藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證

1、第三節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證 一、目的 證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求。 二、用途（一）藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證。（二）藥物生產(chǎn)方法變更、制劑的組分變更、原分析方法進(jìn)行修訂時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證。三、需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目 1. 鑒別試驗(yàn)； 2. 雜質(zhì)定量或限度檢查； 3. 原料或制劑中有效成分含量測(cè)定； 4. 制劑中其它成分（降解產(chǎn)物、防腐劑等）的測(cè)定； 5. 溶出度、釋放度等功能檢查中的溶出量等的測(cè)試方法。 四、驗(yàn)證內(nèi)容 驗(yàn)證內(nèi)容有：準(zhǔn)確度、精密度（重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專屬性、檢測(cè)限、定量限、線性、范圍和耐用性 （一） 準(zhǔn)確度（accuracy） 準(zhǔn)確度是指用該

2、方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，用百分回收率表示。 測(cè)定回收率r（recovery）的具體方法可采用“回收試驗(yàn)法”和“加樣回收試驗(yàn)法”。 回收試驗(yàn) 空白+已知量a的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定值為m%100amr空白回收率 加樣回收試驗(yàn) 已準(zhǔn)確測(cè)定藥物含量p的真實(shí)樣品+已知量a的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定值為m%100apmr 數(shù)據(jù)要求 規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備高、中、低三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次。1. 1. 含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度 原料藥原料藥可用已知純度的對(duì)照品或可用已知純度的對(duì)照品或樣品進(jìn)行測(cè)定，或用本法所得結(jié)果與樣品進(jìn)行測(cè)定，或用本法所得

3、結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果已建立準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。進(jìn)行比較。 制劑制劑可用含己知量被測(cè)物的各組可用含己知量被測(cè)物的各組分混合物進(jìn)行測(cè)定，即采用在空白輔分混合物進(jìn)行測(cè)定，即采用在空白輔料中加入原料藥對(duì)照品的方法。料中加入原料藥對(duì)照品的方法。 如不能得到制劑的全部組分，可如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測(cè)物進(jìn)行測(cè)向制劑中加入已知量的被測(cè)物進(jìn)行測(cè)定，或與另一個(gè)已建立準(zhǔn)確度的方法定，或與另一個(gè)已建立準(zhǔn)確度的方法比較結(jié)果。比較結(jié)果。 中藥分析的準(zhǔn)確度一般用加樣回中藥分析的準(zhǔn)確度一般用加樣回收試驗(yàn)衡量。中藥回收率一般要求在收試驗(yàn)衡量。中藥回收率一般要求在95

4、95105%105%范圍內(nèi)，有些方法操作步驟范圍內(nèi)，有些方法操作步驟繁多時(shí)，可要求在繁多時(shí)，可要求在9090110%110%范圍內(nèi)。范圍內(nèi)。rsdrsd一般在一般在2%2%以內(nèi)。以內(nèi)。 2 2雜質(zhì)定量測(cè)定的準(zhǔn)確度雜質(zhì)定量測(cè)定的準(zhǔn)確度 可向原料藥或制劑中加入已知量可向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。如果不能得到雜質(zhì)或雜質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。如果不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可用本法測(cè)定結(jié)果與另一降解產(chǎn)物，可用本法測(cè)定結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較。成熟的方法進(jìn)行比較。 （二）精密度（二）精密度（precisionprecision） 精精密度是指在規(guī)定條件下，同一個(gè)均勻密度是指在規(guī)定條件下，同一個(gè)均勻樣品，

5、經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間樣品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差（的接近程度。用偏差（d d）、標(biāo)準(zhǔn)偏差）、標(biāo)準(zhǔn)偏差( (sdsd) )、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差( (rsdrsd) )（變異系數(shù)，（變異系數(shù)，cvcv）表示。）表示。 偏差（d）：測(cè)量值與平均值之差xxdi相對(duì)偏差允許差：容量分析（中和法、非水滴定法、銀量法、絡(luò)合滴定法、重氮化法、氧化還原法）0.3%；重量法 0.5%；氧瓶燃燒法 0.5%；儀器分析 3%、凱氏定氮法 1%00bab-a00100100平均值平均值a標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（sd或s）12nxxsi相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（rsd），也稱變異系數(shù)（cv）%100 x

6、srsd 1. 1. 重復(fù)性重復(fù)性(repeatability):(repeatability):在在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測(cè)定相同條件下，由同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度；在規(guī)定的范圍內(nèi)，所得結(jié)果的精密度；在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用至少用9 9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備三次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次或把被測(cè)物個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次或把被測(cè)物濃度當(dāng)作濃度當(dāng)作100%100%，至少測(cè)，至少測(cè)6 6次進(jìn)行評(píng)價(jià)。次進(jìn)行評(píng)價(jià)。 2. 2. 中間精密度中間精密度 同一實(shí)驗(yàn)室，同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度。備所得結(jié)果的精密度

7、。 3. 3. 重現(xiàn)性重現(xiàn)性(reproducibility)(reproducibility)不不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測(cè)定結(jié)果同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。的精密度。 數(shù)據(jù)要求：需報(bào)告數(shù)據(jù)要求：需報(bào)告rdrd，rsdrsd和可和可信限。信限。 （三）檢測(cè)限（三）檢測(cè)限（limit of detectionlimit of detection， lodlod） 檢測(cè)限系指試樣在確定的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)限系指試樣在確定的實(shí)驗(yàn)條件下，被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低條件下，被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低濃度或含量。濃度或含量。 是限度檢驗(yàn)效能指標(biāo)，無需定是限度檢驗(yàn)效能指標(biāo)，無需定量測(cè)定，只要指出高于或低于該規(guī)量測(cè)

8、定，只要指出高于或低于該規(guī)定濃度即可。定濃度即可。 1 1非儀器分析目視法非儀器分析目視法 用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。 2 2信噪比法信噪比法 用于能顯示基線噪音的分析方法用于能顯示基線噪音的分析方法（儀器分析方法），是把已知低濃度（儀器分析方法），是把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測(cè)出號(hào)進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。一般以信噪比（的最低濃度或量。一般以信噪比（s/ns/n）3131或或2121時(shí)的相應(yīng)濃度或注入儀器時(shí)

9、的相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限。的量確定檢測(cè)限。 （1）空白值0時(shí)；測(cè)定背景10次以上，求出標(biāo)準(zhǔn)差b。將b乘以三倍；在工作曲線上求出3b相對(duì)應(yīng)的濃度xb；即為方法的檢出值；（2）空白值不等于0；測(cè)定背景10次以上，求出標(biāo)準(zhǔn)差b ；將b 乘以三倍；在工作曲線上求出3 b 相對(duì)應(yīng)的濃度xb ；將求得的對(duì)應(yīng)濃度值加上空白值即得該方法的檢出限。（四）定量限（1imit of quantitation，loq） 指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精密度要求。 常用信噪比法確定定量限，一般以信噪比（s/n）為101時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定，也可按1984年國際純粹和應(yīng)

10、用化學(xué)聯(lián)合會(huì)(ivpac)規(guī)定：用儀器所測(cè)空白背景響應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)差（sd）的10倍為估計(jì)值，再經(jīng)試驗(yàn)確定方法的實(shí)際測(cè)定下限。 儀器分析：通過測(cè)定一組空的樣品的背景信號(hào)后計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差s。以1os來估算定量限度。（以定量限度制備的樣品來驗(yàn)證） 非儀器分析：通過分析己知被測(cè)物濃度的樣品并確定一個(gè)樣品中被測(cè)物可被準(zhǔn)確和精密測(cè)定出的最低濃度（量）。 （五）專屬性（五）專屬性（specificity specificity ） （選擇（選擇性）：性）： 指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性，能反映該

11、方法在有共定出被測(cè)物的特性，能反映該方法在有共存物時(shí)對(duì)供試物準(zhǔn)確而專屬的測(cè)定能力，存物時(shí)對(duì)供試物準(zhǔn)確而專屬的測(cè)定能力，是指該法用于復(fù)雜樣品分析時(shí)是否受到相是指該法用于復(fù)雜樣品分析時(shí)是否受到相互干擾程度的度量?；ジ蓴_程度的度量。 通常通過分析含有加了雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、有關(guān)化學(xué)物質(zhì)或安慰劑成分的樣品，將所獲分析結(jié)果與未加前述成分之樣品的測(cè)試結(jié)果進(jìn)行比較，兩組測(cè)試結(jié)果之差即專屬性。1鑒別反應(yīng) 應(yīng)能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)別，不含被分析的樣品，以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物，均應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)。2含量測(cè)定和雜質(zhì)測(cè)定 色譜法和其他方法，應(yīng)附代表性圖譜，亦說明專屬性。圖中應(yīng)標(biāo)明各組份的位置，色譜法中的

12、分離度應(yīng)符合要求。 （六） 線性（linearity） 在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。 線形通常用最小二乘法處理數(shù)據(jù)求得回歸曲線的斜率（slope）來表示。數(shù)據(jù)要求：至少需要五個(gè)濃度考察線形，需提供相關(guān)系數(shù)、y截距（是檢定的可能偏差）、回歸斜率及方差等參數(shù)，應(yīng)列出回歸方程數(shù)和線性圖。 （七）范圍（range）： 指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性的條件下，測(cè)試方法適用的高、低限濃度或量的區(qū)間。 范圍的確定可因測(cè)定項(xiàng)目不同而有不同要求： 含量測(cè)定范圍為80%-120%；含量均勻度范圍為70%-130%；雜質(zhì)測(cè)定應(yīng)為被測(cè)雜質(zhì)限度的50%-120%；溶出度應(yīng)為測(cè)定范圍的

13、20%。 （八）（八） 耐用性耐用性 指測(cè)定條件稍有變動(dòng)時(shí)，指測(cè)定條件稍有變動(dòng)時(shí)，結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗(yàn)提結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。是衡量實(shí)驗(yàn)室和工作人員之間在供依據(jù)。是衡量實(shí)驗(yàn)室和工作人員之間在正常情況下實(shí)驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性的尺度。正常情況下實(shí)驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性的尺度。 分析方法重現(xiàn)性的測(cè)定是通過在不同分析方法重現(xiàn)性的測(cè)定是通過在不同的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不同的實(shí)驗(yàn)者對(duì)同一樣品的分的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不同的實(shí)驗(yàn)者對(duì)同一樣品的分別測(cè)試而獲得的。（獲得的這種再與正常別測(cè)試而獲得的。（獲得的這種再與正常檢定下的精密度進(jìn)行比較，從而確定該法檢定下的精密度進(jìn)行比較，從而確定該法的耐用性，或稱粗放度）的耐用

14、性，或稱粗放度） （九）應(yīng)用（九）應(yīng)用 1. 1. 鑒別試驗(yàn)除專屬性、耐用性外，其鑒別試驗(yàn)除專屬性、耐用性外，其它都不要求。它都不要求。 2. 2. 雜質(zhì)的限量檢查除專屬性、檢測(cè)限、雜質(zhì)的限量檢查除專屬性、檢測(cè)限、耐用性外，其它都不要求。耐用性外，其它都不要求。 雜質(zhì)的含量測(cè)定除檢測(cè)限外，其它雜質(zhì)的含量測(cè)定除檢測(cè)限外，其它都要求。都要求。 3. 含量測(cè)定及溶出量測(cè)定除檢測(cè)限、含量測(cè)定及溶出量測(cè)定除檢測(cè)限、定量限外，其它都要求。定量限外，其它都要求。（十）各種含量測(cè)定方法對(duì)效能指標(biāo)的要（十）各種含量測(cè)定方法對(duì)效能指標(biāo)的要求求 1. 1. 容量分析法：用原料藥精制品容量分析法：用原料藥精制品( (

15、含量含量99.599.5) )或?qū)φ掌房疾旆椒ǖ木芏?，相或?qū)φ掌房疾旆椒ǖ木芏?，相?duì)標(biāo)準(zhǔn)差一般應(yīng)不大于對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差一般應(yīng)不大于0.20.2；進(jìn)行回收；進(jìn)行回收率試驗(yàn)。率試驗(yàn)?；厥章室话阍诨厥章室话阍?9.799.7100.3100.3之之間間。 2. uv2. uv法：用適當(dāng)濃度的精制品進(jìn)行法：用適當(dāng)濃度的精制品進(jìn)行測(cè)定，其測(cè)定，其rsdrsd一般不大于一般不大于1 1。制劑的。制劑的測(cè)定，回收率一般應(yīng)在測(cè)定，回收率一般應(yīng)在9898102102之間。之間。 線性：吸光度線性：吸光度a a一般在一般在0.20.20.70.7，濃度點(diǎn)濃度點(diǎn)n n5 5。用濃度。用濃度c c對(duì)對(duì)a a作線性回歸作線

16、性回歸處理，得一直線方程，處理，得一直線方程，r r應(yīng)達(dá)到應(yīng)達(dá)到0.9999(n0.9999(n5)5)，方程的截距應(yīng)近于零。，方程的截距應(yīng)近于零。 3. hplc3. hplc法：要求法：要求rsd2rsd2，回收率回收率9898102102之間。之間。 線性范圍：用精制品配制一系線性范圍：用精制品配制一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度點(diǎn)列標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度點(diǎn)n n應(yīng)為應(yīng)為5 57 7，用，用濃度濃度c c對(duì)峰高對(duì)峰高h(yuǎn) h或被測(cè)物的響應(yīng)值之比或被測(cè)物的響應(yīng)值之比進(jìn)行回歸處理，建立回歸方程，進(jìn)行回歸處理，建立回歸方程，r r應(yīng)應(yīng)大于大于0.9990.999，截距應(yīng)趨于零。，截距應(yīng)趨于零。99：73. 精密度是

17、指（b） a. 測(cè)得的測(cè)量值與真值接近的程度 b. 測(cè)得的一組測(cè)量值彼此符合的程度 c. 表示該法測(cè)量的正確性 d. 在各種正常試驗(yàn)條件下，對(duì)同一樣品分析所得結(jié)果的準(zhǔn)確程度 e. 對(duì)供試物準(zhǔn)確而專屬的測(cè)定能力99x：76精密度是指該法（d） a. 測(cè)得的測(cè)量值與真值接近的程度 b. 測(cè)得的測(cè)量值與回收率接近的程度 c. 測(cè)量的正確性 d. 測(cè)得的一組測(cè)量值彼此符合的程度 e. 對(duì)供試物準(zhǔn)確而專屬的測(cè)定能力 96：138在藥物分析中，精密度是表示該法的（bd） a. 測(cè)量值與真值接近程度 b. 一組測(cè)量值彼此符合程度 c. 正確性 d. 重現(xiàn)性 e. 專屬性 95：106110應(yīng)要求的效能指標(biāo)：

18、 a. 檢測(cè)限 b. 定量限 c. 兩者均要求 d. 兩者均不要求95：106. 含量測(cè)定方法評(píng)估（d）95：107. 雜質(zhì)限量檢查（a）95：108. 雜質(zhì)定量測(cè)定（b）95：109. 溶出度測(cè)定（d）95：110. 中間體含量測(cè)定（d）97：126藥物雜質(zhì)檢查所要求的效能指標(biāo)為（cde） a. 準(zhǔn)確度 b. 精密度 c選擇性 d. 檢測(cè)限 e. 耐用性 98：138評(píng)價(jià)藥物分析所用的測(cè)定方法的效能指標(biāo)有（bcd） a. 含量均勻度 b. 精密度 c. 準(zhǔn)確度 d. 粗放度 e. 溶出度例例1155a a精密度精密度 b b定量限定量限c c兩者皆是兩者皆是 d d兩者皆不是兩者皆不是1. 某法測(cè)得一組測(cè)量值間彼此符合程度（a）2. 測(cè)量值和真值接近的程度（d）3. 測(cè)定結(jié)果的