《耳聾基因檢測(cè)》PPT課件

1、背景介紹耳聾基因檢測(cè)的意義產(chǎn)品介紹案例分享2聽(tīng)覺(jué)障礙，不能聽(tīng)到外界聲響的表現(xiàn)，輕者聽(tīng)而不真，重者不聞外聲。WHO 耳聾分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：4級(jí)別級(jí)別表現(xiàn)表現(xiàn)純音聽(tīng)閾純音聽(tīng)閾輕度聾近距離聽(tīng)一般談話無(wú)困難2640dB中度聾近距離聽(tīng)話感到困難4160dB 重度聾在耳邊大聲呼喊方能聽(tīng)到6180dB全聾聽(tīng)不到耳邊大聲呼喊的聲音超過(guò)80dB耳聾分為傳導(dǎo)性耳聾、感音性耳聾、混合性耳聾遺傳因素；母親懷孕期間的藥物使用史；孕母宮內(nèi)感染:如巨細(xì)胞病毒、皰疹、毒漿體原蟲(chóng)?。荒赣H的生產(chǎn)史；新生兒高膽紅素血癥；顱面部畸形；早產(chǎn)或體重低；各種后天因素，如外傷67常染色體隱性遺傳方式：有25%的幾率生育聾兒。線粒體母系遺傳：母系成員

2、均會(huì)有聾病常染色體顯性遺傳：有50%的幾率生育聾兒。 聽(tīng)力障礙的發(fā)病率聽(tīng)力障礙的發(fā)病率：新生兒1；青年人1%；45-64歲人群14%；65-75歲為30%-60%；75歲以后達(dá)50%-70%存在不同程度的聽(tīng)力損失。 中國(guó)殘疾人聯(lián)合會(huì)公布： 1987年的第一次全國(guó)殘疾人抽樣調(diào)查各類殘疾人總數(shù)約為5164萬(wàn)，其中聽(tīng)力言語(yǔ)殘疾為1770萬(wàn)人，占總殘疾人總數(shù)的34.28%，是各類殘疾的首位。 2006年的第二次全國(guó)殘疾人抽樣調(diào)查，全國(guó)各類殘疾人總數(shù)為8296萬(wàn)人，聽(tīng)力殘疾2004萬(wàn)人占?xì)埣踩丝倲?shù)24.16%，位于第二位，僅次于肢體殘疾。在對(duì)四歲及四歲以內(nèi)的聽(tīng)力損失患兒病因進(jìn)行分析時(shí)，遺傳因素所占比例為

3、71%，高于出生時(shí)新生兒聽(tīng)力損失中遺傳因素占據(jù)了65%的病因N Engl J Med, 2006. 354: p. 2151-2164.SLC26A43%GJB2基因21%綜合征11%非綜合征型30%其他環(huán)境因素14%臨床明確的感染因素10%臨床不明確的感染因素11%出生時(shí)發(fā)病率（出生時(shí)發(fā)病率（186/100,000)186/100,000)SLC26A412%遲發(fā)型聽(tīng)力損失10%GJB2突變15%綜合征型11%非綜合征型22%線粒體mtDNA1555G1%其他環(huán)境因素14%臨床確定的感染因素7%臨床不確定的感染因素8%4 4歲時(shí)的發(fā)病率（歲時(shí)的發(fā)病率（270/100,000270/100,0

4、00） 確立了中國(guó)聾啞人群常見(jiàn)的3個(gè)易感基因及突變熱點(diǎn)藥物敏感性耳聾（mtDNA 1555AG)： 占我國(guó)2780萬(wàn)聽(tīng)力殘疾者的5-12%,意味著139-333萬(wàn)人可以通過(guò)用藥警示而避免致聾。先天性重度耳聾(GJB2)： 占聽(tīng)力殘疾者的20%,意味著556萬(wàn)人可以明確病因，早期發(fā)現(xiàn)，早期干預(yù)，聾而不“啞”。大前庭水管綜合征(SLC26A4)： 占聽(tīng)力殘疾者的16%,意味著445萬(wàn)人通過(guò)早期發(fā)現(xiàn)可以避免永久性聽(tīng)力損失。 純音測(cè)聽(tīng)，閾值在4090dB（中度重度耳聾）都應(yīng)建議配用。1）先天性雙耳重度-極重度感音性耳聾；Audiol Neurootol. 2004 Jul-Aug;9(4):224-3

5、32）語(yǔ)后聾及成年患者有基本語(yǔ)言識(shí)別能力及辨音能力且佩戴助聽(tīng)器無(wú)效者。 節(jié)省財(cái)政支出 提高出生缺陷防治水平；同時(shí)推進(jìn)計(jì)生、衛(wèi)生服務(wù)水平 分析耳聾基因在當(dāng)?shù)氐牧餍胁W(xué)分布 發(fā)現(xiàn)的藥物敏感性耳聾和遲發(fā)性耳聾的個(gè)體提高診斷效率，減少漏診率指導(dǎo)婚育。實(shí)現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育早發(fā)現(xiàn)、早干預(yù)，實(shí)現(xiàn)聾而不啞4個(gè)基因20個(gè)位點(diǎn)非綜合征型耳聾基因檢測(cè)-51單個(gè)耳聾基因sanger全測(cè)序遺傳性聽(tīng)力損失基因檢測(cè)-127三個(gè)耳聾基因高通量測(cè)序Base Molecular Weight A 313.21 C 289.18 G 329.21 T 304.19 CddATPddCTPddGTPddTTPG單堿基延伸技術(shù)單堿基延伸技術(shù)（

6、iPLEXiPLEX ）檢測(cè)位點(diǎn)多：可同時(shí)檢測(cè)20個(gè)基因位點(diǎn)；靈敏度高：能分辨質(zhì)量差別為1 Da的分子；準(zhǔn)確率高：99%；通量大：每天可檢測(cè)3000份以上；自動(dòng)化程度高：檢測(cè)數(shù)據(jù)自動(dòng)分析；檢測(cè)周期短：收到樣本后5個(gè)工作日可出報(bào)告。突變基因GJB2SLC26A4 (PDS)12S rRNAGJB3突變位點(diǎn)35delG、167delT、 176-191del16、299_300delAT、 235delC281CT、589GA、IVS7-2AG、1174AT、1226GA、1229CT、1975GC、2027TA、2162CT、2168AG、IVS15+5GA1494CT 1555AG538CT5

7、47GA染色體13q11-127q31mtDNA1p33-p35表達(dá)蛋白縫隙連接蛋白Connexin 26多次跨膜蛋白Pendrin線粒體功能損失縫隙連接蛋白Connexin 31臨床表現(xiàn)常染色體隱性遺傳。變異較大，可由輕度到極重度，但多數(shù)為重度或極重度耳聾常染色體隱性遺傳。先天性或后天性耳聾，耳聾發(fā)生或加重與外傷、感冒有關(guān)氨基糖甙類藥物性致聾，無(wú)法逆反常染色體顯性遺傳。我國(guó)本土克隆和鑒定的第一個(gè)耳聾致病基因新生兒婚前、孕前和產(chǎn)前人群各種原因不明的耳聾，包括先天性聾 和后天性聾人群聽(tīng)力正常，但有耳聾家族史的人群受檢人群檢測(cè)醫(yī)院 初篩TEOAE/DPOAE 結(jié)果不通過(guò)結(jié)果通過(guò)復(fù)篩(TEOAE/D

8、POAE )+AABR/ABR閾值)篩選聽(tīng)力異常知情同意、自愿選擇采取最少3個(gè)采血斑自愿選擇，知情同意臨床檢驗(yàn)中心耳聾基因檢測(cè)出具檢測(cè)報(bào)告檢測(cè)結(jié)果正常檢測(cè)結(jié)果為雜合突變或純合突變隨訪檢測(cè)醫(yī)院確診出具確診報(bào)告確診結(jié)果為突變確診結(jié)果正常干預(yù)追蹤隨訪基因檢測(cè)流程5 5個(gè)工作日個(gè)工作日PCRPCR、第一代第一代測(cè)序測(cè)序目標(biāo)區(qū)域目標(biāo)區(qū)域捕獲、捕獲、第二代高通量第二代高通量測(cè)序測(cè)序適用范圍：適用范圍：1）基因診斷基因診斷：對(duì)于臨床表型難以確診的病例給予分子水平的鑒別診斷；2）攜帶者篩查攜帶者篩查：對(duì)于無(wú)臨床表型的致病突變攜帶者進(jìn)行基因篩查；檢測(cè)周期：檢測(cè)周期：3535工作日工作日醫(yī)院就診樣本采集DNA提取

9、文庫(kù)制備高通量測(cè)序數(shù)據(jù)分析親屬驗(yàn)證發(fā)送報(bào)告檢測(cè)周期：檢測(cè)周期：3535個(gè)工作日個(gè)工作日疾病疾病基因基因非綜合征型非綜合征型耳聾耳聾ACTG1,CCDC50,CDH23,CLDN14,COCH,DFNB31,DFNA5,DFNB59,DIAPH1,ESPN,ESRRB,EYA4,GJB2,GJB3,GJB6,GRHL2,GRXCR1,HGF,KCNQ4,LHFPL5,LOXHD1,LRTOMT,MARVELD2,MIR96,MYH14,MYH9,MYO15A,MYO1A,MYO3A,MYO6,MYO7A,OTOA,OTOF,PCDH15,POU3F4,POU4F3,PRPS1,RDX,SIX1,

10、SLC17A8,SLC26A4,SLC26A5,STRC,TECTA,TMC1,TMIE,TMPRSS3,TPRN,TRIOBP,USH1C,WFS1,m.1555AG,m.1494CT綜合征型耳聾綜合征型耳聾基因基因Waardenburg（瓦登伯格）綜合征EDN3,EDNRB,MITF,PAX3,SNAI2,SOX10遺傳性共濟(jì)失調(diào)性多發(fā) 性 神 經(jīng) 炎 樣 ?。≧efsum綜合征）PEX1,PEX2,PEX26尤塞氏綜合征（Usher syndrome）CDH23,CLRN1,GPR98,USH2AMohr-Tranebjaerg綜合征TIMM8A特雷徹-柯林斯綜合征（Treacher C

11、ollins syndrome）TCOF1Alport綜合征（遺傳性腎炎）COL4A3,COL4A4,COL4A5Wolfram綜合征1型WFS1檢測(cè)基因 GJB2 GJB3 SLC26A4測(cè)序采用sanger法，在以下情況可建議進(jìn)行單個(gè)基因全測(cè)序 1）耳聾患者檢測(cè)某個(gè)耳聾基因雜合子突變，為明確病因做該基因的全測(cè)序 2）若胎兒母親為某個(gè)耳聾基因的攜帶者，為了評(píng)估胎兒患有耳聾的風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)父親做該耳聾基因的全測(cè)序。先天性耳聾（1/10003/1000）遺傳因素 （65%）綜合征型（SHL） （30%）非綜合征型(NSHL)（70%）常染色體隱性（7585%）GJB2/DFNB1（50%）其他DFNB

12、（50%）常染色體顯性（1524%）X-連鎖 （12%）非遺傳因素（35%）疾病分類疾病分類疾病中疾病中類類基因數(shù)目基因數(shù)目非綜合征型非綜合征型（7272個(gè)個(gè)基因）基因）常染色體隱性45常染色體顯性28X-連鎖3大前庭水管綜合征3聽(tīng)神經(jīng)病4綜合征型綜合征型（6666個(gè)基因）個(gè)基因）伴外耳畸形11伴眼病17伴代謝性疾病2伴肌肉骨骼異常10伴泌尿生殖疾病6伴內(nèi)分泌疾病3伴皮膚疾病6伴神經(jīng)病變2伴心臟缺陷4線粒體遺傳性線粒體遺傳性聽(tīng)力損失聽(tīng)力損失- -5臨床服務(wù)：臨床服務(wù)：127127個(gè)基因（重復(fù)個(gè)基因（重復(fù)1111個(gè)基因）個(gè)基因）技術(shù)簡(jiǎn)介：采用新一代高通量測(cè)序技術(shù)，對(duì)受檢者的耳聾相關(guān)基因區(qū)域進(jìn)行檢

13、測(cè)和分析。目標(biāo)區(qū)域捕獲測(cè)序 檢測(cè)時(shí)間：35個(gè)工作日（7周）檢測(cè)樣本：全血：5ml，EDTA抗凝 (紫蓋)； DNA：6ug，OD在，未降解運(yùn)輸條件：冰袋+干冰運(yùn)輸檢測(cè)結(jié)果：形成報(bào)告文件 2727樣本處理樣本處理樣本檢測(cè)樣本檢測(cè)數(shù)據(jù)分析數(shù)據(jù)分析報(bào)告發(fā)送報(bào)告發(fā)送血樣接收血樣接收解讀咨詢解讀咨詢主要適用于以下情況：1：通過(guò)熱點(diǎn)突變檢測(cè)未能發(fā)現(xiàn)致病原因的耳聾患者2：非綜合征型耳聾，無(wú)法確定致病基因及遺傳方式的3：綜合征型耳聾患者4：存在耳聾家族史的人群一家9口人，6人是耳聾 佛山家系為3代遺傳的耳聾家系，現(xiàn)有家系成員9人，其中6名為耳聾患者，除由于婚姻關(guān)系成為該家系成員的2名耳聾患者外，剩余的4名患者均為母系家庭成員。 30外婆同質(zhì)突變外公正常 姨媽 同質(zhì)突變祖父雜合突變祖母雜合突變叔叔純和突變女：1555A純和 235delc雜合12SrRNA A1555GGJB2 235delc母親重聾同質(zhì)突變 父親重聾 純和突變非常值得警惕的是：這個(gè)孩子通過(guò)了聽(tīng)力篩查，如果沒(méi)有做基因篩查，一旦誤用了氨基糖苷類藥物將一針致聾，導(dǎo)致嚴(yán)重后果31患兒杜某，女，11歲；自述4歲左右，“感冒”后出現(xiàn)耳聾癥狀；臨床診斷：大前庭水管綜合征；否認(rèn)孕期病毒感染及耳聾家族史；檢測(cè)結(jié)果：患兒：SLC26A4基因1174AT+2168AG1174AT+2168AG復(fù)合突變；患兒父親： SLC26A4基因1174