NCCLS_EP6-A定量測量方法的線性評價_中文翻譯

1、EP6-AISBNISSN 0273-3099Volume 23 Number 16Evaluation of the Linearity of QuantitativeMeasureme nt Procedures:A Statistical Approach;Approved Guideli neEP6-A定量測量方法的線性評價:一種統(tǒng)計學(xué)方法，批準指南NCCLS通過自愿一致化的方式為世界醫(yī)學(xué)科學(xué)團體服務(wù)NCCL是醫(yī)療領(lǐng)域一個非贏利性的，不同學(xué)科之間，自愿參與的促進標準化和建立指南的教育組 織。NCCL創(chuàng)J建于1968年并獲得美國國家標準研究院的認可。NCCL所依據(jù)的原則是，對病人高質(zhì)量服

2、務(wù)所需的臨床實驗室檢測，自愿一致的標準是必不可少的。NCCLS!過各臨床實驗室、檢驗團體學(xué)會、工廠和政府機構(gòu)的參與而代表臨床檢驗界。敘述了文件敘述了實驗室的程序、常規(guī)和參考方法以及評估方案可應(yīng)用于所有檢驗學(xué)科。文件 審核的一致化過程由一些正式的步驟組成，敘述了 NCCL文件和規(guī)范的編制如何發(fā)展到被接受為臨床實驗室標準。出版物NCCL文件以標準、指南、委員會報告出版。標準： 通過一致化過程形成的文件，并對材料、方法、或?qū)嵺`以不能修改方式明確規(guī)定其特 定的基本要求。此外，標準也可以包含明確規(guī)定的選定要素。指南： 通過一致化過程形成的文件， 敘述了用于臨床檢驗界的一般實驗操作、 方法或材料的 規(guī)范。

3、使用者可以使用成文文件或修改指南以適應(yīng)特定的需要。報告 ：沒有經(jīng)過一致化審定過程的文件，由理事會頒布。標準”一詞，除了有特定含義外，還常用來指有關(guān)的NCCLS件。一致化過程NCCLS勺自愿一致化審定程序是一個為以下方面建立正式規(guī)范的方案：1. 標準項目的權(quán)威性2 文件的編制和公開評審3 根據(jù)實驗室使用者反饋的評論修改文件4 文件被接受為臨床實驗室標準大多數(shù)NCCL文件必須有 建議”和 批準”兩種層次的一致化文件，根據(jù)特定的一致化過程，文件 也可以有一個中間（ “試行”）一致化的水平層次。建議：NCCL文件作為建議標準或指南處在被臨床檢驗界評審的第一階段。此文件需要接受廣泛徹底的技術(shù)審核，包括對

4、范圍、方法、用途和逐字逐行對技術(shù)和行文內(nèi)容的全面評審。試行： 只有當一種推薦方法對某一領(lǐng)域的評審有明確的需要，或者當某一建議性方案需要收集特定的數(shù)據(jù)時，才制定試行標準或指南。它應(yīng)該接受評審以保證其有效性。批準： 批準的標準或指南已在臨床檢驗界得到一致同意。 應(yīng)審定并評價最終文件的用途， 以 保證獲得一致同意（即對以前版本的意見已圓滿解決） ，并確定對其它標準的需要。NCCLS標準和指南為良好實驗室實踐（GLP）提供了一個一致化的意見。NCCL標準和指南的條款較之應(yīng)用規(guī)定多少要嚴格些。因而，遵守這些自愿一致性標準（或指南）不能減輕使用者對 遵守應(yīng)用規(guī)定的責任。評論實驗室使用者的評論對一致化過程是

5、很重要的。任何人都可以提出評論，根據(jù)一致化過程由書寫文件的NCCL委員會記錄下所有評論。在下一層次文件出版時，這些評論或者修改了文件 或者委員會在文件附錄中給以反饋。強烈鼓勵讀者以任何形式、在任何時間對任何NCCLS件提出 評 論 。 評 論 寄 往 NCCLS 行 政 辦 公 室 ： 940 West Valley Road, Suite 1400,Wayne,Pennsylvania19087,USA。自愿參與強烈希望各專業(yè)的實驗室科學(xué)家能自愿參加NCCL項目。請與NCCLS亍政辦公室聯(lián)系以取得有關(guān)參加委員會的更多的信息。摘要 i委員會成員 iii前言 vii1 范圍2 介紹2 1 目的2

6、 2 選擇方法2 3 定義2 4 實驗方法的概述3 時間要求3 1 儀器熟悉階段3 2 實驗階段4 實驗條件的評價41 樣本要求42 基質(zhì)效應(yīng)43 可接受的基質(zhì)體系44 樣本中添加物的選擇4 5 分析順序46 分析范圍47 樣本準備和濃度計算48 數(shù)據(jù)收集49 臨床上幾個重要的濃度水平5 線性范圍驗證 數(shù)據(jù)評估5 1 初步的數(shù)據(jù)檢查5 2 離群值檢查5 3 線性范圍的確定5 4 考慮隨機誤差6 線性范圍發(fā)布6 1 圖表方法6 2 發(fā)布線性范圍的確認63允許誤差與設(shè)定目標64其它誤差的影響65假設(shè)66 文獻發(fā)布線性聲明的指導(dǎo)方針附錄 A樣本稀釋方法附錄Bt值表附錄 C舉例相關(guān)工作組和評論摘要 相

7、關(guān)工作組和委員評論摘要 質(zhì)量系統(tǒng)方法相關(guān)NCCLSH版物當某分析物濃度或活性的測量值與真值成數(shù)學(xué)上的直線關(guān)系時，我們認為這種定量測定方 法是線性的。對于分析和臨床實驗方法來說，線性特征是非常重要的。線性關(guān)系代表一種最簡 單的數(shù)學(xué)關(guān)系，使分析物的結(jié)果測量變得簡單而容易。曾有爭論，對于競爭免疫法這類測量方法來說，線性不是必須的，因為測量方法的響應(yīng)物 與濃度之間本來就呈非線性關(guān)系。然而，響應(yīng)物的劑量效應(yīng)曲線可以通過合適的轉(zhuǎn)換變成數(shù)學(xué) 上的線性關(guān)系，而且對于一種分析方法來說，只有兩點之間呈線性關(guān)系時， 才能進行計算結(jié)果。確保分析方法呈線性在臨床上也是很重要的。臨床醫(yī)生清楚某分析物量與患者的病理生理 過

8、程并非呈線性，但是他們非常希望實驗室報告的結(jié)果與該分析物的真實濃度水平或數(shù)量或活 性是呈線性關(guān)系的。例如，當一個樣本中分析物的量多一倍時，臨床醫(yī)生期望其測量值也是翻 倍的。本版本說明：與以前版本相比EP6-A最大的改變是統(tǒng)計學(xué)方法的改進。第一版EP6-P僅用線性失擬誤差檢驗（LoF僉驗）來判斷線性關(guān)系。在本標準中，分析時選 取五個等間距的不同濃度水平的分析物，每個濃度水平測量四次。回歸線由所有點所得，同時 得到兩個方差即：由重復(fù)測量得到的樣本方差和由五個平均值的回歸線得到的均值方差。這些 方差的比值即為LOFF僉驗的基礎(chǔ)。這種方法的缺點是精密度好的檢測系統(tǒng)有很小的樣本方差，在LOF僉驗的比率中

9、，均值方差很小時，得出在統(tǒng)計學(xué)上差異顯著，即呈非線性。也可能（概率很 小）由于樣本方差很大（重復(fù)性差）而導(dǎo)致臨床上很重要的非線性得出相反結(jié)果。EP6-A的多項式回歸在概念上與最初的 LOFF僉驗非常相似。它們都有兩種統(tǒng)計模型（線性與 非線性），都是評價那種是最可能的模型。然而，EP6-A乍為一種多項式回歸方法，是一種非線性選擇的特殊參數(shù)模型，特別能夠很好地鑒別非線性。精密度與線性成比例關(guān)系。精密度好時 有利于判斷線性關(guān)系，精密度差時則不利于確定線性關(guān)系。這種方法可以： 1）在每個水平上判斷非線性度， 2）在評價非線性時可以控制不可接受的 精密度， 3）提供一種可測試的統(tǒng)計模型， 4）在很多軟件

10、上可以進行編程。在以前的版本中也提到過，評價線性關(guān)系時， 首先必須在圖上點上數(shù)據(jù)。 通過目測有助于 判斷使用哪種統(tǒng)計學(xué)方法和是否具有線性關(guān)系，非線性度是否與預(yù)期的目標相近。術(shù)語注釋美國臨床實驗室標準化委員會（NCCL或CLS）作為全球標準化的領(lǐng)導(dǎo)者，正努力使全球各種標準盡可能協(xié)調(diào)一致。協(xié)調(diào)一致是一個在認知、理解、解釋差異各方面逐步達到全球一致 的過程。NCCL認識到醫(yī)學(xué)術(shù)語在美國、歐洲和其他地方表達不一致，這些不同也表現(xiàn)在NCCLS 國際標準化組織（ISO）和歐洲標準化委員會（CEN的文件中。因此NCCLS認識到醫(yī)學(xué)術(shù)語的統(tǒng) 一有利于全球標準化的統(tǒng)一，應(yīng)得到立即重視。這項政策的實行是一個發(fā)展和

11、教育的過程，從 一些新項目和現(xiàn)有文件的修訂開始。為使ISO與NCCL莊一些術(shù)語上保持一致，下列術(shù)語用在EP6-A文件中：Trueness（準確度）指多次測量的平均值和分析物的真實值的接近程度。Repeatability（重復(fù)性）代替批內(nèi)精密度，可以恰當?shù)赜脕砻枋鲈谝欢l件下連續(xù)測量同份分析物的接近程度。Measurement procedure（ 測量程序）代替 Analytical method（ 分析方法 ），指一系列用給定的方法完成的特殊操作。Measurementrange（測量范圍）代替Reportable range（可報告范圍），指測量誤差限定在一個特定范圍內(nèi)的分析物 測量的一系

12、列值。 Measurement error/error of measurement（ 測量誤差 ）代替 total error（ 總誤差 ）， 指測量值與真值的差值。所有的術(shù)語和定義為了能得到更廣泛的應(yīng)用，在下一次的版本中將再一次修正。標準防護由于不知道何種標本有傳染性， 因而所有的人體的血液標本都被當作有傳染性， 操作時都 要按標準防護執(zhí)行。標準防護是一種新的防護指南，主要強調(diào)全身防護和與身體隔離的原則。 標準防護是防止所有的病原體，比僅防止血源性病原體更廣泛。標準防護和全身防護指南見美 國CDC文件和NCCLS M29-保護實驗室員工避免職業(yè)性感染。關(guān)鍵詞：允許偏差，允許誤差，線性，基質(zhì)

13、效應(yīng)，測量誤差，總誤差，不確定度定量測量方法的線性評價一種統(tǒng)計學(xué)方法，批準的指南1 范圍 本文件提供一種建立、 驗證和 / 或證實定量測量方法線性范圍的操作方法， 它不能鑒別非線 性的原因，用更多的樣本數(shù)，可以更可靠地判斷線性關(guān)系。如果一個線性評價失敗，要求重做， 可以用更多的重復(fù)次數(shù)，或減少樣本數(shù)而縮小線性范圍。本指南主要是評價線性關(guān)系，盡可能不受精密度和準確度的影響。精密度很差時，會妨礙 線性關(guān)系的評價，因而重復(fù)性的檢查也包括在內(nèi)。實驗過程中會用到一些基質(zhì)，盡可能與分析標本的類型一致（血清、血漿、尿液等） 。 本指南要求實驗室設(shè)定非線性誤差的目標，只提供基本概念，沒有特定的要求。2 介紹2

14、1 目的 本指南的目的旨在提供一種定量測量程序線性評價的統(tǒng)計學(xué)方法。首先要確定一種方法的 非線性濃度范圍，及在每個濃度水平上非線性的程度。本指南強調(diào)任何用戶有必要確定自己對 線性程度的要求，或非線性的允許誤差范圍。評價線性覆蓋范圍的Global檢驗（如LoF檢驗）不是特別重要。 Global 檢驗僅僅表明統(tǒng)計學(xué)上的非線性存在，不能顯示非線性存在哪里，也不能 顯示誤差的大小。 線性試驗有助于評價偏倚的大小 （但非線性并不是偏倚的全部） ，偏倚是測量 誤差的一部分。用戶必須定一個目標，確定自己所要求的測量誤差、偏倚、隨機誤差（不精密度）、非特異性（干擾）的大小。EP-6A僅僅是指導(dǎo)用戶的一系列方法

15、評價文件中的一種，請參照最近發(fā)布 的EP-21文件-臨床實驗方法的總分析誤差。本文件適用范圍很寬，當需建立一種方法的線性范圍時，我們需要測試一個很寬的分析濃 度范圍，然后逐漸縮小直到有可接受的線性范圍。如果用戶在自己的實驗室要驗證已知的線性 范圍（廠家提供） ，測量時僅覆蓋該范圍即可。操作方法大體相似，不同的僅僅是分析的濃度水 平和重復(fù)的次數(shù)。22 方法選擇有很多的方法用來評價線性范圍。Kroll和Ema ncipator提出一種基于直線回歸方程與多項式方程比較的方法，用殘差（即每一個數(shù)據(jù)點到回歸直線的差值）來定義線性。這種方法的優(yōu)點 是非常可靠，且基于嚴格的科學(xué)原理。如果得出線性適合（一次多

16、項式）則說明測量方法是線 性的。但這種方法并不簡單，用戶必須對實驗數(shù)據(jù)（多用表格設(shè)計）進行多次多項式回歸。這種方法被Kroll、Praestgard、Mechaliszyn和Styer進一步改進，并被美國病理學(xué)家學(xué)會實驗室間方法 比對所采用。Krouwer和Schlain提出一種通用的方法，即LPO (last point of the line),需要多次計算最小二乘法方程。Tholen提出一種圖解連同回歸線性失擬誤差與目標百分比對比的評價方法，對連續(xù)線性片斷進行簡單的斜率分析。23 定義允許偏差 /誤差 (Allowable difference/allowable error) ：在一個

17、檢測系統(tǒng)中，來自各種因素的，用 戶能夠承受并能滿足醫(yī)學(xué)要求的分析偏差的大小。通常單次檢測的允許誤差的范圍用標本測量 靶值允許誤差來表示。分析物(Analyte):具有某一名稱的定量測定成分(ISO FDIS 17511分析結(jié)果(Analytical result):在本文件中指一個試驗標本的最后測量結(jié)果。大多用濃度或活性 表示。偏倚(Bias):測量值與公認參考值之間的差異。注：一般情況下，偏倚指公認的方法(決定性， 參考性或指定方法)與比較方法的測量結(jié)果的差值，用數(shù)值或百分數(shù)表示。自變量(In put variable ):非獨立變量(in depe ndence variable )，與因

18、變量(output variable)相 對應(yīng)，用X表示，它的值點在 X軸上。截距( Intercept/Y intercept -1 ):表示一個函數(shù)與數(shù)軸的交叉點， 當一個變量為 0時另一個變量的 值。如y截距表示當x為0時的y值大小。最小二乘法(Least square regression)： 種統(tǒng)計學(xué)方法，由所有數(shù)據(jù)點得到的直線或曲線上每 個點到X軸(即與丫軸平行)的垂直距離的平方和達到最小。線性方程(Linear squation):代表線性關(guān)系的方程式，典型的線性關(guān)系方程表達式為：Y=a+bXX和 丫分別為自變量和應(yīng)變量，b為斜率，a為丫軸截距。線性范圍(Linear range

19、):在本指南中，指覆蓋檢測系統(tǒng)可接受線性關(guān)系的范圍，非線性誤差小 于設(shè)定標準。線性(Linearity):在檢測樣本時，可以直接按比例得出分析物含量(一定范圍內(nèi))的能力。 線性回歸(Linear regression)：待測變量(非獨立)的浮動經(jīng)?？梢?部分地)歸因于其他變量(獨立)，回歸的方法量化了獨立變量和非獨立變量之間的關(guān)系。線性回歸其因變量與各回歸 參數(shù)之間為線性關(guān)系。測量誤差(Measurementerror):測量結(jié)果減去真值(或公認的參考值)的大小。測量程序( Measurement procedure ):一系列操作規(guī)程，根據(jù)給定的方法，用于特定的檢測。測量范圍(Measure

20、ment range ):指測量儀器的誤差在特定范圍內(nèi)的一系列分析物的測量結(jié)果， 以前稱為可報告范圍。應(yīng)變量( Output variable )：獨立變量，與自變量相對應(yīng)。多項式回歸( Polynomial regression )：不同階別的多次最小二乘法回歸Y=a+b1X一次多項式或者擬合直線Y=a+b1X+b2X2二次多項式Y(jié)= a+b1X+b2X2+b3X3三次多項式重復(fù)性( Repeatability )： (測量儀器 )在相同的測量條件下，對同一樣品多次測量，測量儀器重 復(fù)給出十分相近示值的能力， 重復(fù)性可以用示值的離散特性定量表示。 必須在相同的測量程序、 相同的儀器設(shè)備、相同

21、的位置、在較短的時間內(nèi)重復(fù)等。回歸標準誤 ( Standard deviation of y about a regression/standard error of regression，SDy,x)： 獨 立變量丫與預(yù)期變量X相對應(yīng)的可估計變量 Y平均值之間的差量檢測大小。檢測系統(tǒng)(Testi ng system)：包括測量過程的所有因素，如儀器、樣本、人員、試劑、輔助材料 和操作等，也包括樣本類型、測試溫度、濕度等。準確度(Trueness): 一組連續(xù)測量結(jié)果的平均值與公認參考值的接近程度。準確度一般用測量 偏倚(數(shù)字)來表示，準確度與偏倚呈相反關(guān)系。24 實驗方法的概述本指南所用的多

22、項式回歸最初由 Kroll等提出，有嚴密的統(tǒng)計學(xué)規(guī)律，且容易用表格來完成。 可以參考一般的統(tǒng)計學(xué)文獻、書籍或統(tǒng)計軟件。多項式評價線性首先假設(shè)數(shù)據(jù)組呈非線性， 所有數(shù)據(jù)點能用直線或曲線的數(shù)學(xué)方程來表達， 隨機誤差在可接受范圍內(nèi)，則不論最適曲線是直線與否，都不影響(線性范圍內(nèi))實驗數(shù)據(jù)點 之間其他濃度反應(yīng)狀況，并能得到連續(xù)可靠的結(jié)果。收集數(shù)據(jù)時要求有 5到 9個不同濃度的標本多次測量，不同的濃度標本之間稀釋關(guān)系已知， 不要求各濃度之間呈等距的。本質(zhì)上，多項式回歸是設(shè)計用來評價曲線的反應(yīng)模型，因而它適合于評價非線性。這種方 法由兩部分組成，第一部分是檢查非線性模型是否比線性模型更適合于數(shù)據(jù)組；第二部

23、分是評 價最適非線性模型與線性模型的差值(每個點)是否小于該方法所允許的偏差。31 熟悉儀器設(shè)備 評價分析程序的實驗室人員必須十分熟悉儀器的操作、質(zhì)量控制和定標方法，以及正確的 收集樣本等，廠商提供的培訓(xùn)是非常有用的。儀器設(shè)備在實驗室必須安裝和使用一段時間，實 驗室人員能理解和正確操作儀器。32 實驗時間全部實驗數(shù)據(jù)盡可能在較短的時間內(nèi)收集，如可能，單個分析試驗最好在一天內(nèi)做完。4 實驗條件評價建立一個檢測系統(tǒng)的線性范圍比驗證線性范圍來說，所需的實驗條件是不同的，前者需要 更多的實驗標本和重復(fù)次數(shù)，后者只需一系列已知濃度或相互間稀釋關(guān)系的標本，測量順序都 是隨機的。41 標本要求線性評價實驗要

24、求有足夠量的標本，要能滿足五個或更多濃度標本的稀釋和測量。當驗證 線性范圍時，需要 5到 7個能覆蓋整個線性范圍（廠家提供）的不同濃度的標本，每個濃度水平 測量兩次。當一個新的測量方法（或廠家或?qū)嶒炇腋牧家粋€實驗方法時）需要建立新的線性范圍時， 需要 7到 11能覆蓋預(yù)期的測量范圍的不同濃度的標本。生產(chǎn)商希望有更多的測量點 （比預(yù)期的線性范圍寬2030%）,這樣能檢測到 拐點”就能確定更寬的線性范圍。根據(jù)不精密度的大小， 每個濃度水平測量24次。五個測量點是多元回歸方法評價線性范圍時的最低要求,更多的測量點能更精確的評價線 性,得到的線性范圍更寬。本指南推薦用高值和低值濃度的樣本按比例精確配成

25、等間距的不同濃度樣本,但等間距不 是本方法所必需的。只要各標本間的相互關(guān)系已知,配成特殊濃度的樣本也是可以接受的。在 本評價實驗中,在實驗室內(nèi)用移液管精確地吸取高低值濃度標本配成的混合物的誤差比單個的 稱量法配制不同濃度的標本的誤差要小。 在吸取小容量標本時要小心, 用正位移液管比較有用。 5到11個濃度水平的等間距標本的配制方法見附錄A。如果用到商品化的體外診斷試劑,需將廠家附上。在全自動、半自動和手工化學(xué)操作系統(tǒng) 上,這些試劑可用于定標、驗證測量范圍和線性等。42 基質(zhì)效應(yīng)用于驗證線性范圍的標本類型應(yīng)與臨床測試所用的標本類型相類似,所有標本應(yīng)不含廠家 所標定的干擾因素（如溶血、黃疸、脂血等

26、） 。如果上述條件不可避免,則應(yīng)在最后的報告中注 明在評價實驗中所用的標本處理方法或基質(zhì)類型。注意：標本處理時加入不同的摻雜物,與人 的標本相比,會造成不同的影響。43 可接受基質(zhì)體系如果多種基質(zhì)標本類型（如尿液、血清、腦脊液、全血等）在實驗中用到,則應(yīng)評價每種基質(zhì)類型。請參考最新版本的NCCLS勺EP14文件一基質(zhì)效應(yīng)的評價。以下為可能用到的樣本類型， 注意在一些特殊方法時要選擇合適的基質(zhì)。病人標本理想的樣本類型是病人的標本，用接近于預(yù)期的可報告范圍上限和下限（或測量低限）的 兩個分析濃度的標本配成所有標本濃度。 由于我們測定的病人標本的最終濃度代表驗證的范圍， 因而最后的高和（或）低值濃度

27、需要調(diào)整才能達到期望的范圍。用推薦的稀釋液稀釋病人樣本 用于稀釋病人高濃度樣本的液體對測量結(jié)果是有影響的，只有廠家推薦的或?qū)嶒炇乙炎C實 可用的稀釋液才能用于稀釋樣本。對于有些分析系統(tǒng)來說，允許用病人的標本稀釋法來評價線 性，可用經(jīng)認可的稀釋液來對超過分析范圍的病人標本進行稀釋，這時需提供材料證明該稀釋 液是可用于該分析系統(tǒng)的。如可能時，廠商建立分析系統(tǒng)時，應(yīng)包括稀釋液的研究。可能情況下，生產(chǎn)廠家在制定測量方法時要考慮到稀釋液的研究。 病人樣本中添加分析物當分析物中不含干擾物時，添加的分析物不需要高純度。當存在干擾物時，在報告中需提 及其來源、 純度、 預(yù)期影響等。 如果含分析物的濃溶液加入病人

28、標本中時， 加入量盡可能少 （原 則上少于總體積的 10%），并記錄溶劑。用低濃度或者處理過的標本物質(zhì)稀釋樣本 如果可能，用低濃度的病人標本。做為選擇，可以適當?shù)靥幚聿∪藰吮疽越档头治鑫餄舛?（如透析、熱處理、層析） 。注意這些處理可能改變分析物或基質(zhì)的物理或化學(xué)特性。尤其重要 的是保持恒定的基質(zhì)要好于通過稀釋得到低的基質(zhì)效應(yīng)。商業(yè)質(zhì)控物 /定標物 /線性物質(zhì) 如果用到這些物質(zhì)，同病人標本一樣進行分析，可以用高值和低值標本進行混合得到中間 濃度。要注意分析物要保持正常生理狀態(tài)下的形式（如蛋白結(jié)合或代謝產(chǎn)物狀態(tài)） 。用鹽水或其它稀釋劑而不是推薦稀釋液 如用到這些稀釋液，注意基質(zhì)效應(yīng)可能會影響到檢

29、測結(jié)果。這些稀釋液要用最小量，并可 以查證其可用。低稀釋 / 過稀釋商業(yè)質(zhì)控物 如用到這些稀釋液，注意基質(zhì)效應(yīng)可能會影響到檢測結(jié)果，而且隨濃度的不同而改變。這 些稀釋液要用最小量，并可以查證其可用，同時要保證質(zhì)控物完全溶解。水溶液 當用水溶液時，對分析方法的響應(yīng)曲線的影響未測試，基質(zhì)效應(yīng)可能影響到響應(yīng)曲線和結(jié) 果的解釋。盡管高純度的材料可以最大程度的減少干擾效應(yīng) （影響結(jié)果的解釋） ，但低純度的材 料也可以接受。大量的常規(guī)臨床生化方法的定標都是用水溶液材料，稱量法可用來確定靶值。其它溶劑當用有機溶劑作稀釋劑時，基質(zhì)效應(yīng)可能更大。制成分析樣本的添加物的選擇選擇添加物時要仔細考慮，使用其它物種來源

30、的原料也會引起一些影響。表1為一些分析物的建議原料，儀器或試劑廠家的建議也可能有助于確定合適的材料。表1 樣本添加原料分析物原料ALT純酶Alb白蛋白干粉，人V片斷酒精無水乙醇ALP如果沒有咼濃度的病人樣本，用純酶AST純酶淀粉酶唾液或胰腺提取物BIL如果沒有高濃度的病人樣本時，用純膽紅素，或低稀釋的高值質(zhì)控品 或標準品膽固醇純膽固醇或質(zhì)控品C02碳酸鈉或碳酸氫鈉CK純酶Cr無水標準品或高值病人樣本yGT純酶Hb洗滌后的人類紅細胞溶血液Het微量咼速離心后的紅細胞LDH純酶脂酶胰腺提取物P磷酸二氫鈉或鉀Mg氯化鎂TP干粉白蛋白，人（首選）或牛 V片斷（由于總蛋白中含有很多種成分， 因而有代表性

31、的總蛋白的添加物很難確定。如果用白蛋白或非人的一 些成分，在實驗細節(jié)和結(jié)果中要注明）WBC白細胞棕黃層注意：當使用蛋白質(zhì)或酶時，要確保其物理和/或化學(xué)活性的一致性。4. 5分析順序分析順序應(yīng)是隨機的，但如果存在明顯攜帶污染或漂移，則可妥協(xié)。46 分析范圍 選擇的測量濃度范圍應(yīng)包含或等于廠家所聲明的最低和最高濃度范圍，如果聲明的線性范 圍或測量范圍與選擇的濃度范圍不一致時，可以選擇合適的樣本濃度加做新的實驗，或舍去未 端點適當?shù)乜s小線性范圍（五個或以上的樣本數(shù)） 。當建立方法的線性范圍時，需 7到 11個樣本，且 20%到30%的樣本的濃度范圍超出預(yù)期的測 量范圍，在可接受的線性響應(yīng)范圍內(nèi)，試圖

32、舍去非線性點，可得到較寬的線性范圍。47 樣本準備和濃度計算 如果高值和低值濃度是未知的，每一管必須編號來確定它的相對濃度。對于等間距濃度來 說，每管可以用整數(shù)（如 1， 2，3，4，5等）來分配號碼，也就是說，每一管的的濃度分析前可 以未知。驗證線性范圍時，高值和低值的測量均值要用到。如果中間分析管的濃度不是等間距 的，相鄰管之間的相互關(guān)系一定是已知的。 也可以先用高值和低值濃度配制成一個中間濃度管， 然后用低值和中間濃度、高值和中間濃度分配其它管的濃度。以下以五個濃度等間距的配制（參考附錄A: 5到11個等間距濃度的分配方法）舉例。在一些實驗室，優(yōu)先考慮稱量法來配制溶液。不管用何種方法準備

33、低高值溶液，操作時要小心、謹 慎。（1 ）高值和低值濃度管要用可以接受的基質(zhì)，要滿足整個實驗過程中的用量，具體量的 多少要依賴于分析中所用體積決定。注意在操作過程中，要有最準確和精確的加樣技術(shù)。下面 為等間距分配各管濃度。（ 2）低濃度（理想狀態(tài)為接近或位于線性范圍下限）管編號為 1 ，高濃度管編號為 5； （3）中間濃度管由高濃度和低濃度管按恒定的間距配成不同的濃度，一種簡便的配制中 間濃度的方法如下：第2管為3份低濃度和 1份高濃度標本混合而成；第3管為 2份低濃度和 2份高濃度標本混合而成； 第4管為1份的低濃度和 3份的高濃度標本混合而成。每管的濃度由以下公式來計算，第 1管的濃度為C

34、1,體積為V1,以此類推，第5管的濃度和 體積分別為C5和V5:濃度 C= （ C1 V1+C5 - V5） / （V1+V5） 每管的濃度和體積單位必須一致，注意每管要充分混勻，并防止蒸發(fā)或其它改變。 如當檢測系統(tǒng)每測試需要反應(yīng)體積為，每濃度水平測量2次，則至少需且還須考慮反應(yīng)死體積。高濃度管濃度為 120單位，低濃度管濃度為 40單位，注意測量前不需知道實際濃度。樣本管 1和 5每管需體積量；樣本管 2：加的第 1管溶液和的第 5管溶液；樣本管 3：加的第 1管溶液和的第 5管溶液；樣本 管4： 加的 第 1管 溶液和 的 第 5管溶 液， 第 4管 溶液 的濃度 計 算 為： （40*+

35、120*/+=100 單位。預(yù)期各管濃度分別為 40， 60，80，100和120單位。 將分析測量結(jié)果（作為已知濃度）和管號數(shù)（1， 2，3，4和5）或計算濃度作散點圖。如果需用到其它濃度，要知道相互的間隔關(guān)系，且相互間隔適合在座標圖表上表示。如需 配制 110單位的上述分析物溶液， 則可以用的第 1管溶液和的第 5管溶液混勻， 它的編號數(shù)為。 用 相同的計算方法可以得到其它任何的濃度。48 數(shù)據(jù)收集數(shù)據(jù)可以很方便地記錄在工作表或計算機表格程序中。 以下是根據(jù)不同目的所推薦的樣本 數(shù)。建立線性方法： 9到 11個樣本，每個樣本重復(fù)測定 2到4次；驗證聲明范圍或改良方法： 7到 9個樣本，每個

36、樣本重復(fù)測定 2到3次； 在實驗室內(nèi)證實線性范圍有效性： 5到 7個樣本，每個樣本重復(fù)測定 2次。 樣本測量時要隨機分布，在一個分析批內(nèi)或連續(xù)分析批中。數(shù)據(jù)的刪除按和 操作。重復(fù)測量的次數(shù)要足夠， 以便可靠得出各管的濃度。 對于某些分析物， 或在某個濃度水平， 需重復(fù)測量 3-5 次。用戶要能準確地判斷重復(fù)測量的次數(shù)，本指南不反對在不同的濃度水平重復(fù) 不同的次數(shù)。49 臨床上幾個重要的濃度水平 評價線性范圍時，要注意幾個重要的濃度：最低分析濃度或線性范圍的下限，不同的醫(yī) 學(xué)決定水平值，最高分析濃度或線性范圍的上限。5線性范圍的核實 數(shù)據(jù)評估初步數(shù)據(jù)檢查 檢測結(jié)果首先要綜合評價其可接受性和有效性

37、。如果數(shù)據(jù)不可用，參照設(shè)定誤差目標。詳 細的結(jié)果評估必須逐步參照以下模式：1）檢查數(shù)據(jù)是否有極端明顯的差異（或錯誤） ，如果有分析或技術(shù)性問題被發(fā)現(xiàn)并得到 糾正，則重復(fù)整個實驗過程。2）如果沒有發(fā)現(xiàn)極端明顯的分析或技術(shù)性結(jié)果差異（或錯誤） ，目視檢查每一個分析的 所有結(jié)果有無潛在的離群值。將測量數(shù)據(jù)作為丫值，計算濃度或相對濃度作為 X值進行 作圖。在圖上，每一個Y值有一個對應(yīng)的X值，將每個濃度水平重復(fù)測定的均值點在 圖上，手工方法或用計算機將這些點連接起來，觀察每個點與直線的大致偏差，這樣 容易發(fā)現(xiàn)異常點，明顯的抄寫錯誤，或儀器故障等。3）如果需要， 將每一組的檢測數(shù)據(jù)按檢測時間次序排列， 檢

38、查是否有漂移或趨勢性變化。 如果發(fā)現(xiàn)任何明顯的偏差， 糾正錯誤后， 整批數(shù)據(jù)必須被代替。 要避免沒有糾正錯誤， 選擇多次重復(fù)測定結(jié)果中的 “好”數(shù)據(jù)進行替代。數(shù)據(jù)中可以發(fā)現(xiàn)操作中存在的真實問 題。4）觀察每個濃度水平的測量值之間差值。在線性模型中，各段的斜率大致相等，升高或 降低趨勢提示非線性。5）當某一個給定濃度的一個測量值（yi）明顯偏離另一個丫值時，目視檢查就可以判斷它 是一個離群值（參照） 。離群值應(yīng)從數(shù)據(jù)中刪除。6）如果發(fā)現(xiàn)兩個或以上不可解釋的離群值，就應(yīng)懷疑檢測系統(tǒng)的性能。查找問題原因， 必要時請求生產(chǎn)廠家協(xié)助。7）目視檢查XY散點圖對于后續(xù)的線性評估是非常重要的，它可以很容易的發(fā)

39、現(xiàn)非線性， 或測量范圍是否太窄或太寬，也可以為后續(xù)的統(tǒng)計分析選擇更合適的統(tǒng)計分析方法。離群值檢查 在本指南中，離群值指單個檢測結(jié)果目視或在統(tǒng)計學(xué)上明顯偏離其它檢查結(jié)果，僅適用于 評價單個重復(fù)測定結(jié)果，而不適用于某濃度水平的多次重復(fù)測定或測量均值。出現(xiàn)離群值提示 非線性或存在系統(tǒng)誤差。離群值檢查可以發(fā)現(xiàn)錯誤來源（抄寫錯誤、系統(tǒng)不穩(wěn)定等），或推測錯誤原因。深入的討論參見 ASTME 178-94。離群值指某結(jié)果不適用其它數(shù)據(jù)所擬合的模型，可以 通過統(tǒng)計學(xué)方法計算，但大多數(shù)情況下，目視檢查檢測值與預(yù)期值就可以發(fā)現(xiàn)離群值。單個離 群值在數(shù)據(jù)組中可以刪除而不用更換，如果有一個以上的離群值出現(xiàn)，檢測系統(tǒng)可

40、能精確度太 低，應(yīng)按標準方法刪除，這種情況下必須找到原因并糾正。確定線性范圍方法概述：多項式線性評價多項式線性評價首先是假設(shè)數(shù)據(jù)點是非線性的，在隨機誤差很小的前提下，假設(shè)數(shù)據(jù)點完 整地落在線性或曲線范圍內(nèi)。不論最適曲線是線性與否，都不影響（線性范圍內(nèi)）實驗數(shù)據(jù)點 之間其他濃度的反應(yīng)狀態(tài)，并可得到連續(xù)、可靠的結(jié)果的能力。事實上，多項式回歸是用來評 價非線性的，這也是我們選擇多項式線性評價的原因。這種方法有兩部分：第一步判斷用非線 性多項式擬合數(shù)據(jù)是否比線性好；第二步是當非線性多項式擬合數(shù)據(jù)點比線性好時，判斷最適 非線性模型與線性擬合之間的差值是否小于預(yù)先設(shè)定的該方法的允許偏差。多項式回歸評估線性

41、時至少要求五個不同濃度水平樣本，每個水平重復(fù)測定兩次。先要知道其濃度或各溶液之間的比例關(guān)系，不同濃度間可以是等間距或不等間距的（但要知道相互之間的關(guān)系）。如五個濃度水平的覆蓋范圍為 20到100mg/dL,等間距時其它濃度分別為 40, 60, 80 mg/dL，配 制溶液時參見和 Appendix A?？梢杂?0、40、60、80和100代表X值，也可以用1、2、3、4和5。然后做一次、二次和三次多項式回歸分析，可以借助多種商業(yè)統(tǒng)計軟件完成。階別回歸方程回歸自由度（Rdf）一次Y=b0+biX2二次Y= b0+biX+b2X23三次Y= b3+biX+b2X2+b3X34一次多項式模型為直線

42、，這是判斷某種方法是否為線性的最適方程。二次多項式模型代表一種拋物線反應(yīng)曲線，有增加趨勢（曲線上升）或減少趨勢（曲線下降）兩種。三次多項式模 型代表一種 S形反應(yīng)曲線，在測量范圍的兩端呈非線性?；貧w系數(shù)用bi表示，在二次多項式級模型中， b2為非線性系數(shù)；在三次多項式模型中，b2和b3為非線性系數(shù)。計算每個非線性系數(shù)斜率的標準差SEi（可由回歸程序算出），然后進行t檢驗，判斷非線性系數(shù)是否有統(tǒng)計學(xué)意義，即與0之間有無差異。一次多項式模型中的b0和b1兩個系數(shù)不用分析，因為它們不反映非線性。b2和b3的統(tǒng)計分析計算公式如下：t=bi/SEi自由度的計算公式為df=L R-Rdf, L為準備的不同

43、濃度樣本數(shù)，R為重復(fù)檢測次數(shù)，Rd偽回歸分析時的自由度，指Rdf回歸模型中系數(shù)的數(shù)量（包括b）。上例中，三次多項式回歸時，L=5,R=2, Rdf=4, df=5*2-4=6。查t值表（附錄B）（雙側(cè)滬）。如果沒有非線性系數(shù) b2和b3 （ p）,則 認為存在線性關(guān)系，不精密度高時，則分析完成。如果二次多項式模型的非線性系數(shù)b2,或三次多項式模型的b2或b3中任一個與0比較，有顯著差異（p）,則該組數(shù)據(jù)存在非線性。要注意 這只是統(tǒng)計學(xué)上的顯著性，只是非線性被檢測，而不代表對病人的檢測結(jié)果有多大影響，按來 評價非線性度。非線性度通過計算回歸標準（誤）差（Sy,X）,確定最適的一次多項式或三次多項

44、式模型。Sy,）是統(tǒng)計分析測量結(jié)果與模型的差值，因而Sy,）越小，說明該模型越適合數(shù)據(jù)組。每一個濃度處的線性偏差（DL）計算如下：DLi=p（Xi） （ b0+biXi）X的取值范圍從X倒Xs, p（Xi）為最適多項式回歸模型在 Xi處的值，因而DLi為在每個不同濃 度處二次多項式模型與一次多項式（線性）模型的差值，或三次多項式模型與一次多項式（線 性）模型的差值，也即非線性模型與線性模型在每個濃度點的差值。DLi應(yīng)與預(yù)先設(shè)定目標的單位一致，以便進行比較。如果要換算成百分比，則將每個DLi除以該濃度值（已知值）或測量均值（相對濃度）再乘以100%。DL僅表示該濃度水平處的偏差，而不反映點與點之

45、間的偏差。將每個濃度水平處的 DLi與設(shè)定的誤差范圍比較，如果DL小于預(yù)先設(shè)定誤差，即使檢測到統(tǒng)計學(xué)上的非線性，由于非線性誤差小于設(shè)定目標，因而也是不重要的。如果任一個點DL超過設(shè)定目標，則代表該點可能是非線性，此時按以下兩種方法進行處理：（1 ）試圖找到非線性的原因（樣本準備，干擾物質(zhì)，儀器定標等）并解決。（2 ）觀察響應(yīng)（測量）濃度與預(yù)期值散點圖，判斷非線性是在分析濃度范圍的兩端或是 中間。如果是在兩端，試著舍去 DLi最大值的濃度點，重新進行統(tǒng)計分析，這樣就會縮小線性范 圍。考慮隨機誤差線性評估還應(yīng)考慮隨機誤差（本指南中用重復(fù)性來評估）的影響，隨機誤差來源于隨機變異（分析系統(tǒng)的變異），可

46、能會導(dǎo)致非線性的評估能力減低。重復(fù)性最好用L個樣本的所有重復(fù)測量結(jié)果的集合方差來評價，是一個不依賴于分析物濃度總的測量均值的變異。這是檢測方法 的重復(fù)性，用SDr（或CVr相對誤差）來表示。如果不同濃度樣本間的SDr大致相等，則不同濃度樣本間不精密度較恒定，可用 SDr表示。如果在高濃度處的差值較大，則不精密度大小可能與濃 度值成比例變化，此時應(yīng)用 CVr表達。不精密度大小可用方差分析來計算，方差的平方根即為誤 差大小。兩次重復(fù)測定時，可以用手工方法方便地計算兩次測量的差值，如下：2）計算每個樣本濃度處的兩次重復(fù)測量的差值；3）計算差值的平方；4）差值平方的求和；5）除以（樣本數(shù)*2）；6）求

47、平方根。公式如下（L為樣本數(shù)，重復(fù)兩次測量）：2xZri1和ri2分別為該方法兩次測量的實際結(jié)果，或與均值的百分比（但要注意每個濃度處的單 位要統(tǒng)一），如果用到百分濃度，則要用CVr而不能用SD表達。如果重復(fù)測量次數(shù)超過 2次，則隨機誤差要用方差分析來計算。公式如下：R:為重復(fù)測定的次數(shù)（j=1,2,3R）L:樣本數(shù)ri :樣本i處的平均值。將SD與不精密度的設(shè)定目標進行比較（濃度單位或百分比單位）。如果SDr超過設(shè)定目標,則可能是精密度太低，不足以用來真實、可靠地評價線性關(guān)系。這時應(yīng)檢查儀器或操作過程， 找到引起不精密度低的原因，糾正后重新進行實驗。如果方法性能與以前評估重復(fù)性時一致， 重復(fù)

48、測量次數(shù)增多一倍（4次）,這樣可以將均值的標準差降低約40%。有時不精密度在不同濃度時是明顯不同的，這是最好選用加權(quán)回歸線性模型，它是采用每 個濃度重復(fù)測定方差的倒數(shù)。這時需要更復(fù)雜的統(tǒng)計軟件，甚至可能要求助于統(tǒng)計學(xué)家。以下為線性評價方法的流程圖，每個任務(wù)單元的附加說明參見相關(guān)章節(jié)。設(shè)計方法和確定誤差目標（非線性和重復(fù)性）6. 線性范圍發(fā)布圖表法測量結(jié)果（Y）和預(yù)期結(jié)果（X）進行圖解表示，然后進行統(tǒng)計學(xué)分析。簡單的圖表就可以顯示結(jié)果是否遵循線性及非線性明顯的區(qū)域，圖表也有助于全面了解數(shù)據(jù)，可以排除線性，但 不能接受線性，也不能判斷每個濃度處的非線性度。單純的目視圖表不足以建立或驗證線性。線性度

49、最好用差值點圖來表示，即用一次多項式與三次多項式模型的差值作為Y值，每個 濃度值作為X值，進行作圖。允許誤差也可以作在圖上，百分比差值要轉(zhuǎn)換為實際單位，舉例 見附錄C。線性聲明的確認 本指南旨在幫助用戶核實其檢測系統(tǒng)該方法聲明的線性范圍是合適的。建立該方法的廠家 或?qū)嶒炇铱梢酝ㄟ^不同的方法證明線性，包括本指南。不論線性是如何確定的，都可以用本指 南進行確認。允許誤差與目標 設(shè)定實驗室應(yīng)該確定自己的所有分析物的分析誤差的目標（參見當前NCCL文件EP21-臨床實驗方法的總誤差） 。目標的確定應(yīng)基于實驗室客戶的需要及所用方法的特性。具體的設(shè)定誤差目標的方法超出本指南的范圍。然而下面是設(shè)定誤差目標所

50、要考慮的因素：1）線性目標來源于偏倚目標，因而應(yīng)小于或等于它；2）偏倚目標應(yīng)小于或等于測量誤差。 當測量樣本的濃度未知時，線性目標應(yīng)用相對值表示。6 4 其它誤差影響 不合格的實驗結(jié)果可能來自于程序錯誤，儀器、試劑或定標問題，環(huán)境因素，方法錯誤，或基質(zhì) （包括干擾） 。每種原因可能導(dǎo)致重復(fù)性差或偏倚很大。第一步是分析數(shù)據(jù)和操作方法， 試圖找到問題的原因，有時重復(fù)該實驗也是可取的，增加樣本數(shù)（特別是在曲線部分）或增加 重復(fù)次數(shù)（特別是不精密度差時） 。如果不精密度高于設(shè)定目標，則停止實驗直到找到原因并 糾正。本委員會建議用戶與廠家聯(lián)系， 有助于解決這些問題。下列文件可以幫助用戶碰到一些 難題不能

51、解決時進行參考：1）技術(shù)性錯誤如干擾（EP7-臨床化學(xué)的干擾試驗）2）試驗結(jié)果的攜帶污染與漂移，及不精密度與偏倚的初步評價（EP10-定量臨床化學(xué)方法初步評價）3）分析不精密度（EP5-臨床化學(xué)設(shè)備的精密度評價）4）偏倚（EP9-用病人標本進行方法比較與偏倚估計） 如果出現(xiàn)過度意外的誤差，應(yīng)進行評價，以決定該方法或儀器是否可用。測量誤差是由不 精密度、準確度、攜帶污染、漂移所引起，能明顯影響線性范圍，也可能錯誤地解釋結(jié)果。假設(shè) 本指南中用于線性范圍評價時所用的假設(shè)有：1）樣本濃度已知（濃度已知或相互關(guān)系已知） ，沒有誤差；2）線性范圍由測量的最低與最高濃度來確定；3）線性范圍由系統(tǒng)最終輸出結(jié)果

52、（濃度或活性）來表達，而不是由儀器檢測信號（需由系統(tǒng) 進一步處理）來表示；4）所用樣本沒有干擾（干擾可能導(dǎo)致實驗無效） ；5）在線性評價實驗過程中，檢測系統(tǒng)的操作遵守其他要求的操作聲明；6）檢測回歸系數(shù)的顯著性時，假設(shè)每個水平重復(fù)測量時結(jié)果正常分布，這種分布的偏差在不 同濃度水平間是不變的。發(fā)布線性聲明的指導(dǎo)方針推薦格式 推薦格式如下，除非方法開發(fā)者提供特定的格式 （包括線性范圍和最大允許偏差） 。如果 聲明與本指南一致， 則應(yīng)包括用于評價線性的可接受范圍。 在括號內(nèi)填寫適當?shù)脑~語或數(shù)值。對于（分析物） 來說，用（測量方法） ，通過核實在 （確定目標或最大允許偏差范圍） 內(nèi)， 線性范圍為從（下

53、限）到（上限） ?？蛇x的附加信息 增加醫(yī)學(xué)決定水平處的允許偏差范圍是有用的。如果在醫(yī)學(xué)決定水平處的允許偏差范圍 未確定，則可認為在整個線性范圍內(nèi)，允許偏差范圍是一致的。附錄A:稀釋列表本附錄給出等間距不同濃度樣本的稀釋方案，對于評估線性關(guān)系來說，實際濃度值不是很重要的。然而，線性范圍可通過最高和最低呈線性的測量濃度確定，在下面的稀釋列表中，起始為達到或剛0超過上限范圍的高濃度標本或低濃度標本， 并且其標本量足夠多，以至能用于各 點重復(fù)測定。例如，如果每次檢測需要，5個濃度水平各測2次，那么需要5ml標本，e或者至少高濃度和低濃度標本各需要 5ml。下面稀釋列表中，每個標本由不同比例組成。稀釋方

54、案S=5樣本S=6樣本S=7樣本S=8羊本1 :低濃度樣本（L）1 :低濃度樣本（L）1 :低濃度樣本（L）1 :低濃度樣本（L）2: +2: +2 : +2 : +3: +3: +3 : +3 : +4: +4: +4 : +4 : +5:高濃度樣本（H）5 : +5 : +5 : +6:高濃度樣本（H）6 : +6 : +7:高濃度樣本（H）7 : +&高濃度樣本（H）S=9羊本S=10樣本S=11樣本1 :低濃度樣本（L）1 :低濃度樣本（L）1 :低濃度樣本（L）2 : +2 : +2 : +3 : +3 : +3 : +4 : +4 : +4 : +5 : +5 : +5 : +6 : +6 : +6 : +7 : +7 : +7 : +8 : +8 : +8 : +9:高濃度樣本（H）9 : +9 : +10 :高濃度樣本（H）10 : +11:高濃度樣本（H）附錄B: t值表下表為t檢驗分布表，在不