DNA的粗提取和鑒定

1、專題專題5 DNA5 DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)和蛋白質(zhì)技術(shù)隴縣第二高級中學隴縣第二高級中學 鄭杜娟鄭杜娟人教版生物選修一人教版生物選修一基礎(chǔ)知識基礎(chǔ)知識染色體成分染色體成分蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)DNA1 1）不同濃度）不同濃度NaClNaCl中中DNADNA溶解度不同。溶解度不同。 2 2）DNADNA與其他細胞成分在酒精中溶解度不同，與其他細胞成分在酒精中溶解度不同，DNADNA不溶于酒精，細不溶于酒精，細胞中某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。胞中某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。3 3）DNADNA和蛋白質(zhì)對酶耐受性不同：酶的專一性和蛋白質(zhì)對酶耐受性不同：酶的專一性蛋白酶水解蛋蛋白酶水解蛋白質(zhì)。但是對白質(zhì)。但是對DNADNA沒有

2、影響。沒有影響。4 4）DNADNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性不同：蛋白質(zhì)、和蛋白質(zhì)對高溫耐受性不同：蛋白質(zhì)、DNADNA熱穩(wěn)定性不同。熱穩(wěn)定性不同。大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60608080高溫，而高溫，而DNADNA在在8080以上才會變性。以上才會變性。5 5）DNADNA和蛋白質(zhì)對洗滌劑耐受性不同：洗滌劑能夠瓦解細胞膜，和蛋白質(zhì)對洗滌劑耐受性不同：洗滌劑能夠瓦解細胞膜，但對但對DNADNA沒有影響。沒有影響。DNA的粗提取實驗原理的粗提取實驗原理實驗案例實驗案例1 1）不同濃度）不同濃度NaClNaCl中中DNADNA溶解度不同。溶解度不同。 2 2）DNADNA與其他細胞成分

3、在酒精中溶解度不同，與其他細胞成分在酒精中溶解度不同，DNADNA不溶于酒精，細胞中某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。不溶于酒精，細胞中某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。 雞血紅細胞、白細胞中都有細胞核，雞血紅細胞、白細胞中都有細胞核，含大量含大量的的DNADNA, ,既經(jīng)濟又易取既經(jīng)濟又易取 。6 1).1).制雞血細胞液制雞血細胞液0.1g/mL檸檬酸鈉檸檬酸鈉100mL活活雞鮮血雞鮮血180mL500mL燒杯中，玻棒燒杯中，玻棒攪拌攪拌，離心或靜置沉淀。離心或靜置沉淀。離心或靜置后去掉上清液離心或靜置后去掉上清液血漿血漿血細胞血細胞提取細胞核物質(zhì)：提取細胞核物質(zhì)：溶解核內(nèi)溶解核內(nèi)DNA：析出析出DNA：DNA黏

4、稠物再溶解：黏稠物再溶解：提取較純凈的提取較純凈的DNA：DNA的鑒定：的鑒定：濾取濾取DNA黏稠物：黏稠物：過濾含過濾含DNA的的NaClNaCl溶液溶液：2)實驗方法步驟：實驗方法步驟： 在上述溶液中緩緩在上述溶液中緩緩加入蒸餾水，加入蒸餾水，并沿一個方向并沿一個方向輕輕攪拌輕輕攪拌，出現(xiàn)絲狀物；出現(xiàn)絲狀物；當絲狀物不在增加時，停止加水當絲狀物不在增加時，停止加水（此時（此時NaCl溶液的濃度相當于溶液的濃度相當于0.14mol/L）。）。 用多層紗布用多層紗布過濾過濾，含，含DNA的粘稠物留在紗布上。的粘稠物留在紗布上。 用兩層紗布過濾。用兩層紗布過濾。濾液中含有濾液中含有DNA。所得的

5、濾液體積分數(shù)為所得的濾液體積分數(shù)為95%的冷卻酒精的冷卻酒精50mL，用玻棒沿，用玻棒沿一個方向一個方向輕緩攪拌輕緩攪拌，溶液中（，溶液中（析出析出）出現(xiàn)乳白色絲狀物，用）出現(xiàn)乳白色絲狀物，用玻棒玻棒將將絲狀物絲狀物卷起。卷起。利用細胞吸水破裂，細胞核內(nèi)物質(zhì)釋放出來，用利用細胞吸水破裂，細胞核內(nèi)物質(zhì)釋放出來，用紗布紗布過濾取其濾液。過濾取其濾液。在濾液中加在濾液中加2mol/Lmol/L的的NaClNaCl溶液并攪拌，使染色質(zhì)中溶液并攪拌，使染色質(zhì)中DNADNA與蛋白質(zhì)分離，與蛋白質(zhì)分離，DNADNA充分溶解，充分溶解，在燒杯中用在燒杯中用2mol/Lmol/L的的NaClNaCl溶液溶解溶液

6、溶解DNADNA。DNADNA與與二苯胺試劑二苯胺試劑反應(yīng)使溶液呈反應(yīng)使溶液呈現(xiàn)藍色現(xiàn)藍色。自變量你能采用其他方法對你能采用其他方法對DNADNA進行鑒定嗎？進行鑒定嗎？注意：鑒定所用的試劑是注意：鑒定所用的試劑是二苯胺二苯胺或或甲基綠甲基綠。用用二苯胺二苯胺須加熱。用須加熱。用甲基綠不用水浴甲基綠不用水浴加熱。加熱。整個實驗中整個實驗中加入加入“兩次蒸餾水，兩次蒸餾水，三次三次NaClNaCl溶液溶液，一次酒精，一次酒精”酒精最好用酒精最好用95%95%的冷酒精的冷酒精; ;加蒸餾水或加入酒精用玻棒攪拌時加蒸餾水或加入酒精用玻棒攪拌時, ,動作要動作要輕緩且朝一個方向輕緩且朝一個方向。保證保

7、證DNADNA分子的完整性。分子的完整性。小結(jié)：DNA的粗提取與鑒定的粗提取與鑒定實驗原理實驗原理DNA在不同濃度在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同溶液中溶解度不同DNA與其他細胞成分在酒精中溶解度不同與其他細胞成分在酒精中溶解度不同DNA和蛋白質(zhì)對酶、高溫和洗滌劑耐受性和蛋白質(zhì)對酶、高溫和洗滌劑耐受性不同不同DNA與二苯胺呈現(xiàn)藍色反應(yīng)與二苯胺呈現(xiàn)藍色反應(yīng)DNA粗提取粗提取選擇適宜材料選擇適宜材料破碎細胞破碎細胞DNA的溶解和析出的溶解和析出DNA的純化的純化鑒定鑒定DNA與二苯胺混合，沸水浴，呈現(xiàn)藍色反應(yīng)與二苯胺混合，沸水浴，呈現(xiàn)藍色反應(yīng)練習練習 1 1下列圖示中能反映下列圖示中能反映DNA

8、DNA溶解度與溶解度與NaCINaCI溶液濃溶液濃度之間關(guān)系的是（度之間關(guān)系的是（ ）2 2在在DNADNA的粗提取和鑒定的實驗中，提取雞血細胞的核的粗提取和鑒定的實驗中，提取雞血細胞的核物質(zhì)和析出含物質(zhì)和析出含DNADNA的粘稠物的操作過程中均用到蒸餾水，的粘稠物的操作過程中均用到蒸餾水，其作用在于其作用在于 ( ) ( ) A A前者用來溶解血細胞，后者用來溶解前者用來溶解血細胞，后者用來溶解DNADNAB B前者使血細胞吸水破裂，后者用來稀釋前者使血細胞吸水破裂，后者用來稀釋NaClNaCl溶液溶液C C前者用來分離細胞核與細胞質(zhì)，后者用來提取前者用來分離細胞核與細胞質(zhì)，后者用來提取DNADNAD D前者使前者使DNADNA從核中分離出來，后者使從核中分離出來，后者使DNADNA析出析出CB3 3、下圖為、下圖為“DNADNA粗提取和鑒定粗提取和鑒定”實驗的相關(guān)操作。這些操作目的正實驗的相關(guān)操作。這些操作目的正確的是確的是（）A.A.是洗滌血細胞，去除血細胞表面的雜質(zhì)是洗滌血細胞，去除血細胞表面的雜質(zhì)B.B.是溶解是溶解DNADNA，去除不溶于酒精的雜質(zhì)，去除不溶于酒精的雜質(zhì)C.C.是溶解是溶解DNADNA，去除不溶于，去除不溶于2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液的雜質(zhì)