PCR實驗室認證體會復習過程

1、PCR實驗室認證體會一、申請臨床基因擴增實驗實驗收的目的 臨床基因擴增實驗室近年來在我國發(fā)展很快，基因診斷技術在疾病的預防、診斷、治療方面起 到了積極的作用。由于、基因擴增檢測技術的應用對、實驗室的環(huán)境條件、儀器設備、試劑耗 材、人員技術能力和質量控制等方面要求嚴格，而一些實驗人員對此不甚了解，加之利益的驅 使，曾經在 20世紀 80 年代，某些沿海省份的實驗室未按要求規(guī)范設置，出現(xiàn)氣溶膠污染，導 致大規(guī)模假陽性結果報出，為臨床診斷造成了極大的困難。臨床基因擴增實驗室為了規(guī)范實驗 室，保證基因擴增技術有效應用，防止假陰性、假陽性結果的報出，為臨床出具合格而可靠的 報告，申請臨床基因擴增實驗室的

2、驗收是必然而且也是必要的。二、開展臨床基因擴增實驗的必備條件根據衛(wèi)生部 2002 年 1 月 14 日發(fā)布了衛(wèi)醫(yī)發(fā) 200210 號臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦 法（以下簡稱辦法）及其附件臨床基因擴增檢驗實驗室基本設置標準，及同年 2 月 20 日衛(wèi)生部臨床檢驗中心發(fā)布臨床基因擴增實驗室工作規(guī)范，明確規(guī)定臨床基因擴增檢驗 實驗室開展 PCR 技術必需具備的條件：（1）二級以上醫(yī)院實驗室，經衛(wèi)生部臨床檢驗中心驗收合格；（2）從事基因擴增實驗操作的人員必須經過培訓并取得上崗證；（3）使用經國家藥品監(jiān)督管理局批準的允許進入市場銷售的商品試劑盒；（4）開展衛(wèi)生部允許開展的項目。具備了以上幾條后，我

3、們從事臨床基因檢測任務才是符合要 求和規(guī)定并對臨床出具的報告有保障的。三、臨床基因擴增實驗室驗收準備工作1. 硬件準備（1）實驗室整體布局： 根據辦法要求，臨床基因擴增檢驗室原則上分為四個單獨的工作區(qū)域：試劑貯存和準備 區(qū)，標本制備區(qū)，擴增產物分析區(qū)。由于我實驗室使用的是羅氏公司的 Lightcycler 實時熒光定 量擴增儀，擴贈后產物不需開蓋處理直接檢測，所以擴增區(qū)和擴增產物分析區(qū)合為一室，此區(qū) 為負壓。實驗室設計時按照辦法規(guī)定，三個區(qū)域相互獨立，并有各自的緩沖區(qū)域（見圖1）（2）各工作區(qū)域儀器設備 各工作區(qū)域的儀器設備及物品，包括椅子、辦公用品、清潔用品等均不能拿出本區(qū)域，所有可 移動物

4、品均應有本區(qū)域的標示。各區(qū)域應具備的設備配置為：屋頂紫外燈、近臺紫外燈、一次性手套、一次性鞋套、工作服、 廢液缸、掃帚、拖把、廢紙褸簍、微量加樣器（覆蓋1-1000 l），經高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾芯）、筆、紙等。各工作區(qū)域的特殊配置包括：（1）試劑貯存和準備區(qū)： 28oC 冰箱、漩渦震蕩器、超凈工作臺。（2）標本制備： 2 8oC 冰箱、 -20oC 冰箱、高速臺式冷凍離心機、漩渦震蕩器、金屬加熱模 塊、超凈工作臺。（3）擴增及產物分析區(qū)：羅氏 Lightcycler 熒光定量核酸擴增儀、電腦、打印機。 同時：進入各工作區(qū)域必須嚴格按照單一流向，并用明顯的箭頭表示，個區(qū)域用不同的顏

5、 色以示區(qū)別。即試劑貯存和設備區(qū)（藍色）標本制備區(qū)（白色）擴增及產物分析區(qū)（粉 色）。2. 軟件準備：（1）臨床基因擴增實驗室文件編寫：本實驗診斷中心正在進行 ISO15189 實驗室的認可工作，故質量手冊同中心統(tǒng)一，其它文件包 括：程序文件、標準操作程序（ SOP）、相關圖表等由本實驗自己制定。制定的原則根據衛(wèi)生 部下發(fā)的兩個文件，并結合本實際情況編寫適合本實驗實際情況編寫適合本實驗室的切實可行的文件，做到 “寫你所做的，做你所寫的，記錄你已做的 ”。具體編寫內容如下： 程序性文件： PCR 實驗室管理 制度， PCR 實驗 室人員管理制 度，儀器設備的 管理程序， PCR 實驗室儀器設備

6、操作程序， PCR 實驗室儀器設備 校準程序， PCR 檢驗實驗操作程 序，實驗室消耗 品購買、驗收及 儲存程序， PCR 試劑購買、驗收 及儲存程序， PCR 檢測標本的 管理程序， PCR 實驗室記錄控制 程序， PCR 檢驗結果報告的控制程序， PCR 實驗室室內質量控制程序，抱怨處理程序，實驗室 生物防護錯施，實驗室的清潔程序，實驗室廢棄物處理程序等。 標準操作程序（ SOP）：試劑準備區(qū)工作制度，樣本準備區(qū)工作制度，PCR 擴增區(qū)工作制度，半自動型蒸汽壓力滅菌器標準操作程序，高速離心機的標準操作程序，恒溫金屬浴使用規(guī) 程，漩渦震蕩器標準操作程序，潔凈工作臺的標準操作程序，可調式加樣器

7、標準操作程序，恒 溫金屬浴的校準程序，標本采集、運送、接收、保存的標準操作程序試劑準備的標準操作程 序，核酸提取的標準操作程序， Lightcycler 使用的標準操作程序，統(tǒng)計學者質量控制的標準操 作程序，消耗品驗收質檢的標準操作程序。試劑質檢的標準操作程序等。 相關圖表： PCR 實驗室工作人員一覽表，實驗室主要負責人簡歷表， PCR 實驗室工作人員檔 案， PCR 實驗室人員培訓計劃，儀器設備一覽表，儀器設備損壞、故障、修理記錄，儀器設備 的報表申請表，儀器維護保養(yǎng)記錄， Lightcycler 熒光定量擴增儀維護保養(yǎng)記錄，恒溫金屬校 準記錄，采購申請單，試劑領取驗收記錄，試劑質檢記錄，

8、消耗品質檢記錄，消耗性材料領取 驗收記錄，標本接收等記表，不合格標本記錄，報告單發(fā)放接收登記表，特殊報告要求登記 表，抱怨情況登記表，抱怨處理登記表， PCR 實驗室日常工作核查表， Lightcycler 儀器使用 記錄，試劑使用記錄， PCR 實驗室室內質量控制失控原因及糾正錯施記錄，樣本處理記錄，冰 箱溫度記錄 -試劑準備區(qū)，冰箱溫度記錄 - 樣本準備區(qū)，環(huán)境溫度記錄 -試劑準備區(qū)，環(huán)境溫濕度 記錄- 樣本準備區(qū)，環(huán)境溫度記錄 -PCR 擴增區(qū)， PCR 實驗室日常工作核查表，紫外燈使用登記 表，溫度計校準記錄， PCR 實驗室平面圖等。（2 ）人員管理： 文件要在臨床基因擴增實驗室工作

9、的實驗人員必須經過培訓并取得上崗證，所以在申請實驗室 驗收前，要至少一名人員參加衛(wèi)生部檢驗中心舉辦的臨床基因擴贈實驗室上崗培訓班并取得上 崗證。同時實驗室還應該制定自己的年度培訓計劃，保證實驗室人員能不斷得到培訓。（3 ）實驗方面： 使用經國家藥品監(jiān)督管理批準的允許開展的項目。四、臨床基因擴增實驗室驗收申請 如果以上方面準備就緒后，就可以進行臨床基因擴增實驗室驗收申請了，但以本人的經驗，建 議在實驗室設計好后，先請驗收專家進入實地看一下，并提出他們的寶貴意見，以免在驗收時 因離要求有差距而成耽誤了驗收，同時編寫好的程序性文件和 SOP 文件也應請才、專家過 目，得到認可后再提交申請，內容包括：

10、1. 基因擴增檢驗實驗室基本情況：（1 ）實驗室所屬法人單位名稱、地址、電話、聯(lián)系人等。（2 ）實驗室人呀情況和職稱比例。2. 應提供的資料（1 ）醫(yī)療機構職業(yè)許可證復印件；（2 ）擬設置基因擴增檢驗實驗室醫(yī)院的醫(yī)療衛(wèi)生資源狀況，對臨床基因擴增檢驗的需求情況 以及實驗室運行的預測分析；（3 ）擬設基因擴增檢驗實驗室的設置平面圖；（4 ）實驗室主要負責人簡歷表；（5 ）實驗室工作人員一覽表；（6 ）主要儀器設備表；（7 ）擬開展的臨床基因診斷項目；（8 ）實驗室相關程序文件和標準操作程序（ SOP ）；（9 ）檢驗報告樣單；3. 希望驗收時間4. 聲明 本實驗室自愿申請衛(wèi)生部臨床檢驗中心組織的技

11、術驗收，并愿意承擔下列義務：遵守臨床基 因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法和臨床基因診斷實驗室工作規(guī)范及與關規(guī)定；不論能否 獲得通過驗收，預付驗收階段的全部費用。五、現(xiàn)場技術驗收 當提交臨床基因擴增檢驗實驗室技術驗收申請表后，大約兩周時間內（視具體情況而定）衛(wèi)生 部臨床檢驗中心會將臨床基因擴增檢驗實驗室收通知傳真或郵寄至你處，告知驗收工作的具體 時間、專家組成員、驗收程序及驗收費用等。在驗收當天，專家組成員將對實驗室布局、實驗室設置及儀器設備配備情況、實驗室表示、程 序文件標準操作文件的編寫、試驗記錄等情況進行驗收，同時還會現(xiàn)場讓實驗室技術人員進行 臨床標本的操作，實驗結果的正確與否也是實驗室驗收合

12、格的依據之一?，F(xiàn)場提問時專家會對 你所編寫的文件進行提問，主要涉及實驗室污染、是內質控、標本的收集及保存等。驗收結束 后，專家會填寫臨床基因擴增檢驗實驗室技術驗收報告，對驗收結果進行總結，提出整改要求 和意見。六、臨床基因擴增檢驗實驗室收體會1. 認真學習和領會衛(wèi)生部頒發(fā)的臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法及其附件臨床基 因擴增檢驗實驗室基本設置標準，及衛(wèi)生部臨床檢驗中心發(fā)布臨床基因擴增實驗室工作規(guī) 范的內容，并將以上兩個文件的內容落室到自己所編寫的程序文件和標準操作程序中。2. 實驗室布局設計好后一定要請專家實地進行一下檢查，如果條件不具備，也可以將實驗室設 計平面圖寄給專家，因為每個實驗室

13、都有自己的具體情況，如果是新建的實驗室可以按照衛(wèi)生 部臨檢中心提供的標準實驗設計圖來設計，如果是在老的實驗室基礎上改造，就應該多聽一些 專家的意見，以免在驗收的時候因實驗室設計不合理而耽誤驗收以至延誤臨床工作的開展。3. 程序性文件和標準操作程序編寫時，最主要的是可操作性要強，尤其是 SOP 文件，使用頻 率很高，與實驗室的日常工作密切相關，寫的要具體一些，格式并不是很重要，主要是讓第依 次接觸該 SOP 的人也能夠按其完成相關操作。同時還要集注，該文件不是用來驗收的。而是 給自己實驗室人員用的，要認識到文件對保證檢驗質量的重要性，這樣在編寫時就能更細化， 更具體，更實用。文件的編寫是整個實驗

14、室驗收工作任務重要的一個環(huán)節(jié)，也是驗收工作時檢 查的重點，所以在編寫文件時要讓每一個實驗室的人員都參與進來，對所寫的內容、程序和要 求都要知道，并能遵守執(zhí)行。在驗收的時候，專家會對你所寫的文件內容進行提問，如果一個 實驗室操作人員對其應該遵循的管理制度和 SOP 一無所知之甚少，這樣對日常檢驗的質量控 制也是沒有好出的。文件編寫好后，建議也請專家過目，得到首背后再提交認可申請。4. 文件編寫好后，應該按其執(zhí)行，做到 “記錄你所做的 ”簡單的說就是將常規(guī)工作中所做的記錄 下來，一般說，需要記錄的有臨床標本接收中的餓患者個人資料、標本接收日期、標本狀態(tài)、 唯一編號等；檢測前實驗室的清潔；檢測中實驗

15、記錄，試劑廠家、批號、檢測日期、檢測結 果、質控記錄及分析、檢測人（簽字）、儀器運轉情況等；檢測后實驗臺面、儀器設備等的消 毒和清潔、紫外線照射等。依次兩次的記錄并不難，難的是持之以恒。所以許多記錄我們多記 錄我們可以把做到成表格的形式，記錄時在相應的條款上打 “”就行了。5. 實驗過程嚴把質量關。我們編寫的質量手冊的木的的是規(guī)格實驗操作整個過程，做到實驗過 程有章可循，實驗記錄有據可查，保證實驗結果的可靠性和準則性。由于基因擴增技術特殊 性，即使嚴格按質量手冊進行操作，也難免出現(xiàn)錯誤結果，因此包括試劑空白對照，陰性標本 對照、臨界值陽性標本對照等，分別監(jiān)測試劑配制與加樣過程中是否存在污染，標本核酸模板 提取過程紅是否存在污染，標本檢測過程中是否在假陰性結果和結果是否準確等。6. 工作量少影響質量保證系實施。嚴格按臨床基因擴增檢驗實驗室技術要求通過驗收的實驗 室，存在一定運行成本