豆制品、火鍋、麻辣燙等食品中喹諾酮類化合物測定(BJS,09)

1、豆制品、火鍋、麻辣燙等食品中囈諾酮類化合物測定 (BJS.09)豆制品、火鍋、麻辣燙等食品中唾諾酮類化合物的測定BJS2021091范圍本標準 規(guī)定了豆腐、豆干、火鍋底料、麻辣燙底料及火鍋和麻辣燙的食材中諾氟沙 星、氧氟 沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟羅沙星、沙拉沙星、雙氟沙星、司 帕沙星、環(huán)丙 沙星、達氟沙星、恩諾沙星的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測法。本標準適用于豆腐、 豆干、火鍋底料、 麻辣燙底料及火鍋和麻辣燙的食材中諾氟 沙星、 氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟羅沙星、沙拉沙星、雙氟沙星、 司帕沙星、 環(huán)丙沙星、達氟沙星、恩諾沙星的測定和確證。2 原理采用 0. lmol/LEDTA-Mcl

2、lvaine 緩沖溶液提取樣品中的喳諾酮類化合物， 經(jīng)離心和過濾后，上清液經(jīng) HLB 固相萃取柱凈化后，用高效液相色譜 - 串聯(lián) 質(zhì)譜儀檢測 和確證，內(nèi)標法定量。3 試劑和材料以下所用的試劑，除特別注明外均為分析純，水為 GB/T6682 規(guī)定 的一級水。3. 1 乙睛 (CH3CN) ：色譜純。3.2 甲醇 ( CH30H) ：色譜純。3. 3甲酸(CHOOH):色譜純。3. 4 甲醇(CH30H)。3. 5 氨水(NH40H):濃度 25%? 28%。3.6 乙二胺四乙酸二鈉 (C10H14N2Na208 ? 2H20)。3. 7 檸檬酸(C6H807 ? H20)。3. 8 磷酸氫二鈉

3、(Na2HP04 ? 12H20)。3.9氫氧化鈉 (NaOH)o3. 10 鹽酸(HC1):含 HCI38%。3. 11 乙酸鐵 (CH3COONH4) ：色譜純。3. 12磷酸氫二鈉溶液(0. 2mol/L):稱取71. 63g磷酸氫二鈉(3.8),用水溶解 并定容至lOOOmLo3. 13檸檬酸溶液0. Imol/L:稱取21.01g檸檬酸3.7,用水溶解并定容至lOOOmLo3. MMcllvaine 緩沖溶液：將 lOOOmLO. lmol/L 檸檬酸溶液 3. 13與 625mL0. 2mol/L 磷酸氫二鈉溶液 3.12混合，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié) pH 至 4.00. 1。3.

4、15EDTA-Mcllvaine 緩沖溶液0. Imol/L :稱取 60. 5g 乙二胺四乙酸二鈉 3. 6至 1625mLMcllvaine 緩沖溶液 3. 14中, 超聲使其溶解。3. 165%甲醇水溶液:取 5mL 甲醇 3.4 ,用水稀釋至 100mLo3. 1725%氨水甲醇溶液:取 25mL M 水 3.5 ,用甲醇 3.4稀釋至 100mLo3. 1 8標準品:標準品中文名稱、英文名稱、CAS 登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量 見附錄 A 表 A. 1, 純度 299%。3. 19標準儲藏液配制：分別精密稱取標準品3. 18約10mg,置10mL容量瓶中， 加 入 0. 2mL 甲

5、酸 3.3 ,超聲使溶解，用乙 . 腌 3. 1定容至刻度，搖勻，配制成濃度為1. Omg/mL的標準儲藏液，轉(zhuǎn)移至溶劑瓶中于-181以下避光保 存，有效期 6 個月。3. 20混合標準溶液的配制：準確吸取標準儲藏液3. 19 ImL于100mL容量瓶中，用 甲醇 3.2定容至刻度， 配制成濃度為 O.Olmg/mL 的混合標準溶液環(huán) 丙沙星、 沙拉沙星濃度約0.015mg/niL ，于 QC以下避光保存，有效期 3個 月。3.21混合標準中間溶液的配制：準確吸取混合標準溶液3.20 lmL至10mL容 量瓶中，用甲醇3.2定容至刻度， 配制成濃度為 l.Oug/mL 的混合標準 中間溶液環(huán)

6、丙沙星、沙拉沙星濃度約l.Sug/mL，于 4工以下避光保存，臨用新配。3. 22內(nèi)標標準儲藏液配制：分別稱取笊代同位素標準品3. 18約10mg,至 10mL容量瓶中，參加 0. 2mL 甲酸 3.3,超聲溶解，用乙脯 3. 1稀釋至刻度， 配制 成濃度為1. Omg/mL的標準儲藏液，于-18T以下避光保存，有效期6個月。3.23混合內(nèi)標標準中間溶液的配制： 準確吸取內(nèi)標標準儲藏液 3.22 O.OlmL 于 10mL 容量瓶中，用甲醇 3.2定容至刻度，配制成濃度為 1.0ug/mL 的混合內(nèi)標標準 中間溶液，于 4工以下避光保存，臨用新配。3.24固相萃取小柱 500mg, 6mL：

7、HLB 柱或相當(dāng)者。使用前依次以 6mL 甲醇、6mL 水活化，保持柱體濕潤。4 儀器和設(shè)備 4.1 液相色譜 - 串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源 ESI o4. 2分析天平：感量 0. 001g和O.OOOOIg。4. 3渦旋振蕩器4. 4超聲儀4. 5離心機：轉(zhuǎn)速8000r/min4. 6均質(zhì)器4. 7氮氣濃縮儀 5 測定步驟 5.1 試樣制備與保存豆制品、火鍋和麻辣燙的食材從待檢樣 品中 取出樣品約500g,用組織搗碎機充分搗碎混勻，裝入潔凈容器中，密封，并標明標記，于-18 “C冷凍存放?；疱伒琢稀⒙槔睜C底料固體狀：從待檢樣品中取出樣品約500g,用組織搗碎機 充分搗碎混勻，裝入潔凈容器

8、中，密封，并標明標記，于 4工冷藏存放。半固體狀：從待檢樣品中取出樣品約500g,放入研缽中，迅速研磨均勻，裝入潔凈容器中，密封，并標明標記于 4C 冷藏存放。液體狀：從待檢樣品中取出樣品約500g,攪拌均勻后裝入潔凈容器中，密封，并標明標記，于 4工冷藏存放。5. 2樣品溶液制備提取：稱取 5. 0g均勻樣品精確至0. 001g,置50mL離心管中，精密參加混合內(nèi)標標準中間溶液3.23 0. ImL,參加20mL0. Imol/LEDTA-Mcllvaine 緩沖溶液3. 15渦旋混勻 Imin,超聲提取 15min, 8000r/min離心5min,上淸液轉(zhuǎn)移至 50mL容量瓶中，殘渣用

9、EDTA-Mcllvaine緩沖 溶液3.15同法重復(fù)提取兩次，每次 10mL,合并上 淸液至同一容量瓶中，用 EDTA-Mcllvaine 緩沖溶液 3.15定容至刻度，混勻。用濾紙過濾必要時10000r/min 離心 5min 后過濾，續(xù)濾液待凈化。凈化：精密吸取上述待凈化液 25.0mL,以約lmL/min的流速全部通過固相小柱3.24，用 3mL5%甲醇水溶液3.16淋洗，抽干，先后以 6mL甲醇、3mL氨 水甲醇 3.17洗脫，合并甲醇及氨水甲醇洗脫液，45*氮吹至近干，準 確參加2.0mL流動相初始比例復(fù)溶液溶解殘渣，過0.22uni濾膜，續(xù)濾液供 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀分析。5.

10、3基質(zhì)標準工作溶液的制備稱取 5.0g空白試樣精確至0. 001g,置50mL離 心管 中，除不參加混合內(nèi)標標準中間溶液外，其余同 5.2操作處理后得到空 白基質(zhì)， 共制備 6份。分別精密吸取混合標準中間溶液 3. 21 0mL、 0. 010mL、 0. 020mL、 0. 050mL、 0. lOOmL、0. 200mL及混合內(nèi)標標準中間溶液3. 230. 025mL于試管中，氮吹至近 干， 精密參加 l.OmL 空白基質(zhì)復(fù)溶，過 0.22um 濾膜，制成濃度為 Ong/mL.lOng/mL, 20ng/mL. 50ng/mL. lOOng/mL. 200ng/mL 的基質(zhì)標準工作溶液環(huán)

11、丙沙 星、沙拉沙星濃度為 Ong/mL, 15ng/mL. 30ng/mL, 75ng/mL 、 150ng/mL. 300ng/mL, 同位素內(nèi)標濃度約 25ng/mL 05.4測定5. 4. 1液相色譜參考條件1色譜柱:C18色譜柱,2. lmmX50nunX1.7uni,或性能 相當(dāng)者。2柱溫： 40Co3流速： 0. 25mL/mino4進樣量： 2uLo5 流動相：A-5mmol/L乙酸鐵水溶液含0. 1%甲酸，B-乙睛。梯度洗脫條件見表 lo表1梯度洗脫條件時間 minA % B % 質(zhì)譜 參考條件 1電離方式:電噴霧電離 ESI；2掃描方式：正離子掃描；3檢測方式：多反響監(jiān)測 M

12、RM ；4離子源參數(shù)參考條件：離子源接口電壓， 4000V ；離子源接口溫度， 3509；脫溶劑溫度， 25 TC；離子源加熱溫度， 40CTC;霧化氣流速， 2. 9L/min ；枯燥氣流速 , 10.0L/min；加熱氣流速， 10. OL/mino5 定性離子對、定量離子對參見表2。表 2 喳諾酮類藥物主要質(zhì)譜參數(shù)序號組分母離子子離子Q1 預(yù)四極桿電壓碰撞電 壓 Q3預(yù)四極桿電壓 m/z m/z V V eV 1 諾氟沙星320. 2*302. 0-16-21-21231. 1-15-39-252 氧氟沙星362. 2*318. 2-30-18-24261. 1-30-28-193 洛美

13、沙星352. 0*265. 0-25-23-29308. 0-25-17-224 培氟沙星334. 0290. 1-25-18-20*316. 2-25-21-225 氟羅沙星370. 0*326. 0-30-20-23269. 0-29-28-266 沙拉沙星386. 2342. 0-15-19-25299. 1-29-30-20*368. 1-14-22-267 雙氟沙星400. 0*356. 0-17-20-25299. 0-17-28-288 司帕沙星393. 0*349. 0-30-21-28292. 0-30-21-249 環(huán)丙沙星332. 1*314. 1-25-21-22287

14、. 8-24-17-30231. 0-25-40-4010 達氟沙星358. 0*340. 1-26-23-24283. 2-14-24-3082. 1-26-44-1511 恩諾沙星360. 0*342. 1-27-20-25316. 0-13-20-22245. 2-28-27-1712D8- 環(huán)丙沙星340. 3322. 1-10-21-2213D5-恩諾沙星 365. 1321. 1-11- 19-2214D5-諾氟沙星 325.3307. 2-10-20-21 注: 1. “* 表示定量離子；2?所列質(zhì)譜參考條件是在島津 LC/MS-8050 質(zhì)譜儀上完成的，此處所列試驗用 儀 器型

15、號僅供參考， 不涉及商業(yè)目的， 鼓勵方法使用者嘗試不同廠家或型號 的儀器； 3?對不同質(zhì)譜儀，儀器參數(shù)可能存在差異，測定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最正確；4. 由于嘍諾酮類化合物離子化受基質(zhì)干擾較為顯著，方法使用者可根據(jù)實際情況選擇表中所列離子對進行定性定量測定。5. 4. 3標準曲線繪制取基質(zhì)標準工作溶液5. 3按濃度由低到高依次進樣檢測，內(nèi)標法繪制標準曲線。5. 5定性在相同實驗條件下，試樣中待測物質(zhì)的保存時間與標準工作溶液中對應(yīng)的保留時間偏差應(yīng)在 2. 5%之內(nèi)；且試樣譜圖中各組分定性離子的相對豐度與標準工作溶液定性離子的相對豐度， 其允 許偏差不超過表 3 規(guī)定的范圍時，那么可確定為樣品中存

16、在此種待測物。 基質(zhì)標準 溶液多反響監(jiān)測 MRM 典型圖譜見附錄 B。表 3定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度,%50%20%? 50% 10%? 20%八10%允許的相對偏差， 20% 5% 0%芳0%5. 6定量待測樣 液中唾諾酮藥物的響應(yīng)值應(yīng)在標準曲線線性范圍內(nèi)，諾氟沙星、氧氟沙星、 培氟沙星、氟 羅沙星以氛代諾氟沙星為內(nèi)標，洛美沙星、雙氟沙星、環(huán)丙沙 星、達氟沙星以氛 代環(huán)丙沙星為內(nèi)標，司帕沙星、沙拉沙星、恩諾沙星以氛 代恩諾沙星為內(nèi)標，內(nèi) 標法定量。本方法中所列內(nèi)標能根本滿足方法要求， 如條件允許，可采用各化合 物的對應(yīng)同位素化合物作為內(nèi)標。6 結(jié)果計算試樣測定結(jié)果按公

17、式 1 計算目標物的含量： . 1式中：X 試樣中被測組分的含量，單位為微克每千克ug/kg；m 試樣的稱樣量，單位為克 g;C 由工作曲線計算得到的試樣中被測組分的濃度，單位為納克每亳升昭/mL；V 定容體積，單位為毫升 mL。F稀釋倍數(shù)計算結(jié)果需扣除空白值空白基質(zhì)，并保存三位有效數(shù)字。7 檢測方法靈敏度、準確度、精密度 7. 1 靈敏度諾氟沙星、氧氟沙星、洛美沙星、 培 氟沙星、氟羅沙星、雙氟沙星、司帕沙星、達氟沙星、恩諾沙星檢出限均 為 5 u g/kg, 環(huán)丙沙星檢出限為7. 5 u g/kg,沙拉沙星檢出限為7. 5 R g/kg。諾氟沙星、氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟羅沙星、雙

18、氟沙星、司帕沙星、達氟沙星、恩諾沙星定量限均為 15ug/kg,環(huán)丙沙星定量限為 22.5U g/kg,沙拉沙星定量限為 22.5ug/kg07. 2準確度本方法在 15. 0? 100. Ou g/kg 的添加水平上的回收率范圍為 65. 0%? 120. 0%o7. 3 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù) 平均值 的 15%0附錄 A 標準品信息表 A.1 標準品中文名稱、英文名稱、 CAS 登錄號、分子式、相 對分 子質(zhì)量序號化合物名稱英文名 CAS 登錄號分子式相對分子質(zhì)量 1 諾氟沙 星 Norfloxacin70458-96-7C16H18FN3033

19、19. 332 氧氟沙星 0floxacin82419-36-lC18H20FN304361. 373 洛美沙星Lomef 1 oxacin98079-51-7C17H19F2N303351. 354 培氟沙星Pefloxacin70458-92-3C17H20FN303333. 365 氟羅沙星F1 eroxacin79660-72-3C 17H18F3N303369. 346 鹽酸沙拉沙星SarafloxacinHydrochloride91296-87-6C20H18ClF2N303421. 817 鹽酸雙氟 沙星 D 辻 loxacinHydrochloride91296-86-5C2