HPLC常見問題和解決方法總匯

1、壓力異常操作壓力的變化往往是故障的征兆。從下表中找出所觀察到的現(xiàn)象，并在 右側(cè)的列表中參考相應(yīng)的解決方法。A、沒有壓力顯示，沒有流動相流動原因解決方法1、電源問題1、接通電源，開機2、保險絲被燒壞2、更換保險絲3、控制器設(shè)疋不正確或設(shè)疋失敗3、a、米取恰當(dāng)?shù)脑O(shè)定 b、修理或更換控制器4、柱塞桿折斷4、更換柱塞桿5、泵頭內(nèi)有空氣乙、溶劑脫氣、啟動泵抽出空氣6流動相不足6、a、補充流動相 b、更換入口濾頭7、單向閥損壞：7、更換單向閥8、漏液8擰緊或更換手緊接頭B、流動相流動正常，但沒有壓力顯示原因解決方法1、儀表損壞1、更換儀表2、壓力傳感器損壞2、更換壓力傳感器C、壓力持續(xù)偏咼原因解決方法1、

2、流速設(shè)定過高1、調(diào)整流速設(shè)定2、柱前篩板堵塞2、a、在允許情況下反沖色譜柱b、更換篩板C、更換色譜柱3、流動相使用不當(dāng)或緩沖鹽的結(jié)晶沉淀3、a、使用恰當(dāng)?shù)牧鲃酉?b、沖洗色譜柱4、色譜柱選擇不當(dāng)4、選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱5、進樣閥損壞5、清洗或更換進樣閥6柱溫過低6提高溫度7、控制器失常7、修理或更換控制器8、保護柱阻塞8、清洗或更換保護柱9、在線過濾器阻塞9、清洗或更換在線過濾器D壓力持續(xù)偏低原因解決方法1、流速設(shè)定過低1、調(diào)整流速2、系統(tǒng)漏液2、確定漏液位置并維修3、色譜柱選擇不當(dāng)3、選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱:4、柱溫過高4、降低溫度5、控制器失常5、維修或更換控制器E、壓力不斷上升原因解決方法1、見列

3、表C1、見列表CF、壓力降為零原因解決方法1、見列表A B1、見列表A BG壓力不斷下降，但不回零原因解決方法1、見列表D1、見列表DH、壓力波動原因解決方法1、泵中有氣體1、a、溶劑脫氣b、從泵中除去氣體2、單向閥損壞2、更換單向閥:3、泵密圭寸損壞3、更換泵密封4、脫氣不充分改變4、a、溶劑脫氣脫氣方法（使用在線脫氣法等）5、系統(tǒng)漏液5、確定漏液位置并維修6使用梯度洗脫、由日于流動相粘度的變化引起的壓力波動漏液通?？梢酝ㄟ^擰緊或更換管路接頭來解決漏液的問題。 但值得注意的是過份擰緊 會導(dǎo)致金屬接頭的漏液和塑料接頭的磨損。如果通過稍微擰緊接頭不能解決漏液 的問題，就必須將接頭取下，檢查是否損

4、壞（例如，卡套損壞、密圭寸表面有雜質(zhì)）； 損壞的接頭應(yīng)該更換掉。A、接頭處漏液原因r解決方法1、接頭松動1、擰緊2、接頭磨損2、更換3、接頭過緊3、a、擰松，再重新擰緊b、更換4、接頭被污染4、a、拆下清洗b、更換5、部件不匹配5、使用同一品牌的配件B、泵漏液原因解決方法1、單向閥松動1、a、擰緊單向閥（不必擰的過緊） b、更換單向閥2、接頭松動2、擰緊接頭（不必擰的過緊）3、混合器密封損壞3、a更換混合器密封b、更換混合器4、泵密封損壞4、維修或更換泵密封件5、壓力傳感器損壞5、維修或更換壓力傳感器6脈沖阻尼器損壞6、更換脈沖阻尼器7、比例閥損壞7、a檢查隔膜，如果漏液立即更換b、檢查手緊接

5、頭，損壞的立即更換8、放空閥的損壞8 a、擰緊放空閥b、更換放空閥C、進樣閥漏液原因解決方法1、轉(zhuǎn)子密封損壞：1、重新安裝或更換進樣閥2、定量環(huán)阻塞2、更換定量環(huán)3、進樣口密圭寸松動3、調(diào)整4、進樣針頭尺寸不合適：4、使用恰當(dāng)?shù)倪M樣針5、廢液管中產(chǎn)生虹吸5、保持廢液管咼于廢液液面6廢液管阻塞6更換或疏通廢液管D色譜柱漏液原因解決方法1、尾端接頭松動1、擰緊接頭2、卡套內(nèi)有填料2、拆下、清洗卡套、重新安裝3、篩板厚度不合適3、使用合適的篩板（參考下表）篩板選擇指導(dǎo)物質(zhì)粒徑篩板孔徑3-4u0.5u5-20u2uE、檢測器漏液原因解決方法1、流通池墊片損壞1、a、避免過大的背景壓力（壓力降） b、更

6、換墊片2、流通池窗破碎2、更換窗口13、手緊接頭漏液3、擰緊或更換4、廢液管阻塞4、更換廢液管5、流通池阻塞5、重新安裝或更換液相色譜系統(tǒng)的許多問題都能在譜圖上反映出來。其中有一些問題可以通 過改變設(shè)備參數(shù)得到解決；而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對于色 譜柱和流動相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵。A、峰拖尾原因解決方法1、篩板阻塞1、a、反沖色譜柱b、更換進口篩板C、更換色譜柱2、色譜柱塌陷2、填充色譜柱3、干擾峰3、a、使用更長的色譜柱b、改變流動相或更換色譜柱4、流動相PH選擇錯誤4、調(diào)整PH值。對于堿性化合物，低PH值更 有利于得到對稱峰5、樣品與填料表面的溶化點 發(fā)生反應(yīng)圖

7、5、a、加入離子對試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑b、更改色譜柱B、峰前延原因解決方法1、柱溫低1、升高柱溫2、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)2、使用流動相作為樣品溶劑3、樣品過載3、降低樣品含量4、色譜柱損壞4、見 A1、A2C、峰分叉原因解決方法保護柱或分析柱污染 圖1、取下保護柱再進行分析。如果必要 更換保護柱。如果分析柱阻塞，拆下來 清洗。如果問題仍然存在，可能是柱子 被強保留物質(zhì)污染，運用適當(dāng)?shù)脑偕?施。如果問題仍然存在，入口可能被阻 塞，更換篩板或更換色譜柱。2、樣品溶劑不溶于流動相2、改變樣品溶劑。如果可能采取流動 相作為樣品溶劑。D、峰變形原因解決方法1、樣品過載1、減少樣品載量E、早出的峰變形原

8、因解決方法1、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)1、a、減少進樣體積b、運用低極性樣品溶劑F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原因解決方法1、柱外效應(yīng)1、a、調(diào)整系統(tǒng)連接（使用更短、內(nèi)徑 更小的管路）b、使用小體積的流通池GK 增加時，脫尾更嚴(yán)重原因解決方法1、一級保留效應(yīng)，反相模式1、a、加入三乙胺（或堿性樣品）b、加入乙酸（或酸性樣品）C、加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品）d、更換一支柱子2、二級保留效應(yīng)，正相模式2、a、加入三乙胺（或堿性樣品）b、加入乙酸（或酸性樣品）C、加入水（或多官能團化合物） d、試用另一種方法3、二級保留效應(yīng)，離子對3、加入三乙胺（或堿性樣品）H、酸性或堿性化合物的峰拖尾原因解決方法1

9、、緩沖不合適1、a使用濃度50-100mM的緩沖液b、使用Pka等于流動相PH值的緩沖液I、額外的峰原因解決方法1、樣品中有其他組份1、正常2、前一次進樣的洗脫峰2、a、增加運行時間或梯度斜率 b、提高流速3、空位或鬼峰3、a檢查流動相是否純凈b、使用流動相作為樣品溶劑C、減少進樣體積J、保留時間波動原因解決方法1、溫控不當(dāng)1、調(diào)好柱溫2、流動相組分變化2、防止變化（蒸發(fā)、反應(yīng)等）3、色譜柱沒有平衡3、在每一次運行之前給予足夠的時間 平衡色譜柱K、保留時間不斷變化原因解決方法1、流速變化1、重新設(shè)定流速2、泵中有氣泡2、從泵中除去氣泡3、流動相選擇不恰當(dāng)3、a、更換合適的流動相 b、選擇合適的

10、混合流動相L、基線漂移原因解決方法1、柱溫波動。（即使是很小的溫度變化 都會引起基線的波動。通常影響示差檢 測器、電導(dǎo)檢測器、較低靈敏度的紫外 檢測器或其它光電類檢測器。）1、控制好柱子和流動相的溫度，在檢 測器之前使用熱交換器圖2、流動相不均勻。（流動相條件變化引 起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。）2、使用HPLC級的溶劑，高純度的鹽和 添加劑。流動相在使用前進行脫氣，使 用中使用氦氣。3、流通池被污染或有氣體3、用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通 池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不 要用鹽酸）4、檢測器出口阻塞。（高壓造成流通池 窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線）4、取出阻塞物或更換管子。參考檢測 器

11、手冊更換流通池窗。5、流動相配比不當(dāng)或流速變化5、更改配比或流速。為避免這個問題 可定期檢查流動相組成及流速。6柱平衡慢，特別是流動相發(fā)生變化 時6、用中等強度的溶劑進行沖洗，更改 流動相時，在分析前用10-20倍體積的 新流動相對柱子進行沖洗。7、流動相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑 配成7、檢查流動相的組成。使用高品質(zhì)的 化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑8、樣品中有強保留的物質(zhì)（高 K值） 以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個 逐步升高的基線。8使用保護柱，如有必要，在進樣之 間或在分析過程中，定期用強溶劑沖洗 柱子。9、使用循環(huán)溶劑，但檢測器未調(diào)整。9、重新設(shè)定基線。當(dāng)檢測器動力學(xué)范 圍發(fā)生變化時，使

12、用新的流動相。10、檢測器沒有設(shè)定在最大吸收波長 處。10、將波長調(diào)整至最大吸收波長處M基線噪音（規(guī)則的）原因解決方法1、在流動相、檢測器或泵中有空氣1、流動相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測 器或泵中的空氣。2、漏液圖2、見第三部分。檢查管路接頭是否松 動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正 常的噪音。如有必要，更換泵密封。3、流動相混合不完全3、用手搖動使混合均勻或使用低粘度 的溶劑4、溫度影響（柱溫過高，檢測器未加 熱）4、減少差異或加上熱交換器5、在同一條線上有其他電子設(shè)備5、斷開LC檢測器和記錄儀，檢查干 擾是否來自于外部，加以更正。6泵振動6、在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器N、基線噪音（不規(guī)則的）原因

13、解決方法漏液 圖1、見第三部分。檢查接頭是否松動， 泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的 噪音。如有必要，更換密圭寸。檢查流通 池是否漏液。2、流動相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配 成2、檢查流動相的組成。3、流動相各溶劑不相溶3、選擇互溶的流動相4、檢測器/記錄儀電子元件的問題4、斷開檢測器和記錄儀的電源，檢查 并更正。5、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡5、用強極性溶液清洗系統(tǒng)6檢測器內(nèi)有氣泡6、清洗檢測器，在檢測器后面安裝背 景壓力調(diào)節(jié)器7、流通池污染（即使是極少的污染物 也會產(chǎn)生噪音。）7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流 通池8、檢測器燈能量不足8更換燈9、色譜柱填料流失或阻塞9、更換色譜柱10、流動相混合不均

14、勻或混合器工作不 正常10、維修或更換混合器，在流動相不走 梯度時，建議不使用泵的混合裝置O寬峰原因解決方法1、流動相組成變化1、重新制備新的流動相2、流動相流速太低2、調(diào)節(jié)流速3、漏液（特別疋在柱了和檢測器之間）3、見section 3。檢杳接頭疋否松動、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常 的噪音。如果必要更換密封。4、檢測器設(shè)定不止確4、調(diào)整設(shè)定5、柱外效應(yīng)影響柱子過載a、b、檢測器對反應(yīng)時間或池體積響應(yīng)過大b、c、柱子與檢測器之間的管路太長或管C、路內(nèi)徑太大d、d、記錄儀響應(yīng)時間太長圖小體積進樣（例如：10ul而不是100ul）以1: 10或1: 100的比例稀釋樣品減少響應(yīng)時間或使用更

15、小的流通池使用內(nèi)徑為0.007-0.01的短管路減少響應(yīng)時間6緩沖液濃度太低6、增加濃度7、保護柱污染或失效7、更換保護柱8、色譜柱污染或失效，塔板數(shù)較低8更換同樣類型的色譜柱。如果新柱 子可以提供對稱的色譜峰，則用強溶劑 沖洗舊柱子。9、柱入口塌陷9、打開柱入口，填補塌陷或更換柱子10、呈現(xiàn)兩個或多個未被完全分離的物 質(zhì)的峰10、選擇其它類型的色譜柱以改善分離 效果11、柱溫過低11、提咼柱溫。除非特殊情況，溫度不 宜超過75 r12、檢測器時間常數(shù)太大12、使用較小的時間常數(shù)a、P、分離度降低原因解決方法1、流動相污染或變質(zhì)（引起保留時間 變化）1、重新配置流動相2、保護柱或分析柱阻塞 圖

16、2、去掉保護柱進行分析。如果必要則 更換保護柱。如果分析柱阻塞，可進行 反沖。如果問題仍然存在色譜柱可能被 強保留的污染物損壞，建議使用恰當(dāng)?shù)?再生程序。如果冋題仍然存在，進口可 能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色 譜柱。Q所有的峰面積都太小原因解決方法1、檢測器衰減設(shè)定過高1、減少衰減的設(shè)定2、檢測器時間常數(shù)設(shè)定太大2、設(shè)定較小的時間常數(shù)3、進樣量太少3、增大進樣量4、記錄儀連接不當(dāng)4、使用正確的連接R、所有的峰面積都太大原因解決方法1、檢測器衰減設(shè)定過低1、米取較大的衰減2、進樣過多2、減少進樣量3、記錄儀連接不正確3、正確連接記錄儀以下問題在使用進樣閥過程中有可能發(fā)生 A、手動進樣閥，轉(zhuǎn)

17、動不靈原因解決方法1、轉(zhuǎn)子密封損壞1、更換或調(diào)整轉(zhuǎn)子密封2、轉(zhuǎn)子太緊2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度B、手動進樣閥，載樣困難原因解決方法1、進樣閥安裝不當(dāng)1、重新安裝2、定量環(huán)阻塞2、清洗或更換定量環(huán)3、進樣器污染3、清洗或更換進樣器4、管路阻塞4、清洗或更換管路C、自動進樣閥，不能轉(zhuǎn)動原因解決方法1、無壓力（或電源）1、提供恰當(dāng)?shù)膲毫Γ娫矗?、轉(zhuǎn)子太緊2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度3、進樣閥安裝不當(dāng)3、重新安裝D自動進樣閥，其它問題原因解決方法1、阻塞1、清洗或更換阻塞部件2、機械故障2、見隨機維修手冊3、控制器故障3、維修或更換控制器由氣味、景象和聲音可以發(fā)現(xiàn)的問題你需要運用你所有的感官去發(fā)現(xiàn)液相色譜的問題。

18、你最好養(yǎng)成習(xí)慣，每天 花上幾分鐘運用你的感官（除了味覺）來“感覺”你的液相色譜是否存在問題， 這樣可以幫助你迅速找到問題所在。 例如：在你看到漏液之前，你可能首先聞到 它的氣味。大部分的問題是可以通過眼睛看到。A、溶劑的氣味原因解決方法1、漏液1、見 section 32、濺出2、a檢查廢液瓶是否已滿b、找到濺出的部位并清洗干凈B、熱氣味原因解決方法1、儀器過熱1、a、檢杳并調(diào)節(jié)通風(fēng)設(shè)施 b、檢查并調(diào)節(jié)溫度設(shè)定C、關(guān)掉儀器，查找維修手冊C、讀數(shù)不正常原因解決方法1、壓力不正常1、見 section 22、柱溫箱問題2、a、檢查并調(diào)節(jié)設(shè)定b、參照用戶手冊3、檢測器燈失效3、更換燈D；燈警告|原因解決方法1、壓力超出極限值a、1、檢杳是否阻塞b、檢查并調(diào)節(jié)極限值的設(shè)定2、其它警示燈2、見用戶手冊E、警告音原因解決方法1、溶劑泄漏/濺出1、找到并解決2、其它警告音2、見用戶手冊F、刺耳的短音或長音原因解決方法1、軸承失效1、見用戶手冊2、潤滑不夠2、進行恰當(dāng)?shù)臐櫥?、機械故障3、見用戶手冊常見故障及日常維護下表中列出了液相色譜常見的一些問題，右側(cè)中則列出的日常維護的方法 可以減少問題出現(xiàn)的頻率。括號中的數(shù)字是建議進行維護的時間間隔。 用戶手冊 則提供您更多的維護方法。溶劑瓶問題維護1、進口篩板阻塞a、1、更換（3-6個月）b、過濾流動相，0.5u濾膜2、氣泡2、流動