流感實驗室SOP

1、流感網(wǎng)絡實驗室標準操作程序(SOP)文件編制：文件編號： HZCDC/LG/SOP發(fā)布日期： 2009 年 12 月 15 日 有效版本：第 1 版受控狀態(tài)：受控號：批準人：標準操作程序目錄文件編號HZCDC/LG/SOP/013HZCDC/LG/SOP/025HZCDC/LG/SOP/036HZCDC/LG/SOP/048HZCDC/LG/SOP/0510HZCDC/LG/SOP/0614HZCDC/LG/SOP/0715HZCDC/LG/SOP/0817HZCDC/LG/SOP/0919HZCDC/LG/SOP/1022HZCDC/LG/SOP/11文件名稱 頁碼實驗室管理制度 人員管理與

2、培訓制度 儀器設備管理制度 檔案管理制度 標本的采集、運送與保存 標本的接受、登記和處理 實驗室清理與消毒 廢棄物消毒處理 個體防護與生物安全 生物安全柜的使用與維護 離心機的使用與維護241HZCDC/LG/SOP/1226HZCDC/LG/SOP/1328HZCDC/LG/SOP/1431HZCDC/LG/SOP/1532HZCDC/LG/SOP/1634HZCDC/LG/SOP/17HZCDC/LG/SOP/1840HZCDC/LG/SOP/1942HZCDC/LG/SOP/2044HZCDC/LG/SOP/2147HZCDC/LG/SOP/22普通冰箱的使用與維護移液器的使用與維護程序

3、振蕩器的使用與維護低溫冰柜的使用與維護高壓滅菌器的使用與維護ABI SteponePlus TM Real-Time PCRSystem的使用與維護 36ABI RT-PCR 儀 9700 型的使用與維護凝膠成像系統(tǒng)的使用與維護CO2 培 養(yǎng) 箱 的 使 用 與 維 護顯微鏡的使用與維護核酸提取標準操作程序51HZCDC/LG/SOP/24MDCK細胞培養(yǎng)56HZCDC/LG/SOP/25細胞的凍存與復蘇HZCDC/LG/SOP/23Real Time-PCR 操 作 方 法5927標準操作程序文件編號：HZCDC/LG/SOP/01第1頁共2頁實驗室管理制度第1版頒布日期：2009年12月1

4、5日1目的規(guī)范實驗室的日常管理。2范圍適用于流感網(wǎng)絡實驗室。3責任人實驗室所有工作人員。4任務4.1培訓縣級疾控中心送檢標本的安全采集和運送環(huán)節(jié)。4.2 每年接受國家流感核酸標本考核工作。4.3對流感散發(fā)、爆發(fā)病例及稍點醫(yī)院送檢流感咽拭子標本進行PCR檢測，并在三個工作日內報告結果，做好標本的登記和送檢工作4.4開展流感病毒毒株細胞分離培養(yǎng)工作。4.5組織開展正常人群流感抗體的免疫水平監(jiān)測工作。4.6做好流感實驗室內儀器的使用記錄，并定期檢查維護儀器。4.7做好流感實驗室內檔案管理工作。5. 內容5.1實驗室人員檔案與設備檔案分別保存于實驗室及質量科檔案柜中，并由專人管理5.2 實驗室工作人員

5、應符合人員管理與培訓制度中的要求與 規(guī)定。5.3 嚴格按照設備管理制度對所用儀器進行管理。5.4 實驗室工作人員應嚴格按照標本的采集與保存 、標本的 接收、登記和處理的要求與規(guī)定進行實驗操作。5.5 實驗室工作人員應熟知個體防護與生物安全措施。5.6 實驗室工作人員在實驗前、 實驗中和實驗后均應嚴格按照 實 驗室的清理與消毒制度對實驗室進行清理與消毒。5.7 實驗室工作人員對于流感抗體檢測的結果與報告應嚴格執(zhí)行 保密程序。5.8 實驗室工作人員應認真做好實驗過程中所涉及的各項記錄工 作。5.9 實驗室工作人員應每半年至一年進行一次健康狀況記錄。標準操作程序文件編號：HZCDC/LG/SOP/0

6、2第1頁共2頁人員管理與培訓制度第1版頒布日期：2009年12月15日1目的保證實驗室充分的技術支持，嚴格實驗室人員管理。2范圍適用于流感實驗室工作人員。3責任人科室負責人。4內容4.1實驗室目前由1名高級衛(wèi)生技術職稱、2名中級衛(wèi)生技術職稱 和2名初級衛(wèi)生技術職稱的檢驗人員，均接受過省疾病預防控制中心 的技術培訓，并獲得合格證書。4.2科室負責人應了解所有工作人員。在安排工作區(qū)域時，要根 據(jù)人員的工作種類和所涉及的生物材料，對實驗室環(huán)境做安全檢查。4.3新調入、外來合作、進修、實習的人員在進入實驗室之前須 經(jīng)過科室負責人的批準。4.4對新上崗人員實驗室工作的潛在危險，進行安全教育。4.5在崗工

7、作人員須參加本科室的業(yè)務學習每月1-2次。4.6在崗工作人員每年參加省級以上繼續(xù)教育學習至少1次。4.7每年舉辦科內業(yè)務講座1-2次。4.8實驗室每年發(fā)表專業(yè)論文或業(yè)務總結至少1篇。4.9執(zhí)行實驗室工作人員年度采咽拭子檢測流感抗體和備案制度，工作人員咽拭子標本應長期保留標準操作程序文件編號：HZCDC/LG/SOP/03第1頁共2頁儀器設備管理制度第1版頒布日期：2009年12月15日1.目的妥善管理儀器設備并保證其良好的運轉設備管理制度。2. 范圍適用于流感網(wǎng)絡實驗室備案儀器設備。3. 責任人科室負責人。4. 內容4.1對于儀器設備的一般情況進行登記，包括：名稱、制造商、型號、序號、接收日期

8、、啟用日期、目前放置地點、接收狀態(tài)（全新、改裝等），填寫儀器設備一覽表。4.2儀器設備的說明書復印件及校準資料，存放于設備檔案 文件中，由質量管理科保管。4.3儀器設備的使用、維修須及時填寫儀器使用記錄和設 備維護記錄。4.4有問題的儀器設備加貼明顯的紅色停用標識，標識上應有停用日期及原因。可搬動的儀器移至質管科報修，不可移動的設備原地 待修，直至修復校驗后重新標識。4.5 儀器設備的報廢處理：因使用壽命、損壞、故障導致儀器設 備不能滿足檢測需要時，該設備即行報廢。由管理人員填寫報廢申請， 科室質量負責人核實，質管科批準后由質量負責人在設備檔案中簽名 注銷。4.6 儀器設備實行嚴格的分區(qū)專用。

9、標準操作程序文件編號：HZCDC/LG/SOP/04第1頁共2頁檔案管理制度第1版頒布日期：2009年12月15日1.目的妥善管理各種資料。2. 范圍。凡在流感檢測業(yè)務管理、技術操作等活動中形成的檔案和資料， 包括檢測樣品卡、各類檢測原始記錄、各類檢驗報告、儀器使用記錄、 實驗室工作人員健康體檢記錄及質量申訴意見的函文等，都屬于本制 度的管理范圍。3責任人適用于流感實驗室檔案管理員。4內容4.1流感抗體檢測實驗室要有專人負責妥善保存各種實驗記錄、 感染者檔案，不得擅自修改和銷毀。嚴格保密制度，未經(jīng)省級衛(wèi)生行 政部門許可，不得向無關人員和單位提供任何情況。4.2 實驗室要指定專人負責實驗室檔案的

10、管理工作，實驗室對工 作檔案要按內容進行編目整理、歸檔保存。4.3 每位實驗室人員都有責任認真主動做好材料的收集和整理工 作，并及時提供給實驗室檔案管理人。4.4 若實驗室撤消或合并，應及時做好工作檔案的移交工作，以 保持檔案的完整性和連續(xù)性。5. 實驗室工作檔案內容5.1 實驗室規(guī)劃、建設的各種文件和資料。5.2 實驗室各類工作人員的姓名、性別、年齡、職稱、專業(yè)分工、 獎懲、培訓等。5.3 實驗室培訓過程中各種文件和資料 ,包括 :培訓的相關書籍 及光盤等。5.4 儀器設備的說明書、維修記錄、技術檔案和開機使用記錄及 大型設備管理人員名單等。5.5 實驗室工作的各種統(tǒng)計報表。5.6 上級主管

11、部門下發(fā)的實驗室建設與管理文件和本實驗室制定 的規(guī)章制度。6. 保存6.1 要妥善保存檢測記錄和各種檔案， 不得擅自修改和銷毀。 記錄 保存期不少于 10 年，國家法律、 法規(guī)另有規(guī)定的， 依照有關規(guī)定執(zhí)行， 特殊情況需長期保存的另立冊存檔。6.2 超過保存期的檢測資料需銷毀時，要列出銷毀清單，科長復 核、簽名報中心質量保證負責人審批后銷毀。標準操作程序文件編號：HZCDC/LG/SOP/05第1頁共4頁標本的采集、運送和保存第1版頒布日期：2009年12月15日1. 目的正確使用采集、運送與使用的方法，保證采集的標本符合檢測條件。2. 范圍適用于流感網(wǎng)絡實驗室。3. 責任人實驗室工作人員。4

12、. 程序4.1生物安全要求采集疑似人高致病性流感病例和不明原因肺炎病 人呼吸道標本時，采集人員需以BSL-3級防護；一般流感樣病例，呼吸道 標本的采集以BSL-2級防護。具體參見“生物安全個人防護SOP。4.2材料421無菌拭子：聚丙烯纖維頭的拭子422 15 mL離心管423常用的采樣液配制：常用的上呼吸道采樣液有： pH7.47.6 的Hanks或MEM液400mL。加入慶大霉素(50 mg/mL)0.8mL，多粘菌 B(250/mL)3.2mL。加入抗菌素以后重新調節(jié)pH值為7.4，配制好以 后，分裝每個采樣管23mL , -20 C凍存。4.2.4壓舌板4.3實驗步驟4.3.1采集呼吸

13、道標本 呼吸道標本：包括鼻拭子、咽拭子、鼻咽抽 提物、鼻洗液、咽漱液。最佳采集時間為發(fā)病后的前 3天，不超過7天。(1) 鼻拭子：采集者左手扶住患者的下頜部，右手持無菌拭子輕 輕插入鼻道內鼻腭處，停留片刻后緩慢轉動退出。以另一拭子擦拭另 側鼻孔。將拭子頭浸入采樣液中，在采樣液中擠壓拭子頭部數(shù)次，用 力折斷拭子的尾部，將拭子的尾部棄去。(2) 咽拭子：左手用壓舌板壓住患者的舌頭。右手持無菌拭子擦 拭雙側咽扁桃體及咽后壁，將拭子頭浸入采樣液中，在采樣液中擠壓 拭子頭部數(shù)次，用力折斷拭子的尾部，將拭子的尾部棄去。亦可將鼻、 咽拭子收集 于同一采樣管中。（3）漱口液：用10mL生理鹽水漱喉。漱時讓患者

14、頭部微后仰，發(fā) “噢”聲讓生理鹽水在咽部轉動。然后，用平皿或燒杯收集洗液。（4 ）鼻洗液：讓患者取坐姿，頭微后仰，用移液管將 5 mL生理 鹽水注入一 側鼻孔，囑患者同時發(fā)K音以關閉咽腔。然后讓患者低 頭使生理鹽水流出，用平皿或燒杯收集洗液。重復此過程洗兩側鼻 孔。（5）鼻咽抽取物：常用于采集氣管和支氣管分泌物。將真空泵 與導尿管相連。將導尿管插入鼻腔與上腭平行，打開真空裝置，緩 慢做漩渦運動，同樣收集另外一個鼻孔。用采樣液 3mL涮洗導尿管。432將米集好的標本注明：編號，標本種類，米集日期。433采集好的標本24h內放置4 C保存。標準操作程序文件編號：HZCDC/LG/SOP/06第1頁

15、共1頁標本的接收、登記和處理第1版頒布日期：2009年12月15日1. 目的嚴格標本接收的查對制度，保證檢測結果的準確性。2. 范圍適用于流感網(wǎng)絡實驗室。3. 責任人實驗室工作人員。4. 內容4.1對轄區(qū)內的送檢標本進行嚴格的查對和驗收，編號前，工作人 員應認真查對姓名、性別、年齡、家庭住址、身份證號碼、聯(lián)系方式 等并認真填寫流感標本接收記錄一覽表。4.2對嚴重污染標本應做記錄，需重新米集標本者應正確及時地重 新采樣，以免延誤病人檢測的結果報告。4.3對書寫不清楚的申請單，當事者要及時與檢驗人員聯(lián)系（可電話），明確受檢者姓名、性別、年齡、登記號碼和檢驗項目等。4.4所需標本類型為鼻、咽拭子標本

16、放運送液。4.5下級送檢來的標本要與送檢單分開放，送檢單一定要認真仔細 地填寫完整，樣本要合格并切要達到所需的量。標準操作程序文件編號：HZCDC/LG/SOP/07第1頁共2頁實驗室清理與消毒第1版頒布日期：2009年12月15日1. 目的避免實驗室污染，確保人員健康與結果準確。2. 范圍流感網(wǎng)絡實驗室。3. 責任人實驗室工作人員。4. 內容4.1根據(jù)衛(wèi)生部消毒技術規(guī)范的要求和規(guī)定，本實驗室選用消 毒液為有效氯溶液，根據(jù)不同的情況使用不同的濃度。4.2流感檢測實驗室消毒液配制。4.2.1 實驗室消毒液應即用即配，本實驗室使用含氯消毒劑。4.2.2 物體表面消毒液：濃度為 500mg L。4.

17、2.3 地面消毒液：濃度為 1000mg L；4.2.4 生物廢棄物消毒液：濃度為 10000mg L。4.2.5 物體表面的消毒 :桌椅等每天開始工作前用濕布抹擦一次 ,下 班時用500mg/L有效氯溶液抹擦一次。地面用濕拖把拖擦一次，下班 時用1000mg / L有效氯溶液拖擦。禁止干抹干掃，抹布和拖把等清潔 工具各科室專用，不得混用，用后洗凈晾干。4.2.6 儀器表面和工作臺面用紫外線消毒照射消毒或 75酒精消 毒。4.2.7 若被明顯污染，如標本外溢、濺潑或器皿打破、灑落于表面，應立即用10000mg / L有效氯溶液灑于污染表面，并使消毒液浸過污 染物表面，保持30 60分鐘再擦。拖

18、把用后浸于lOOOOmg / L有效氯 溶液內至少 1 小時。428若己知被陽性標本污染，應用lOOOOmg /L有效氯溶液擦拭, 消毒至少 30分鐘 。4.3空氣消毒：紫外線照射至少30分鐘或75%酒精噴霧消毒。4.4實驗前對實驗室進行至少30分鐘的紫外線照射并通風。4.5實驗結束后使用500mg / L的有效氯溶液對各區(qū)實驗臺面、地 面和進行擦洗。然后打開室內、移動紫外燈照射并打開通風設備通風 至少30分鐘。標準操作程序文件編號：HZCDC/LG/SOP/08第1頁共2頁廢棄物消毒處理第1版頒布日期：2009年12月15日1. 目的防止污染廢物造成的交叉感染及環(huán)境污染。2. 范圍流感網(wǎng)絡實

19、驗室檢測后的全部污染廢物及剩余標本和試劑盒剩余 廢棄物品。3. 責任人實驗室工作人員。4. 處理方法4.1 廢棄物處置應符合實驗室生物安全通用要求（ GB 19489-2004 ）和消毒技術規(guī)范（ 2002 年版）。對實驗室用過的全 部廢棄物品，包括剩余血樣標本，留樣標本分離血清后剩余的血凝塊， 剩余廢棄的試劑盒陽性對照血清，用過的酶標反應板，吸頭，一次性 隔離衣，手套等置于一次性醫(yī)源垃圾污物袋中，用 HI V 專用的全自動 高壓消毒鍋121 C高壓消毒30min后，裝袋于焚燒爐中徹底焚燒后填寫 一次性醫(yī)療廢物銷毀記錄。4.2對實驗室環(huán)境、臺面、地面可用2%o -5%o過氧乙酸、次氯酸鈉（含

20、有效氯2000-5000mg/L ）、75%乙醇和2%戊二醛，保持10-30min，實 驗用金屬器械用70%-75%的乙醇浸泡30min。4.3 對生物安全柜的消毒遵照生物安全柜的使用說明處理。4.4對實驗廢液的消毒處理：ELISA法檢測中洗板機廢液瓶中的廢 液，加入含氯消毒劑使次氯酸鈉含量達到 5000mg/L ，混勻后放置 30min 以上，再棄入污水池中。禁止在工作狀態(tài)下于廢液瓶中加入揮發(fā)性消 毒劑，以免揮發(fā)性酸、堿氣體吸入機器內腐蝕損壞儀器。標準操作程序文件編號：HZCDC/LG/SOP/09第1頁共3頁個體防護與生物安全第1版頒布日期：2009年12月15日1.目的保證實驗室和工作人

21、員的安全與健康2. 范圍流感網(wǎng)絡實驗室。3. 責任人實驗室工作人員4. 內容：4.1 實驗室安全4.1.1 每年至少一次對實驗室電器設備的接地和極性、線路完整性 進行年度檢查并建立檔案記錄。4.1.2 可移動設備應接地或采用更先進的辦法防止觸電，但全部塑 封無法接地的設備除外。新設備在使用前也進行同樣檢查。4.1.3 實驗室應有足夠的插座，分面要合理，以減少在插座上接上 其它多余的插座和避免拖拉過多的電線。4.1.4 除校準儀器外，儀器不得接電維修。實驗室工作人員不得維 修實驗室電力系統(tǒng)。以上所有工作由單位電工室工作人員執(zhí)行。4.1.5 按消防部門規(guī)定在實驗室擺放滅火器并由總務科負責管理， 按

22、有效期每 5年更換一次。對實驗室工作人員進行防火安全訓練。遇到 失火撥打電話 119 以求得幫助并開始從失火區(qū)撤離。4.1.6 下班時注意關好水電、門窗。4.2 生物防護4.2.1 實驗室工作人員要熟悉實驗室清理和消毒制度與安全 與生物防護制度。4.2.2 采集標本時要注意安全，直接接觸病人血液和體液的操作應 戴雙層乳膠手套。4.2.3 不得在實驗室內吃東西、喝飲料、吸煙、化妝與會客。4.2.4 實驗室用品不得用于其它用途， 不可將私人物品帶入實驗室。4.2.5 工作時要戴手套、 穿工作衣和隔離衣， 手套破損應立即丟棄、 洗手、更換4.2.6 不能用戴著手套的手觸摸暴露的皮膚、口唇、眼睛、耳朵

23、、 頭發(fā)等。4.2.7 盡量避免使用尖銳物品和器具，宜用不易破碎的材料制品。4.2.8 工作完畢，脫去手套后洗手，再脫去工作衣，用肥皂和流動 水洗手。4.2.9 按實驗室清潔、消毒制度對實驗室進行清潔消毒。4.2.10 生物污染廢棄物臨時存放地點要有明顯的標志。5. 應急處理5.1 意外：是指發(fā)生了未導致個人傷害的危險 。5.1.1 感染性液體濺出或滲漏，首先用紙巾或吸附性材料覆蓋，用 消毒液（如0.5-1.0%次氯酸鈉 ）噴灑在濺出液周圍。然后消毒液灑在吸附 材料上 10分鐘。5.1.2 有潛在傳染性的液體或其他體液，棄手套，洗手，換新手套， 禁止戴手套接觸眼，鼻，粘膜和皮膚，禁止戴手套離開

24、工作區(qū)；5.1.3 衣物污染，盡快移開隔離衣以防止感染物觸及皮膚并防止進 一步擴散。棄保護手套，洗手，更換隔離衣及手套，將已經(jīng)污染的隔 離衣放入高壓滅菌器消毒，清理發(fā)生污染的地方。如果個人衣物被污 染，應立即將污染處浸入 75的乙醇中，更換干凈的衣物。5.2 事故：是指發(fā)生了人身傷害。5.2.1 因為感染性因子的特性，任何一種小的損傷，包括皮膚的破 損或刺傷等，都可能與傳染性物質接觸，導致嚴重后果。5.2.2 皮膚被針頭刺傷，切割傷或標本濺出污染皮膚，用肥皂和水 徹底沖洗傷口，盡量擠出損傷處的血液。523樣品或檢測試劑濺入眼內，立即用水連續(xù)沖洗。濺入嘴內， 先吐出殘留的液體后，用水反復漱口。5

25、24患有皮膚疾患，尤其有皮膚潰爛，破損情況要及時診治。5.2.5遇有高危的意外事故發(fā)生，除進行局部處理外，同時應立即 采取預防措施，包括對其隨訪，流感檢測，休息并暫時離開原崗位三 個月，按醫(yī)囑服用抗LG輔物進行預防。526遇有意外事故，應及時分別以口頭和書面形式報告上級部門（527遇有意外事故，接觸者應在接觸當時，接觸后六周，三個月, 六個月和十二個月各采血檢查一次。標準操作程序文件編號：HZCDC/LG/SOP/10第1頁共2頁第1版生物安全柜的使用與維護頒布日期：日2009 年 12 月 151. 目的正確使用及維護生物安全柜，保證檢測工作的正常進行2. 范圍ESCO-Class II B

26、SC生物安全柜3. 責任人實驗室工作人員4. 內容4.1 先接通電源，打開生物安全柜的電源開關。4.2 將所需的實驗用具（如：加液器、盛放吸頭的廢物缸等）放入 生物安全柜內。4.3 將玻璃移門完全關閉后，再按“ UVW ”鍵開啟紫外燈，實施紫外 殺菌操作 30 分鐘后將自動關閉紫外燈，并顯示“ UV END ”提示信息。 在殺菌過程中，一旦打開移門或開啟熒光燈，系統(tǒng)就會自動關閉紫外 燈。4.4殺菌操作結束后，打開移門至Sash height ”安全高度,按“送 風機”鍵啟動送風機運行，為了實現(xiàn)工作區(qū)域的自凈，保持送風十分鐘 后再開始正式作業(yè)。4.5按“照明”鍵開啟日光燈，將移門高度始終保持在S

27、ASHHEIGHT ”安全高度，開始正式作業(yè)。4.6 在作業(yè)時，若使用插座，務必在“切斷備用插座電源”的狀態(tài)下， 將輔助設備的電源插頭插入“備用插座”，再按“插座”鍵接通備用插座電 源；使用結束時，必須再次按“插座”鍵，切斷插座電源。所用輔助設備 的功耗不允許超過插座的最大負荷（見插座上的標示） 。4.7 作業(yè)結束時，保持風機運行十分鐘后再關閉。按住“送風機”鍵 持續(xù) 3秒鐘以上，可關閉風機。5. 注意事項5.1 在殺菌時作業(yè)人員必須遠離生物安全柜，以免紫外線對人身體 造成傷害。5.2移門高度不要超過“SASH HEIGHT ”安全線高度，否則將有氣流 不能平衡的危險，可能會引起不潔氣溶膠外溢

28、，而危害作業(yè)者健康。 若超出將會自動報警，按“靜音”鍵取消報警聲音。5.3操作結束時，務必先關閉送風機，等待風機停止運轉后，再切斷生物安全柜的電源。以免造成變頻器等器件損壞。標準操作程序文件編號：HZCDC/LG/S0P/11第1頁共2頁離心機的使用與維護第1版頒布日期：2009年12月15日1.目的正確使用及維護，保證檢測工作的正常進行2范圍Thermo.Heraeus 高速低溫離心機3. 責任人實驗室工作人員4. 內容4.1 開箱后，將離心機放置于桌或平面臺板上，使離心機底面四只 橡膠機腳與桌面接觸，均勻受力。4.2 插上電源插座，按下電源開頭（開頭在離心機背面） ，接通電 源。4.3 按

29、打開鍵，打開門蓋（未接通電源時，右側面的小孔處用隨機 工具往里頂，打開門蓋）。將離心室泡沫盒內的掛架插入轉子體槽內 （注 意：門未打開，離心室泡沫盒未出離心室前切勿開機，否則將使電機 損壞）。離心管加液放入不銹鋼管套（離心管試液目測均勻） 。離心管 必須成偶數(shù)對稱放置，否則會產(chǎn)生振動和噪聲。4.5轉速、時間、溫度4.5.1設置轉速：按轉速鍵及 /鍵，選擇離心機本次工作的轉速； 根據(jù)需要轉換轉速單位：r/min或g/min。4.5.2設置時間：按時間鍵及/，選擇離心機本次工作的時間（最 長時間為 99分鐘）。時間為倒計時。4.5.3設置溫度：按溫度鍵及 /，選擇離心機本次工作的溫度。4.5.4

30、當上述三個步驟完成后，關上離心機蓋，按 START 鍵，離心 機開始運行。4.5.5 在運行中，離心機轉速逐漸上升至工作轉速；時間顯示為倒4.5.6離心時間倒計時到0或運行途中按STOP鍵，離心機停止運4.5.7按打開鍵，打開門蓋，取出離心管。4.5.8關斷電源開頭，離心機斷電。5. 注意事項5.1離心機在運轉時，不得移動離心機，不要打開蓋。5.2安放離心機的臺面應堅實平整，四只橡膠機腳都應與臺面接 觸和均勻受力，以免產(chǎn)生振動。5.3離心管加液應稱量平衡，若加液差異過大運轉時會產(chǎn)生大的振 動，此時應停機檢查，使加液符合要求，離心試管必須成偶數(shù)對稱放 入。5.4若運行時有異常響聲或有離心試管破裂

31、，會引起較大振動應立 即停機處理。5.5電源必須有接地線。標準操作程序文件編號：HZCDC/LG/SOP/12第1頁共2頁普通冰箱的使用與維護第1版頒布日期：2009年12月15日1. 目的正確使用及維護，保證檢測工作的正常進行。2. 范圍BCD-216T XZ 型海爾普通冰箱。3. 責任人實驗室工作人員4. 內容4.1 接通電源（ 220 伏），先不要立即放入物品，通常讓冰箱空載運 行一段時間，待冰箱內部充分冷卻下來后，再放入需冷凍或冷藏的物 品，正式啟用冰箱。4.2 選擇冰箱的工作方式：4.2.1 人工智慧方式：如無特殊需求，建議使用此方式。按一下人 工智慧按鍵，人工智慧指示燈亮起，此時冰

32、箱自動工作。4.2.2 人為調節(jié)方式：可以根據(jù)存儲物品的需要進行速凍，軟冷凍 保鮮室及冷藏室溫度的設定與調節(jié)。4.2.3 取放物品時動作要快， 不要長時間開著門， 開關門時的動作要 輕。5. 注意事項5.1 溫度值設定改變時， 箱內溫度需經(jīng)過一段時間后才能達到平衡。 且這段時間的長短，取決于溫度設定值改變的大小、周圍環(huán)境溫度的 高低、開門頻次及箱內存放物品的多少等。5.2 不要將過熱的物口放入冰箱內， 等冷卻至室溫后， 再放入冰箱。5.3 一定要保持出水口暢通， 使化霜水通暢地經(jīng)此處流出， 堵塞時， 請使用附件中的透孔銷進行疏通。5.4定時除霜，每年至少兩次。除霜時，切斷電源，切記不可使用 機

33、械工具或其它方式進行除霜，以免損壞冰霜。5.5冰霜啟用后，一般情況下不要停用冰箱，以免影響冰箱使用壽 命。如要停機，拔下電源后，至少保持間隔五分鐘，才能再次插電。標準操作程序文件編號：HZCDC/LG/S0P/13第1頁共3頁移液器的使用與維護第1版頒布日期：2009年12月15日1. 目的正確使用及維護移液器，保證檢測工作的正常進行。2. 范圍各種型號的移液器。3. 責任人實驗室工作人員。4. 內容4.1根據(jù)所需取液量選擇相應的移液器，可調式移液器應在允許容 量范圍內調節(jié)。4.2首先選擇一支合適的吸頭安放在移液器套筒上。使用大體積移 液器（如5000 gl以上）時必須在套筒上加插一過濾芯，稍

34、加扭轉地壓緊吸 頭使之與套筒間無空氣間隙。未裝吸頭的移液器絕不可用來吸取任何 液體。4.3把按鈕壓至第一停點。垂直握持移液器，使吸頭浸入液樣中，浸入 液體深度視型號而定。4.4緩慢、平穩(wěn)地松開按鈕，吸液樣。等一秒鐘，然后將吸頭提離 液面。用一次性吸水紙抹去吸頭外面可能附著的液滴。小心勿觸及吸 頭口。4.5將吸頭貼到容器內壁并保持10-40度傾斜。4.6放液4.6.1平穩(wěn)地把按鈕壓到第一停點。等一秒鐘后把按鈕壓到第二停點以排出剩余液體。4.6.2 壓住按鈕，同時提起移液器，使吸頭貼容器壁擦過。4.6.3 按吸頭彈射器除去吸頭。4.6.4 松開按鈕。4.7 當裝上一個新吸頭 （或改變吸取的容量值

35、）時應預洗吸頭，先吸 入一次液樣并將之排回原容器中。預洗新吸頭能有效提高移液的精確 度和重現(xiàn)性。這是因為第一次吸取的液體會在吸頭內壁形成液膜，導 致計量誤差。而周一吸頭在連續(xù)操作時液膜相對保持不變，故第二次 吸液時誤差即可消除。4.8 排放致密或粘稠液體時，宜在第一停點多等一兩秒鐘再壓到第 二停點。5. 注意事項5.1在取液前所取液體應在室溫（15-25 C）平衡：若吸液溫度與室溫有異時將吸頭預洗多次再用。注意移液溫度不得超過70 C。5.2 吸頭浸入液體深度要合適，吸液過程盡量保持不變。5.3 在吸取液體時應緩慢勻速吸取，避免液體濺到移液器頭上。打 出液體后不應松開按鈕，將吸頭壓掉后再將拇指

36、松開，避免液體回吸。5.4 在調整取液量的旋鈕時，不要用力過猛，并注意計數(shù)器顯示的數(shù)值不 要超過其可調范圍。5.5 連續(xù)可調式移液器在取樣移液過程中應注意吸頭不能觸及其它 物品，以免被污染。吸頭盒 （架子 ）、廢液瓶、所取試劑及移液的標本管 應擺放合理，以方便操作過程、避免污染為原則。5.6 改吸不同液體、標本或試劑前要換新吸頭；發(fā)現(xiàn)吸頭內有殘液時要換新吸頭5.7 新吸頭使用前要預洗。5.8 吸頭內有液體時不可將移液器平放、倒轉，以防液體進入移液 器套筒內。5.9 連續(xù)可調式移液器在使用完畢后應置于移液器架上，遠離潮濕 及腐蝕性物質。45標準操作程序文件編號：HZCDC/LG/S0P/15第1

37、頁共1頁振蕩器的使用與維護第1版頒布日期：2009年12月15日1. 目的正確使用及維護振蕩器，保證檢測工作的正常進行2. 范圍其林貝爾VDRTEX-5微量振蕩器3. 責任人實驗室工作人員4. 內容4.1微量振蕩器應置于堅固的水平臺上。4.2打開電源。4.3將標本管垂直或略為傾斜地放置在振蕩盤上，開機振蕩數(shù)秒或 數(shù)分鐘直至標本完全混勻后，關機。4.4切忌將標本管平躺或倒轉振蕩，以免管內液體滲出。4.5保持振蕩器清潔、干燥。4.6使用完畢后，關上電源。5. 注意事項5.1儀器備有熔絲保險裝置，在超載時能自動斷路，只需要更換熔 絲管，即可正常運轉。5.2儀器可在8小時內連續(xù)工作。5.3儀器必須防潮

38、，妥善保管。標準操作程序文件編號：HZCDC/LG/SOP/15第1頁共2頁低溫冰箱的使用與維護第2版第1次修改頒布日期：2007年11月15日1. 目的正確使用及維護DW-40L262海爾低溫保存箱，保證檢測工作的正常 進行。2. 范圍DW-40L262海爾低溫保存箱。3. 責任人實驗室工作人員。4. 內容4.1將低溫冰柜放平后，接通電源（220伏），先不要立即放入物品, 按速凍鍵，讓保存箱空載運行一段時間，待冰柜內部充分冷卻下來后， 正式啟用保存箱。4.2按4，設置溫度，一般置于40 C。4.3取放物品時動作要快，不要長時間開著門，開關門時的動作要 輕。5. 注意事項5.1不要放入易燃物品

39、。5.2不要將過熱的物品放入保存向內、內，等冷卻至室溫后，再放入冰柜5.3 定時除霜，每年至少兩次。除霜時，切斷電源，切記不可使用 機械工具或其它方式進行除霜，以免損壞冰柜。5.4 保存箱啟用后，一般情況下不要停用冰柜，以免影響保存箱使 用壽命。如要停機，拔下電源后，至少保持間隔五分鐘，才能再次插 電。標準操作程序文件編號：HZCDC/LG/S0P/16第1頁共2頁高壓火菌器的使用與維護第1版頒布日期：2009年12月15日1. 目的杜絕醫(yī)源性污染2. 范圍流感篩查實驗室3. 責任人流感篩查實驗室工作人員4. 內4.1消毒準備：先將容器內的消毒桶取出，把待消毒物品放置于桶 中有孔隔板上，在容器

40、內加入67厘米深清水，（約45升，為避免電 熱器產(chǎn)生水垢，最好使用蒸餾水），將桶放入器內準備消毒。消毒物品 在放置時，應使其之間留有一定間隙，不可堆壓過緊，以免妨礙蒸汽穿透4.2 器蓋開閉：器蓋合上時，必須先將器蓋背面之放汽軟管插入消 毒桶內之管架中，然后將器身周圍六個鎖緊螺栓扳起旋緊于器蓋上， 在旋緊螺旋栓時，必須對面平均旋轉，方能使器蓋與器身密閉而不漏 汽，開啟時，須將鎖緊螺栓全部松開，即可將蓋提起。4.3 加熱方法：準備工作完畢后，將電源插頭插入消毒器底座內并 接通電源，加熱開始后，使放汽閥手柄直立放置，以便將器內冷空氣 排出，待放汽閥因水沸而冒出一定量蒸汽時，即可將手柄扳平，器內 壓力

41、隨即逐漸升高，當壓力達到消毒物所需壓力時，為消毒開始時間。5. 注意事項如壓力超過 1.65 公斤力厘米時， 必須立即切斷電源， （如不用電加 熱時，應將消毒器撤離熱源。并將放汽閥手柄豎起放汽，使壓力降到 消毒物所需壓力為止 ）。6. 消毒時間6.1 普通敷料，如果不堆壓過緊，維持在 1.4公斤力厘米 2以上壓 力，一般消毒時間采用 20 分鐘。金屬器械約 12分鐘即可。6.2 干燥處理：消毒完畢后，應立即切斷電源，將放汽閥手柄直立 豎起，待器內蒸汽放盡，壓力表指針降至“ 0位后，立即開啟器蓋，將 消毒物品全部取出，并將其攤開，從增進消毒后之干燥程度，切不可 將其悶置于器內，否則消毒物品必將回

42、潮。標準操作程序文件編號：HZCDC/LG/SOP/17第1頁共4頁ABI SteponePlus TM Real-Time PCR System 的使用與維護第1版頒布日期：2009年12月15日1.目的確保ABI SteponePlus tm Real-Time PCR System 正常運轉，提高檢 測結果準確率。2. 范圍ABI SteponePlus TM Real-Time PCR System3. 責任人流感網(wǎng)絡實驗室工作人員4. 內容4.1操作步驟1. 開機：先打開計算機；再打開 SteponePlus TM Real-Time PCR System 儀器；再打開計算機上 St

43、epone 軟件；2. 打開軟件后，點擊“Advaneed Setup ”3. 進入界面后，在“ Experiment Name ”下命名本次實驗名1) “Whieh instrument are you using to run the experiment? ”選項下，選 “SteponePlus TM Instrument(96 wells) ”2) “What type of experiment do you want to set up?”選項下，選 Quantitation-Standard Curve ；3) “Whieh reagents do you want to use

44、 to deteet the target sequenee? ” 選項下，選 TaqMan ? Reagents ；4) “What ramp speed do you want to use in the instrument run? ” 選項下，選 Standard(2 hours to complete a run) ”.4. 回到左邊Setup ”選項下，點擊Plate Setup ”5. 在 Define Targets and samples ”界面下：1) 在 Define Targets ” 選項中，點擊 Add New Target ” 添加新Target，根據(jù)實驗需要編

45、輯靶基因名稱；(如，甲型H1N1流感病毒核酸檢測：Target 1 vwflual; Target 2 Tlua; Target 3 swhl;Target 4 Fp)2) Reporter ” 選項下：均選 FAM ”3) Quencher ” 選項下：均選 None ”4) 在 Define samples ”選項下，點擊 Add New Sample ”，根據(jù)本次實驗的樣本數(shù)添加，根據(jù)贗本名稱編輯名稱 ;(如，本次實驗2 個樣本，Sample 1 T, Sample 2 2)6. 再點擊 Assign Targets and Samples ；在此界面下，設置“ViewPlate Lay

46、out ”,“View Plate Layout ”下 的 各 反 應 孔 與SteponePlus TM Real-Time PCR System 儀器中的 96 孔反應板是 對應的。如，B3孔（縱向B，橫向3）設置：先點擊 B3 孑L:再 1）在 Assign Target to the selected wells ” 中選擇靶基因（根據(jù)個人設計的八連管中的靶基因的反應體系設 置，女口 B3孔設置的是“swflua1 ”基因，則點擊swflua1 ”前的“”選 定；若為陽性對照孔，再點擊swflua1后的S；陰性對照，點擊N”； 其他基因設置依次類推；2）在 Assign Sample（

47、s） to the selected wells”選項下:選擇樣品。（如: B3孔中樣品編號為“ 1 :點擊編號為1的樣品前的“”選 定，其他的樣本設置依次類推）3）在 Select the dge to use as the passive referenee ”選項中，選擇“None ”7. 回到左邊Setup ”下，點擊Run Method ”1）在Reaction Volume Per well ”中，選擇反應體系的量。女口，甲型H1N1流感核酸檢測體系為25山。2）設置反應溫度。 按照界面所示， 根據(jù)試劑盒說明書， 設置反 應溫度與時間。單擊上方溫度設置可直接修改溫度；下方為時間，如

48、 02: 00 為 2Min， 00: 10為 10s。3）界面中Holding Stage ”為2個反應溫度，該階段如需更多溫度：先點擊“Holding Stage ”下，任意Step,再點擊Add Step ”即 可增加一個“Step。以后的個階段如需增加溫度與此相同。4）如需增加一個“ Stage,點擊Add Stage ”選項下，Cycli ng ” 即可。5）根據(jù)試劑盒說明，修改各階段循環(huán)數(shù)，在“Number ofCycles ”下修改循環(huán)數(shù)。6）根據(jù)試劑盒說明書，選擇開始采集熒光的“ Step ”，“DataCollection On ” 為開始；Data Collection O

49、ff ”為關閉。8. 所有項目設置完畢后，點擊右上角“ START RUN ”,根據(jù)提示 將該次反應結果保存到指定文件夾即可。9. 運行開始后，自動計算擴增所需時間。10. 全程擴增約需2h ;擴增結束后，電腦上的 Stepone軟件自 動分析結果；可直接看到擴增曲線。在分析結果時， Ct 值結合擴 增曲線分析。如，甲型 H1N1 流感病毒核酸檢測（北京金豪試劑 盒）陽性對照 Ct30 有意義；待測樣品 CtCt37 則重新檢測。甲型 H1N1 陽性結果的判斷結合試劑 盒說明書判斷。11. 分析結果完畢后，先關閉 Stepone 軟件，再關閉 Stepone 儀器，最后關閉電腦。12. 所有操

50、作完畢后，請?zhí)顚懢軆x器使用記錄。5. 注意事項5.1 開關儀器時注意開關順序：開機時，先開電腦，再是 PCR 儀， 最后打開 Step One 軟件；關機時順序相反。5.2 儀器運轉時周圍不要有堵塞物，保持通風。5.3 PCR 運轉時，聯(lián)機電腦一直保持開機狀態(tài)，禁止待機設置。5.4 PCR儀操作人需熟悉掌握儀器全程操作規(guī)程后方可進行操作。5.5 PCR儀需定期進行維護與校正，確保檢測結果準確率標準操作程序文件編號：HZCDC/LG/SOP/18第1頁共2頁ABI RT-PCR 儀 9700 型第1版的使用與維護頒布日期：2009年12月15日1. 目的確保流感病例標本得到有效的檢測，為流感病

51、毒感染提供可靠的實 驗室診斷依據(jù)。保證檢測結果的快速性和可靠性，同時確保樣本不被 污染和污染環(huán)境。2. 范圍ABI 9700 型 RT-PCR 儀。3. 責任人流感網(wǎng)絡實驗室工作人員。4.1 操作步驟1. 按電源鍵打開 PCR 儀。2按F5 (User)，再按F2(New)，建立新的擴增反應名稱；具體：按選擇英文字母，按Enter確認。3. 新的名稱輸入后按三次。即可回到開機頁面。4按F2(Creat)建立新的反應循環(huán)條件5根據(jù)所用反應試劑要求的反應溫度、 時間，按“ fj ”設置反應條 件6設置完成后，按F2 (Store )保存建立的新反應，默認保存在新 的反應名稱下。7按F1 (Acce

52、pt)接受。4.2進行反應時，在待機頁面可直接按F1 (RUN )，選擇已經(jīng)建立 的反應名稱，即可開始擴增。4.3擴增中途如需停止反應，按Stop鍵停止即可。4.4 反應完成后，取出反應管，關閉電源。5. 注意事項5.1本PCR儀使用的為0.2ml PCR反應管。5.2 進行擴增時上蓋要緊閉，擴增完成后及時取出反應管，關閉電源。5.3 PCR儀長時間不適用，拔掉電源插頭。5.4 每次使用儀器前，先開機預熱。61標準操作程序文件編號：HZCDC/LG/S0P/19第1頁共2頁凝膠成像系統(tǒng)的使用與第1版維護頒布日期：2009年12月15日1. 目的確保凝膠成像系統(tǒng)正常運行，提高季節(jié)性流感檢測效率。

53、2. 范圍UVP凝膠成像系統(tǒng)3. 責任人流感實驗室工作人員4. 內容4.1操作步驟1. 將待觀察的瓊脂糖凝膠置于觀察箱內，關好門。2. 打開隨機電腦電源，進入待機頁面后，雙擊圖標，打開Lauch TS 成像系統(tǒng)軟件。3. 打開Ultraviolet ”紫外燈電源4. 點擊軟件Live ”采集圖像，觀察凝膠成像情況；5. 根據(jù)成像情況，調節(jié)圖像明暗度、大小 ;6. 點擊SNAP”，再點擊Time STAMP ”添加時間后，點擊SAVE” 保存圖像；7. 觀察完成后，關閉 Ultraviolet ”電源，關閉 Lauch TS ”軟件；8. 點擊 START ”關閉電腦；9. 取出瓊脂糖凝膠，并妥

54、善處理。5. 注意事項5.1放入凝膠后，操作過程中，脫去手套，避免凝膠中 TB污染成像 儀。5.2 觀察中注意自我保護，避免紫外燈直射。5.3觀察完畢后一定取出凝膠，放置TB污染。標準操作程序文件編號：HZCDC/LG/SOP/20第1頁共3頁CO2培養(yǎng)箱的使用與維護第1版頒布日期：2009年12月15日1.目的用于培養(yǎng)流感MDCK細胞，進行病毒分離、鑒定2. 范圍Thermo Series 8000DH CO 2培養(yǎng)箱3. 責任人流感網(wǎng)絡實驗室工作人員4. 內容4.1參數(shù)設置1. 溫度設置：Thermo 8000DH系列的CO2培養(yǎng)箱工作溫度范圍為10 C -50 C, 此溫度受環(huán)境溫度的影響。出廠時，廠家將溫度設定為 10 C,在此設 置下，所有的加熱器都將關閉。按以下鍵設置溫度：1）按MODE ”直至SET ”指示燈亮。2）按參數(shù)調節(jié)右鍵，至面板顯示“ TEMP XX.X ”信息。3）按“fj”設置所需要的溫度值。4）按Enter ”保存設定值。5）按MODE ”至RUN ”