液相色譜法習(xí)題解答

1、液相色譜法習(xí)題解答液相色譜法習(xí)題解答1.從分離原理、儀器構(gòu)造及應(yīng)用范圍上簡要比較氣相色譜及液從分離原理、儀器構(gòu)造及應(yīng)用范圍上簡要比較氣相色譜及液相色譜的異同點(diǎn)。相色譜的異同點(diǎn)。解：二者都是根據(jù)樣品組分與流動(dòng)相和固定相相互作用力的差別進(jìn)行解：二者都是根據(jù)樣品組分與流動(dòng)相和固定相相互作用力的差別進(jìn)行分離的。分離的。從儀器構(gòu)造上看，液相色譜需要增加高壓泵以提高流動(dòng)相的流動(dòng)速度，從儀器構(gòu)造上看，液相色譜需要增加高壓泵以提高流動(dòng)相的流動(dòng)速度，克服阻力。同時(shí)液相色譜所采用的固定相種類要比氣相色譜豐富的多，克服阻力。同時(shí)液相色譜所采用的固定相種類要比氣相色譜豐富的多，分離方式也比較多樣。氣相色譜的檢測器主要

2、采用熱導(dǎo)檢測器、氫焰分離方式也比較多樣。氣相色譜的檢測器主要采用熱導(dǎo)檢測器、氫焰檢測器和火焰光度檢測器等。而液相色譜則多使用紫外檢測器、熒光檢測器和火焰光度檢測器等。而液相色譜則多使用紫外檢測器、熒光檢測器及電化學(xué)檢測器等。但是二者均可與檢測器及電化學(xué)檢測器等。但是二者均可與MS等聯(lián)用。等聯(lián)用。二者均具分離能力高、靈敏度高、分析速度快，操作方便等優(yōu)點(diǎn)，但二者均具分離能力高、靈敏度高、分析速度快，操作方便等優(yōu)點(diǎn)，但沸點(diǎn)太高的物質(zhì)或熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)難以用氣相色譜進(jìn)行分析。而只沸點(diǎn)太高的物質(zhì)或熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)難以用氣相色譜進(jìn)行分析。而只要試樣能夠制成溶液，既可用于要試樣能夠制成溶液，既可用于HPLC

3、分析，而不受沸點(diǎn)高、熱穩(wěn)定性分析，而不受沸點(diǎn)高、熱穩(wěn)定性差、相對分子量大的限制。差、相對分子量大的限制。2.液相色譜中影響色譜峰展寬的因素有哪些液相色譜中影響色譜峰展寬的因素有哪些? 與氣相色譜相比與氣相色譜相比較較, 有哪些主要不同之處有哪些主要不同之處?解解:液相色譜中引起色譜峰擴(kuò)展的主要因素為液相色譜中引起色譜峰擴(kuò)展的主要因素為渦流擴(kuò)散、流動(dòng)的流動(dòng)相傳質(zhì)、滯留的流動(dòng)相渦流擴(kuò)散、流動(dòng)的流動(dòng)相傳質(zhì)、滯留的流動(dòng)相傳質(zhì)以及柱外效應(yīng)。傳質(zhì)以及柱外效應(yīng)。在氣相色譜中徑向擴(kuò)散往往比較顯著，而液相在氣相色譜中徑向擴(kuò)散往往比較顯著，而液相色譜中徑向擴(kuò)散的影響較弱，往往可以忽略。色譜中徑向擴(kuò)散的影響較弱，往

4、往可以忽略。另外，在液相色譜中還存在比較顯著的滯留流另外，在液相色譜中還存在比較顯著的滯留流動(dòng)相傳質(zhì)及柱外效應(yīng)。動(dòng)相傳質(zhì)及柱外效應(yīng)。3. 在液相色譜中在液相色譜中, 提高柱效的途徑有哪些提高柱效的途徑有哪些?其中最有效的途徑是其中最有效的途徑是什么什么?解解:液相色譜中提高柱效的途徑主要有液相色譜中提高柱效的途徑主要有:1.提高柱內(nèi)填料裝填的均勻性提高柱內(nèi)填料裝填的均勻性;2.改進(jìn)固定相改進(jìn)固定相 減小粒度減小粒度; 選擇薄殼形擔(dān)體選擇薄殼形擔(dān)體; 選用低粘度的流動(dòng)相選用低粘度的流動(dòng)相; 適當(dāng)提高柱溫適當(dāng)提高柱溫其中其中,減小粒度是最有效的途徑減小粒度是最有效的途徑.4. 液相色譜有幾種類型液

5、相色譜有幾種類型?它們的保留機(jī)理是什么它們的保留機(jī)理是什么? 在這些類型在這些類型的應(yīng)用中的應(yīng)用中,最適宜分離的物質(zhì)是什么最適宜分離的物質(zhì)是什么?解解:液相色譜有以下幾種類型液相色譜有以下幾種類型:液液-液分配色譜液分配色譜; 液液-固吸附色譜固吸附色譜; 化學(xué)鍵合色譜化學(xué)鍵合色譜;離子交換色譜離子交換色譜; 離子對色譜離子對色譜; 空間排阻色譜等空間排阻色譜等.液液-固吸附色譜是通過組分在兩相間的多次吸附與解吸平衡實(shí)固吸附色譜是通過組分在兩相間的多次吸附與解吸平衡實(shí)現(xiàn)分離的現(xiàn)分離的.最適宜分離的物質(zhì)為中等相對分子質(zhì)量的油溶性試最適宜分離的物質(zhì)為中等相對分子質(zhì)量的油溶性試樣，凡是能夠用薄層色譜

6、分離的物質(zhì)均可用此法分離。樣，凡是能夠用薄層色譜分離的物質(zhì)均可用此法分離。其中其中;液液-液分配色譜的保留機(jī)理是通過組分在固定相和流動(dòng)相液分配色譜的保留機(jī)理是通過組分在固定相和流動(dòng)相間的多次分配進(jìn)行分離的?？梢苑蛛x各種無機(jī)、有機(jī)化合物。間的多次分配進(jìn)行分離的?？梢苑蛛x各種無機(jī)、有機(jī)化合物?；瘜W(xué)鍵合色譜中由于鍵合基團(tuán)不能全部覆蓋具有吸附能力的載化學(xué)鍵合色譜中由于鍵合基團(tuán)不能全部覆蓋具有吸附能力的載體體,所以同時(shí)遵循吸附和分配的機(jī)理所以同時(shí)遵循吸附和分配的機(jī)理,最適宜分離的物質(zhì)為與液最適宜分離的物質(zhì)為與液-液色譜相同。液色譜相同。離子交換色譜和離子色譜是通過組分與固定相間親合力差別而離子交換色譜和

7、離子色譜是通過組分與固定相間親合力差別而實(shí)現(xiàn)分離的實(shí)現(xiàn)分離的.各種離子及在溶液中能夠離解的物質(zhì)均可實(shí)現(xiàn)分各種離子及在溶液中能夠離解的物質(zhì)均可實(shí)現(xiàn)分離，包括無機(jī)化合物、有機(jī)物及生物分子，如氨基酸、核酸及離，包括無機(jī)化合物、有機(jī)物及生物分子，如氨基酸、核酸及蛋白質(zhì)等。蛋白質(zhì)等。在離子對色譜色譜中在離子對色譜色譜中,樣品組分進(jìn)入色譜柱后樣品組分進(jìn)入色譜柱后,組分的離子與對離組分的離子與對離子相互作用生成中性化合物子相互作用生成中性化合物,從而被固定相分配或吸附進(jìn)而實(shí)現(xiàn)從而被固定相分配或吸附進(jìn)而實(shí)現(xiàn)分離的分離的.各種有機(jī)酸堿特別是核酸、核苷、生物堿等的分離是離各種有機(jī)酸堿特別是核酸、核苷、生物堿等的分

8、離是離子對色譜的特點(diǎn)。子對色譜的特點(diǎn)?？臻g排阻色譜是利用凝膠固定相的孔徑與被分離組分分子間的相空間排阻色譜是利用凝膠固定相的孔徑與被分離組分分子間的相對大小關(guān)系對大小關(guān)系,而分離、分析的方法。最適宜分離的物質(zhì)是：而分離、分析的方法。最適宜分離的物質(zhì)是：另外尚有手性色譜、膠束色譜、環(huán)糊精色譜及親合色譜等機(jī)理。另外尚有手性色譜、膠束色譜、環(huán)糊精色譜及親合色譜等機(jī)理。5. 在液在液-液分配色譜中，為什么可分為正相色譜及反相色譜？液分配色譜中，為什么可分為正相色譜及反相色譜？解：采用正相及反相色譜是為了降低固定液在流動(dòng)解：采用正相及反相色譜是為了降低固定液在流動(dòng)相中的溶解度從而避免固定液的流失。相中的

9、溶解度從而避免固定液的流失。6.何謂化學(xué)鍵合固定相何謂化學(xué)鍵合固定相?它有什么突出的優(yōu)點(diǎn)它有什么突出的優(yōu)點(diǎn)?解解:利用化學(xué)反應(yīng)將固定液的官能團(tuán)鍵合在載體表面形成的固利用化學(xué)反應(yīng)將固定液的官能團(tuán)鍵合在載體表面形成的固定相稱為化學(xué)鍵合固定相定相稱為化學(xué)鍵合固定相.優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn): 固定相表面沒有液坑固定相表面沒有液坑,比一般液體固定相傳質(zhì)快的多比一般液體固定相傳質(zhì)快的多. 無固定相流失無固定相流失,增加了色譜柱的穩(wěn)定性及壽命增加了色譜柱的穩(wěn)定性及壽命. 可以鍵合不同的官能團(tuán)可以鍵合不同的官能團(tuán),能靈活地改變選擇性能靈活地改變選擇性,可應(yīng)用與多可應(yīng)用與多種色譜類型及樣品的分析種色譜類型及樣品的分析.1.

10、有利于梯度洗提有利于梯度洗提,也有利于配用靈敏的檢測器和餾分的收集也有利于配用靈敏的檢測器和餾分的收集.7. 何謂化學(xué)抑制型離子色譜及非抑制型離子色譜何謂化學(xué)抑制型離子色譜及非抑制型離子色譜?試述它們的試述它們的基本原理基本原理.解解:在離子色譜中檢測器為電導(dǎo)檢測器在離子色譜中檢測器為電導(dǎo)檢測器,以電解質(zhì)溶液作為流動(dòng)以電解質(zhì)溶液作為流動(dòng)相相,為了消除強(qiáng)電解質(zhì)背景對電導(dǎo)檢測器的干擾為了消除強(qiáng)電解質(zhì)背景對電導(dǎo)檢測器的干擾,通常除了分析通常除了分析柱外柱外,還增加一根抑制柱還增加一根抑制柱,這種雙柱型離子色譜法稱為化學(xué)抑制這種雙柱型離子色譜法稱為化學(xué)抑制型離子色譜法型離子色譜法.但是如果選用低電導(dǎo)的

11、流動(dòng)相（如但是如果選用低電導(dǎo)的流動(dòng)相（如10- 5 10-4M的苯的苯甲酸鹽或鄰苯二甲酸鹽），則由于背景電導(dǎo)較低，不干擾甲酸鹽或鄰苯二甲酸鹽），則由于背景電導(dǎo)較低，不干擾樣品的檢測，這時(shí)候不必加抑制柱，只使用分析柱，稱為樣品的檢測，這時(shí)候不必加抑制柱，只使用分析柱，稱為非抑制型離子色譜法非抑制型離子色譜法例如為了分離陰離子例如為了分離陰離子,常使用常使用NaOH溶液為流動(dòng)相，鈉離子的干溶液為流動(dòng)相，鈉離子的干擾非常嚴(yán)重，這時(shí)可在分析柱后加一根抑制柱，其中裝填高容擾非常嚴(yán)重，這時(shí)可在分析柱后加一根抑制柱，其中裝填高容量量H+型陽離子交換樹脂，通過離子交換，使型陽離子交換樹脂，通過離子交換，使Na

12、OH轉(zhuǎn)化為電導(dǎo)轉(zhuǎn)化為電導(dǎo)值很小的值很小的H2O，從而消除了背景電導(dǎo)的影響，從而消除了背景電導(dǎo)的影響XHNaRXNaHROHNaROHNaHR2何謂梯度洗提？它與氣相色譜中的程序升溫有何異同之何謂梯度洗提？它與氣相色譜中的程序升溫有何異同之處？處？解：在一個(gè)分析周期內(nèi)，按一定程序不斷改變流動(dòng)相的組成解：在一個(gè)分析周期內(nèi)，按一定程序不斷改變流動(dòng)相的組成或濃度配比，稱為梯度洗提是改進(jìn)液相色譜分離的重要手或濃度配比，稱為梯度洗提是改進(jìn)液相色譜分離的重要手段段梯度洗提與氣相色譜中的程序升溫類似，但是前者連續(xù)改變梯度洗提與氣相色譜中的程序升溫類似，但是前者連續(xù)改變的是流動(dòng)相的極性、的是流動(dòng)相的極性、pH或