為簡便，試劑便宜，靈敏度高；但費時，準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性差。第13頁/共16頁4.卡式配血（微柱凝膠法）已成為國際安全輸血檢查的推薦方法，該法具有：檢測項目全靈敏度高特異性強重復(fù)性好客觀性好節(jié)省樣品、試劑，結(jié)果易保存可自動化操作。不足之處是成本昂貴。 5