hbv基因與耐藥檢測檢驗(yàn)科版

1、產(chǎn)品經(jīng)理 吳 勇hbvhbv分型和耐藥突變基因檢測分型和耐藥突變基因檢測產(chǎn)品經(jīng)理 吳 勇一、基因芯片原理及特點(diǎn)一、基因芯片原理及特點(diǎn)二、二、hbvhbv分型與耐藥突變基因檢測產(chǎn)品簡介分型與耐藥突變基因檢測產(chǎn)品簡介三、亞能三、亞能hbvhbv分型與耐藥突變基因檢測的運(yùn)用及臨床意義分型與耐藥突變基因檢測的運(yùn)用及臨床意義四、亞能四、亞能hbvhbv分型與耐藥突變檢測產(chǎn)品優(yōu)勢分型與耐藥突變檢測產(chǎn)品優(yōu)勢一、基因芯片原理及特點(diǎn)一、基因芯片原理及特點(diǎn)基因芯片基因芯片(gene chip)(gene chip)：是多種特定的寡核苷酸序列為探針，固定于支持物表面上而成的二維dna陣列?；驹恚夯驹恚豪脡A

2、基互補(bǔ)配對原則，通過目的dna與探針特異結(jié)合來判斷目的dna的序列信息。 pcr+反向點(diǎn)雜交（rdb）基因芯片原理基因芯片原理基因芯片技術(shù)特點(diǎn)基因芯片技術(shù)特點(diǎn)u 高靈敏度高靈敏度pcrpcru 高特異性高特異性-核酸分子雜交核酸分子雜交u 高通量高通量-膜芯片上排列多種探針膜芯片上排列多種探針u 結(jié)果易判讀結(jié)果易判讀-化學(xué)顯色化學(xué)顯色 二、二、hbvhbv分型與耐藥突變基因檢測產(chǎn)品簡介分型與耐藥突變基因檢測產(chǎn)品簡介乙型肝炎病毒分型和耐藥突變基因檢測試劑盒乙型肝炎病毒分型和耐藥突變基因檢測試劑盒 （pcr-pcr-反向點(diǎn)雜交法）反向點(diǎn)雜交法）注冊號：國食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字注冊號：國食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字2

3、0112011第第34011773401177號號專利號：專利號：zl200710073933.3zl200710073933.3國內(nèi)首個全面提示核苷（酸）類藥物耐藥的快速診斷試劑國內(nèi)首個全面提示核苷（酸）類藥物耐藥的快速診斷試劑 pcr pcr擴(kuò)增：擴(kuò)增：在s基因和p基因重疊區(qū)段設(shè)計pcr引物，pcr擴(kuò)增片段既包含耐藥突變位點(diǎn)又能進(jìn)行基因分型。p p基因：耐藥突變檢測基因：耐藥突變檢測編碼dna合成酶（包含逆轉(zhuǎn)錄酶rt），抗病毒藥物作用靶區(qū)，耐藥基因突變熱點(diǎn)區(qū)s s基因：分型檢測基因：分型檢測技術(shù)原理技術(shù)原理采集樣本采集樣本雜交雜交顯色顯色結(jié)果判讀結(jié)果判讀0.5小時小時3小時小時1.5小時小

4、時提取提取dnapcr擴(kuò)增擴(kuò)增操作流程操作流程全程僅需全程僅需6 6小時小時儀器名稱儀器名稱參數(shù)及要求參數(shù)及要求臺式高速離心機(jī) 轉(zhuǎn)速13000rpm，轉(zhuǎn)子規(guī)格：1.5ml冰箱雙溫區(qū)：4/-18；雙門 移液器1-10l,10-100l, 100-1000l干式恒溫器孔徑：1.5 ml；控溫范圍：室溫+5-100pcrpcr儀儀0.2 ml，48或96孔分子雜交儀分子雜交儀控溫范圍：環(huán)境溫度+5-100，可調(diào)；精度：0.1檢測儀器檢測儀器試劑盒性能指標(biāo)試劑盒性能指標(biāo)準(zhǔn)確性準(zhǔn)確性：檢測105例臨床慢性hbv感染陽性樣本，結(jié)果與測序比較顯示為相同的 基因型和耐藥突變類型，準(zhǔn)確率為100%。特異性特異性

5、：檢測50例臨床hbv陰性樣本結(jié)果全部為陰性；檢測非hbv感染性病原體dna，包括c型肝炎病毒（hcv）和hiv，結(jié)果均為陰性。靈敏度靈敏度：能檢測血清hbv的最低檢出限為1.0103iu/ml。精密度精密度：檢測2.0103iu/ml的血清hbv，批內(nèi)和批間的一致性好。穩(wěn)定性穩(wěn)定性：產(chǎn)品有效期為6 6個月個月，在有效期內(nèi)產(chǎn)品性能穩(wěn)定。本產(chǎn)品檢測的樣本為本產(chǎn)品檢測的樣本為血清或血漿血清或血漿；要求待檢樣本的要求待檢樣本的hbv dnahbv dna載量載量1.01.010103 3copies/mlcopies/ml。樣本要求樣本要求樣本保存樣本保存為了避免為了避免dnadna降解，制備好的血

6、清或血漿，避免長時間室溫放置；降解，制備好的血清或血漿，避免長時間室溫放置；2 288保存不超過保存不超過4848小時；小時；-18-18以下保存不超過半年，避免反復(fù)凍融。以下保存不超過半年，避免反復(fù)凍融。注意事項注意事項三、三、亞能亞能hbvhbv分型與耐藥突變基因檢測分型與耐藥突變基因檢測的運(yùn)用及臨床意義的運(yùn)用及臨床意義亞能亞能hbvhbv產(chǎn)品應(yīng)用產(chǎn)品應(yīng)用抗病毒治療前、治療中抗病毒治療前、治療中hbvhbv的基因分型和耐藥突變基因檢測的基因分型和耐藥突變基因檢測u 區(qū)分我國常見的區(qū)分我國常見的hbv-bhbv-b、c c、d d基因型基因型u 涵蓋我國涵蓋我國4 4種核苷（酸）抗病毒藥物（

7、拉米夫定、阿德福韋酯、種核苷（酸）抗病毒藥物（拉米夫定、阿德福韋酯、 替比夫定、恩替卡韋）替比夫定、恩替卡韋）7 7個耐藥位點(diǎn)的個耐藥位點(diǎn)的1616種突變：種突變：rtl180mrtl180m、rtm204v/rtm204v/i i、rta181v/trta181v/t、rtn236trtn236t、rtm250rtm250i i/l/v/l/v、rts202g/rts202g/i i、rtt184rtt184i i/s/a/f/l/s/a/f/l。hbvhbv基因型檢測臨床意義基因型檢測臨床意義u hbeag hbeag陽性患者中，陽性患者中，b b基因型對基因型對ifn-ifn-治療的應(yīng)答

8、率高于治療的應(yīng)答率高于c c基因基因 型，型，a a基因型高于基因型高于d d基因型?；蛐汀 與與c c基因型感染者相比，基因型感染者相比，b b基因型感染者較早出現(xiàn)基因型感染者較早出現(xiàn)hbeaghbeag血清學(xué)血清學(xué) 轉(zhuǎn)換，較少進(jìn)展為慢性肝炎、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌；轉(zhuǎn)換，較少進(jìn)展為慢性肝炎、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌；預(yù)測干擾素應(yīng)答和疾病進(jìn)展情況預(yù)測干擾素應(yīng)答和疾病進(jìn)展情況慢性乙型肝炎防治指南（慢性乙型肝炎防治指南（20102010年）年）hbvhbv耐藥檢測臨床意義耐藥檢測臨床意義u抗病毒治療前，預(yù)存耐藥檢測抗病毒治療前，預(yù)存耐藥檢測 協(xié)助臨床選擇合理抗病毒藥物，實(shí)現(xiàn)個體化抗病毒治療、提

9、高抗病毒療效、降低耐藥發(fā)生率。u 抗病毒治療中，全程耐藥監(jiān)測抗病毒治療中，全程耐藥監(jiān)測 全程監(jiān)測耐藥，利于早期挽救治療，為調(diào)整治療方案提供理論支持。全程監(jiān)測耐藥，為調(diào)整治療方案提供理論依據(jù)全程監(jiān)測耐藥，為調(diào)整治療方案提供理論依據(jù)四、亞能四、亞能hbv分型耐藥突變分型耐藥突變檢測產(chǎn)品優(yōu)勢檢測產(chǎn)品優(yōu)勢全基因序列測定全基因序列測定法法限制性片段長度多態(tài)性限制性片段長度多態(tài)性分析法（分析法（rflprflp）實(shí)時熒光實(shí)時熒光pcrpcr法法亞能亞能hbv hbv 基因芯片基因芯片靈敏靈敏度度靈敏度低，最低檢測限為20%；靈敏，最低檢測限為5%；靈敏，最低檢測限為5%；靈敏，最低檢測限為5%；檢測檢測位

10、點(diǎn)位點(diǎn)所有突變位點(diǎn)已知耐藥位點(diǎn)僅能檢測rt204位點(diǎn)我國4種核苷類藥物7個耐藥位點(diǎn)的16種突變評價評價1、測序試劑大多未獲得sfda批準(zhǔn)；2、操作繁瑣、技術(shù)難度大、儀器要求高、不易在臨床開展。1、需針對每一個待測突變位點(diǎn)，分別設(shè)計特異性內(nèi)切酶反應(yīng)體系；2、一些突變可能生成新的酶切位點(diǎn)，或破壞原有酶切位點(diǎn)，必須謹(jǐn)慎看待檢測結(jié)果。結(jié)果僅提示拉米夫定耐藥。1、是首個獲得sfda批準(zhǔn)的，同時進(jìn)行hbv分型、耐藥檢測的試劑盒；2、準(zhǔn)確性好、6小時出結(jié)果、結(jié)果肉眼可見。儀器要求低，操作便捷、易于臨床使用。hbvhbv耐藥檢測產(chǎn)品比較耐藥檢測產(chǎn)品比較亞能亞能hbvhbv分型與耐藥突變檢測優(yōu)勢分型與耐藥突變檢

11、測優(yōu)勢u 高高 效效：sfda批準(zhǔn)，國內(nèi)首個hbv分型與耐藥突變基因同時檢測的試劑盒；u 檢測位點(diǎn)廣檢測位點(diǎn)廣：能檢測我國 4種核苷（酸）抗病毒藥物（拉米夫定、 阿德福韋酯、替比夫定、恩替卡韋）7個耐藥位點(diǎn)的16種突變；u 靈敏度高靈敏度高： 1.0103iu/ml，最低檢測限為5%；u 快快 速速：6小時即可完成檢測；u 易易 用用：操作簡易、結(jié)果可直接讀取，設(shè)備要求低，易于臨床使用。 國內(nèi)首個全面提示核苷（酸）類藥物耐藥的快速診斷試劑；國內(nèi)首個全面提示核苷（酸）類藥物耐藥的快速診斷試劑；6h6h全面呈現(xiàn)：全面呈現(xiàn)：4 4種核苷（酸）相關(guān)的種核苷（酸）相關(guān)的7 7個耐藥位點(diǎn)個耐藥位點(diǎn)1616種突變，區(qū)分種突變，區(qū)分hbv- bhbv- b、c c、d d三種基因型；三種基因型；全程監(jiān)測耐藥